铜蓝蛋白联合运铁蛋白的应用的制作方法

文档序号:19148455发布日期:2019-11-15 23:48阅读:来源:国知局

技术特征:

1.铜蓝蛋白联合运铁蛋白,在制备预防或/和改善或/和治疗痴呆和/或认知功能障碍的药物中的应用;或/和在制备益智类补充剂或药物方面的应用;

优选地,所述痴呆和/或认知功能障碍为阿尔茨海默症或轻度认知障碍。

2.一种包含铜蓝蛋白的组合物,其特征在于:所述组合物包括:铜蓝蛋白和运铁蛋白;优选地,所述铜蓝蛋白和所述运铁蛋白以混合物的形式使用,或者所述铜蓝蛋白和所述运铁蛋白分别独立使用。

3.根据权利要求2所述的组合物,其特征在于:

所述组合物包括:铜蓝蛋白1-5质量份,运铁蛋白1-5质量份;优选地,铜蓝蛋白1质量份,运铁蛋白1质量份。

4.根据权利要求2所述的组合物,其特征在于:所述铜蓝蛋白和运铁蛋白的制备原料均包括健康人血清。

5.根据权利要求2-4任一项所述组合物,其特征在于:所述转铁蛋白的制备方法依次包括:预处理液制备步骤,疏水层析纯化步骤;优选地,还包括浓缩置换步骤。

6.根据权利要求5所述组合物,其特征在于:

所述预处理液制备步骤中,将血浆cohniv组分依次经过第一次复溶处理,第一次离心处理,第一次过滤处理,调节ph处理,去除杂质蛋白处理,第二次离心处理,第二次过滤处理,得到预处理液;

所述疏水层析纯化步骤中,将所述预处理液经过缓冲液置换处理,疏水层析处理,得到纯化转铁蛋白;优选地,所述纯化转铁蛋白的纯度为大于等于95%;

优选地,所述浓缩置换步骤中,将所述纯化转铁蛋白进行超滤处理、置换处理,得到转铁蛋白。

7.根据权利要求6所述组合物,其特征在于:所述预处理液制备步骤中,

所述第一次复溶处理,采用pbs缓冲液复溶,所述血浆cohniv组分与所述pbs缓冲液的质量体积比为1:(2-10),优选为1:3.5;优选地,所述pbs缓冲液为:10-50mmol/lpbs,ph6.0-8.0,更优选为20mmol/lpbs,ph7.5;

所述第一次离心处理,转速为4,000-15,000rpm,温度为0-10℃,优选为10,000rpm,4℃,保留上清液用于所述第一次过滤处理;

所述第一次过滤处理,采用孔径为0.1-1.0μm,优选为0.45μm滤膜,过滤后取滤液用于所述调节ph处理;

所述调节ph处理,将所述滤液的ph值调节为6.5-7.5,优选为7.0;更优选采用1mol/l柠檬酸钠溶液作为ph调节剂;

所述去除杂质蛋白处理,向调节ph后的滤液中加入蛋白沉淀剂去除杂质蛋白;更优选地,所述蛋白沉淀剂选自:peg4000和/或乙醇溶液;进一步优选地,所述peg4000与调节ph后的滤液的质量体积比为10-20%,优选为15%;所述乙醇溶液的体积百分浓度为90-98%,优选为96%,温度为0至零下10℃,优选为零下4℃;

所述第二次离心处理,转速为4,000-10,000rpm,温度为0-10℃,优选为10000rpm,4℃,保留上清液用于第二次过滤处理;

所述第二次过滤处理,采用孔径为0.1-1.0μm,优选为0.45μm滤膜,得到的滤液作为预处理液。

8.根据权利要求6所述组合物,其特征在于:所述疏水层析纯化步骤中,

所述缓冲液置换处理,采用hitrapdesalting脱盐柱,采用的平衡缓冲液为:10-50mmol/lpbs,ph6.0-8.0,其中(nh4)2so4的浓度为0.5-3mol/l,优选为20mmol/lpbs,ph7.0,(nh4)2so4浓度为1.5mol/l;

所述疏水层析处理,先将所述平衡缓冲液平衡所述辛基疏水柱,再用所述平衡缓冲液淋洗所述辛基疏水柱,再用洗脱缓冲液洗脱;

所述疏水层析柱为辛基疏水柱,用octylsepharose4fastflow装填;

所述平衡缓冲液为:10-50mmol/lpbs,ph6.0-8.0,其中(nh4)2so4浓度为1.5-3mol/l,优选为20mmol/lpbs,ph7.0,(nh4)2so4浓度为1.5mol/l;

所述洗脱缓冲液为:10-50mmol/lpbs,ph6.0-8.0,其中(nh4)2so4浓度为0.9-1.4mol/l,优选为20mmol/lpbs,ph7.0,(nh4)2so4浓度为1.2mol/l;

优选地,所述超滤处理,采用1kd-10kd,优选为3kd超滤膜;

所述置换处理,采用的置换缓冲液为:10-50mmol/lpbs,ph7.0-7.4,优选为20mmol/lpbs,ph7.2。

9.权利要求2-8任一项所述组合物在制备预防或/和改善或/和治疗痴呆和/或认知功能障碍的药物中的应用;或/和在制备益智类补充剂或药物方面的应用;优选地,所述痴呆和/或认知功能障碍为阿尔茨海默症或轻度认知障碍。


技术总结
本发明属于生物药品应用领域,铜蓝蛋白联合运铁蛋白,在制备预防或/和改善或/和治疗阿尔茨海默症的药物中的应用;或/和在制备益智类补充剂或药物方面的应用;以及包括铜蓝蛋白和运铁蛋白的组合物。本发明中血浆中参与调节体内金属离子平衡的铜蓝蛋白能提高运铁蛋白治疗动物痴呆模型的自理能力以及学习和记忆能力,可以起到增强记忆力、提高认知功能的作用。本发明还提供一种运铁蛋白制备方法,该法能从目前常用的Nitschmann‑Kistler或cohn 6法或cohn6+9法生产血液制品时废弃物Cohn IV组分里提取运铁蛋白,故可以充分、合理地利用了有限的血浆,减少了血浆资源的浪费;该制备方法较为简单,而且可以直接工业化放大生产,大规模地应用于制药工业。

技术研发人员:栗琳;崔雅轩;谢蓝;张丽丽;娄玉霞;管书丽;石浩威
受保护的技术使用者:北京豪思生物科技有限公司
技术研发日:2019.09.19
技术公布日:2019.11.15
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