本发明属于医药技术领域，特别涉及一种用于治疗肺癌的药物及其制备方法。
背景技术：
当今社会，癌症是全球范围内主要的公共卫生问题之一，其病因、发病机制及治疗方案一直是研究的热点，其中肺癌以其稳居榜首的高发病率、高死亡率受到更多的重视。在近50年以来，世界各个国家肺癌的发生率与死亡率明显呈持续上升趋势。据研究报道，无论在发达国家还是中国，肺癌的发生率在恶性肿瘤中排名第一，死亡率也居前列。年龄是与肺癌发生的密切相关的因素。目前，绝大部分肺癌患者的发病年龄大于40岁，肺癌发病年龄越来越年轻化，女性肺癌患者也呈上升趋势。肺癌的发病机制，目前尚不清楚，可能与多种因素有关，例如吸烟、职业因素、空气污染等与肺癌的发生有关。吸烟是目前世界上公认的引起肺癌的最危险因素之一。多项研究表明，吸烟量与吸烟时间长短跟肺癌发病率成正相关，且吸烟者肺癌发病率会提高20-25倍。工业区与大城市肺癌的发病率跟死亡率都较高，其中与粉尘污染或工业排放的废气或交通工具有密切的关系。长期吸入含镍、石棉、砷等化学物质致癌粉尘或接触放射性物质(铀)的工人，肺癌发生率明显提高。
根据病理学分型，肺癌可分为小细胞肺癌(smallcelllungcancer，sclc)与非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer,nsclc)两大类，其中经病理确诊的患者中sclc约占15％。sclc是肺癌中分化最低，恶性程度最高的一型。电镜观察超微结构，癌细胞中可见典型神经内分泌颗粒，且从免疫组化研究来看，癌细胞对神经特异性烯醇化酶(neuron-specificenolase，nse)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine，5-ht)等呈阳性反应，证实小细胞肺癌具有神经内分泌功能。在sclc中，患者可出现如乏力、体重下降等非特异性全身症状及类癌综合征、库欣综合征等几种常见的副肿瘤综合征。尽管sclc发病率较低，且对放化疗敏感，但因其存在转移早、继发性耐药率高、缺乏相应靶向药物等缺点，患者的中位生存期相对较短。
化疗是sclc患者治疗的主要方法。研究表明，单药或联合方案化疗对sclc有效，基于依托泊苷联合顺铂(ep)是最常用的联合初始化疗方案。局限期患者推荐使用ep联合同步放疗。此外，伊利替康联合铂类药物也用于sclc化疗。2014年的一项iii期小型临床试验发现，伊利替康联合顺铂对比ep方案用于sclc广泛期的中位生存期为12.8个月vs9.4个月(p＝0.002)，两年生存率分别为19.5％与5.2％。但不久，美国的两项大型iii期试验结果表明，二者之间的应答率和总生存率无明显区别。一项meta分析证明，伊利替康联合顺铂对比依托泊苷联合顺铂可以改善无进展生存期(pfs)与总生存期(os)。但此项研究未提供独立的患者数据。基于伊利替康联合铂类的方案具有较小的临床生存获益，且存在相应的毒副反应。因此，nccn指南推荐依托泊苷联合铂类作为局限期与广泛期sclc的标准治疗方案。广泛期和局限期sclc患者中位生存期分别为9-11个月和14-20个月；广泛期患者的2年生存率小于5％，局限期患者2年生存率为40％左右。
迄今为止，目前国内外尚无依托泊苷和山奈酚联合用药治疗肺癌作用的报道。本发明提供了依托泊苷联合山奈酚治疗小细胞肺癌的方法，并显示了良好的治疗效果。
技术实现要素：
本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种用于治疗肺癌的药物及其制备方法。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
一种用于治疗肺癌的药物，所述药物含有依托泊苷和山奈酚，以及药学上可接受的载体或者常规辅料。
优选地，所述用于治疗肺癌的药物中依托泊苷和山奈酚的质量比为1:3至3:1。
优选地，所述用于治疗肺癌的药物中依托泊苷和山奈酚的质量比为2:1。
优选地，所述依托泊苷的给药剂量为40-80mg/kg，山奈酚的给药剂量为40-80mg/kg。
优选地，所述药物为口服剂的形式，例如是胶囊剂、颗粒剂、片剂、粉剂、滴丸、口服液或糖浆。
进一步地，本发明还提供了用于治疗肺癌的药物的制备方法，包括如下步骤：分别称取依托泊苷和山奈酚的固体粉末，过80-100目筛，两者混合均匀后加入药学上可接受的载体或者常规辅料，按照药学常规制药方法制备成口服剂。
优选地，所述药学上可接受的载体或者常规辅料选自稀释剂、粘合剂、崩解剂、润湿剂、润滑剂或稳定剂中的一种或多种。
进一步地，本发明还提供了依托泊苷联合山奈酚在制备治疗肺癌的药物中的用途。
优选地，所述的肺癌为小细胞肺癌。
依托泊苷(etoposide)又称足叶乙苷、鬼臼乙叉苷。1963年，瑞士山道士公司从植物盾叶鬼臼podophyllumpeltatum.和西藏鬼臼podophyllusemodiiwall.中提取了鬼臼毒素(podophyllotoxion)，从而进行衍生化所得的化学药物。依托泊苷为有丝分裂抑制剂，为细胞周期特异性抗肿瘤药物，作用于dna拓扑异构酶ii，形成药物-酶-dna稳定的可逆性复合物，阻碍dna修复，具有广谱抗癌活性，是目前临床上广泛应用的抗肿瘤药物，主要用于治疗小细胞肺癌、恶性淋巴瘤、恶性生殖细胞瘤、白血病，对横纹肌肉瘤、神经母细胞瘤、卵巢癌、胃癌和食管癌、非小细胞肺癌等有一定疗效。依托泊苷水溶性差(水中的溶解度为58.7μg/ml)，为了增强依托泊苷的溶解性和安全性，目前研究已有阳离子脂质体、微乳和纳米球等制剂的报道。依托泊苷的生物利用度特点是个体差异很大，在25-75％之间。蛋白结合率97％，主要是肝脏代谢(cyp3a4代谢酶)，生物半衰期为6h(口服)、6-12h(静脉注射)、3h(婴幼儿静脉注射)，排泄是通过肾脏或胆脏。作为治疗确切的抗肿瘤药物，自上市已经与其他药物联合应用形成了多种标准治疗方法。依托泊苷的分子结构如式1所示。
式1.依托泊苷的分子结构式
山奈酚是植物界中广泛存在的黄酮类化合物，主要来源于姜科植物山奈的根茎，并大量存在于水果、茶叶和蔬菜中，具有抗癌、抗炎、抗氧化等多种生物活性及药理作用，具有开发成为抗癌新药的潜能。最新研究表明，山奈酚可通过调控多种机制发挥抗癌作用，如阻滞细胞周期于g2/m期、诱导细胞凋亡、抑制肿瘤血管新生、免疫系统的激活与调控、调节细胞内的sod水平等。此外，山奈酚与化疗药物联合使用，还能增强化疗敏感性的作用，且对机体正常组织毒性较小。因而，山奈酚用于治疗肿瘤及辅助化疗具有很好的应用前景。有研究发现，山奈酚对人小细胞肺癌h446细胞有明显的抑制作用，该抑制作用与山奈酚诱导的细胞周期阻滞和细胞凋亡有关。山奈酚的分子结构如式2所示。
式2.山奈酚的分子结构式
与现有技术相比，本发明的有益效果是：虽然依托泊苷和山奈酚的抑制肺癌作用已有报道，但是将二者联合起来用于治疗肺癌的效果还不为现有技术所知。发明人对现有的具有治疗肺癌效果的药物活性成分进行筛选和复配，意外地发现，依托泊苷和山奈酚在特定用量配比下的组合对治疗小细胞肺癌具有协同作用。两种药物活性成分的联合使用，可以降低依托泊苷和山奈酚各自在治疗小细胞肺癌时的使用剂量，能够起到增强疗效和降低副作用的效果，这一现象可为合理选择临床用药，降低药物毒性，提高小细胞肺癌治疗效果提供科学依据。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
依托泊苷和山奈酚的联合使用对人小细胞肺癌h446细胞增殖的影响
1、实验材料
依托泊苷，购自上海机纯实业有限公司。
山奈酚，购自西安禾清枫生物科技有限公司。
人小细胞肺癌细胞株h446，由中国协和医科大学细胞库提供。
2、细胞培养
人小细胞肺癌细胞株h446以rpmi-1640培养基培养，内含10％新生牛血清、青霉素100×10-3u/l、链霉素100mg/l。置37℃、5％co2环境下培养，每2-3d传代1次。
3、mtt法检测依托泊苷和山奈酚的联合使用对人小细胞肺癌h446细胞增殖的影响
设立空白对照组、单独用药组和联合用药组，根据药物浓度不同分为20,40,60,80mg/l。采用贴壁细胞培养法常规培养细胞，取对数生长期h466细胞，胰酶消化，稀释为单细胞悬液，并给予计数，按照每孔细胞数为3×103个接种于96孔培养板中，放置于37℃、5％co2恒温培养箱中培养，培养24小时后取出96孔培养板，将旧培养液吸去，加入含不同浓度药物的新培养液，总体积为每孔200μl，共设置复孔6个，培养48小时，然后于每孔中加入20μl5g/l的mtt，继续培养4小时后，轻微弃去含有mtt的培养液，于培养板中加入dmso150μl，震荡10分钟，测定吸光度，波长设定为570nm。抑制率(％)＝(od570对照组-od570加药组)/od570对照组。实验结果如表1所示。
表1mtt法测定依托泊苷和山奈酚合用对h446细胞的抑制作用
由表1的实验结果可以看出，与使用单种类的依托泊苷或山奈酚相比，将依托泊苷和山奈酚联合使用时，能够明显提升对人小细胞肺癌h446细胞增殖的抑制率，起到协同增效的抑制作用。例如，单独使用依托泊苷(80mg/l)时的细胞增殖抑制率为41.90％，单独使用山奈酚(80mg/l)时的细胞增殖抑制率为34.89％，而将依托泊苷(40mg/l)与山奈酚(40mg/l)配伍使用时，细胞增殖抑制率可显著提升至72.59％。
依托泊苷联合山奈酚对h446移植瘤裸鼠肿瘤生长的影响
balb/c裸小鼠，4-5周龄，体质量约20g，spf级，雌雄各半,购自上海斯莱克实验动物有限责任公司。
人小细胞肺癌细胞株h446用含10％小牛血清、100u/ml青霉素、100u/ml链霉素的rpmi-1640培养液及在co2体积分数为5％的37℃恒温箱中，于饱和湿度下进行培养。培养h446细胞至对数生长期，胰酶消化，用无血清无抗生素rpmi1640培养液洗涤2次，离心收集细胞，普通光学显微镜下观察计数，制成5×107个/ml的细胞悬液备用。用一次性无菌注射器抽取上述细胞悬液注入实验裸鼠右侧腋部皮下，每只鼠设1个皮下接种点，每点接种0.2ml细胞悬液，约含1×107个肿瘤细胞。
皮下接种肿瘤细胞10d后可见明显成瘤现象。待肿瘤体积达到50-100mm3，将荷瘤裸鼠随机分成4组,每组均为10只小鼠：模型对照组(每3天注射一次生理盐水)、依托泊苷组(每3天于腹腔注射一次，注射量为5mg/kg)、山奈酚组(每3天于腹腔注射一次，注射量为5mg/kg)、联合用药组(每3天于腹腔注射一次，依托泊苷和山奈酚的注射量均为2.5mg/kg)。从注射之日起,每天观察肿瘤形成及有无红肿、溃破。测量瘤体的长径(a)、短径(b),根据公式计算肿瘤体积(v＝1/2×a×b2)。4周后颈椎脱臼法处死所有小鼠，剥取肿瘤组织，用0.9％氯化钠溶液冲洗，滤纸吸干后称取肿瘤质量，计算抑瘤率。实验结果如表2所示。
表2依托泊苷联合山奈酚对h446移植瘤裸鼠肿瘤生长的影响
由表2的实验结果可以看出，治疗前各组之间肿瘤体积无明显差异；随着饲养时间的延长,肿瘤体积逐渐增大。结果显示，治疗期间各组肿瘤体积的增长速度不同，其中，模型对照组肿瘤体积增长速度最快，联合用药组最慢。治疗结束时，模型对照组的平均肿瘤体积为(1376±190)mm3,依托泊苷组为(904±83)mm3,山奈酚组为(972±91)mm3，而联合用药组仅为(539±40)mm3。根据治疗结束后的肿瘤质量来计算肿瘤抑制率，得到依托泊苷组、山奈酚组和联合用药组的肿瘤抑制率分别为35.5％、33.1％和64.5％，可见联合用药组的肿瘤抑制率与单药组相比具有显著差异，这说明依托泊苷和山奈酚的联合用药在抑制小细胞肺癌的增殖方面具有显著的协同增效作用。综上所述，本发明的药物组合物可以降低依托泊苷和山奈酚各自在治疗小细胞肺癌时的使用剂量，能够起到增强疗效和降低副作用的效果，这一现象可为合理选择临床用药，降低药物毒性，提高小细胞肺癌治疗效果等方面提供科学依据。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对技术方案做出若干修改或等同替换，这些修改或等同替换也应视为本发明的保护范围。