专利名称：一种抗过敏、抗哮喘和抗炎症的新药的制作方法
技术领域：
本发明属于一种新儿茶酚衍生物和它们的盐以及以它们为有效成份的5-脂加氧酶活性抑制剂有关的药物。
人体中由于5-脂加氧酶的作用，由花生四烯酸生成5-氢过氧化二十碳四烯酸，然后以这个化合物为中间体，生成各种白三烯类化合物。其中白三烯B4具有显著的促使白细胞游动的作用，是引起炎症的原因。白三烯C4以及白三烯D4是过敏的发病因子。
所以，具有抑制5-脂加氧酶活性作用的化合物，就有可能成为预防及治疗因5-脂加氧酶的代谢产物所引起的疾病，比如支气管哮喘、鼻腔过敏、眼睛发炎、特异反应性皮肤炎等过敏性疾病、浮肿、贫血性疾病、高血压、贫血性脑障害等循环系统的疾病。
到目前为止，Wellcome公司开发的BW-755C、Merck公司开发的L-651896、小野药品公司开发的OND-LP-219等近200种5-脂加氧酶抑制剂的开发工作均由于毒性、代谢、吸收性等方面的问题而停止了。
本发明的目的是提供新儿茶酚衍生物及其盐，以及以它们为有效成份的5-脂加氧酶抑制剂。
为了解决上述问题，本发明以5-脂加氧酶活性抑制作用为指标，对中国产药用植物进行分离、精制。发现了具有显著的5-脂加氧酶活性抑制作用的新儿茶酚衍生物，从而完成了本发明。
根据本发明，可以提供下列结构式所代表的新儿茶酚衍生物。
(R代表含1～10个氧原子或碳原子的直链及带支链的烷基，最好是甲基、乙基等含1～4个碳原子的低级烷基；或是含2～10个碳原子的脂肪族、芳香族酰基，最好是乙酰基、丙酰基等低级脂肪族酰基。
表示碳碳单键或双键)本发明的化合物，主要存在于中同四川省野生植物无毛粉条儿菜[Aletris glabra Bur.et Franch.(Liliaceae)]中。将全草干燥、粉碎后，用95％乙醇提取，除去溶剂，将所得粗提物用柱层析等适当的分离方法进行分离、纯化，得到了化(I)所表示的化合物。用以上方法分离得到的化(I)所表示的生理活性物质的新儿茶酚衍生物的结构是根据波谱学方法的解析结果鉴定的。
本发明的化合物作为医药品使用时，将本发明中的化合物直接或者添加医药品中允许的添加剂制成医药制剂进行给药，或者以二个化合物的混合物，以及含有它们的无毛粉条儿菜的提取物或浸膏(浸膏是指去掉浸取溶剂的提取物)的形式进行给药。
本发明中药理学上所允许的盐是指与无机碱所形成的盐，与有机碱所形成的盐，与氨基酸所形成的盐等。无机碱是指碱金属类，如锂、钠、钾；碱土金属类，如镁、钙等形成的无机碱，其他金属如铝、铅、铁等也包含在本发明中。有机碱是指胺类，比如氨、1级胺、2级胺、3级胺、含氮的杂环(包括脂肪族、芳香族)等。具体地说是指甲胺、二甲胺、三甲胺、乙胺、二乙胺、三乙胺、丙胺、二丙胺、异丙胺、二异丙胺、丁胺、二丁胺、异丁胺、叔丁胺、单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、吡咯烷、哌啶、吗啉、比咯、吡啶等；氨基酸是指赖氨酸、精氨酸、组氨酸等。
由于本发明可以抑制5-脂加氧酶的活性，从而抑制5-脂加氧酶的代谢产物白三烯类物质的生成，因此可以治疗及预防哺乳动物(例如人、猫、兔子、豚鼠、小鼠)等因这些代谢产物而引起的支气管哮喘、鼻过敏、眼炎、特异反应性皮炎等过敏性疾病、浮肿、贫血性疾病、高血压、贫血性脑障害等循环系统疾病。
本发明中的5-脂加氧酶活性抑制剂的给药方式可以是口服或非口服形式。剂型可以是锭剂、片剂、胶囊、粉未、乳化剂、悬浊剂、注射液等。以上剂型再结合各自合适的载体、成形剂或其他相应的添加剂，用常规的方法进行生产。
本发明中的新儿茶酚衍生物每日的给药量，因患者的状态、体重、衍生物的类型、给药方式等的不同而异。比如在非口服的情况下，皮下、静脉、肌肉或直肠内每日给药0.01～20mg/kg或0.1～10mg/kg。在口服的情况下，每日给药0.1～1000mg/kg或1～10mg/kg。
本发明中的新儿茶酚衍生物具有5-脂加氧酶活性的抑制作用，可用作抗过敏、抗哮喘、抗炎症的药物。用以下的实施例对本发明作具体的说明，但本发明并不限于下列实施例。1.7-二-(3、4-二羟基苯基)-4，6-庚二烯-3-酮的结构如下
在中国四川省采集到的无毛粉条儿菜[Aletris glabra Bur.etFranch.(Liliaceae)]全草，干燥、粉碎后、室温下用95％的乙醇提取，提取液在60℃以下减压浓缩，取所得提取物8.0克进行离心分配色谱(CPC)(三鬼电机公司制)，溶剂系统为氯仿-甲醇-异丙醇-水(7∶6∶2∶5)的混合液二相体系。然后用Merck公司制的硅胶60F254进行分离，同时对分离得到的各部分进行活性评价。
CPC粗分部分中得到的活性部分164.7mg，Rf＝0.3～1.0(溶剂氯仿-甲醇-异丙醇-水4∶3∶1∶2)将CPC粗分后所得活性部分用20克硅胶的柱层析进行梯度洗脱，溶剂系统为氯仿-甲醇-水(100∶10∶1)→40∶10∶1→20∶10∶1→甲醇。得到活性部分26.0mg。Rf＝0.4(氯仿-甲醇-水∶70∶10∶1)上述活性部分再用16克硅胶的柱层析进行梯度洗脱，溶剂为-氯仿-甲醇-水20∶1∶0→10∶1∶0→70∶10∶1。得到16.6mg5-脂加酶活性抑制剂的纯品。
得量16.6mg。Rf＝0.36(氯仿∶甲醇10∶1)以述活性纯品，根据以下的波谱鉴定出其结构为前述的新型儿茶酚衍生物类化合物。氢核磁共振谱在氘代氯仿中以四甲基硅烷为内标，在500兆周频率下测定了氢核磁共振谱，数据如下，单位ppm。
δ2.78(m，2H)，2.86(m，2H)，6.22(d，1H，J＝15.6H2)，6.53(dd，1H，J＝8.1，2.1Hz)，6.65(d，1H，J＝2.1Hz)，6.67(d，1H，J＝8.1Hz)，6.75(d，1H，J＝7.9Hz)，6.75(dd，1H，J＝15.6，11.0Hz)，6.88(dd，1H，J＝7.9，2.1Hz)，6.89(d，1H，J＝15.6Hz)，6.99(d，1H，J＝2.1Hz)，7.35(dd，1H，J＝15.6，11.0Hz)。C-13核磁共振谱在氘代氯仿中，以四甲基硅烷为内标，在125.8兆周频率下测定了C-13核磁共振谱。数据如下，单位ppm。δ31.2(t)，43.2(t)，114.7(d)，116.4(d)，116.6(d)，116.6(d)，120.7(d)，121.9(d)，125.0(d)，128.8(d)，129.9(s)，134.2(s)，144.0(d)，144.6(s)，146.2(d)，146.2(s)，146.7(s)，148.5(s)，203.0(s)。1、7-二-(3、4-二羟基苯基)-1.4.6-庚三烯-3-酮具有如下结构
离心分配色谱粗分后得A～C、a～d 7个部分，对各部分进行活性评价后，得到活性部分(部分B)1.32克。Rf＝0.3～1.0(氯仿-甲醇-异丙醇-水4∶3∶1∶2的有机相)。
上述活性部分用75克硅胶、氯仿-甲醇-水100∶10∶1→60∶10∶1→40∶10∶1→20∶10∶1进行柱层析梯度洗脱，得到了A～O的15个部分，并进行了活性评价。其中活性部分(部分F)的得量78.2mg，Rf＝0.3(氯仿-甲醇-水，70∶10∶1)以述部分用16克硅胶、正己烷-乙酸乙酯1∶1→1∶2→0∶1→甲醇进行柱层析梯度洗脱，得到A～D4个部分，并进行了活性评价。活性部分(部分D)的量为43.1mg，Rf＝0.35(氯仿-甲醇-水70∶10∶1)。
上述活性部分用中压柱(B型)进行纯化、洗脱剂为甲醇-水1∶1→1∶0，所得部分D即为5-脂加氧酶活性抑制剂的纯品11.9mg。活性部分(部分D)得量11.9mg，Rf＝0.38(反相，甲醇-水3∶2)。
上述活性成分的化学结构根据下列的波谱方法鉴定为新型儿茶酚衍生物1.7-二-(3，4-二羟基苯基)-1，4，6-庚三烯-3-酮。质谱(EI-MS法)C19H16O5计算值324.0998，实验值324.1024。氢核磁共振谱在氘代氯仿中，以四甲基硅烷为内标，在500兆周的频率下测定了氢核磁共振谱，数据如下单位ppmδ6.64(d，1H，J＝15.1Hz)，6.76(d，1H，J＝8.4Hz)，6.80(d，1H，J＝8.3Hz)，6.86(dd，1H，J＝15.3，10.7Hz)，6.91(d，1H，J＝15.8Hz)，6.91(dd，1H，J＝8.4，2.1Hz)，6.95(d，1H，J＝15.3Hz)，7.02(d，1H，J＝2.1Hz)，7.04(dd，1H，J＝8.3，2.1Hz)，7.12(d，1H，J＝2.1Hz)，7.52(dd，1H，J＝15.1，10.1Hz)，7.59(d，1H，J＝15.8Hz)。C-13核磁共振谱在氘代氯仿中，以四甲基硅烷为内标，在125.8兆周的频率下测定了C-13核磁共振谱，数据如下，单位ppm。
δ114.8(d)，115.7(d)，116.7(d)，116.8(d)，122.0(d)，123.6(d)，123.7(d)，125.5(d)，128.5(s)，128.5(d)，130.1(s)，144.2(d)，145.7(d)，146.1(d)，146.9(s)，147.1(s)，148.6(s)，150.2(s)，191.9(s)。
<实施例3>5-脂加氧酶活性抑制实验本实验以调查本发明中的化合物的5-脂加氧酶活性抑制作用为目的。
1.酶溶液的配制豚鼠好碱性白血病细胞(Rat Basophilic Leukemia CellRBL-1，ATCC CRL1378)在含10％非动化牛胎儿血清的eagle培养液中培养，细胞用PBS洗三回洗干净后，在含1mM EDTA、0.1M HEPES、PH为7.0的溶液中1×107个/ml的比例进行分散。用超声波将细胞破粹后，13,000转/分离心60分钟，上清液即为酶溶液。
2.酶活性的测定方法将上述酶溶液54ul添加到含1mM EDTA、2mM氯化钙，被检测物质(溶解于DMSO中)、0.1M HEPES、PH为7.0的溶液中，总体积为120ul。37℃下静置10分钟后，加入6ul 0.4mg/ml的花生油烯酸(甲醇溶液)，在37℃下反应60分钟后，添加120ul己晴终止反应，13000转/分离心10分钟，用高压液相色谱检测上清液中所含的5-羟基二十碳四烯酸的含量。
上述测定的结果为5-脂加氧酶活性50％被抑制时的浓度(IC50)，1.7-二-(3，4-二羟基苯基)-4，6-庚二烯-3-酮为70nM，1.7-二-(3，4-二羟基苯基)-1，4，6-庚三烯-3-酮为43nM。
权利要求
1.一种抗过敏、抗哮揣和抗炎症的新药，其特征是有效成分是新儿茶酚衍生物以及它们在药理学上允许的盐，结构式为
(R代表氧原子或碳原子数为1～10个的直链或带有支链的烷基，或碳原子数为2～10个的脂肪族及芳香族酰基，
表示碳碳键为单键或双键)。
2.根据权利要求1所述的一种新药，其特征是新儿茶酚衍生物以及它们在药理学上允许的盐所组成的药物。
3.根据权利要求1所述的一种新药，其特征是新儿茶酚衍生物以及它们在药理学上允许的盐为有效成份的5-脂加氧酶活性抑制剂。
4.根据权利要求3所述的一种新药，其特征是用于治疗过敏、抗哮喘或抗炎症。
全文摘要
通过对90余种高山药用植物的活性筛选、分离、结构鉴定后,发现了2个新儿茶酚衍生物类化合物,其结构如下:为单键或双键经活性实验表明,这两个新儿茶酚衍生物类化合物具有显著的抑制5－脂加氧酶的活性,他们的IC
文档编号A61P37/08GK1180065SQ9611773
公开日1998年4月29日 申请日期1996年10月8日 优先权日1995年12月12日
发明者俞文胜, 胡孝纮, 德田昌彦, 川边纪雄, 户上泰彦, 石千寻 申请人:中国科学院成都生物研究所, 东丽株式会社