本发明属于药物含量检测领域，尤其是涉及一种洛芬的含量检测方法。
背景技术：
：非甾体抗炎药是一类不含有甾体结构的抗炎药，临床上广泛用于哺乳动物乳腺炎、子宫炎、关节炎的治疗及各种发热和疼痛症状的缓解，由于疗效显著，目前已成为用量最多的首要种类之一。卡洛芬是2-芳基丙酸类非甾体消炎镇痛药，主要用于动物关节治疗，与其他非甾体抗炎药相比，作用明显、胃肠道作用及肾毒性作用要小许多。卡洛芬，英文名：Carprofen，CAS号为53716-49-7，分子式为C15H12CLNO2,分子量为273.71，，熔点为197-198℃，结构式如(I)所示，目前监测卡洛芬的方法是固相萃取液质联用技术，设备复杂，过程复杂，对操作人员技能要求比较高，不适合工业化大批量样本操作。技术实现要素：有鉴于此，本发明旨在提出一种洛芬的含量检测方法，检测结果准确可靠，检测范围大。为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：一种卡洛芬的含量检测方法，采用Agilent-1260高效液相色谱仪进行分析，采用DAD检测器，检测波长为235nm，进样量为20μl，包括如下步骤：(1)色谱条件：色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充物，采用Agilent-1260高效液相色谱wondasilC18进行测定；流动相为甲醇-0.02mol/l磷酸二氢钠，其中，甲醇的体积分数为65-80％；流速为0.6-1.5ml/min；柱温为25-40℃；(2)样品处理：精密称量标准品约50.0mg，放入50ml容量瓶中，加入色谱甲醇溶解后定容至刻度线，摇匀后用0.45m有机滤头过滤；精密称量相同质量的供试品，放入50ml容量瓶中，加入色谱甲醇溶解后定容至刻度线，摇匀后用0.45m有机滤头过滤；(3)测定法：按上述条件，分别对标准品与供试品进行自动进样，用外标法以峰面积计算卡洛芬的含量。进一步，所述的步骤(3)中的计算卡洛芬含量的测定公式为：卡洛芬含量(％)＝(待测品峰面积/标准品峰面积)*(标准品浓度/待测品浓度)*100％。进一步，所述的步骤(1)中的高效液相色谱wondasilC18柱为4.6*250mm，5μmwondasilC18柱、4.6*150mm，5μmwondasilC18柱或4.6*100mm，5μmwondasilC18柱中的一种。优选的，所述的步骤(1)中甲醇的体积分数为75％。优选的，所述的步骤(1)中流速为1ml/min。优选的，所述的步骤(1)中柱温度为30℃。相对于现有技术，本发明所述的卡洛芬的含量检测方法具有以下优势：本发明所述的卡洛芬的含量检测方法通过液相色谱法进行分析检测，是一种简便、分离效果好、精密度和准确度高的卡洛芬含量的检测方法，检测结果准确可靠，检测范围大，灵敏度高和准确度高。附图说明构成本发明的一部分的附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：图1为本发明实施例所述的卡洛芬标准品的HPLC检测图谱；图2为本发明实施例所述的卡洛芬的线性关系图与回归方程。具体实施方式除非另外说明，本文中所用的术语均具有本领域技术人员常规理解的含义，为了便于理解本发明，将本文中使用的一些术语进行了下述定义。下面结合实施例来详细说明本发明。实施例1精密称取标准品50.0mg，置于50ml容量瓶中，加色谱甲醇超声溶解后稀释定容至刻度线，用1ml注射器取溶液经0.45μm的一次性有机滤头过滤，得标准品溶液；精密称取相同重量的供试品，置于50ml容量瓶中，加色谱甲醇超声溶解后稀释定容至刻度线，用1ml注射器取溶液经0.45μm的一次性有机滤头过滤，得供试品溶液。标准品溶液和供试品溶液各配置5份。色谱条件：用Agilent-1260高效液相色谱wondasilC18柱(4.6*250mm，5μm)；流动相：甲醇-0.02mol/l磷酸二氢钠(75:25)；流速：1ml/min；检测波长：235nm；采集时间25min；检测器：紫外检测器；柱温：30℃。按上述色谱条件，对所有标准品和供试品分别进样，如图1所示，标准品溶液5个样品分别进样所得峰面积平均值为5969，RSD值为0.16％；供试品溶液5个样品分别进样所得峰面积平均值为5932，RSD值为0.23％。根据公式：卡洛芬含量(％)＝(待测品峰面积/标准品峰面积)*(标准品浓度/待测品浓度)*100％采用外标法将标准品与供试品平均值代入即可得供试品卡洛芬的含量为99.51％。本发明实施例1所述检测方法的方法学考察(1)精密度考察称取同一卡洛芬样品，进行6次重复试验，峰面积表1；表1卡洛芬6次重复试验的面积次数123456峰面积598059905972597859645997峰面积RSD为0.20％，结果表明，本HPLC法检测卡洛芬含量精密度高，重现性好。(2)线性关系试验根据发明所述方法，用50ml的容量瓶配制浓度为10mg/ml的储备液，加甲醇分别稀释成0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml、1.5mg/ml、2.0mg/ml的标准溶液，按照本发明分析方法，对进样量(X)和峰面积(Y)进行数据回归分析，线性关系如图2所示，回归方程为y＝6033.8x-20.68。结果表明卡洛芬在2ug-40ug浓度范围内，峰面积和进样量呈良好的线性关系。(3)加样回收实验准确称取已知含量的卡洛芬样品适量，再分别精密加入一定量的卡洛芬样品80％、100％、120％，使供试品溶液中的卡洛芬浓度分别在卡洛芬标准曲线的高、中、低区域各3份，按本发明项下的操作，依法测定，计算回收率，结果平均回收率为99.68％，RSD为0.45％，表明该方法加样回收率好。综上表明本发明所述含量检测方法稳定性好，精密度好，适用于卡洛芬的含量测定。再次精密称量50mg相同样品置于50ml容量瓶中，加色谱甲醇稀释后定容至刻度线；精密称量20、40、50、60、80mg标准品分别置于50ml容量瓶中，加色谱甲醇稀释后定容至刻度线，得到标准品溶液0.4mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml、1.2mg/ml、1.6mg/ml。色谱条件：AgilentZorbaxExtendC18色谱柱(3*50mm，3μm)，柱温：30℃，流速：0.8ml/min；检测波长：235nm；进样量：10μl，流动相：A甲醇，B0.2％甲酸水溶液，采用梯度冲洗的方法见下表2。表2梯度冲洗时间(min)AB010900.510901.59010490104.510905.51090质谱条件：电喷雾电离源(ESI)；喷雾电压(IS)-4.2kv；多反应监测模式(MRM)；负离子扫描；雾化气压力(GSI)50psi，辅助气流速(GS2)55L/min，气帘气压力(GUR)20psi，离子源温度(TEM)150℃，碰撞室压力(CAD)7psi，选择性检测荷质比(m/z)为193带负电荷的分子离子峰。按上述条件，对标准品1、2、3、4、5和供试品分别进样，测得供试品中卡洛芬的含量为99.3％。实施例2样品及标准品配置同实施例1.色谱条件：用Agilent-1260高效液相色谱wondasilC18柱(4.6*150mm，5μm)；流动相：甲醇-0.02mol/l磷酸二氢钠(65:35)；流速：0.6ml/min；检测波长：235nm；采集时间35min；柱温：40℃。按上述色谱条件，对所有标准品和供试品分别进样，如图1所示，标准品溶液5个样品分别进样所得峰面积平均值为6014，RSD值为0.34％；供试品溶液5个样品分别进样所得峰面积平均值为5946，RSD值为0.43％。根据公式：卡洛芬含量(％)＝(待测品峰面积/标准品峰面积)*(标准品浓度/待测品浓度)*100％采用外标法将标准品与供试品平均值代入即可得供试品卡洛芬的含量为99.02％。实施例3样品及标准品配置同实施例1.色谱条件：用Agilent-1260高效液相色谱wondasilC18柱(4.6*100mm，5μm)；流动相：甲醇-0.02mol/l磷酸二氢钠(80:20)；流速：1.5ml/min；检测波长：235nm；采集时间25min；柱温：25℃。按上述色谱条件，对所有标准品和供试品分别进样，如图1所示，标准品溶液5个样品分别进样所得峰面积平均值为6203，RSD值为0.47％；供试品溶液5个样品分别进样所得峰面积平均值为6016，RSD值为0.63％。根据公式：卡洛芬含量(％)＝(待测品峰面积/标准品峰面积)*(标准品浓度/待测品浓度)*100％采用外标法将标准品与供试品平均值代入即可得供试品卡洛芬的含量为100.14％。以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页1 2 3