专利名称：改善视神经乳头循环的药物的制作方法
技术领域：
本发明涉及改善视神经乳头循环的药物，尤其是治疗正常张力性青光眼的药物，所述药物包含洛美利嗪或其可药用酸加成盐作为活性组分。
背景技术：
青光眼是导致失明的一种主要原因，并且被定义为“眼疾病，其特征是眼内压升高、和由于眼内压升高导致的暂时性或持久性视神经机能障碍”。虽然对于高眼内压性青光眼例如闭角性青光眼或继发性青光眼，该定义是可适用的，但是对于不伴有眼内压升高的正常张力性青光眼，则该定义不适用。
最近，人们已经对由眼外周循环障碍例如视神经乳头循环障碍引起的、同时眼内张力在正常范围内的正常张力性青光眼有了注意。因此，人们已经对正常张力性青光眼的综合征进行了各种研究，以找到治疗该疾病的方法。
另一方面，已知钙离子拮抗剂对眼循环是有效的。钙离子拮抗剂可阻断兴奋细胞例如平滑肌和心肌细胞内的电位依赖性钙通道，抑制钙离子向细胞内的流动，因为钙离子向细胞内流动会诱导平滑肌松弛和抑制心肌收缩，所以钙离子拮抗剂被广泛用于治疗心绞痛和高血压。还已知，随着钙离子拮抗剂种类的不同，钙离子拮抗剂对眼循环的作用是不同的。例如，就对视神经乳头的作用而言，尼卡地平表现出弱活性，但是尼伐地平表现出增强视神经乳头内血流的活性(参见“Nichi-Gan Kaishi”(《日本眼科学杂志》(Journal of JapaneseOphthalmology Society))，Vol.100，No.12，p.923，1996)。
具有下述化学式(Ⅰ)所示结构的洛美利嗪或其可药用酸加成盐是钙离子拮抗剂，其具有苄基哌嗪母核，并公开在JP-A-60-222472中，目前该化合物的二盐酸盐(盐酸洛美利嗪)正以代号K2796作为治疗偏头痛的药物进行研究。 JP-A(Kohyo)-7-508030公开了一种用于治疗青光眼的局部眼用组合物，其中包含联合使用的钙拮抗剂和具有降低或控制眼内压活性的化合物，其中公开了包括KB 2796在内的多种已知钙拮抗剂。
上述日本专利出版物公开，在用于治疗青光眼的局部眼用组合物中使用的已知钙拮抗剂“优选是能降低眼内灌注压、并且在不降低系统血压时具有降低眼内血流的倾向的钙拮抗剂”(参见其中的说明书，第4页，右上栏末行到左下栏第2行)。
然而，与之相反的是，如下文所述，洛美利嗪或其可药用酸加成盐既不降低系统血压，也不降低眼内灌注压，但是可增强眼内血流。
此外，上述专利出版物仅公开了KB 2796的名称，但是从没有提出甚至是建议洛美利嗪或其可药用酸加成盐对视神经乳头循环的活性。
本发明的公开人们强烈地希望使用不具有任何系统作用例如降血压活性的药物来在临床上治疗正常张力性青光眼。
本发明的目的是提供改善视神经乳头循环的新药物，所述药物不具有任何系统作用例如降血压活性，并且可用于治疗正常张力性青光眼。
本发明者们已经进行了充分研究，并且发现，在多种钙离子拮抗剂当中，洛美利嗪或其可药用酸加成盐表现出很小的降血压活性，也就是说具有弱的外周血管舒张活性，并且不增加外周血流，但是可令人惊奇地增加眼外周(视神经乳头)内血流，由此完成了本发明。
附图简要说明附
图1示出了在实验1中盐酸洛美利嗪给药组的NB值(标准模糊值模糊定量指数)变化率。
附图2示出了在实验1中尼伐地平给药组的NB值变化率。
附图3示出了在实验1中盐酸洛美利嗪给药组的眼内压。
附图4示出了在实验1中尼伐地平给药组的眼内压。
附图5示出了在实验1中盐酸洛美利嗪给药组的平均血压。
附图6示出了在实验1中尼伐地平给药组的平均血压。
附图7示出了在实验1中盐酸洛美利嗪给药组的心率。
附图8示出了在实验1中尼伐地平给药组的心率。
附图9示出了在实验3中盐酸洛美利嗪给药组的血流变化率。
在附图1、2、6、7、8和9中，每一数据的标准误差如下*p＜0.05，**p＜0.01(相对于载体给药组)在附图1、3、5、7和9中，每一曲线的含义如下○载体给药组●盐酸洛美利嗪给药组，0.03mg/kg，i.v.
△盐酸洛美利嗪给药组，0.1mg/kg，i.v.
▲盐酸洛美利嗪给药组，0.3mg/kg，i.v.
此外，在附图2、4、6和8中，每一曲线的含义如下○载体给药组●尼伐地平给药组，0.003mg/kg，i.v.
△尼伐地平给药组，0.01mg/kg，i.v.
▲尼伐地平给药组，0.03mg/kg，i.v.
实施本发明的最佳方式用于改善视神经乳头循环的本发明药物包含洛美利嗪或其可药用酸加成盐作为活性组分。这些化合物是通过已知方法、例如在上述JP-A-60-222472中公开的方法制得的。
所述可药用酸加成盐包括，与无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸形成的盐，或者与有机酸例如马来酸、富马酸、琥珀酸、柠檬酸成的盐，特别优选的盐是二盐酸盐。
此外，已知洛美利嗪的可药用酸加成盐还以多晶型物或水合物形式存在，本发明活性组分也包括这些多晶型物或水合物。
可以以适于口服给药或注射的剂型、优选以口服给药剂型将用于改善视神经乳头循环的本发明药物给予患有正常张力性青光眼的患者。
口服给药制剂包括片剂、粒剂、细粒剂、粉剂等，这些制剂可通过常规方法、将洛美利嗪或其可药用酸加成盐与常规可药用添加剂混合而制得，所述可药用添加剂有例如乳糖、玉米淀粉、微晶纤维素、硬脂酸镁、羧甲基纤维素钙、羟丙基纤维素、滑石等。
注射剂可这样制得将洛美利嗪或其可药用酸加成盐溶于注射用蒸馏水，可任选向其中加入等渗剂(例如甘露糖醇、氯化钠、葡萄糖、山梨醇、甘油、木糖醇、果糖、麦芽糖、甘露糖等)、稳定剂(例如亚硫酸钠、白蛋白等)、防腐剂(例如苯甲醇、对羟基苯甲酸甲酯等)。还可任选向注射剂中加入pH调节剂例如酸(例如盐酸、甲磺酸、柠檬酸等)或碱(例如氢氧化钠、二异丙醇胺等)。
注射剂可以是使用时溶于溶剂中的冷冻干燥制剂。冷冻干燥制剂可通过将上述活性组分的水溶液冷冻干燥而制得，可任选向其中加入上述等渗剂、稳定剂、防腐剂、pH调节剂等。
本发明药物可增加视神经乳头中的血流，并且可改善视神经乳头循环，因此可特别用于治疗正常张力性青光眼。
本发明视神经乳头循环改善药物的剂量可随给药途径、疾病严重程度、患者年龄、体重等因素而变，但是通常为每天0.1mg-100mg洛美利嗪或其可药用酸加成盐，每天给药1-3次。
当视神经乳头循环改善药物包含盐酸洛美利嗪作为活性组分时，其特别优选通过口服给药，其剂量可随疾病严重程度、患者年龄和体重而变，但是通常为每天1mg-40mg盐酸洛美利嗪，每天给药1-3次。其优选以每天2mg-10mg的剂量每天给药2次或3次。
洛美利嗪或其可药用酸加成盐可增加视神经乳头中的血流，同时其系统副作用例如降血压活性或增加心率作用很小(参见实验1)。本发明视神经乳头循环改善药物还较少表现出其它副作用(客观和主观症状)。此外，在老年人(65-85岁)中的副作用表现与在年轻人(15-64岁)中的副作用表现差异很小。
因此，本发明视神经乳头循环改善药物具有高度安全性，甚至在老年患者中也可安全使用，特别是治疗正常张力性青光眼。
此外，本发明视神经乳头循环改善药物可通过口服给药有效地发挥效力(参见实验2)。
本发明视神经乳头循环改善药物的上述优点可通过下述实验证实。
将20mg盐酸洛美利嗪(5mg×4片)对具有正常眼内压的健康男性志愿者(6名男子)给药，在给药后第1.5、3.0、4.5和6.0小时，通过超声发色多普勒法测定中央视网膜动脉和眼动脉中的血流。同时也测定血压、心率和眼内压。
结果发现，在不影响血压和眼内压的剂量下，盐酸洛美利嗪可显著增加中央视网膜动脉中的血流。因为中央视网膜动脉与视网膜和视神经乳头中的血流相关，因此认为盐酸洛美利嗪在不影响血压和眼内压的剂量下能有效地改善视网膜中循环机能障碍。此外，盐酸洛美利嗪对眼动脉血流没有显著作用。另外，给药4.5小时后，心率有暂时减慢。
当通过Sugiyama等人的方法[参见Tetsuya SUGIYAMA和IkuoAZUMA，“Atarashii Ganka”(《眼睛杂志》(Journal of the Eye))，Vol.14，No.5，pp.745-748，1997]观察盐酸洛美利嗪对由给药内皮肽-1所诱导的视神经乳头中血流减少的作用时，结果发现，其表现出对视神经乳头中血流减少的剂量依赖性抑制(参见实验3)。
此外，从下述实验结果中可预期到，本发明视神经乳头循环改善药物可抑制在青光眼患者中通常观察到的视网膜神经细胞死亡。
鉴于在青光眼患者玻璃体中谷氨酸的浓度高到足以诱导视网膜神经细胞死亡，以及在实验模型中视网膜神经细胞由于露置于谷氨酸而消失，我们进行了下述实验。
从怀孕大鼠的胚胎(确证怀孕后18天)中分离出视网膜神经细胞并培养10天，用谷氨酸(500μM)处理10分钟。把所得神经细胞在不含谷氨酸的培养基中培养1小时，然后通过台盼蓝排除法测定谷氨酸的神经毒性。从用谷氨酸处理前30分钟开始，将盐酸洛美利嗪施加到受测神经细胞上直至评价细胞存活率后1小时为止。
结果发现，盐酸洛美利嗪表现出抗谷氨酸诱导的神经细胞死亡的剂量依赖性抑制活性，并在0.01、0.1和1μM的浓度下表现出显著的抑制活性。
通过下述实验举例说明本发明药物的作用。实验1(视神经乳头循环改善活性)如下文所述，通过使用NB值变化率作为指数来测定视神经乳头循环改善活性。(1)测试化合物盐酸洛美利嗪尼伐地平(阳性对照)(2)测试方法1)通过激光散斑技术测定视神经乳头中血流在OSHIDA-型固体箱中饲养雄性新西兰白兔(重2.3-3.1kg)，用Xylocaine Spray(商品名，Fujisawa Pharmaceutical生产)和Xylocaine Jelly(商品名，Fujisawa Pharmaceutical生产)将左心房局部麻醉，把一个导管(Polyethylene Tube SP28，Natsume出产)插到后心房动脉中以测定血压和心率，用记录仪(WT-645G，Nihon-Koden制造)连续记录血压和心率。在局部麻醉下，同样把用于给予测试药物的导管(Polyethylene Tube SP31，Natsume出产)插到动物右后心房静脉中。通过滴加Mydrin M(商品名，SantenPharmaceutical生产)将动物两只眼睛都进行瞳孔放大，然后通过滴加0.4％Benoxil(商品名，Santen Pharmaceutical生产)溶液将右眼局部麻醉，把控制线悬挂在上直肌和下直肌上。
如下所述测定视神经乳头血流用眼底循环分析器(激光散斑循环分析器-ⅡLSCA-Ⅱ)在右视神经乳头上选择没有表面血管的部分
，测定整个视野定量模糊指数平均值(100×100)[标准模糊值]，并通过下述公式计算NB值的变化率(％)NB值变化率(％)=(给予药物或载体后NB值*)/(给予药物或载体前NB值)×100*)给予测试药物或载体(作为对照)后的NB值是这样测定的用1分钟静脉内(i.v.)给予0.1ml/kg量测试药物或载体，然后在给药后第5、15、30、60、90和120分钟测定NB值。
测试药物是这样制备的将含有2％酒石酸的20％二甲基乙酰胺溶液加到测试药物中，以把给药体积调节至0.1ml/kg，并通过向其中加入热水来将混合物溶解。2)测定眼内压每次当给予药物或载体后测定上述NB值时(除了给药5分钟后不测定眼内压以外)，通过用校准肺活量计(Alcon ApplicationPneumatonograph，Nippon Alcon制造)滴加0.4％Benoxil(商品名，Santen Pharmaceutical生产)溶液后，在左眼上测定眼内压。3)统计学确定给予药物或载体后的数据与给予药物或载体之前的数据之间的改变值，对于每一项，确定每次测试中6只动物的平均值和标准偏差，结果如附图1-8所示。通过在每次测试时与载体给药对照组的数据进行比较的t-测试，来确定测试药物的测试显著性。在低于5％的组和低于1％的组中独立地指示显著性标准。(3)测试结果与载体给药组相比，在给予盐酸洛美利嗪(0.03、0.1和0.3mg/kg，i.v.)的组中，视神经乳头血流增加了。在每次测试时，与载体给药组相比，盐酸洛美利嗪都能有效地增加视神经乳头血流，并且在给药5分钟和15分钟后表现出显著差异。此外，在用0.1或0.3mg/kg盐酸洛美利嗪给药的组中，甚至在给药30分钟后也表现出了显著的增加效果(参见附图1)。与之相反，在相同剂量下，与载体给药组相比，给予盐酸洛美利嗪的组在眼内压、平均血压和心率方面没有表现出显著作用，除了在给予0.3mg/kg药物的组中，给药5分钟后观察到心率的一定显著增加(参见附图3、5和7)。
与载体给药组相比，在给予尼伐地平(0.003、0.01和0.03mg/kg，i.v.)的组中，也观察到了视神经乳头血流的较高增加，给药5分钟后作用是显著的。此外，给药15分钟后在给予0.003和0.03mg/kg药物的组中，和给药30分钟后在给予0.03mg/kg药物的组中，观察到了显著的增加活性(参见附图2)。然而，给药5分钟后在给予0.01和0.03mg/kg药物的组中，和给药15分钟后在给予0.03mg/kg药物的组中，观察到了显著的降血压活性(参见附图6)。另外，给药5分钟后在所有组中，给药15分钟后在给予0.03mg/kg药物的组中，和给药30分钟后在给予0.01和0.03mg/kg药物的组中，观察到心率显著增加(参见附图8)。与之相反，在尼伐地平给药组中，没有观察到对眼内压的任何明显作用(参见附图4)。
从上述结果中可清楚地看出，尼伐地平表现出与视神经乳头血流增加活性相伴的剂量依赖性降血压活性和心率增加活性，但是与之相反，盐酸洛美利嗪可增加视神经乳头血流，同时没有副作用例如降血压活性或心率增加活性或副作用很小，因此盐酸洛美利嗪具有高度安全性，并且甚至对于老年人也能高度安全地使用。实验2(测定兔子中药物血浆浓度)在与上述实验1相同的条件下，如下所述，在给予盐酸洛美利嗪(0.03mg/kg，i.v.)的组中，在给药后第5、15、30和60分钟测定洛美利嗪的血浆浓度。(1)测试化合物盐酸洛美利嗪(2)测试方法将雄性新西兰白兔(重2.5-3.5kg，每组3只)置于OSHIDA-型固体箱中。在含有2％酒石酸的20％二甲基乙酰胺中制备盐酸洛美利嗪溶液(含量为0.03mg/kg)，并给到兔子右后心房静脉中。之后，在给予测试药物后第5、15、30和60分钟从左后心房静脉采集血样。将采集的血样离心(4℃，3000rpm×10分钟)以获得血浆样本，然后通过气相色谱法测定血浆中洛美利嗪的含量。
在下述条件下进行气相色谱测定所用仪器GC-14B型气相色谱仪(Shimadzu Corporation制造)FTD检测器(Shimadzu FTD-8，Shimadzu Corporation制造)测定条件柱Shimadzu CBP1-M25-025(25m×0.2mm，膜厚度0.25μm)注射端口温度310℃柱温285℃检测器温度310℃载气氦(2.30kg/m2)补充气氦(流速40ml/分钟)H2流速3.8ml/分钟空气流速160ml/分钟(3)测试结果测试结果如表1所示。
测试制剂的组成
在实验开始时，将测试制剂敷用在皮肤表面，形成一层薄层。在0.5、12或24小时，模拟普通淋浴/沐浴，即用5毫升温水(32℃)冲洗皮肤表面。在持续24小时的渗透测试结束后，用甲醇药签去除残留在皮肤表面的硝酸咪0.2升/分钟的流速给兔子吸入4分钟氢气，然后停止吸入氢气。根据氢气浓度的清除曲线，用计算机计算半衰期，以确定该组织中的血流速度，然后通过下述公式计算血流的变化率(％)血流变化率(％)=(给予药物或载体后的血流*)/(给予药物或载体前的血流)×100*)给予药物或载体后的血流值是这样测定的用1分钟将0.1ml/kg的测试药物或载体(作为对照)给到股静脉中(i.v.)，然后在给药后5分钟把内皮肽-1(Peptite Institute出产，10-6M 100μl)给到玻璃体内，之后在内皮肽-1给药后第15、45、75、105、135和165分钟测定血流。10-6M内皮肽溶液是通过将内皮肽以10-4M浓度溶于0.1％乙酸中，并用人造眼用灌注液Opeguard MA(商品名，SenjuPharmaceutical出产)将该混合物稀释制得的。
测试药物是这样制备的将含有2％酒石酸的20％二甲基乙酰胺溶液加到测试药物中，以把给药体积调节至0.1ml/kg，并通过向其中加入热水来将该混合物溶解。
2)统计学在每次6只动物中确定平均值和标准误差，结果如附图9所示。通过在每次测试时与载体给药对照组的数据进行比较的t-测试，来确定测试药物的测试显著性。在低于5％的组和低于1％的组中独立地指示显著性标准。(3)测试结果在给予盐酸洛美利嗪(0.03、0.1和0.3mg/kg，i.v.)的组中，由内皮肽-1导致的视神经乳头血流减少被剂量依赖性地抑制了，并且与载体给药组相比，给药135分钟后在用0.03mg/kg药物给药的组中观察到了显著性差异。此外，给药15、45和135分钟后在0.1mg/kg药物给药组中，和给药45、75、105、135和165分钟后在0.3mg/kg药物给药组中，观察到了显著抑制作用(参见附图9)。
实施例通过下述实施例进一步举例说明本发明。
实施例1(片剂)将盐酸洛美利嗪(5重量份)、乳糖(30重量份)和微晶纤维素(33重量份)均匀混合，向该粉状混合物中加入5％玉米淀粉水溶液(7.5重量份)，通过湿法制粒法将所得混合物制粒。将所得颗粒与玉米淀粉(22.5重量份)和硬脂酸镁(2重量份)混合，把该混合物制片以获得片剂(1片100mg，含有5mg盐酸洛美利嗪)。
实施例2(粒剂)将盐酸洛美利嗪(5重量份)和乳糖(50重量份)均匀混合，向该粉状混合物中加入5％玉米淀粉水溶液(45重量份)，通过湿法制粒法将所得混合物制粒，以制得每100mg含有5mg盐酸洛美利嗪的粒剂。
工业实用性在本发明视神经乳头循环改善药物中作为活性组分的洛美利嗪或其可药用酸加成盐可增加视神经乳头血流，同时几乎没有系统副作用例如降血压活性或心率增加活性，并很少表现出其它副作用(主观和客观症状)，并且其另外特征是，在老年人(65-85岁)中的副作用表现与在年轻人(15-64岁之间)中的副作用表现没有什么不同，因此，本发明药物可用于改善视神经乳头循环，尤其可用于治疗正常张力性青光眼。
权利要求
1．改善视神经乳头循环的药物，其中包含洛美利嗪或其可药用酸加成盐作为活性组分。
2．权利要求1的药物，其中所述可药用酸加成盐是二盐酸盐。
3．权利要求1或2的药物，其中所述药物可用于治疗正常张力性青光眼。
4．权利要求3的药物，其中所述药物是适于口服给药的剂型。
5．洛美利嗪或其可药用酸加成盐在制备用于改善视神经乳头循环的药物中的应用。
6．权利要求5的应用，其中所述可药用酸加成盐是二盐酸盐。
7．权利要求5或6的应用，其中所述用途是用于治疗正常张力性青光眼。
8．权利要求7的应用，其中所述用途是用于制备适于口服给药的制剂。
9．改善视神经乳头循环的方法，包括将有效量的洛美利嗪或其可药用酸加成盐对视神经疾病患者给药。
10．权利要求9的方法，其中所述可药用酸加成盐是二盐酸盐。
11．权利要求9和10的方法，所述方法用于治疗正常张力性青光眼。
12．权利要求11的方法，该方法是通过口服给药进行的。
全文摘要
本发明提供了新的视神经乳头循环改善剂,其中包含式(Ⅰ)所示洛美利嗪或其可药用酸加成盐作为活性组分。本发明视神经乳头循环改善剂可促进视神经乳头血流,同时具有很小或没有系统副作用例如降血压或增加心率,并且可特别用于治疗正常张力性青光眼。
文档编号A61K31/495GK1295475SQ99804594
公开日2001年5月16日 申请日期1999年1月21日 优先权日1998年1月29日
发明者原英彰, 嶋泽雅光, 岩仓裕士, 杉山哲也 申请人:阿克苏诺贝尔公司