巨大戟二萜类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种巨大戟二萜类化合物的应用，特别是涉及一种巨大戟二萜类化合 物在制备抗肿瘤药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 癌症，是严重危及人体生命的第一大恶性疾病，其中，乳腺癌已成为对妇女健康威 胁最大的癌症之一。随着现代社会经济的发展，各种社会问题和家庭问题造成的不健康的 生活环境因素，使女性乳腺癌发病率逐年增高，目前全球每年平均有130万人新患乳腺癌， 且近年来呈现不断上升趋势，近年我国乳腺癌发病率的增长速度高出高发国家1-2个百分 点，且呈明显年轻化趋势。
[0003] 乳腺癌是乳房腺上皮细胞在多种致癌因子作用下，发生了基因突变，致使细胞增 生失控。由于癌细胞的生物行为发生了改变，呈现出无序、无限制的恶性增生。乳腺细胞 发生突变后便丧失了正常细胞的特性，组织结构紊乱，细胞连接松散，癌细胞很容易脱落游 离，随血液或淋巴液等播散全身，形成早期的远端转移，给乳腺癌的临床治愈增加了很大困 难。而全身重要脏器的转移如肺转移、脑转移、骨转移等都将直接威胁人的生命。因此，目 前治疗各种乳腺癌症及相关病症已成为医学界的重要课题。
[0004]目前临床上治疗乳腺癌主要方式仍然是外科手术治疗，尽管手术方式有多种类 型，但很多病人身体机能和状态不足以耐受手术，且手术的破坏性依然较大，局部复发性风 险依然极高，且并发症严重。而放射治疗受目前的设备及生物学效应影响，较难达到完全杀 灭肿瘤细胞的目的，多用于综合治疗。而目前现有的药物治疗不论是化学药物还是中草药， 均有不同程度严重的副作用，因此，研究和开发药效明显，靶向性强，毒副作用小的天然产 物势在必行，可以弥补手术治疗、放射治疗、化学治疗的不足，既能巩固放疗、化疗的效果， 又能消除放化疗的毒副作用。
[0005] 天然产物在药物研究领域占有重要的一席之地，迄今，在临床应用的药物三分之 一以上来自天然产物或其衍生物或全合成产物，天然产物往往结构新颖，生物作用独特(徐 任生等.《天然产物化学》科学出版社，2004年)。其中，二萜类化合物在抗肿瘤天然产物 中活性突出，紫杉烷型二萜化合物紫杉醇（paclitaxel)做为代表，上市多年。此外，还有雷 公藤属植物中分离得到的雷公藤甲素（triptolide)、从香茶菜属植物中分离得到的冬凌草 甲素（oridonin)等均有较强的抗癌作用(许旭东，胡晓茹，杨峻山.抗肿瘤药用植物有效 成分研究概况.中国中药杂志，2008, 17:2073-2081)。因此，二萜类化合物结构的特异性和 明确的抗肿瘤活性已经成为当今抗肿瘤药天然产物研发的热点之一，特别是在新药及其先 导化合物发现中起着不可替代的作用。
[0006] 甘遂为大戟科植物甘遂Euphorbia kansui T. N. liou ex T. P. Wang的干燥块根， 性，苦、寒，有毒。具有泻水逐饮、消肿散结的功效。用于水肿胀满，胸腹积水，痰饮积聚，气 逆咳喘，二便不利，风痰癫痫，痈肿疮毒。始载于《神农本草经》，目前《中国药典》2010年版 收载。
[0007] 甘遂化学成分目前研究主要以巨大戟二萜、假白榄酮二萜和甘遂烷型三萜为主， 并有一定量的十八碳不饱和脂肪酸。其中，巨大戟二萜是从甘遂中分离最多的化学成分，此 类化合物母核较单一，变化较少，由5/7/7/3四个环稠合而成，8位和10位存在一个酮桥， 1\2位有一个双键，6、7位基本结构多为双键，从巨大戟二萜类的取代情况可以看出，主要 取代位置在3、5、13、20位，而4位多为0-OH取代，取代基类型3、5、20位多为乙酰基、苯甲 酰基、2, 3二甲基丁酰基、癸二烯酰基、癸烯基、棕榈酰基等，13位取代多为癸酰基、十二碳 酰基等。
[0008] 巨大戟二萜也是甘遂中相关活性报道最多的成分，文献报道此类化合物有着良好 的抗炎抗病毒活性（Li-Yan Wang，Nai-Li Wang, Xin-Sheng Yao, et al. Diterpenes from the Roots of Euphorbia kansui and Their in Vitro Effects on the Cell Division of Xenopus. J. Nat. Prod. . 2002(65):1246-1251;Li-Yan Wang, Nai-Li Wang, Xin-Sheng Yao, et al. Diterpenes from the Roots of Euphorbia kansui and Their in Vitro Effects on the Cell Division of Xenopus (2). Chem. Pharm. Bull. . 2003, 51 (8) : 935-941)、抑制 一氧化氮合酶（NOS)活性(郑维发.甘遂醇提物中4种二萜类化合物的体内抗病毒活性研 究.中草药.2004(01))等。另外，治疗乳腺癌的药物市场上，药效显著、毒副作用小、靶向 性强的天然产物类药物基本空白，而在国内外专利文献报道中巨大戟二萜类成分均为涉及 抗乳腺癌活性报道。
【发明内容】
[0009] 本发明要解决的技术问题是提供一种巨大戟二萜类化合物在制备抗肿瘤药物中 的应用。该巨大戟二萜类化合物可为甘遂中的巨大戟二萜类化合物，而且巨大戟二萜类化 合物作为有效成分可用于在制备抗肿瘤及相关疾病的药物中的应用，特别是作为有效成分 在制备治疗抗乳腺癌疾病的药物中的应用。
[0010] 为解决上述技术问题，本发明提供一种巨大戟二萜类化合物在制备抗肿瘤药物中 的应用，其中，所述巨大戟二萜类化合物是如式（I)所示的巨大戟二萜类化合物中的一种或 多种；
[0011]
【主权项】
1. ー种巨大戟二萜类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在干：所述巨大戟二 萜类化合物是如式（I)所示的巨大戟二萜类化合物中的ー种或多种；
其中，R1选自氢、乙酰基、苯甲酰基、癸二烯酰基、2,3二甲基丁酰基、癸酰基、癸单烯酰 基或棕榈酰基； R2选自氢、乙酰基、苯甲酰基、癸酰基、癸单烯酰基或棕榈酰基； R3选自氢、羟基、乙酰基、苯甲酰基、癸二烯酰基、2,3二甲基丁酰基、癸酰基、癸烯酰基 或棕榈酰基； R4选自氢、羟基、癸酰基、十二碳酰基、癸酰基、癸单烯酰基或棕榈酰基。
2. 如权利要求1所述的应用，其特征在干：所述R1选自氢、癸二烯酰基或2, 3二甲基丁 醜基； R2选自氢、癸二烯酰基或2, 3二甲基丁酰基； R3选自乙酰基； R4选自氢。
3. 如权利要求1所述的应用，其特征在干：所述巨大戟二萜类化合物为 3-0- (2'E，4'Z-癸二烯酰基）-20-0-乙酰基巨大戟二萜醇、3-0- (2'E，4'E-癸二烯酰 基）-20-0-乙酰基巨大戟二萜醇、3-0-(2,3二甲基丁酰基）-20-0-乙酰基巨大戟二萜 醇、5-0-(2'E，4'Z-癸二烯酰基）-20-0-乙酰基巨大戟二萜醇、5-0-(2'E，4'E-癸二烯酰 基）-20-0-乙酰基巨大戟二萜醇中的ー种或多种。
4. 如权利要求1所述的应用，其特征在干：所述抗肿瘤药物为抗乳腺癌药物。
5. 如权利要求1所述的应用，其特征在干：所述巨大戟二萜类化合物是由包含以下步 骤的方法制备得到的： 1) 采用醇类对甘遂药材进行提取，过滤，合并滤液，回收至无醇味，加入第一有机试剂 萃取，合并第一有机试剂层，回收溶剂，浓缩至干，得浸膏，备用； 2) 浸膏加第一有机试剂溶解，过滤，上反相凝胶柱层析，分别采用不同的第二有机试 剂洗脱，收集各部分洗脱液，进行高效液相色谱仪检测，收集含有巨大戟二萜类化合物的部 位； 3)对含有巨大戟二萜类化合物的部位进行柱层析的粗分离，并用第三有机溶剂进行梯 度洗脱，合并相同物质，经反复柱层析，得到巨大戟二萜类化合物。
6. 如权利要求5所述的应用，其特征在干：所述步骤1)中，醇类包括：体积百分比浓度 为80%~100%的乙醇； 醇类与甘遂药材的重量比为4 :1~20 :1 ; 提取的时间为1~3小时，提取的次数1~5次，提取的方式为回流、40~80°C温浸搅 拌或渗漉； 第一有机试剂包括：石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿或丙酮； 第一有机试剂的用量为待需要进行萃取的液体体积的2~20倍，萃取的次数为1~5 次。
7. 如权利要求5所述的应用，其特征在干：所述步骤2)中，第一有机试剂与浸膏的体 积比为5:1~1:2 ; 反相凝胶柱层析优选为C18柱层析； 第二有机试剂包括：体积浓度为50%~100%的甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇或二氯甲烷； 第二有机试剂与浸膏的用量比为2000ml:Ig~100mL:Ig; 步骤2)中，高效液相色谱仪检测的条件为： 色谱柱：AgilentPoroshelll20EC_C8 ;配在线过滤器； 流动相：A相乙腈与B相体积百分比浓度为0. 02%的磷酸水溶液的混合物； 流动相梯度程序为：〇~1分钟，A相所占的体积比例35%~54% ;1~6分钟，A相所 占的体积比例为54% ;6~7分钟，A相所占的体积比例为54%~70% ;7~13分钟，A相所 占的体积比例为70%~92% ;13~15分钟，A相所占的体积比例为92% ;15~17分钟，A相 所占的体积比例为92%~100% ;17~25分钟，A相所占的体积比例为100% ;25. 01~30分 钟，换为100%甲醇冲洗； 流速：〇? 7ml/min;柱温：30°C; 程序波长：〇 ~9. 6min，230nm;9. 55 ~12. 5min，265nm; 12. 5 ~18min，220nm; 18 ~ 25min，210nm〇
8. 如权利要求5所述的应用，其特征在干：所述步骤3)中，柱层析为硅胶柱层析； 硅胶柱层析的条件为：1〇〇~300目硅胶装柱； 含有巨大戟二萜类化合物的部位与硅胶的重量比范围为5:1~1:5 ; 第三有机溶剂包括：石油醚与二氯甲烷的混合液，或石油醚、二氯甲烷与甲醇的混合 液； 其中，石油醚与二氯甲烷的混合液中，石油醚与二氯甲烷的体积比为9:1~1:9范围中 的不同比例； 石油醚、二氯甲烷与甲醇的混合液中，比重为〇. 9-1. 2的石油醚与二氯甲烷的混合液： 甲醇的体积比为1:1。
【专利摘要】本发明公开了一种巨大戟二萜类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，该巨大戟二萜类化合物是如式（I）所示的巨大戟二萜类化合物中的一种或多种。该巨大戟二萜类化合物能够明显抑制乳腺癌细胞的增殖活性，与传统的肿瘤治疗方法相比，抑瘤效果好，毒副作用小，靶向性强，对于正常细胞无损害，安全性得到最大保证，为治疗乳腺癌提供了一种潜在的新药开发用途，可作为抗乳腺癌候选药物进一步研究。
【IPC分类】A61P35-00, C07C67-48, A61K31-22, C07C69-28, C07C69-587, A61K31-231
【公开号】CN104622865
【申请号】CN201310564219
【发明人】果德安, 吴婉莹, 侯晋军, 杨洲, 姚帅, 龙华丽, 笪娟, 蔡录影
【申请人】中国科学院上海药物研究所
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2013年11月14日