二萜化合物及其制备方法和应用
【专利摘要】本发明公开了一种新型C22二萜的制备方法和应用，所述的新型C22二萜结构式为：所述新型C22二萜分子式为C22H26O4，该化合物命名为perovskiaol(1)。所述制备方法是以干燥分药花属植物全株为原料，经粉碎提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、HPLC分离步骤。所述的应用为perovskiaol在制备抗癌药物中的应用。经细胞毒活性实验，perovskiaol对白血病急性早幼粒NB4细胞、肺腺癌A549细胞、人体肝癌细胞瘤HepG 2细胞具有较好的细胞毒活性，IC50值分别达2.35、1.47、0.81μM。本发明化合物结构简单活性好，可作为抗癌药物的先导性化合物，有良好的应用前景。
【专利说明】
一种新型C22二萜化合物及其制备方法和应用
技术领域
[0001] 本发明属于植物有效成分提取技术领域，具体涉及一种新型c22二萜化合物一种及 其制备方法和应用。
【背景技术】 [0002] 一种
[0003] 分药花属(Perovskia)植物全球约7种，主要分布在伊朗、巴基斯坦、印度以及我国 的西藏和新疆。我国西藏有2种。研究表明，分药花属植物富含松香烷型二萜和Icetexane型 二萜。这类二萜类成分结构新颖多样，且具有广泛的药理活性，其中的丹参醌类结构具有广 谱强效的抗肿瘤活性。关于分药花属植物的研究不多，本研究组是对该属植物研究相对深 入的研究团队之一。在前期我们从天然产物中寻找抗肿瘤活性成分过程中，我们发现松香 烷型二萜具有较好的抗肿瘤活性。随后选择从滨藜叶分药花中分离得到的部分松香烷型二 萜进行了体外抗肿瘤活性筛选，结果显示，部分松香烷型二萜具有显著的细胞毒活性。本发 明从滨藜叶分药花中分离得到1个新型C 22二萜化合物，是从松香烷型二萜衍生而形成，具有 显著的细胞毒作用。
【发明内容】
[0004] 本发明的第一目的是提供一种新型C22二萜化合物；第二目的在于提供所述新型 C22二萜化合物的制备方法;第三目的在于提供所述新型C22二萜化合物在制备抗癌药物中 的应用。
[0005] 本发明的第一目的是这样实现的，所述的新型C22二萜化合物是以干燥的分药花属 植物全株为原料，经粉碎提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离得到的，其 结构式为：
[0007] 所述的新型C22二砲化合物的分子式为C22H26O4,该化合物命名为perovskiaol(l)
[0008] 本发明的第二目的是这样实现的，所述的新型C22二萜化合物的制备方法，是以干 燥的分药花属植物为原料，经粉碎提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离获 得，具体为：
[0009] A、粉碎提取:将干燥的分药花属植物全株粗粉碎到20~40目，用有机溶剂超声提 取2~4次，每次30~60min，提取液合并;提取液过滤，减压浓缩提取液至1/4~1/2体积时， 静置，滤除沉淀物，浓缩成浸膏a;
[0010] B、有机溶剂萃取:浸膏a中加入重量比1~2倍量的水，用与水等体积的有机溶剂萃 取3~5次，合并有机溶剂萃取相，减压浓缩成浸膏b;
[0011] C、硅胶柱层析:将浸膏b用重量比1.5~3倍量的氯仿溶解，然后用浸膏重0.8~1.2 倍的80~100目硅胶拌样，然后上硅胶柱层析，装柱硅胶为160~200目，用量为浸膏b重量6 ~8倍量；用体积比为1:0~0:1的混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监 测，合并相同的部分；
[0012] D、反相柱层析:将以20:1配比的有机溶剂进行洗脱得到的洗脱液上反相柱层析， 反相柱是用反相材料C-18装柱；用体积含量为20~100 %的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集 各部分洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；
[0013] E、高效液相色谱分离：将以体积含量70~95 %的甲醇/水溶液洗脱得到的洗脱液 经高效液相色谱分离纯化，即得所述的新型C22二砲化合物perovskiaol (1);
[0014] F、E步骤所述的高效液相色谱分离纯化是以35~45%的乙腈为流动相，流速2~ 3ml/min，10.0 X 250mm，5iim的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波 长为254nm，每次进样45~60此，收集12~15min的色谱峰，多次累加后蒸干。即得所述的新 型C22二砲化合物perovskiaol (1)。
[0015]本发明的第三目的是这样实现的，所述的新型C22二砲化合物perovskiaol(l)在制 备抗癌药物中的应用。
[0016]本发明新型C22二砲化合物perovskiaol(l)是首次被分离出来的，通过核磁共振和 质谱测定方法确定其结构，并表征其具体结构为：
[0018] 以perovskiaol(l)为原料，经对白血病急性早幼粒NB4细胞、肺腺癌A549细胞、人 体肝癌细胞HepG 2细胞、人前列腺癌PC3细胞、人乳腺癌MCF7细胞的细胞毒活性实验， perovskiaol (1)对NB4，A549和HepG 2细胞株具有较好的细胞毒活性，IC5Q值分别达2.35、 1.47、 0.81yM〇
[0019]本发明化合物结构简单活性好，可作为抗癌药物的先导性化合物，有良好的应用 前景。
【附图说明】
[0020]图1为化合物perovskiaol(l)的核磁共振碳谱pH NMR);
[0021]图2为化合物perovskiaol(l)的核磁共振氢谱(13C NMR);
【具体实施方式】
[0022]下面结合附图对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基 于本发明教导所作的任何变换或改进，均落入本发明的保护范围。
[0023]本发明所述的新型C22二砲化合物perovskiaol(l)是以干燥的分药花属植物全株 为原料，经粉碎提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离得到的，其结构式为：
[0025] 所述的新型C22二砲化合物的分子式为C22H26O4,该化合物命名为perovskiaol(l)。 [0026]本发明所述的新型C22二砲化合物perovskiaol (1)的制备方法，是以干燥的分药花 属植物全株为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离获得，具体 为：
[0027] A、粉碎提取:将干燥的分药花属植物全株粗粉碎到20~40目，用有机溶剂超声提 取2~4次，每次30~60min，提取液合并;提取液过滤，减压浓缩提取液至1/4~1/2体积时， 静置，滤除沉淀物，浓缩成浸膏a;
[0028] B、有机溶剂萃取:浸膏a中加入重量比1~2倍量的水，用与水等体积的有机溶剂萃 取3~5次，合并有机溶剂萃取相，减压浓缩成浸膏b;
[0029] C、硅胶柱层析:将浸膏b用重量比1.5~3倍量的氯仿溶解，然后用浸膏重0.8~1.2 倍的80~100目硅胶拌样，然后上硅胶柱层析，装柱硅胶为160~200目，用量为浸膏b重量6 ~8倍量；用体积比为1:0~0:1的混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监 测，合并相同的部分；
[0030] D、反相柱层析:将以20:1配比的有机溶剂进行洗脱得到的洗脱液上反相柱层析， 反相柱是用反相材料C-18装柱；用体积含量为20~100 %的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集 各部分洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；
[0031] E、高效液相色谱分离：将以体积含量70~95 %的甲醇/水溶液洗脱得到的洗脱液 经高效液相色谱分离纯化，即得所述的新型C22二砲化合物perovskiaol (1);
[0032] F、E步骤所述的高效液相色谱分离纯化是以35~45%的乙腈为流动相，流速2~ 3ml/min，10.0 X 250mm，5iim的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波 长为254nm，每次进样45~60此，收集12~15min的色谱峰，多次累加后蒸干。即得所述的新 型C22二砲化合物perovskiaol (1)。
[0033] A步骤所述的有机溶剂为80~100 %的乙醇或甲醇。
[0034] B步骤所述的有机溶剂为乙酸乙酯、氯仿、乙醚、石油醚或苯。
[0035] C步骤所述的混合有机溶剂为正己烷-丙酮、氯仿-丙酮、氯仿-甲醇、石油醚-丙酮 或石油醚-乙酸乙酯。
[0036] C步骤所述的混合有机溶剂的体积配比为1:0、20:1、9:1、8:2、3:2、1:1、1:2、0:1。
[0037] E步骤所述的高效液相色谱分离纯化是以35~45%的乙腈为流动相，流速2~3ml/ min，10.0 X250mm，5iim的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为 254nm，每次进样45~60此，收集12~15min的色谱峰，多次累加后蒸干。
[0038]本发明所述的新型C22二砲化合物perovskiaol (1)在制备抗癌药物中的应用。
[0039] 本发明所述的分药花属植物不受地区和品种限制，均可以实现本发明。
[0040] 实施例1
[00411取干燥的分药花属植物全株4.5kg，粗粉碎至40目，用80%的乙醇超声提取4次，每 次60min，提取液合并;提取液过滤，减压浓缩至体积的1/4;静置，滤除沉淀物，浓缩成458g 浸膏a;在浸膏a中加入458g水，用与水等体积的氯仿萃取5次，合并萃取相，减压浓缩成236g 浸膏b;用200目硅胶1888g装柱，在浸膏b中加入708g的氯仿溶解，然后加入100目硅胶 188.8g拌样，拌样后上柱；用体积比分别为1:0、20 :1、9:1、8:2、3:2、1:1、1: 2、0:1的氯仿-甲醇混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，合并相同的部分，得到8个 部分，体积比20:1的氯仿-甲醇混合有机溶剂的洗脱液c为78g;用反相材料C-18装柱，洗脱 液c上反相柱，以体积含量为20~100 %的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并 浓缩，经TLC监测，合并相同的部分;取以体积含量70~95%甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液， 再以35%的乙腈为流动相，流速31111/111；[11，10\250111111，5111]1的2〇1^1?16口1^16?反相制备柱 为固定相，紫外检测器检测波长为254nm，每次进样48此，收集14.5min的色谱峰，多次累加 后蒸干，即得所述的新型C22二砲化合物perovskiaol (1)。
[0042] 实施例2
[0043]取干燥的分药花属植物全株5kg，粗粉碎至20目，用100%的乙醇超声提取2次，每 次50min，提取液合并；提取液过滤，减压浓缩至体积的1/3;静置，滤除沉淀物，浓缩成503g 浸膏a;在浸膏a中加入503g的水，用与水等体积的氯仿萃取3次，合并萃取相，减压浓缩成 269g浸膏b;用160目硅胶2152g装柱，在浸膏b中加入807g的氯仿溶解，然后加入80目硅胶 215.28拌样，拌样后上柱 ；用体积比分别为1:0、20:1、9:1、8:2、3 :2、1:1、1:2、0:1的正己烷-丙酮混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；用反相 材料C-18装柱，洗脱液c上反相柱，以体积含量为20~100 %的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收 集各部分洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分;取以体积含量70~95%甲醇水溶液 洗脱得到的洗脱液，再以40 %的乙腈为流动相，流速3ml/min，10 X 250mm，5_的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254nm，每次进样45yL，收集 13 ? 5min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的新型C22二砲化合物perovskiaol (1)。 [0044] 实施例3
[0045]取干燥的分药花属植物全株6kg，粗粉碎至30目，用80%的甲醇超声提取4次，每次 30min，提取液合并;提取液过滤，减压浓缩至体积的1/2;静置，滤除沉淀物，浓缩成612g浸 膏a;在浸膏a中加入1224g的水，用与水等体积的乙醚萃取4次，合并萃取相，减压浓缩成 354g浸膏b;用180目硅胶2478g装柱，在浸膏b中加入704g的丙酮溶解，然后加入90目硅胶 424.8g拌样，拌样后上柱；用体积比分别为1:0、20 :1、9:1、8:2、3:2、1:1、1:2、0:1的氯仿-丙 酮混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；用反相材 料C-18装柱，洗脱液c上反相柱，以体积含量为20~100 %的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集 各部分洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分;取以体积含量70~95%甲醇水溶液洗 脱得到的洗脱液，再以45 %的乙腈为流动相，流速3ml/min，10 X 250mm，5_的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254nm，每次进样50yL，收集 12. Omin的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的新型C22二砲化合物perovskiaol (1)。
[0046] 实施例4。
[0047]取干燥的分药花属植物全株5.5kg，粗粉碎至40目，用90%的乙醇超声提取3次，每 次45min，提取液合并；提取液过滤，减压浓缩至体积的1/4;静置，滤除沉淀物，浓缩成548g 浸膏a;在浸膏a中加入822g的水，用与水等体积的石油醚萃取4次，合并萃取相，减压浓缩成 275g浸膏b;用160目硅胶1650g装柱，在浸膏b中加入412.5g的丙酮溶解，然后加入80目硅胶 275g拌样，拌样后上柱；用体积比分别为1:0、20 :1、9:1、8:2、3:2、1:1、1:2、0:1的石油醚-丙 酮混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；用反相材 料C-18装柱，洗脱液c上反相柱，以体积含量为20~100 %的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集 各部分洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分;取以体积含量70~95%甲醇水溶液洗 脱得到的洗脱液，再以40 %的乙腈为流动相，流速2ml/min，10 X 250mm，5_的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254nm，收集15min的色谱峰，多次 累加后蒸干，即得所述的新型C22二砲化合物perovskiaol (1)。
[0048] 实施例5
[0049] 取干燥的分药花属植物全株5kg，粗粉碎至20目，用100%的甲醇超声提取4次，每 次35min，提取液合并;提取液过滤，减压浓缩至体积的1/2;静置，滤除沉淀物，浓缩成523g 浸膏a;在浸膏a中加入1046g的水，用与水等体积的苯萃取5次，合并萃取相，减压浓缩成 246g浸膏b;用200目硅胶1722g装柱，在浸膏b中加入738g的丙酮溶解，然后加入100目硅胶 196.8g拌样，拌样后上柱；用体积比分别为1:0、20:1、9:1、8:2、3 :2、1:1、1:2、0:1的石油醚-乙酸乙酯混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；用 反相材料C-18装柱，洗脱液c上反相柱，以体积含量为20~100 %的甲醇水溶液进行梯度洗 脱，收集各部分洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分;取以体积含量70~95%甲醇水 溶液洗脱得到的洗脱液，再以45 %的乙腈为流动相，流速2ml/min，10 X 250mm，5mi的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254nm，收集14.5min的色谱峰，多 次累加后蒸干，即得所述的新型C22二砲化合物perovskiaol (1)。
[0050] 实施例6
[0051 ]取实施例1制备的化合物perovskiaol(l)，为淡黄色胶状物;测定方法为：用核磁 共振，结合其它波谱技术鉴定结构。
[0052] (1)旋光为[a]D13.3+〇.23(c 0.29，Me0H/CHCl3l:l);
[0053] (2)紫外光谱(溶剂为甲醇），UV(Me0H)人max(loge)248(3.49)，345(2.35)nm;
[0054] (3)红外光谱（溴化钾压片）vmax 3449，1743，1695，1603，1498，1454，1260，1128， 1069,993,865cm-;
[0055] (4)HRESIMS显示本发明化合物准分子离子峰m/z 377.1738[M+Na] + (计算值为 377.1728)，结合1H和13C NMR谱（图1和图2,碳谱氢谱数据归属见表1)给出其分子式为 C22H26〇4</H NMR(C5D5N，500MHz)和 13C NMR(C5D5N，125MHz)数据，见表 1。
[0056] 表 1化合物perovskiaol(l)的1H和13C NMR数据(溶剂为CDC13)(400/100MHz)
[0059] 实施例7
[0060] 取实施例2制备的化合物perovskiaol(l)按实施例6中的方法进行结构测定，结果 为:其结构同实施例6,分子式为C22H26O4。
[0061 ] 实施例8
[0062] 取实施例3制备的化合物perovskiaol (1)按实施例6中的方法进行结构测定，结果 为:其其结构同实施例6，分子式为C22H26〇4。
[0063] 实施例9
[0064] 取实施例4制备的的化合物perovskiaol (1)按实施例6中的方法进行结构测定，结 果为:其其结构同实施例6，分子式为C22H26〇4。
[0065] 实施例10
[0066] 取实施例5制备的化合物的化合物perovskiaol (1)按实施例6中的方法进行结构 测定，结果为:其其结构同实施例6，分子式为C22H26〇4。
[0067] 实施例11
[0068] 取实施例1~5所制备的任一新型C22二砲化合物perovskiaol (1)进行细胞毒活性 检测试验，试验情况如下：
[0069]细胞株：白血病细胞(NB4)、肺癌细胞(A549)、人体肝癌细胞(HepG2)、前列腺癌细 胞(PC3)、乳腺癌细胞(MCF7)由中国科学院上海药物研究所和昆明动物研究所提供。
[0070]实验设计：以上细胞与不同浓度化合物温育72小时，每株细胞的实验均重复一次， 用两次实验的结果进行数据处理，采用改良MTT法及SRB法评价化合物对细胞增殖的抑制程 度，计算抑制率，根据抑制率采用Log i t方法计算IC5Q，比较化合物的体外抗肿瘤活性。
[0071 ]细胞的增殖抑制率=(空白对照0D值-加药孔的0D值)/空白对照0D值X 100%。 [0072] (a)改良MTT 法
[0073] 取处于对数生长期的悬浮细胞，将细胞浓度调整为4 X104/ml，加入96孔培养板， 90此/孔。阳性对照为顺铂，用生理盐水溶解。每孔分别加入lOiil不同浓度的样品（1号试液-5号试液）。加样组及对照组均设4个复孔，加样组、阳性对照组的高浓度组还设培养基的加 药平行孔，每块板均设有4个空白对照孔(仅加培养基）。样品的终浓度分别为1〇- 2、1(^、1、 10及 102yg/mL,相应 DMS0的终浓度分别为0.1%、0.01%、0.001%、0.0001%、0.00001%。样 品在终浓度102yg/mL时，用0.1 %DMS0作为溶剂对照，其余浓度均用生理盐水作阴性对照。 阳性对照药顺铂的终浓度为1 (T1、1、1 〇yg/mL。细胞在37 °C，5 % C02培养箱中分别孵育48h后， 加入10'1'(511^/1111，318111&)，10吣/孔。继续培养411后，加入三联液[10%303-5%异丁醇-0.012mol/L HCL(w/V/V)]，100yL/孔，放置过夜后用酶标仪在570nm、630nm双波长下测定各 孔的0D值。
[0074] (b)SRB法
[0075]取处于对数生长期的贴壁细胞株，用25%胰酶常规消化后，再用15%小牛血清完 全RPMI-1640培养基将细胞浓度调整为5X104/mL，加入96孔培养板，90yL/孔。细胞在37°C， 5%C0 2培养箱中分别孵育24h后加入阳性对照、阴性对照以及受试样品（各受试浓度同上 MTT法，10yL/孔），样品的终浓度分别为10- 2、10-1、1、10、102yg/mL，相应DMS0的终浓度分别为 0.1%、0.01%、0.001%、0.0001%、0.00001%。样品在终浓度10 2辟/1^时用0.1%01^0作为 溶剂对照，其余浓度均用生理盐水作阴性对照。阳性对照药顺铂的终浓度为HT 1、1、i〇yg/ mL，阴性对照为等体积的生理盐水。加样组及对照组均设4复孔，加样组、阳性对照组的高浓 度组还设培养基的加药平行孔，每块板均设有4个空白对照孔(仅加培养基）。将96孔培养板 置于37 °C，5 %⑶2培养箱中孵育（细胞与样品作用）48h后，加入4°C、50 %的TCA(三氯乙酸） 50yL/孔。加完TCA后，将96孔培养板置于4 °C孵育1小时，取出培养板，轻轻倾去板内液体。用 自来水轻轻冲洗5遍(将自来水由烧杯中轻轻倒入板中，轻晃后再将水倒去），置于空气中风 干至不见水痕。然后加入配制好的0.4 % SRB(用1 %乙酸稀释），50此/孔，于室温下静置染色 30分钟后倾去SRB溶液，用1%乙酸冲洗4遍，以除去未与蛋白质结合的染料。置于空气中风 干至无水痕后，加入10mM未缓冲Tris(缓血氨酸）溶液150此/孔(PH10,用三蒸水配制），将 染料溶解后，于振荡器上振荡5分钟，用酶标仪在570nm波长下读取各孔0D值。
[0076] (c)实验结果
[0077] 实验结果表明：经对白血病急性早幼粒NB4细胞、肺腺癌A549细胞、人体肝癌细胞 瘤HepG 2细胞、人前列腺癌PC3细胞、人乳腺癌MCF7细胞的细胞毒活性实验，化合物1对NB4， A549和Ifep G 2细胞株具有较好的细胞毒活性，IC5Q值分别达2.35、1.47、0.81yM。
[0078]表2化合物的细胞毒活性（IC50，yM)
[0080] NB4,白血病急性早幼粒细胞;A549,肺腺癌细胞;Hep G 2,人体肝癌细胞株;PC3， 人前列腺癌细胞;MCF7，人乳腺癌细胞。
【主权项】
1. 一种新型c22二萜化合物，其特征是:所述的新型C22二萜化合物是以干燥的分药花属 植物全株为原料，经粉碎提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离步骤得到的， 其结构式为：2. 根据权利要求1所述的新型C22二萜化合物，其特征是:所述新型二萜化合物的分子式 为C22H26O4,该化合物命名为perovskiaol (1)。3. -种权利要求1所述的新型C22二萜化合物的制备方法，其特征在于是以干燥的分药 花属植物全株为原料，经粉碎提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离获得，具 体为： A、 粉碎提取:将干燥的分药花属植物全株粗粉碎到20~40目，用有机溶剂超声提取2~ 4次，每次30~60min，提取液合并;提取液过滤，减压浓缩提取液至1/4~1/2体积时，静置， 滤除沉淀物，浓缩成浸膏a; B、 有机溶剂萃取:浸膏a中加入重量比1~2倍量的水，用与水等体积的有机溶剂萃取3 ~5次，合并有机溶剂萃取相，减压浓缩成浸膏b; C、 硅胶柱层析:将浸膏b用重量比1.5~3倍量的氯仿溶解，然后用浸膏重0.8~1.2倍的 80~100目硅胶拌样，然后上硅胶柱层析，装柱硅胶为160~200目，用量为浸膏b重量6~8倍 量;用体积比为1:0~0:1的混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，合 并相同的部分； D、 反相柱层析:将以20:1配比的有机溶剂进行洗脱得到的洗脱液上反相柱层析，反相 柱是用反相材料C-18装柱;用体积含量为20~100%的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部 分洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分； E、 高效液相色谱分离:将以体积含量70~95 %的甲醇/水溶液洗脱得到的洗脱液经高 效液相色谱分离纯化，即得所述的新型C22二砲化合物perovskiaol (1); F、 E步骤所述的高效液相色谱分离纯化是以35~45%的乙腈为流动相，流速2~3ml/ min，10.0 X250mm，5ym的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为 254nm，每次进样45~60yL，收集12~15min的色谱峰，多次累加后蒸干。即得所述的新型C22 二砲化合物perovskiaol (1) 〇4. 根据权利要求3所述的新型C22二砲化合物perovskiaol (1)的制备方法，其特征是:A 步骤所述的有机溶剂为80~100 %的乙醇或甲醇。5. 根据权利要求3所述的新型C22二砲化合物perovskiaol (1)的制备方法，其特征是:B 步骤所述的有机溶剂为乙酸乙酯、氯仿、乙醚、石油醚或苯。6. 根据权利要求3所述的新型C22二砲化合物perovskiaol (1)的制备方法，其特征是:C 步骤所述的混合有机溶剂为正己烷-丙酮、氯仿-丙酮、氯仿-甲醇、石油醚-丙酮或石油醚-乙酸乙酯。7. 根据权利要求3所述的新型C22二砲化合物perovskiaol (1)的制备方法，其特征是:C 步骤所述的混合有机溶剂的体积配比为1:0、20:1、9:1、8:2、3 :2、1:1、1:2、0:1。8. -种权利要求1、2或3所述的新型C22二砲化合物perovskiaol(l)在制备抗癌药物中 的应用。
【文档编号】A61P35/00GK105820044SQ201610017521
【公开日】2016年8月3日
【申请日】2016年1月12日
【发明人】江志勇, 周俊, 朱乐钰, 高雪梅, 胡秋芬, 高路, 黄相中, 李干鹏
【申请人】云南民族大学