GGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSGYAMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGTYIYYPDSVKGRFT ISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTAMYYCARLG⑶NYYEYFDVWGAGTTVTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTL GCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASRTA(SEQ ID N0:24)描述了 MIN-C2Fab 重链。
[0084] DIVITQSTASLGVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYMHWYQQRPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGS GSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHSRELPFTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPK DINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC(SEQ ID N0:25)描述了 MIN-C2FabK 链。
[0085] RADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMS STLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC(SEQ ID N0:26)描述了 MIN-C2 轻 CL 区氨基酸 序列。
[0086] FDVWGAGTTVTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPA VLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASRTA(SEQ ID N0:27)描述了 MIN-C2 重链 CHl 区氨基 酸序列。
[0087] DIVITQSTASLGVSLGQRATISC(SEQ ID N0:28)描述了 MIN-C2 轻链可变构架区 I(FWRl)氨基酸序列。
[0088] DIVITQTTAIMSASPGEEVTLTC(SEQ ID N0:29)描述了 MIN-E6 轻链可变构架区 I(FWRl)氨基酸序列。
[0089] RASKSVSTSGYSYMH(SEQ ID N0:30)描述了 MIN-C2 轻链可变互补决定区 I (CDRl)氨 基酸序列。
[0090] SATSSVSYIH(SEQ ID NO:31)描述了 MIN-E6轻链可变互补决定区I(CDRl)氨基酸 序列。
[0091] WYQQRPGQPPKLUY(SEQ ID N0:32)描述了 MIN-C2 轻链可变构架区 2(FWR2)氨基酸 序列。
[0092] WFQQRPGTSPKUWY(SEQ ID N0:33)描述了 MIN-E6 轻链可变构架区 2(FWR2)氨基酸 序列。
[0093] LASNLES(SEQ ID N0:34)描述了 MIN-C2轻链可变互补决定区2(CDR2)氨基酸序 列。
[0094] STSNLAS(SEQ ID N0:35)描述了 MIN-E6轻链可变互补决定区2(CDR2)氨基酸序 列。
[0095] GVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYC(SEQ ID N0:36)描述了 MIN-C2 轻链可变构 架区3(FWR3)氨基酸序列。
[0096] GVPVRFSGSGYGTSYSLTISRMEAEDAATYYC(SEQ ID N0:37)描述了 MIN-E6 轻链可变构 架区3(FWR3)氨基酸序列。
[0097] QHSRELPFT(SEQ ID N0:38)描述了 MIN-C2轻链可变互补决定区3(CDR3)氨基酸序 列。
[0098] QQRSSSPFT(SEQ ID N0:39)描述了 MIN-E6轻链可变互补决定区3(CDR3)氨基酸序 列。
[0099] EVQLEESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFS(SEQ ID N0:40)描述了 MIN-C2 重链可变构架 区I(FWRl)氨基酸序列。
[0100] EVKLEESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFS(SEQ ID N0:41)描述了 MIN-E6-7 重链可变构 架区I(FWRl)氨基酸序列。
[0101] EVKLEESGGDLVKPGGSLKLSCVVSGFTFS(SEQ ID N0:42)描述了 MIN-E6-8 重链可变构 架区I(FWRl)氨基酸序列。
[0102] GYAMS(SEQ ID NO:43)描述了 MIN-C2重链可变互补决定区I(CDRl)氨基酸序列。
[0103] RYGMS(SEQ ID NO:44)描述了 MIN-E6-7重链可变互补决定区I(CDRl)氨基酸序 列。
[0104] RYGMS(SEQ ID N0:45)描述了 MIN-E6-8重链可变互补决定区I(CDRl)氨基酸序 列。
[0105] WVRQTPEKRLEWVA(SEQ ID N0:46)描述了 MIN-C2 重链可变构架区 2(FWR2)氨基酸 序列。
[0106] WVRQTPDKRLEWVA(SEQ ID N0:47)描述了 MIN-E6-7 重链可变构架区 2(FWR2)氨基 酸序列。
[0107] WVRQTPGKRLEWVA(SEQ ID N0:48)描述了 MIN-E6-8 重链可变构架区 2(FWR2)氨基 酸序列。
[0108] TISSGGTYIYYPDSVKG(SEQ ID N0:49)描述了 MIN-C2 重链可变互补决定区 2(CDR2) 氨基酸序列。
[0109] TISSGGTYIYYPDSVKG(SEQ ID N0:50)描述了 MIN-E6-7 重链可变互补决定区 2(⑶R2)氨基酸序列。
[0110] TISGGGTYIYYPDSVKG(SEQ ID NO:51)描述了 MIN-E6-8 重链可变互补决定区 2(⑶R2)氨基酸序列。
[0111] RFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTAMYYCAR(SEQ ID NO:52)描述了 MIN-C2 重链可变构 架区3(FWR3)氨基酸序列。
[0112] RFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYYCAR(SEQ ID NO:53)描述了 MIN-E6-7 重链可变 构架区3(FWR3)氨基酸序列。
[0113] RFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYHCTR(SEQ ID NO:54)描述了 MIN-E6-8 重链可变 构架区3(FWR3)氨基酸序列。
[0114] LGGDNYYEY(SEQ ID NO:55)描述了 MIN-C2重链可变互补决定区3(CDR3)氨基酸序 列。
[0115] DNYGSSYDYA(SEQ ID NO:56)描述了 MIN-E6-7 重链可变互补决定区 3(CDR3)氨基 酸序列。
[0116] DNYGRNYDYG(SEQ ID NO:57)描述了 MIN-E6-8 重链可变互补决定区 3(CDR3)氨基 酸序列。
[0117] EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCA ASGFTFS(SEQ ID NO:58)描述了 IGHV3(名称来自 Igblast) :FWR1 :人IgG抗体构架区序列，其相对于MIN-C2的可变重链区具有84. 7%同源 性（249/294)。
[0118] WVRQAPGKGLEWVS(SEQ ID NO:59)描述了 IGHV3(名称来自 Igblast) :FWR2 :人 IgG 抗体构架区序列，其相对于MIN-C2的可变重链区具有84. 7%同源性（249/294)。
[0119] RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAV(SEQ ID N0:60)描述了 IGHV3(名称来自 Igblast) :FWR3 :人IgG抗体构架区序列，其相对于MIN-C2的可变重链区具有84. 7%同源 性（249/294)。
[0120] DIVLTQSPASLAVSPGQRATITC(SEQ ID NO:61)描述了 IGkV7(名称来自 Igblast): FWRl :人IgG抗体构架区序列，其相对于MIN-C2的可变轻链区具有76.4%同源性 (226/296)〇
[0121] WYQQKPGQPPKLLIY(SEQ ID NO:62)描述了 IGkV7(名称来自 Igblast) :FWR2 :人 IgG 抗体构架区序列，其相对于MIN-C2的可变轻链区具有76. 4%同源性（226/296)。
[0122] GVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYY(SEQ ID NO:63)描述了 IGkV7(名称来自 Igblast) :FWR 3:人IgG抗体构架区序列，其相对于MIN-C2的可变轻链区具有76. 4%同源 性（226/296)。
[0123] EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID N0:64)描述了 IGHV3(名称来自 Igblast) :FWR1 :人IgG抗体构架区序列，其相对于MIN-E6的可变重链区具有84. 1%同源 性（249/296)。
[0124] WVRQAPGKGLEWVS(SEQ ID NO:65)描述了 IGHV3(名称来自 Igblast) :FWR2 :人 IgG 抗体构架区序列，其相对于MIN-E6的可变重链区具有84. 1 %同源性（249/296)。
[0125] RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:66)描述了 IGHV3(名称来自 Igblast) :FWR3 :人IgG抗体构架区序列，其相对于MIN-E6的可变重链区具有84. 1%同源 性（249/296)。
[0126] EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC(SEQ ID NO:67)描述了 IGkV3(名称来自 Igblast): FWRl :人IgG抗体构架区序列，其相对于MIN-E6的可变轻链区具有69. 5%同源性 (187/269)。
[0127] WFQQRPGTSPK LLIY(SEQ ID NO:68)描述了 IGkV3(名称来自 Igblast) :FWR2 :人 IgG抗体构架区序列，其相对于MIN-E6的可变轻链区具有69. 5%同源性（187/269)。
[0128] GIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC(SEQ ID NO:69)描述了 IGkV3(名称来自 Igblast) :FWR3 :人IgG抗体构架区序列，其相对于MIN-E6的可变轻链区具有69. 5%同源 性（187/269)。
[0129] 首先通过ELISA来测试通过各种克隆产生的抗体。理想地，癌细胞特异性抗体将 结合于肽SEQ ID NO: 3,其缺少PSMGFR肽（SEQ ID NO: 1)的最后10个N端氨基酸，但并不 结合于SEQ ID N0:4的肽，其缺少在PSMGFR肽的C端处的最后10个氨基酸。理想地，干细 胞特异性抗体将具有相反的结合模式；它们将结合于SEQ ID NO:4的肽，但并不结合于SEQ ID N0:3的肽。通过ELISA，单克隆抗体2D6C3和2D6C8(在本文中还被分别称为C3和C8) 结合于SEQ ID NO:4的肽，但并不结合于SEQ ID NO: 3的肽。相反地，单克隆抗体C2和E6 结合于SEQ ID NO:3的肽，但并不结合于SEQ ID NO:4的肽，见图2。
[0130] 在用来确定对于干细胞具有特异性的单克隆抗体的另一种方法中，将抗体涂布在 细胞培养板的表面上。由于人干细胞不是粘着的，所以它们将不附着于培养板，除非培养板 涂布有识别在干细胞的表面上的受体的抗体。以这种方式，克隆2D6C3和2D6C8 (在本文中 还被分别称为C3和C8)被确定为是干细胞特异性抗体。在一种优选的实施方式中，抗体结 合于其序列对应于MUCl*胞外域的肽，但并不结合于膜近侧部分（SEQ ID N0:3)。在一种更 优选的实施方式中，抗体结合于PSMGFR肽的远侧部分肽（SEQ ID NO:4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID N0:6)并且不结合于膜近侧部分（SEQ ID N0:3)。
[0131] 可以通过FACS来另外测试单克隆抗体的结合特异性，以确定它们是否结合于癌 细胞或干细胞。图3-图6示出FACS数据，其共同显示，癌症特异性抗体C2(MIN-C2)和 E6 (MIN-E6)仅结合于MUCl阳性癌细胞，但并不结合于人干细胞。相反地，图3-图6表明， 干细胞抗体2D6C3和2D6C8仅结合于干细胞，但并不结合于癌细胞。
[0132] 作为用来确定单克隆抗体的特异性的又一种测试，可以测试它们对干细胞或癌细 胞的生长的影响。如在图1的草图中可以看到的，二价抗MUCl*抗体二聚化MUCl*的胞外 域并刺激生长，而单价Fab则抑制生长。测试抗体的二价形式的刺激人干细胞的生长的能 力以及测试单价Fab的抑制干细胞的生长的能力。图7-图9示出照片和绘出的数据，其 表明，二价干细胞抗体2D6C3和2D6C8(C3和C8)刺激人干细胞生长。图10-图12表明， 干细胞抗体C3的Fab，在IOOuM下，抑制干细胞的生长，但癌症特异性抗体C2 (MIN-C2)和 E6 (MIN-E6)的Fab则不。图13 -图15表明，癌症特异性抗体C2 (MIN-C2)和E6 (MIN-