通过胆固醇生物合成抑制剂的雌激素受体β的诱导和治疗癌症的方法
【专利说明】通过胆固醇生物合成抑制剂的雌激素受体β的诱导和治 疗癌症的方法
[0001] 本申请要求2012年6月27日提交的美国临时申请号61/665, 116的优先权权益， 其公开内容通过引用结合到本文中，如同其全文写在本文中一样。
[0002] 资助声明 本发明在政府的支持下，按照国家卫生研宄院授予的资助号R56CA86916下取得。US政 府具有对本发明的一定权益。
[0003] 本文公开一种治疗癌症的新方法，使用组合药物以改进癌症治疗的方法，和用于 治疗癌症包括三-阴性乳腺癌的联合疗法。
[0004] 雌激素受体（"ER"）已长期靶向癌症疗法，特别是乳腺癌疗法。存在两大类受体， 每一类有进一步的亚型。雌激素受体-a (ERa )是促-增殖蛋白；其诱导细胞增殖和肿瘤 生长。ERf3是乳腺癌细胞中细胞生长的负调节剂。尽管ERa表达在乳腺肿瘤发生期间， 特别是在早期阶段增加，但ERf3减少。ERa和ERf3优先地形成功能性异二聚体，其以与 ERa同二聚体的亲和力类似的亲和力结合DNA，且大于ER β同二聚体的亲和力，和ER β被 认为是作为ER a转录活性的负调节剂起作用。因此，根据促进ER β活性将造成肿瘤抑制 的理论，ERf3激动剂已被开发为潜在的抗癌剂。
[0005] ERf3广泛表达于人体内，已在结肠、食管、胃、脑、肺、前列腺、睾丸、胰腺和血管的 肿瘤中被检测到，和ERI3在其它癌症中的作用已有充分的记录。例如，ERI3表达的丧失不 仅与乳腺癌的晚期相关，而且还与结肠癌和前列腺癌的晚期相关。ERf3蛋白表达也随着更 具侵袭性的黑色素瘤而逐渐减小。还已证实选择性ERf3激动剂在何杰金氏淋巴瘤细胞系 和异种移植物研宄中的抗增殖和促凋亡作用。最后，ERf3激动剂还促进ERf3在神经胶质 瘤细胞中的表达和肿瘤-抑制功能二者。总之，这些发现促使针对ERf3调节剂，特别是激 动剂的大量研宄。
[0006] 雌激素当然是调节一系列广泛的身体过程的类固醇激素，因而雌激素受体涉及非 癌症过程也是不足为奇的。例如，最近数据提示ERf3的一个功能可能是调节免疫应答，并 提示ERf3-选择性配体可以是治疗慢性肠和关节炎症的治疗上有用的药物。另外，ERf3调 节已被建议作为一种用于子宫内膜异位症和代谢性疾病例如肥胖症和代谢综合征的疗法。 并且尽管ERa和ERf3在动脉壁中表达且在动脉粥样硬化的进展期间发现表达的变化，但 各自参与的性质值得进一步研宄。例如，ERf3在人中的表达与冠状动脉钙化和动脉粥样硬 化相关，然而ERa和ERf3在人大动脉中的表达随着动脉粥样硬化的进展而减少。
[0007] 本文公开了涉及这样的发现的方法和组合物，即胆固醇生物合成抑制剂在 ER a -阳性和ER a -阴性乳腺癌细胞系二者（包括三阴性细胞）中诱导抗增殖蛋白，雌激素 受体β (ER β )。胆固醇生物合成抑制剂有效地减少乳腺癌细胞的生长，并破坏ER a -阳性 乳腺癌细胞中的促-增殖ERa。然而，OSC的胆固醇生物合成抑制剂与ERf3激动剂一起的 组合比单独使用分开的配体额外地抑制乳腺癌细胞的生长。这种作用在三-阴性细胞中尤 其显著。另外地，使用SiRNA敲除实验在肿瘤细胞中ERf3的下调防止由胆固醇生物合成抑 制剂介导的细胞-杀死作用。
[0008] 因此，本文公开了通过诱导ER β使细胞对化学治疗剂敏感来治疗癌症的方法。虽 然这种方法可在其中涉及ERf3信号传导的任何组织和细胞类型中实施，但在一个实施方 案中，癌症是乳腺癌。在进一步的实施方案中，癌症是ER β -阴性乳腺癌，和在又一个实施 方案中，癌症是三-阴性乳腺癌（即，对于PR、ERa和HER-2为阴性）。在另一个实施方案 中，癌症是卵巢癌。在某些实施方案中，诱导通过给予胆固醇生物合成抑制剂进行。在进 一步的实施方案中，胆固醇生物合成抑制剂是氧化鲨烯环化酶（"0SC"）的抑制剂，例如Ro 48-8071〇
[0009] 还公开用于治疗癌症的组合疗法，其包括胆固醇生物合成抑制剂和ERf3激动剂。 在一个实施方案中，癌症是乳腺癌。在进一步的实施方案中，癌症是ER β -阴性乳腺癌，在 又一个实施方案中，癌症是三-阴性乳腺癌（即，对于PR、ERa和HER-2为阴性）。在另一 个实施方案中，癌症是卵巢癌。在进一步的实施方案中，胆固醇生物合成抑制剂是氧化鲨烯 环化酶（"0SC"）的抑制剂，例如Ro 48-8071。
[0010] 通过本文公开的方法和组合物治疗的癌症可具有不同的类型和/或来源，例如乳 腺、前列腺、肺、结肠、卵巢、胰腺、肝、甲状腺、胃、子宫、淋巴瘤、脑、皮肤、肾、口、喉、舌、鼻、 食管和膀胱癌症，以及白血病和淋巴瘤，及其耐药表型。
[0011] 附图简述 图I. Ro 48-8071治疗对ERa、ER0和Bcl-2蛋白在T47-D乳腺癌细胞中的表达的影 响。
[0012] 图2. Ro 48-8071治疗对ERa和ER β蛋白在BT-474乳腺癌细胞中的表达的影 响。
[0013] 图3.低剂量Ro 48-8071对ERa和ER β表达的影响。
[0014] 图4. Ro 48-8071刺激ER β在ER a -阴性细胞系（三-阴性）中的表达。
[0015] 图5.用ER β siRNA的ER β敲除阻断Ro 48-8071的抗增殖作用。T47-D细胞用 ER^ siRNA (30 和 60 nM ;siER0，Santa Cruz)、杂乱 RNA (siC)或者转染试剂单独（C) 处理72h (上方小图）。在用60 nM siRNA处理的组中，细胞用Ro 48-8071 (10 μΜ)或单 用媒介（C)处理48 h (下方小图），肿瘤细胞生存力使用如所述的SRB测定法测定。在下 方小图中，*指示显著地不同于媒介对照组，和**指示在杂乱RNA组（siRNA-C)和亲本细 胞组中显著地不同于Ro 48-8071处理的样品（p〈 0.001 ;AN0VA)。这些结果证实，当在乳 腺癌细胞中的ERβ的水平减少时，Ro 48-8071在乳腺癌细胞中的抗增殖作用降低。
[0016] 图6. ERI3激动剂增强Ro 48-8071降低ΒΤ-474细胞的生存力的能力。ΒΤ-474 细胞用10 μΜ Ro 48-8071 ± 1 μΜ DPN，或者单独用DPN处理。细胞生存力在48 h后 使用SRB测定法测定。在图6中，*指示显著地不同于对照组，和**指示显著地不同于Ro 48-8071 和 DPN 处理的样品（p〈0. 001，AN0VA)。
[0017] 图 7. PHTPP ("PH")，一种 ER β 拮抗剂，阻断 Ro 48-8071 的抗增殖作用。BT-474 细胞用10 μ M Ro 48-8071处理24 h ± 10或100 nM ΡΗ，或者单独用PHTPP处理。细胞 生存力如前所述经24 h后测定。在图7中，*指示显著地不同于对照，**指示显著地不同 于Ro 48-8071处理的样品，和指示显著地不同于对照（p〈0. 001，AN0VA)。Ro 48-8071 在乳腺癌细胞中的抗增殖作用在其与ERβ拮抗剂组合时减少。
[0018] 详细描述 因此，本文提供一种在受试者中治疗癌症的方法，该方法包括： i) 给予足以在癌细胞中诱导ERβ s的量的胆固醇生物合成抑制剂；和 ii) 给予治疗有效量的选择性或非选择性ER β激动剂； 其中这些步骤可顺序地或同时地进行。
[0019] 在段落[0018]中公开的方法的某些实施方案中，胆固醇生物合成抑制剂是OSC的 抑制剂。在其它实施方案中，胆固醇生物合成抑制剂是角鲨烯单加氧酶的抑制剂。在其它 实施方案中，胆固醇生物合成抑制剂是角鲨烯合酶的抑制剂。在其它实施方案中，胆固醇生 物合成抑制剂是法呢基焦磷酸合酶的抑制剂。在其它实施方案中，胆固醇生物合成抑制剂 是香叶基焦磷酸合酶、甲羟戊酸-5-焦磷酸脱羧酶、磷酸甲羟戊酸激酶或甲羟戊酸激酶的 抑制剂。
[0020] 在段落[0019]中公开的方法的某些实施方案中，OSC的抑制剂是以下段落
[0083]-[0131]的任何一段公开的式I、II或III的化合物。在某些实施方案中，OSC的抑 制剂选自在下表1中公开的化合物。在进一步的实施方案中，OSC的抑制剂选自在下表1中 公开的具有少于100 ηΜ的IC5tl的化合物。在进一步的实施方案中，OSC的抑制剂选自在下 表1中公开的具有少于40 ηΜ的IC5tl的化合物。在进一步的实施方案中，OSC的抑制剂选 自在下表1中公开的具有少于10 ηΜ的IC5tl的化合物。
[0021] 在段落[0020]中公开的方法的某些实施方案中，OSC的抑制剂是Ro 48-8071。
[0022] 在段落[0018]_[0021]的任何一段中公开的方法的某些实施方案中，癌症是乳腺 癌。
[0023] 在段落[0022]中公开的方法的某些实施方案中，癌症是ER-阴性乳腺癌。
[0024] 在段落[0022]中公开的方法的某些实施方案中，癌症是ERf3 -阴性乳腺癌。
[0025] 在段落[0022]中公开的方法的某些实施方案中，癌症是三-阴性乳腺癌。
[0026] 在段落[0