冷却至常温，接种乳酸杆菌、红茶 菌、酵母菌(市售)制剂20~25Kg，设定发酵温度28~35°C，静置发酵培养120~168h，至 pH6. 5~7. 0长出白色菌块为止。
[0012] 所述的一种防治鸡大肠杆菌病中药微生态口服剂的制备方法，其特征在于：将白 色菌块和菌液，按1:100~300兑入5%~10%冷糖开水稀释，发酵温度20~35°C，二次发 酵24-48h后，即得微生态口服液。
[0013] 所述的一种防治鸡大肠杆菌病中药微生态口服剂的制备方法，其特征在于：步骤 二是在无菌发酵室内进行的。
[0014] 本发明中药微生态口服剂具有增加肠道内有益菌群数量、提高免疫功能、增强鸡 体抗病力等功效，且制备方法简单、使用方便、无残留。本发明的有益效果预防效果好，治 愈率达到94. 6%，活菌含量高经测定含量在8 X 108cfu/g。
[0015] 本发明中药微生态口服剂的最小抑菌浓度（MIC)和最低杀菌浓度（MBC)的测定 以及药敏试验，分别测定第一次发酵液和二次发酵液，本试验所用菌株为大肠杆菌O 78 ( CVCC1418 )购自中国兽医药品监察所。采用试管二倍稀释法测定最小抑菌浓度（MIC)，具 体操作如下：取加塞无菌小试管9支，每管中加入制好的普通肉汤培养基lmL，在1管加中 药lmL，用微量移液器混匀，吸取ImL至第2管混匀，依次到第7管，从第7管吸出ImL混合液 并弃之，第8管做阳性对照(加菌液不加中药)，第9管做阴性对照(加中药不加菌液)，此时 1 到 7 号管内药液的浓度分别相当于 500mg/mL、250mg/mL、125mg/mL、62. 5mg/mL、31. 25mg/ mL、15. 63mg/mL、7. 81mg/mL生药浓度；向1-8管加稀释好的菌液0. lmL，第9管不加菌液，但 加0.1 mL LB肉汤培养基；将各组试管置于37°C条件下培养20h，观察并记录结果；与对照组 比较，有絮状沉淀的管则为有细菌生长，无絮状沉淀的管为细菌生长受抑制管，以肉眼观 察无絮状沉淀管的最低药物浓度作为该药的最小抑菌浓度（MIC);由于中草药对细菌的MIC 国内目前尚无统一的标准，本试验参照同类试验的标准作为判断标准（当MIC < 15. 63mg/ mL生药浓度时为高度敏感；当MIC在15. 63~62. 5mg/mL生药浓度时为中度敏感；当MIC 为62. 5~250. 00 mg/mL生药浓度时为较敏感；当MIC>250. 00 mg/mL生药浓度时为不敏 感）测出MIC后，再依次从未见细菌生长的各试管培养物中取一接种环，接种于不含药的普 通琼脂平板上，轻轻摊开菌液，37 °C培养24 h，观察有无细菌生长，普通琼脂平板中，生长 的菌落数小于5个菌落的药液最低浓度，即为MBC ;药敏试验采用纸片扩散法，测定抑菌圈 直径，参照标准药敏试验结果，判定药物的敏感性。测得结果见表1。
[0016] 表1 MIC、MBC和药敏试验结果
【主权项】
1. 一种防治鸡大肠杆菌病中药微生态口服剂的制备方法，其特征在于：它是按以下步 骤制备：一、取金银花、地锦草、白头翁、黄连、牛胆汁、板兰根、车前草、黄芪、石榴皮、甘草； 二、除牛胆汁外，将各中药超微粉碎加乙醇溶液武火煮沸，文火保温，冷却过滤，浓缩滤液， 加入白糖煮沸，冷却降至常温后接种乳酸杆菌、红茶菌及酵母菌，经120~168h发酵至长出 白色菌块；三、将白色菌块和菌液，按1:100~300稀释，二次发酵24~48h后，即得微生态口服 液。
2. 根据权利要求1所述的一种防治鸡大肠杆菌病中药微生态口服剂的制备方法，其 特征在于：秤取以下重量份的中药：金银花80~100、地锦草80~100、白头翁80~100、黄连 80~100、牛胆汁60~80、板兰根60~80、车前草40~60、黄芪40~60、石榴皮30~40、甘草20~30。
3. 根据权利要求1所述的一种防治鸡大肠杆菌病中药微生态口服剂的制备方法，其特 征在于：除牛胆汁外，秤取重量份的中药，超微粉碎，加入中药总重量8~10倍量的50%~ 70%的乙醇溶液，浸泡30~60min，武火煮沸，文火保温30~60min，冷却十二层纱布过滤； 滤渣再加6~8倍量的水，武火煮沸，文火保温30~60min，冷却十二层纱布过滤，合并两次 滤液，浓缩回收乙醇，用乙醇检测仪检测浓缩液中无乙醇时停止浓缩，同时向浓缩液中加入 牛胆汁。
4. 根据权利要求1所述的一种防治鸡大肠杆菌病中药微生态口服剂的制备方法，其特 征在于：以100 Kg浓缩液为单位添加白糖10~15Kg，并煮沸3~5min，冷却至常温，接种 乳酸杆菌、红茶菌、酵母菌（市售）制剂20~25Kg，设定发酵温度28~35°C，静置发酵培养 120~168h,至pH6. 5~7. 0长出白色菌块为止。
5. 根据权利要求1所述的一种防治鸡大肠杆菌病中药微生态口服剂的制备方法，其特 征在于：将白色菌块和菌液，按1:100~300兑入5%~10%冷糖开水稀释，发酵温度20~ 35°C，二次发酵24-48h后，即得微生态口服液。
6. 根据权利要求1所述的一种防治鸡大肠杆菌病中药微生态口服剂的制备方法，其特 征在于：步骤二是在无菌发酵室内进行。
【专利摘要】一种防治鸡大肠杆菌病中药微生态口服剂的制备方法,其是按以下步骤制备:取金银花、地锦草、白头翁、黄连、牛胆汁、板兰根、车前草、黄芪、石榴皮、甘草；将各中药超微粉碎加乙醇溶液武火煮沸，文火保温，冷却过滤，浓缩滤液，加入白糖煮沸，冷却降至常温后接种乳酸杆菌、红茶菌及酵母菌，经120~168h发酵至长出白色菌块；三、将白色菌块和菌液，按1:100~300稀释，二次发酵24~48h后,即得微生态口服液。本发明中药微生态口服剂具有增加肠道内有益菌群数量，提高免疫功能，增强鸡体抗病力,本发明的有益效果预防效果好,治愈率达到94.6%,且制备方法简单，活菌含量高，使用方便，绿色无残留。
【IPC分类】A61P31-04, A61K36-718, A61P37-04, A61K35-413, A61K35-747
【公开号】CN104739963
【申请号】CN201510191373
【发明人】朱伟, 郭庆, 李磊, 邹小娟, 黄岩, 程亮, 韩俊伟
【申请人】郭庆
【公开日】2015年7月1日
【申请日】2015年4月22日