功效改进且毒性降低的抗体与sn-38的免疫缀合物的剂量的制作方法
【专利说明】功效改进且毒性降低的抗体与SN-38的免疫缀合物的剂量
[0001] 相关申请
[0002] 本申请根据35 U. S. C. 119 (e)要求12/13/12提交的美国临时专利申请 61/736, 684 及 1/7/13 提交的 61/749, 548 的权益。
[0003] 序列表
[0004] 本申请含有经由EFS-Web以ASCII格式提交的序列表并且在此以引用的方式整体 并入。在2013年7月17日创建的所述ASCII副本的名称是IMM340W01_SL. txt并且大小 是60, 405个字节。 发明领域
[0005] 本发明涉及抗体或抗原结合抗体片段与喜树碱如SN-38的免疫缀合物的治疗用 途，所述免疫缀合物靶向人受试者中的各种癌细胞的能力得以改进。在优选实施方案中，抗 体及治疗性部分经由提高治疗功效的细胞内可裂解的键连接。在更优选的实施方案中，免 疫缀合物是以使治疗效果达到最佳的特定剂量和/或特定施用方案来施用的。用于本文所 公开的人治疗用途的SN-38缀合抗体的最佳剂量和施用方案显示从动物模型研宄中不能 预测到的出乎意料的优良功效，从而允许有效治疗耐受标准抗癌疗法（包括母体化合物， 依立替康（CPT-Il))的癌症。
[0006] 发明背景
[0007] 多年来在特异性地靶向药物疗法的领域中科学家的一个目标是使用单克隆抗体 (Mb)来特定递送毒性试剂到人癌症。已经开发了肿瘤相关Mb与合适的毒性试剂的缀合 物，但是在人的癌症疗法中已经取得了各式各样的成功，并且实际上没有应用在如感染性 及自体免疫疾病的其它疾病中。毒性试剂最通常是化学治疗性药物，虽然发射颗粒的放射 性核素或细菌或植物毒素也已与MAb缀合，尤其用于癌症疗法（Sharkey和Goldenberg, CA Cancer J Clin. 2006年7月-8月；56 (4) :226-243)并且更近来，将放射性免疫缀合物 用于某些感染性疾病的临床前疗法中（Dadachova和Casadevall，Q J Nucl Med Mol Imaging2006 ;50 (3):193-204) 〇
[0008] 使用Mb-化学治疗性药物缀合物的优点在于：(a)化学治疗性药物本身在结构上 被明确定义；(b)使用充分定义的缀合化学过程将化学治疗性药物连接至Mb蛋白，经常在 远离Mb抗原结合区的特异性位点处；（c)与涉及Mb及细菌或植物毒素的化学缀合物相 比，Mb-化学治疗性药物缀合物更具有可重复性且通常具有更小的免疫原性，且因此更有 商业发展前途并且容易获得管理批准；以及（d)Mb-化学治疗性药物缀合物与放射性核素 Mb缀合物相比全身毒性要小几个数量级，尤其是针对辐射敏感的骨髓。
[0009] 喜树碱（CPT)及其衍生物是一类有效的抗肿瘤剂。依立替康（又称为CPT-11) 及拓扑替康是CPT类似物，其是被批准的癌症治疗剂（Iyer *Ratain，CancerChemother. Phamacol. 42: S31-S43 (1998))。CPT通过经由使拓扑异构酶I-DNA复合物稳定来抑制拓扑 异构酶 I 酶，从而发挥作用（Liu,等人 The Camptothecins:Unfolding Their Anticancer Potential, Liehr J. G. , Giovanella,B.C.和 Verschraegen (编著），NY Acad Sci. , NY 922:1-10(2000))。CPT在缀合物的制备中带来了特殊问题。一个问题是大多数CPT衍生物 在含水缓冲液中的不溶性。其次，CPT提供对于缀合至大分子的结构修饰的特别挑战。例 如，CPT本身仅在环E中含有叔羟基。在CPT的情况下羟基官能团必须偶联至适用于随后 的蛋白缀合的接头；并且在有效的CPT衍生物如SN-38、化学治疗性CPT-Il的活性代谢物 及其它含有C-10-羟基的衍生物如拓扑替康和10-羟基-CPT中，酚羟基在C-IO位置处的 存在使得必需的C-20-羟基衍生作用复杂化。第三，喜树碱的E环的δ-内酯部分在生理 条件下的不稳定性导致抗肿瘤效力大大降低。因此，进行缀合方案以便在7或更低的pH下 进行其以避免内酯环打开。然而，具有胺反应性基团如活性酯的双官能CPT的缀合通常需 要8或更大的pH。第四，细胞内可裂解部分优选地并入连接CPT与抗体或其它结合部分的 接头/间隔物中。
[0010] 存在制备及施用抗体-CPT缀合物如抗体-SN-38缀合物的更有效方法的需要。优 选地，所述方法包括使得用于人患者的治疗用途的抗体-CPT缀合物的功效最大化且使得 毒性最小化的最佳给药及施用方案。
[0011] 发明概述
[0012] 除非另外明确地说明，如本文所用的缩写"CPT"可以是指喜树碱或其任何衍生物， 如SN-38。本发明通过提供用于制备和施用CPT抗体免疫缀合物的改进的方法及组合物来 解决在本领域中未实现的需要。优选地，所述喜树碱是SN-38。所公开的方法及组合物适用 于治疗耐受其它形式的疗法或对其反应较小的多种疾病及病状，并且可以包括针对其用于 选择性靶向的合适的抗体或抗原结合抗体片段可产生、或可获得或已知的疾病。可用本发 明的免疫缀合物治疗的优选疾病或病状包括例如癌症或由感染性有机体所引起的疾病。
[0013] 优选地，靶向部分是抗体、抗体片段、双特异性或其它多价抗体、或其它基于抗体 的分子或化合物。所述抗体可以具有各种同种型，优选地人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4,更优 选地包括人IgGl铰链及恒定区序列。抗体或其片段可以是嵌合的人-小鼠、嵌合的人-灵 长类动物、人源化（人构架及鼠科高变（CDR)区）、或完全人抗体以及其变型，如一半IgG4 抗体（称为"单抗体（unibody)"），如由 van der Neut Kolfschoten 等人（Science 2007 ; 317:1554-1557)所描述。更优选地，抗体或其片段可被设计或选择以包含属于特定同种异 型的人恒定区序列，这可以造成在向人受试者施用免疫缀合物时降低的免疫原性。供施用 的优选同种异型包括非Glml同种异型（nGlml)，如Glm3、Glm3, 1、Glm3, 2或Glm3, 1，2。更 优选地，同种异型选自由以下组成的组：nGlml、Glm3、nGlml, 2及Km3同种异型。
[0014] 使用的抗体可以结合至本领域中已知的任何疾病相关抗原。举例来说，当疾病病 况是癌症时，由肿瘤细胞表达或另外与肿瘤细胞有关的许多抗原在本领域中是已知的，包 括但不限于碳酸酐酶IX、α-甲胎蛋白（AFP)、 α-辅肌动蛋白-4、A3、对A33抗体有特异 性的抗原、ART-4、Β7、Ba 733、BAGE、BrE3-抗原、CA125、CAMEL、CAP-1、CASP-8/m、、CCCL19、 CCCL21、CD1、CDla、CD2、CD3、CD4、CD5、CD8、CD11A、CD14、CD15、CD16、CD18、CD19、CD20、 CD21、CD22、CD23、CD25、CD29、CD30、CD32b、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD44、CD45、 CD46、CD52、CD54、CD55、CD59、CD64、CD66a-e、CD67、CD70、CD70L、CD74、CD79a、CD80、CD83、 CD95、CD126、CD132、CD133、CD138、CD147、CD154、CDC27、CDK-4/m、CDKN2A、CTLA-4、CXCR4、 CXCR7、CXCL12、HIF-I a、结肠特异性抗原-p (CSAp)、CEA (CEACAM5)、CEACAM6、c-Met、DAM、 EGFR、EGFRvIII、EGP-I (TR0P-2)、EGP-2、ELF2-M、Ep-CAM、成纤维细胞生长因子（FGF)、 Flt-1、Flt-3、叶酸受体、G250 抗原、GAGE、gplOO、GRO-β、HLA-DR、HML 24 人绒毛膜促性 腺激素（HCG)及其亚基、HER2/neu、HMGB-1、低氧诱导因子（HIF-I)、HSP70-2M、HST-2、Ia、 IGF-1R、IFN- γ、IFN- α、IFN- β、IFN- λ、IL-4R、IL-6R、IL-13R、IL-15R、IL-17R、IL-18R、 11^-2、11^-6、几-8、11^-12、11^-15、11^-17、11^-18、11^-23、11^-25、胰岛素样生长因子-1(16卩-1)、 KC4-抗原、KS-I-抗原、KSl-4、Le-Y、LDR/FUT、巨噬细胞迀移抑制因子（MIF)、MAGE、MAGE-3、 MART-1、MART-2、NY-ESO-I、TRAG-3、mCRP、MCP-I、ΜΙΡ-1Α、ΜΙΡ-1Β、MIF、MUCl、MUC2、MUC3、 MUC4、MUC5ac、MUC13、MUC16、MUM-1/2、MUM-3、NCA66、NCA95、NCA90、PAM4 抗原、胰腺癌粘 蛋白、PD-I受体、胎盘生长因子、p53、PLAGL2、前列腺酸性磷酸酶、PSA、PRAME、PSMA、P1GF、 ILGF、ILGF-1R、IL-6、IL-25、RS5、RANTES、T101、SAGE、S100、存活素、存活素-2B、TAC、 TAG-72、腱生蛋白、TRAIL 受体、TNF-α、Tn 抗原、Thomson-Friedenreich 抗原、肿瘤坏死 抗原、VEGFR、ED-B纤连蛋白、WT-1、17-1A-抗原、补体因子C3、C3a、C3b、C5a、C5、血管生 成标记物、bcl-2、bcl-6、Kras、致癌基因标记物以及致癌基因产物（参见，例如Sensi等 人，Clin Cancer Res 2006, 12:5023-32 ;Parmiani 等人，JImmunol 2007, 178:1975-79 ; Novellino 等人 Cancer Tmmunol Immunother 2005, 54:187-207)。优选地，抗体结合至 CEACAM5、CEACAM6、EGP-I (TR0P-2)、MUC-16、AFP、MUC5a, c、PAM4 抗原、CD74、CD19、CD20、 CD22 或 HLA-DR0
[0015] 可以利用的示例性抗体包括但不限于：hRl (抗IGF-1R，3/12/10申请的美国专 利申请序列号12/722,645)、hPAM4(抗粘蛋白，美国专利号7,282,567)、hA20(抗CD20， 美国专利号 7,251，164)、hA19(抗 CD19,美国专利号 7, 109,304)、hIMMU31(抗 AFP，美国 专利号7, 300, 655)、hLLl (抗CD74,美国专利号7, 312, 318)、hLL2 (抗CD22,美国专利 号 7, 074, 403)、hMu-9 (抗 CSAp，美国专利号 7, 387, 773)、hL243 (抗 HLA-DR，美国专利号 7, 612, 180)、hMN-14 (抗 CEACAM5,美国专利号 6, 676, 924)、hMN-15 (抗 CEACAM6,美国专 利号 7,541,440)、hRS7(抗 EGP-1，美国专利号 7,238,785)、hMN-3(抗 CEACAM6,美国专利 号7, 541，440)、Abl24和Abl25 (抗CXCR4,美国专利号7, 138, 496)，每个引用专利或申请 的实施例部分以引用的方式并入本文。更优选地