多价肺炎球菌多糖-蛋白结合组合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及多价免疫原性组合物，包含：通过将源自12种肺炎链球菌血清型1、3、 4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F以及肺炎链球菌血清型22F或33F的荚膜多糖结 合至载体蛋白（如CRM197)制备的13种不同的多糖-蛋白结合物。本发明总体上涉及医学 领域，并且具体涉及微生物学、免疫学、以及通过免疫对婴儿、儿童、和成人中的肺炎球菌疾 病的预防。
【背景技术】
[0002] 肺炎链球菌是肺炎的主要原因。根据国家统计局公布的2010死亡趋势，肺炎是 10大死亡原因之一，每100000人中有14. 9人死亡，比2000年增加82. 9%。世界卫生组织 (WHO)还估算了在2012年，全球5岁或小于5岁的476000例HIV阴性儿童死于肺炎链球菌 感染，对于5岁以下的儿童，其占各种原因儿童死亡率的5%。
[0003] 在1977年，Robert Austrian博士研制出14价肺炎球菌多糖疫苗来预防肺炎球 菌疾病，之后该疫苗发展至23价多糖疫苗。已经证明多价肺炎球菌多糖疫苗对于预防中老 年人和高危患者的肺炎球菌疾病是有用的。然而，由于T细胞独立的免疫应答，所以婴儿和 幼童对大多数的肺炎球菌多糖响应很差。7价肺炎球菌结合物疫苗（7vPnC，p revnar? )包 含来自7种最普遍的血清型4、68、听、14、18(：、19?和23?的荚膜多糖。自从2000年在美国 获得批准，已经证实Prevnar是高度免疫原性的并且有效抵抗婴儿和幼儿中的侵袭性疾病 和中耳炎。现在，Prevnar在全世界约80个国家获得批准。Prevnar分别在美国、欧洲和世 界的其他地区覆盖了大约80-90%、60-80%和40-80%的侵袭性肺炎球菌疾病（IH))。正如 预期的，在引入Prevnar后的几年中收集的监测数据已经清楚地证实，在美国由被Prevnar 覆盖的血清型引起的侵袭性肺炎球菌疾病降低。然而，血清型的覆盖率限于一些地区，并且 由没有被Prevnar覆盖的血清型（特别是19A)引起的侵袭性肺炎球菌疾病增加。
[0004] 在2010年2月，咨询委员会的免疫实践（The Advisory Committee on Immunization Practices，ACIP)推荐了用于接种新批准的13价肺炎球菌结合疫苗 (PCV-13)。PCV-13 是包含除包含在 Prevnar 中的 7 种血清型（4、6B、9V、14、18C、19F、23F) 之外的6种另外的血清型（1、3、5、6A、7F、19A)的肺炎球菌结合疫苗。根据美国活性细菌核 心监测（Active Bacterial Core surveillance，ABC)，在已知为5岁或小于5岁儿童中的 致病血清型的IB)病例中的总共64%被PCV-13覆盖。在2007年，在5岁或小于5岁儿童 的4600例IB)病例中的仅70病例被PCV7覆盖，而2900被PCV-13覆盖的病例占主要部分。 现在，正在研制15价肺炎球菌结合疫苗，其覆盖发病率随血清型替换而增加的另外的血清 型。
【发明内容】
[0005] 因此，本发明提供了用于预防婴儿、儿童和成人的肺炎球菌疾病的多价免疫原性 组合物，该多价免疫原性组合物包含源自13种肺炎球菌血清型（包括血清型22F或血清型 33F)的荚膜多糖。具体地，本发明提供了包含血清型22F或血清型33F以及血清型1、3、4、 5、6六、68、7?、听、14、18(：、194、19?和23?的13价肺炎球菌结合物（?(^-13)组合物。
[0006] 技术方案
[0007] 根据本发明的一个方面，提供了多价免疫原性组合物，其包含13种不同的多 糖-蛋白结合物和生理上可接受的载体，其中，每种结合物包含源自结合至载体蛋白的肺 炎链球菌的不同血清型的荚膜多糖，并且荚膜多糖由选自由1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、 18C、19A、19F和23F组成的组中的12种血清型以及血清型22F或血清型33F制备。
[0008] 在根据本发明的多价免疫原性组合物中，载体蛋白可以是CRM197。根据本发明的多 价免疫原性组合物可以进一步包含佐剂，例如，包含铝类佐剂的佐剂。佐剂可以选自由磷酸 铝、硫酸铝和氢氧化铝组成的组，并且优选的是磷酸铝。
[0009] 根据本发明的另一方面，提供了用于诱导对肺炎链球菌荚膜多糖结合物的免疫应 答的药用组合物，该药用组合物包含免疫学有效量的所述免疫原性组合物。
[0010] 在一个实施方式中，药用组合物可以是被配制成包含以下的免疫原性组合物： 2 μ g的每种血清型的多糖，但在6B的情况下为4 μ g ;大约34 μ g的CRM197载体蛋白； 0. 125mg的元素铝（0. 5mg的磷酸铝）佐剂；和作为赋形剂的氯化钠和琥珀酸钠缓冲液。
[0011] 技术效果
[0012] 根据本发明的多价免疫原性组合物包含源自13种不同的肺炎球菌血清型（包括 血清型22F或血清型33F)的荚膜多糖，从而导致血清IgG效价和功能性抗体活性升高。因 此，可以将根据本发明的多价免疫原性组合物有利地用于预防婴儿、儿童和成人中的肺炎 球菌疾病。
[0013] 发明模式
[0014] 已经通过具有抗生素抗性和多重抗药性的一些血清型进行了血清型替换。 此外，血清型分布的地区差异导致地区覆盖Prevnar的差异（Harboe ZB, Benf ield TL,Valentiner-Branth P，et al. Temporal Trends in Invasive Pneumococcal Disease and Pneumococcal Serotypes over 7Decades. Clin Infect Dis 2010;50:329-37)。因 此，没有理由除去现有的肺炎球菌结合疫苗中的任何血清型。相反，需要通过添加血清型进 一步扩大覆盖率。
[0015] 根据Lauri A. Hicks等人基于1998至2004年在美国收集的IB)数据所发表的研 宄，在5岁以下的儿童中，由包含在Prevenar中的血清型引起的IPD的发病率下降，而由血 清型 3、15、19A、22F 和 33F 引起的 IF1D 的发病率增加 （Lauri A. Hicks, et al. Incidence of Pneumococcal Disease Due to Non-Pneumococcal Conjugate Vaccine(PCV7)Serotypes in the United States during the Era of Widespread PCV7Vaccination, 1998-2004. Clin Infect Dis 2007;196:1346-54)。此外，Michael R. Jacobs 等人报道在美国俄亥 俄州克立夫兰，由于Prevenar的引入，由血清型19A、6C、22F和15引起的IPD的发病率 增加 （Michael R. Jacobs, et al. Emergence of Streptococcus pneumoniae Serotypes 19A, 6C, and 22F and Serogroup 15in Cleveland, Ohio, in Relation to Introduction of the Protein-Conjugated Pneumococcal Vaccine, 1998-2004. Clin Infect Dis 2008 ； 47:1388-95)。由US⑶C发布的关于肺炎球菌血清型引起婴儿和5岁以下幼儿的IB)的数 据表明在1998-1999至2008之间在血清型分布方面血清型22F和血清型33F的明显增加。 因此，如果将血清型22F或血清型33F包含在肺炎球菌结合疫苗中，则可以降低肺炎球菌疾 病的发病率，并且可以进一步为接种PCV-13可能发生的血清型替换做准备。
[0016] 本发明提供了包含13种荚膜多糖的多价免疫原性组合物，该13种荚膜多糖包含 在Prevenar 13中，其中的一种被血清型2或血清型9N取代。具体地，本发明提供了包含 以下的多价免疫原性组合物：13种不同的多糖-蛋白结合物和生理上可接受的载体，其中， 每种结合物包含来自结合至载体蛋白的肺炎链球菌的不同血清型的荚膜多糖，并且该荚膜 多糖由选自由血清型1、3、4、5、6六、68、7?、听、14、18(：、19六、19?和23?组成的组中的12种血 清型以及血清型22F或血清型33F制备。
[0017] 荚膜多糖可以由本领域普通技术人员已知的标准技术制备。为了减少活化的荚膜 多糖的粘度或增加其溶解度，可以降低荚膜多糖的大小。在本发明中，荚膜多糖由选自由肺 炎链球菌的血清型1、3、4、5、6八、68、7?、听、14、18(：、194、19?和23?组成的组中的12种血清 型和血清型22F或血清型33F制备。通过分离方法制