派伊尔淋巴集结活化剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种派伊尔淋巴集结活化剂。
【背景技术】
[0002] 派伊尔淋巴集结是存在于上部肠道中的高度功能化的淋巴滤泡组织，其是作为用 于抗原特异性分泌型IgA的产生和免疫耐受性表达的重要出发点的诱导组织之一。目前已 知派伊尔淋巴集结在被称为肠道免疫的生物防御相关的免疫机制中起着重要的作用。例 如，派伊尔淋巴集结的淋巴细胞具有时常通过归巢现象被补充至其它局部粘膜免疫系统和 全身免疫系统的附属组织，并传播免疫信息的功能。
[0003] 作为派伊尔淋巴集结免疫功能调节活性之一，可以举出骨髓细胞增殖促进因子 (例如，细胞因子）在派伊尔淋巴集结中的产生。作为这种骨髓细胞增殖促进因子，例如，已 知有在派伊尔淋巴集结中产生的作为细胞因子的IL-6 (白细胞介素-6)(非专利文献1)。
[0004] 另一方面，迄今为止，已有报道从菊花科茅苍术（Atractylodes lancea DC.)的根 莖中得到的多糖、以及从豆科内蒙黄耆（Astragalus mongholics Bunge.)的地上部分得到 的多糖具有调节派伊尔淋巴集结免疫功能的活性（非专利文献2)。
[0005] 另外，已知有以来自禾本科植物甘蔗的提取物作为有效成分的感染预防治疗剂、 疫苗佐剂以及针对由球虫引起的人或动物的疾病的预防治疗剂（例如，专利文献1和2)。
[0006] 现有技术文献
[0007] 专利文献
[0008] 专利文献1 :日本特开2000-297046号公报
[0009] 专利文献2 :日本特开2003-63975号公报
[0010] 非专利文献
[0011] 非专利文献 I :T. Hong，T. Matsumoto，H. Kiyohara and H. Yamada :Enhanced production of hematopoietic growth factors through T cell activation in Peyer's patches by oral administration of Kampo(Japanese herbal)medicines, 'Juzen-taiho-to'，Phytomedicine，5 卷，353 ~360 页（1998 年）
[0012] 非专利文献 2 :Hiroaki Kiyohara，Toshiake Matsuzaki，Tsukasa Matsumoto， Takayuki Nagai，Haruki Yamada:Yakugaku Zasshi，128 卷，5 号，709 ~719 页（2008 年）
【发明内容】
[0013] 发明要解决的课题
[0014] 若可以人为地调节派伊尔淋巴集结的免疫功能，则可通过肠道免疫的方式来调节 与生物防御相关的免疫机制，因此是有益的。如非专利文献2中公开的那样，迄今为止已 知有几种具有派伊尔淋巴集结免疫功能调节活性的物质。但是，尚谈不上有充分供应能力 (repertory)以满足消费者的多样化需求。
[0015] 另外，尽管已知有几种来自禾本科植物的功能性成分，但迄今为止尚不知道具有 派伊尔淋巴集结免疫功能调节活性的成分，例如尚不知道具有如下作用的成分，所述作用 是增强在派伊尔淋巴集结中产生具有骨髓细胞增殖促进活性的细胞因子的作用（下面也 将该作用称作"派伊尔淋巴集结活性作用"）。
[0016] 鉴于上述情况，本发明的目的在于，提供一种新型派伊尔淋巴集结活化剂，其具有 增强在派伊尔淋巴集结中产生具有骨髓细胞增殖促进活性的细胞因子的作用。
[0017] 解决课题的方法
[0018] 本发明人等，发现从甘蔗（sugar cane)脱蔗糖提取物中提纯（精制）而成的后述 α-葡聚糖组分和杂聚糖组分具有增强在派伊尔淋巴集结中产生具有骨髓细胞增殖促进活 性的细胞因子的作用，从而完成了本发明。
[0019] 即，本发明提供一种作为有效成分含有从甘蔗得到的多糖的派伊尔淋巴集结活化 剂。
[0020] 本发明的派伊尔淋巴集结活化剂，至少有增强在派伊尔淋巴集结中产生具有骨髓 细胞增殖促进活性的细胞因子（例如，IL-6)的作用。因此，至少通过调节派伊尔淋巴集结 中的上述细胞因子的产生，能够发挥派伊尔淋巴集结免疫功能调节活性。另外，由于甘蔗是 自古以来就用作食品的物质之一，因此，可提供安全性更高的派伊尔淋巴集结活化剂。
[0021] 上述多糖也可以是以α -葡聚糖作为主要成分，峰值分子量在720000~1080000 的范围内，并在总构成糖组分中葡萄糖占有的比率为80%以上且非还原末端葡萄糖占有的 比率为20~30%以及α 1-6键合的葡萄糖占有的比率为15~25%的多糖（下面也称为 "α-葡聚糖组分"）。由此，能够起到更优良的派伊尔淋巴集结活性作用。此外，在本说明 书中" α 1-6键合的葡萄糖"是指以1位和6位的羟基与其它结构单元进行键合的α -葡萄 糖单元，也称作" α -6键合的葡萄糖"。
[0022] 本说明书中，所谓"分子量分布曲线"是指采用高速凝胶过滤色谱法（HPSEC)分析 被检测试样（〇-葡聚糖组分和杂聚糖组分）的分子量时获得的分布曲线。分子量例如是 采用下述方法求出：通过标准多糖（pullulan ?-800、400、200、100、50、20、10和5，昭和电 工株式会社制造）在HPSEC中的保留时间，制作分子量相对于保留时间系数（Kav)的校准 曲线，且根据被检测试样的保留时间求出分子量。另外，HPSEC的条件例如可按如下方式进 行设定。
[0023] 柱：Asahi-pak GS710 和 Asahi-pak GS620 (各为 0· 76i. d.(内径）X 60cm)(昭和 电工株式会社制造）的联用柱
[0024] 送液装置JASCO PV-980(日本分光株式会社（JASCO Corporation)制造）
[0025] 检测器：Shodex RI SE_62(昭和电工株式会社制造）（灵敏度：X2)
[0026] 洗脱液：0· 2M NaCl (1.0 mL/min)
[0027] 本说明书中，所谓"峰值分子量"是指上述"分子量分布曲线"中的峰顶对应的分 子量。
[0028] 另外，上述α -葡聚糖组分优选为如下组分：将选自甘蔗提取物或来自甘蔗的糖 蜜中的原料进行乙醇沉淀，经过透析或膜处理从所得到的沉淀中去除低分子量的物质而获 得的组分（也称作"乙醇沉淀组分"）。
[0029] 乙醇沉淀组分也可以是直接使用甘蔗提取物或来自甘蔗的糖蜜而获得的组分。另 外，优选使用如下组分获得：即，将甘蔗提取物或来自甘蔗的糖蜜，通液于作为载体填充了 阳离子交换树脂的柱中，通过在以水作为洗脱液时的上述阳离子交换树脂与各成分之间的 亲和力之差进行分级，且在所得到的多个组分中去除了蔗糖、葡萄糖和果糖的吸收420nm 波长的光的组分（也称作"来自甘蔗的提取物"）。通过采用来自甘蔗的提取物，可更有效 地获得乙醇沉淀组分。
[0030] 上述α -葡聚糖组分优选为如下组分：g卩，将上述乙醇沉淀组分通液于作为载体 填充了阴离子交换树脂的柱中，用低离子强度的洗脱溶剂洗脱吸附于上述阴离子交换树脂 的成分而获得洗脱组分，进而对该洗脱组分进行凝胶过滤而获得的组分。
[0031] 上述α-葡聚糖组分优选为如下组分：g卩，将上述乙醇沉淀组分，通液于作为 载体填充了以水进行平衡化的阴离子交换树脂的柱中，用IOOmM的NH 4HCCV冼脱吸附于 上述阴离子交换树脂的成分而得到洗脱组分，进而将所述洗脱组分通液于截留分子量 (MWCO) 2X IO3~4X 10 5Da的凝胶过滤柱，最初流出的相当于空隙体积的量的组分。
[0032] 上述多糖也可以是以杂聚糖作为主要成分，峰值分子量在38400~57600的范 围内以及664000~996000的范围内，并在总构成糖组分中葡萄糖占有的比率为30 %~ 50%、阿拉伯糖占有的比率为20~30%、且非还原末端阿拉伯糖占有的比率为20~30% 的多糖（下面也称为"杂聚糖组分"）。由此，能够起到更优良的派伊尔淋巴集结活性作用。
[0033] 上述杂聚糖组分，优选为从上述乙醇沉淀组分中获得的组分。此时，上述乙醇沉淀 组分，优选使用上述来自甘蔗的提取物而获得的组分。
[0034] 上述杂聚糖组分优选为如下组分：即，将上述乙醇沉淀组分通液于作为载体填充 了阴离子交换树脂的柱中，用高离子强度的洗脱溶剂洗脱吸附于上述阴离子交换树脂的成 分而得到的组分。
[0035] 上述杂聚糖组分，优选由如下组分组成：
[0036] 将上述乙醇沉淀组分通液于作为载体填充了以水