使用软骨来源细胞的胞外基质膜的治疗血管生成疾病的组合物、以及角膜或结膜的移植物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及使用软骨细胞来源的胞外基质膜的用于治疗血管生成 (angiogenesis)相关疾病的组合物、以及角膜或结膜的移植物。具体而言，本发明涉及基于 软骨细胞来源的胞外基质膜的抗血管生成活性来治疗血管生成相关疾病（例如翼状胬肉） 的组合物、以及角膜或结膜的移植物。
[0002] 具体而言，本发明涉及基于支架的抗血管生成活性来治疗角膜血管生成相关疾病 (例如翼状胬肉）的组合物、以及角膜或结膜的移植物，其中，所述支架使用得自动物的软 骨组织和/或软骨细胞的软骨细胞来源的胞外基质以膜形式制作。
[0003] 另外，本发明涉及与基于抗血管生成活性的软骨细胞来源的胞外基质膜相关的新 用途，其中，由动物中的软骨组织和/或软骨细胞分泌形成的软骨细胞来源的胞外基质膜 抑制血管内皮细胞的附着和增殖。另外，软骨细胞来源的胞外基质膜抑制血管内皮细胞的 迀移，以抑制血管化（vascularization)或血管浸润，从而抑制血管生成。
【背景技术】
[0004] 血管生成（或者也称为新生血管化）是指新血管的生成，推测基于发育过程和伤 口愈合而诱导或调控。然而，血管生成引起组织退化的情况是人们所不期望的。特别是，血 管生成与疾病（例如癌症、软骨的增生和血管浸润症、角膜血管生成症、糖尿病性视网膜病 变、脉络膜血管生成相关疾病、黄斑部变性）密切相关。就这方面而言，推测抑制血管生成 能提高上述疾病的治疗效果。
[0005] 关于血管生成的机制，已知血管生成因子（例如血管内皮生长因子（VEGF)、FGF或 PIGF)在形成相对于外周血管的微血管的癌细胞或组织中表达。另外，已知上述血管生成因 子的表达通过缺血性损伤和炎症诱导。
[0006] 角膜是无血管组织，为保持视力需要维持角膜的透明性。但是，在眼睛中也出现了 血管生成症，并相应地引起眼部血管生成相关疾病。角膜血管生成能够降低眼部透明性，造 成视力丧失。另外，视网膜血管生成可引起血管的不正常形成，通过血管中的渗出现象引起 的视网膜细胞退化造成视力丧失。与此类眼部新生血管化相关的疾病包括角膜血管生成、 糖尿病性视网膜病变、脉络膜血管生成相关疾病以及黄斑部变性。因此，眼部血管生成是不 期望的，应当尽可能进行抑制。
[0007] 就这方面而言，由于近年来平均寿命的增加、户外活动和运动的增多，外伤性眼科 疾病的发病率也在增高，因此，对于有效且能够补充眼部血管生成相关疾病的现有疗法和 外科手术的缺点的新的治疗进展的需求在显著增高。
[0008] 例如，角膜血管生成涉及的翼状胬肉，在早期接受药物治疗，但是在严重损伤的情 况下，实施外科手术（例如，血管切开术和结膜自体移植术）。然而，在血管生成相关疾病的 情况下，存在高复发率（10% -45% )和并发症的问题。尤其是，上述外科手术不能被用于 二次手术或者大范围的过量翼状胬肉的情况。
[0009] 再次，角膜血管生成存在药物相关的副作用、并发症和外科手术局限性，需要开发 新的治疗剂、医疗材料及治疗方法。基于这一要求，近来用于治疗角膜的新的生物医疗材料 备受关注。
[0010] 目前可使用的治疗角膜血管生成的医疗材料主要包括：用于青光眼的多孔胶原海 绵，治疗烧伤、角膜损伤及翼状胬肉的来源于完整组织的羊膜。
[0011] 关于使用上述羊膜的医疗材料，Bioland公司生产的AmniSite-Cornea在韩国开 发，其它大部分产品都由美国公司开发。例如，由IOP公司生产的Ambi〇-dry2?被进口至韩 国被用于翼状胬肉及角膜损伤。然而，所有这些产品均未被医疗保险涵盖，由于高的外科手 术费用而由此造成患者的巨大负担。
[0012] 因此，考虑到在大部分情况下依赖于昂贵的进口医疗产品的现状，迫切需要开发 新技术和生物材料，以治疗血管生成相关疾病，由此取代进口产品。新产品也能够创造新的 市场份额并预先占据优势。
[0013] 关于这方面，韩国专利公开号10-0947553公开了通过将来源于动物或人体的羊 膜用酒精、胰蛋白酶、碱性溶液和酸性溶液进行处理制备羊膜组织移植物材料的方法。依据 该公开内容，其提供了当移植于具有角膜上皮缺陷的犬类模型中时，增强角膜上皮再生的 羊膜。此外，韩国专利公开号100996846公开了作为由羊膜和非粘膜上皮细胞构成的角膜 或结膜的移植物，该角膜或结膜的移植物具有足够的粘蛋白分泌细胞，从而有助于眼部表 面稳定化，并在移植后具有高的植入和持久性。
[0014] 然而，这些现有技术基于使用羊膜作为基础材料，从而生产角膜或者结膜的移植 物。因而，同样存在与羊膜安全化相关的高生产成本的问题，大量生产受到限制。因此，在 本发明中，认为迫切需要开发能够替代羊膜的新的医疗材料，能够用于以低成本大量生产 并具有出色的生物相容性和疗效。
[0015] 正因为如此，本发明人着眼于由血管生成引起的角膜混浊、以及随后的视力下降 和失明并发症。作为潜心研宄的结果，开发出能够防止血管生成的医疗材料，再次确认了软 骨细胞来源的胞外基质膜具有优异的血管生成抑制效果。现在，将软骨细胞来源的胞外基 质膜用于开发治疗血管生成相关疾病的组合物（包括角膜或结膜的移植物）。
【发明内容】
[0016] 技术问题
[0017] 本发明提供了利用软骨细胞来源的胞外基质膜的血管生成抑制作用，用于治疗角 膜的新生血管化疾病（例如翼状胬肉）的组合物、以及角膜或结膜的移植物。
[0018] 具体而言，本发明提供了利用软骨细胞来源的胞外基质膜的血管生成抑制作用， 用于治疗角膜的血管生成相关疾病（例如翼状胬肉）的组合物、以及角膜或结膜的移植物， 所述软骨细胞来源的胞外基质膜由来自动物的经培养的软骨细胞分泌而形成，并以膜状支 架的形式制备。
[0019] 另外，本发明提供了基于血管生成抑制作用的软骨细胞来源的胞外基质膜相关的 新用途，所述软骨细胞来源的胞外基质膜由动物的软骨组织和/或软骨细胞分泌而形成， 抑制血管内皮细胞的附着和增殖。另外，软骨细胞来源的胞外基质膜抑制血管内皮细胞的 迀移，从而阻止血管化或血管浸润，由此最终抑制血管生成。
[0020] 技术手段
[0021] 本发明一方面提供了用于治疗血管生成相关疾病的新的组合物、以及角膜或结膜 的移植物。
[0022] 本发明的用于治疗血管生成相关疾病的组合物包含软骨细胞来源的胞外基质作 为有效组分，其中，所述胞外基质由动物软骨分泌。
[0023] 优选的是，软骨细胞来源的胞外基质主要由胶原蛋白和糖胺聚糖组成。
[0024] 具体而言，软骨细胞来源的胞外基质可通过如下得到：将软骨组织进行脱细胞，将 无细胞软骨组织用蛋白酶进行处理并中和；或者可通过如下得到：在分离自软骨组织的软 骨细胞的单层培养过程中，对从软骨细胞分泌形成的胞外基质膜进行脱细胞。
[0025] 本发明所述的用于治疗血管生成相关疾病的组合物可抑制血管内皮细胞的附着 和增殖。另外，本发明所述的用于治疗血管生成相关疾病的组合物可抑制血管化和血管浸 润，从而抑制血管生成。
[0026] 例如，本发明所述的用于治疗血管生成相关疾病的组合物可用于治疗角膜血管生 成相关疾病，例如翼状胬肉或外伤性角膜溃疡。另外，本发明所述的用于治疗血管生成疾病 的组合物可用于治疗糖尿病性视网膜病变、脉络膜血管生成相关的疾病或黄斑部变性。
[0027] 本发明所述的用于治疗血管生成相关疾病的组合物可通过如下得到：将软骨细胞 来源的胞外基质膜变成粉末形式，并与药学上可接受的载体混合，从而制成滴眼剂或注射 剂的滴注剂形式、或者膏剂或注射剂的凝胶形式。
[0028] 也就是说，当本发明所述的用于治疗血管生成相关疾病的组合物与药学上可接受 的载体混合时能够以多种形式制备。例如，本文中使用的药学上可接受的载体可为粘结剂、 润滑剂、崩解剂、赋形剂、助溶剂、分散剂、稳定剂、悬浮剂、染料、矫味剂等。在注射制剂的情 况下，可将缓冲剂、防腐剂、缓和剂、增溶剂、等渗剂、稳定剂等用于混合物中。在注射制剂的 情况下，本发明所述的用于治疗血管生成相关疾病的组合物可制成单位剂量的安培瓶、或 多倍剂量形式。另外，在局部给予的情况下，可使用基质、赋形剂、润滑剂、防腐剂等，但是本 发明不限于此。根据本发明，对本领域普通技术人员来说显而易见的是，能够创造通过包含 多种载体或添加剂制备的处于多种形式的用于治疗血管生成相关疾病的组合物。
[0029] 同时，只要软骨细胞来源的胞外基质膜成分能够到达眼球，本发明所述的用于治 疗血管生成相关疾病的组合物可利用任何给予途径，例如所述途径可包括，针对眼球的局 部给予或玻璃体内给予、或者向角膜给予、向结膜给予、向眼周给予、向前房给予、视网膜下 给予或结膜下给予，但是并不限于此。
[0030] 本发明所述的用于治疗血管生成相关疾病的组合物的治疗有效量，可参考期望血 管生成相关疾病的治疗效果所需的给予量。因此，可根据患者的疾病类型、疾病严重度、待 给予的软骨细胞来源的胞外基质膜的制剂类型、患者年龄、患者性别、患者体重、患者健康 状况和患者的饮食、给予时间、给予方法、给予途径、以及本发明所述的用于治疗血管生成 相关疾病的组合物的排出速度，对有效量进行调控。例如，当将本发明所