Matrigel诱导肿瘤细胞逆转为肿瘤干细胞的应用及方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，具体涉及Matrigel诱导肿瘤细胞逆转为肿瘤干细胞 的应用及方法。
【背景技术】
[0002] BDMatrigel是从富含胞外基质蛋白的EHS小鼠肿瘤中提取出的基底膜基质，其 主要成分有层粘连蛋白、IV型胶原、巢蛋白、硫酸肝素糖蛋白，还包含生长因子和基质金属 蛋白酶等。在室温条件下，Matrigel聚合形成具有生物学活性的三维基质，模拟体内细胞 基底膜的结构、组成、物理特性和功能，有利于体外细胞的培养和分化，可用于对细胞形态、 生化功能、迀移、侵染和基因表达等的研宄。
[0003] 本课题组的前期实验研宄表明Nanog可以作为肝癌干细胞的新标记物分子 (Hepatology. 2012, 56 (3) : 1004-14)，也就是说，Nanog阴性细胞转变为Nanog阳性细胞即 意味着肝癌细胞转变为肝癌干细胞。并且本研宄小组利用Matrigel进行Nanog阴性细胞 体内成瘤实验中，在体视显微镜下意外地观察到Nanog阴性细胞所形成的移植瘤中出现 Nanog阳性细胞。据此，我们推测Matrigel很可能具有诱导Nanog阴性细胞转变为Nanog 阳性细胞的作用，然而这一点现有技术并无相关报道，因此，本发明在此基础上进一步研宄 Matrigel能否作为逆转剂，诱导肝癌细胞转变为肝癌干细胞。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种Matrigel诱导肿瘤细胞逆转为肿瘤干细胞的应用， 通过Matrigel的诱导，能够将肿瘤细胞转变为肿瘤干细胞；得到的肿瘤干细胞可以用于肿 瘤治疗药物的筛选以及用于肿瘤细胞发生机制的研宄。
[0005] 本发明还提供了Matrigel诱导肿瘤细胞逆转为肿瘤干细胞的方法。
[0006] 本发明采用的技术方案具体如下：
[0007] 1、Matrigel在诱导肿瘤细胞逆转为肿瘤干细胞的试剂中的应用。
[0008] 优选的，所述肿瘤细胞为肝癌细胞。
[0009] 优选的，所述肝癌细胞为PLC/PRF/5细胞或Huh7细胞。
[0010] 3、Matrigel诱导肿瘤细胞逆转为肿瘤干细胞的方法，包括如下步骤：
[0011] (1)将肿瘤细胞溶液与Matrigel混合，得到混合液；
[0012] (2)将混合液加入到细胞培养基中进行细胞培养即得肿瘤干细胞。
[0013] 优选的，所述肿瘤细胞为肝癌细胞。
[0014] 优选的，所述步骤（1)中所述肝癌细胞溶液的细胞浓度为104个/mL，肝癌细胞溶 液与Matrigel按1:1的体积比混合。
[0015] 优选的，所述步骤（2)中所述细胞培养时间为1周。
[0016] 优选的，所述步骤（1)中所述肝癌细胞溶液为Nanog阴性细胞溶液；所述Nanog阴 性细胞为肝癌细胞感染Lv-pNanog-GFP慢病毒后表现为绿色萤光蛋白不表达的细胞。
[0017] 4、上述方法逆转得到的肿瘤干细胞。
[0018] 本发明的有益效果在于：在体外环境中肝癌细胞很难转化为肝癌干细胞，但是采 用Matrigel进行诱导则能够促进这种转变的发生，从而得到肝癌干细胞。得到的肝癌干细 胞可以用于肿瘤治疗药物的筛选以及用于肝癌细胞发生机制的研宄。
【附图说明】
[0019] 为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图：
[0020] 图INanog阴性细胞在体内发生逆转；具体为Huh7细胞Nanog阴性细胞体内成瘤 后体视显微镜（放大倍数10倍）观察结果，通过显微镜可以观察到绿色荧光出现；图中的 百分比为流式检测细胞中绿色荧光细胞的比例。
[0021] 图2为将Nanog阴性细胞形成的移植瘤中Nanog阳性和阴性细胞再次分离后，两 种细胞的克隆和成球能力实验结果；其中GFP阳性细胞的克隆形成效率和细胞球形成效率 均高于GFP阴性细胞。
[0022] 图3Matrigel诱导Nanog阴性细胞体外逆转实验结果；所用细胞为Huh7细胞，诱 导组加入Matrigel;对照组用10%FBS的DMEM培养基替代Matrigel，将Nanog阴性细胞 分别经过含Matrigel和不含Matrigel的对照条件培养6天后流式检测，图中A为对照组 显微镜观察及流式结果，B为Matrigel诱导组显微镜观察及流式结果，在Matrigel诱导组 观察到了明显的绿色荧光出现，流式检测阳性率为5. 3%。
[0023] 图4为Matrigel体外诱导后得到的Nanog阳性细胞成球实验结果；图中A为诱导 逆转形成的Nanog阳性细胞成球结果，图中B为未经诱导的普通Nanog阳性细胞成球结果； 与普通经流式分选得到的Nanog阳性细胞相比，逆转形成的GFP阳性细胞表现出基本一致 的成球能力。
【具体实施方式】
[0024] 下面对本发明的优选实施例进行详细的描述。实施例中未注明具体条件的实验方 法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。
[0025] 本发明所述Nanog阴性细胞是指细胞感染Lv-pNanog-GFP慢病毒后表现为 GFP(绿色萤光蛋白）不表达的细胞，Nanog阳性细胞是指细胞感染Lv-pNanog-GFP慢病毒 后表现为GFP表达的细胞。
[0026] 本发明所用肝癌细胞系为PLC/PRF/5细胞和Huh7细胞，PLC/PRF/5细胞购于 ATCC ;Huh7细胞来源于本课题组库存。
[0027] 本发明所用仪器如表1所示。
[0028] 表1实验仪器
[0029]
【主权项】
1. Matrigel在诱导肿瘤细胞逆转为肿瘤干细胞的试剂中的应用。
2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肿瘤细胞为肝癌细胞。
3. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述肝癌细胞为PLC/PRF/5细胞或Huh7 细胞。
4. 权利要求1所述Matrigel诱导肿瘤细胞逆转为肿瘤干细胞的方法，其特征在于，包 括如下步骤： (1) 将肿瘤细胞溶液与Matrigel混合，得到混合液； (2) 将混合液加入到细胞培养基中进行细胞培养即得肿瘤干细胞。
5. 根据权利要求4所述方法，其特征在于，所述肿瘤细胞为肝癌细胞。
6. 根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述步骤（1)中所述肝癌细胞溶液的细胞浓 度为1〇4个/mL，肝癌细胞溶液与Matrigel按1:1的体积比混合。
7. 根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述步骤⑵中所述细胞培养时间为1周。
8. 根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述步骤（1)中所述肝癌细胞溶液为Nanog 阴性细胞溶液；所述Nanog阴性细胞为肝癌细胞感染Lv-pNanog-GFP慢病毒后表现为绿色 萤光蛋白不表达的细胞。
9. 由权利要求4?8任一项所述方法逆转得到的肿瘤干细胞。
【专利摘要】本发明公开了一种Matrigel诱导肿瘤细胞逆转为肿瘤干细胞的应用及方法，将肿瘤细胞溶液与Matrigel混合，得到混合液；将混合液加入到细胞培养基中进行细胞培养即得到逆转的肿瘤干细胞。得到的肿瘤干细胞可以用于肿瘤细胞发生机制的研究，也可以用于药物筛选。
【IPC分类】C12N5-095
【公开号】CN104593328
【申请号】CN201410849661
【发明人】钱程, 沈俊杰, 单娟娟
【申请人】中国人民解放军第三军医大学第一附属医院
【公开日】2015年5月6日
【申请日】2014年12月30日