脱细胞真皮基质鼓膜及外耳组织修复材料的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及脱细胞真皮基质鼓膜及外耳组织修复材料的制备方法。
【背景技术】
[0002]目前，临床上对于鼓膜修复主要采用自体颞肌筋膜进行修复，也有采用动物源性生物材料进行修复，由于存在二次损伤和异位组织瘢痕化的问题，修复效果难以满意。筋膜组织和鼓膜组织结构差异较大，因此在修复结果上仅仅完成了外耳与中耳的阻隔作用，且修复为瘢痕修复，对鼓膜原有的声音空气传导功能影响很大。
[0003]由此可见，现有技术中的鼓膜修复材料修复效果较差，仅能起到阻隔的作用，对鼓膜原有的声音空气传导功能影响很大，亟待研发一种新的鼓膜修复材料制备方法，以克服目前制造鼓膜修复材料的方法的缺陷。
【发明内容】
[0004]本发明要解决的技术问题为提供一种脱细胞真皮基质鼓膜及外耳组织修复材料的制备方法，该制备方法拓宽了脱细胞真皮基质鼓膜及外耳组织修复材料的原料来源，降低了脱细胞真皮基质鼓膜及外耳组织修复材料的成本，制备的脱细胞真皮基质鼓膜及外耳组织修复材料具有良好的相容性，可以完成组织完整修复以及鼓膜功能的修复。
[0005]为解决上述技术问题，本发明的脱细胞真皮基质鼓膜及外耳组织修复材料的制备方法，其包括以下步骤:
步骤A:选取哺乳动物体或人体的真皮组织；
步骤B:通过对比所述真皮组织和鼓膜组织的结构，确定所述真皮组织结构中与所述鼓膜组织的结构相近且相邻3层的真皮组织α层结构；
步骤C:去除所述真皮组织中除真皮组织α层结构以外的其他层，获得真皮组织α层初级原料；
步骤D:对所述真皮组织α层初级原料进行脱细胞处理，获得脱细胞真皮组织α层初级原料；
步骤Ε:将经步骤D处理的脱细胞真皮组织α层初级原料在无菌、恒温条件下，于平衡原液中混摇一定时间，复原所述脱细胞真皮组织α层初级原料中胶原蛋白、活性因子的生物性能；
步骤F:将经步骤Ε中处理后的脱细胞真皮组织的α层初级原料，在平衡液中处理，通过改变蛋白质膜的通透性和补充平衡离子的方式，封闭真皮组织α层初级原料的蛋白质的电位点，得到脱细胞真皮基质鼓膜及外耳组织修复材料。
[0006]本发明的一个实施例中，所述步骤F中，通过组合离子或者单一离子来调平所述脱细胞后的真皮组织α层初级原料的电位差，达到封闭所述脱细胞后的真皮组织α层初级原料的蛋白质的电位点的目的。
[0007]本发明的一个实施例中，所述步骤D中，在脱细胞处理的过程中，将1、V、VI型胶原蛋白、碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子-β、纤维连接蛋白固定。
[0008]本发明的一个实施例中，所述步骤C中，利用固定液对真皮组织α层初级原料进行固定。
[0009]本发明的一个实施例中，所述步骤D中，去除真皮组织α层初级原料免疫性，保留天然组织立体框架的胶原蛋白和弹力纤维物质，并维持其天然的材料的框架结构。
[0010]本发明的一个实施例中，所述步骤Ε中，所述恒温条件中，温度选择范围为16~37摄氏度。
[0011]本发明的一个实施例中，所述步骤Ε中，于平衡液中混摇的时间为4~24小时。
[0012]本发明的一个实施例中，所制备的脱细胞真皮基质鼓膜及外耳组织修复材料直接用于人或动物的移植。
[0013]本发明脱细胞真皮基质鼓膜及外耳组织修复材料的制备方法的有益效果为:
本发明脱细胞真皮基质鼓膜及外耳组织修复材料的制备方法，根据真皮特点及鼓膜组织结构的特殊性进行改进，制备出与人体鼓膜结构、组织特点极为相近的鼓膜修复材料，在完成组织完整性修复的基础上，鼓膜功能得到了基本的修复，使临床效果得到大大提高，拓宽了制备脱细胞真皮基质鼓膜及外耳组织修复材料的原料来源，降低了制备该修复材料的成本。
【附图说明】
[0014]上述仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明，以下结合附图与【具体实施方式】对本发明作进一步的详细说明。
[0015]图1为本发明的脱细胞真皮基质鼓膜贴补重建鼓膜后2周的照片图；
图2和图3为本发明的脱细胞真皮基质鼓膜贴补法重建鼓膜术后6周的照片图；
图4为鼓膜穿孔后，利用本发明制备的脱细胞真皮基质鼓膜及外耳组织修复材料采取内植法进行鼓膜重建的照片图；
图5为本发明制备的脱细胞真皮基质鼓膜内植法重建鼓膜后2周的照片图；
图6为本发明制备的脱细胞真皮基质鼓膜内植法重建鼓膜后6周的窄屏照片图；
图7为本发明制备的脱细胞真皮基质鼓膜内植法重建鼓膜术后6周的照片图；
图8为本发明制备的脱细胞真皮基质移植前的照片图；
图9为本发明制备的脱细胞真皮基质植入豚鼠耳重建鼓膜术后2周的照片图；
图10为本发明制备的脱细胞真皮基质处理后植入豚鼠耳重建鼓膜术后6周照片图； 图11为本发明的制备的脱细胞真皮基质处理后植入豚鼠耳重建鼓膜术后8周的照片图；
图12为本发明制备的外耳组织修复材料移植前的照片图；
图13为本发明制备的外耳组织修复材料移植前局部表面的照片图；
图14为正常鼓膜外耳道面的照片图；
图15为本发明制备的外耳组织修复材料移植后8周外耳道面的照片图；
图16为正常鼓膜鼓室面的照片图；
图17为本发明制备的外耳组织修复材料移植后8周鼓室面的照片图；
图18为本发明制备的外耳组织修复材料移植后8周鼓室面照片图。
【具体实施方式】
[0016]下面通过附图和实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。
[0017]本发明的脱细胞真皮基质鼓膜及外耳组织修复材料的制备方法，其包括以下步骤:
步骤A:选取哺乳动物体或人体的真皮。
[0018]哺乳动物体为猪、牛、羊等，较佳的，选取人体上的真皮，哺乳动物不同部位的真皮的结构组成以及功能存在差异，且不同部位真皮所含基质蛋白及各种因子的类型、数量不同。根据不同部位真皮的组成结构，功能以及各种因子含量的不同，有针对性的选择相应部位的真皮。
[0019]步骤B:通过对比所述真皮组织和鼓膜组织的结构，确定所述真皮组织结构中与所述鼓膜组织的结构相近且相邻3层的真皮组织α层结构；
具体的讲，鼓膜组织结构基本可以分为3层，分别是:上皮细胞层、致密纤维层、内皮粘膜细胞层。其中，鼓膜外层是皮肤上皮细胞，主要成分为胶原蛋白和皮肤细胞，1、V型胶原蛋白分层有序地排列，其中，直径统一与规则排列的I型胶原蛋白是维持鼓膜上皮细胞生长排列的重要因素；中间层为致密的1、V型胶原蛋白，其间按一定规律排列弹力纤维和糖蛋白；VI型胶原蛋白以网状结构构成鼓膜内粘膜层的基质层，对鼓膜基质的有序排列、粘膜细胞生长起着重要作用。
[0020]本发明通过电子显微镜对鼓膜组织结构与大量的真皮层组织结构比对、胶原蛋白类型定性比对、胶原蛋白排列方向顺序比对，在250层真皮组织结构中确定了与鼓膜组织结构