胞附着，标尺:50μπι，工作电压(HV):15.0kv，束斑大小控制参数(Spot):
5.0，放大倍数(Mag):755倍，工作距离(WD): 11.3mm,工作压强(Pressure):515.7Pa，工作温度(Tem):0°C，ADM第1天。请配合参阅图9所示，本发明的脱细胞真皮基质处理后植入豚鼠耳重建鼓膜术后2周，可见表面有少量成纤维细胞附着(一)，标尺:20 μ m，工作电压(HV):15.0kv，束斑大小控制参数(Spot):5.0，放大倍数(Mag):1906倍，工作距离(WD):12.5mm，工作压强(Pressure):475.1Pa，工作温度(Tem):0°C，ADM第2周。请配合参阅图10所示，本发明的脱细胞真皮基质处理后植入豚鼠耳重建鼓膜术后6周，可见表面有大量细胞附着，形成单层(一)，标尺:50 μ m，工作电压(HV): 15.0kv,束斑大小控制参数(Spot):5.0，放大倍数(Mag):973 倍，工作距离(WD):12.7mm，工作压强(Pressure):515.7Pa，工作温度(Tem):0°C，ADM第6周。请配合参阅图11所示，本发明的脱细胞真皮基质处理后植入豚鼠耳重建鼓膜术后8周，可见表面附着有大量细胞，形成多层(一)，标尺:20 μπι，工作电压:15.0kv,束斑大小控制参数:5.0，放大倍数:2200倍，工作距离:11.5mm，工作压强:556.1Pa，工作温度0°C，ADM第8周。扫描电镜观察可见表面光滑，局部有乳头样突起，存在大量交织排列的胶原纤维，未见细胞样结构。正常豚鼠鼓膜扫描电镜观察可将外耳道面的鳞状上皮细胞、中间的纤维层和鼓室面的扁平上皮细胞。豚鼠鼓膜穿孔后植入脱细胞真皮基质鼓膜修复材料进行鼓膜重建术后8周，可见胶原纤维，外耳道面有大量的鳞状上皮细胞，鼓室面有大量扁平上皮细胞存在，脱细胞真皮基质鼓膜修复材料中部可见大量未成熟的扁平上皮细胞。
[0037]实施例2
请配合参阅图12所示，本发明的外耳组织修复材料移植前表面光滑，可见大量交织排列的胶原纤维(一)，无任何细胞附着，标尺:30μπι。请配合参阅图13所示，本发明的外耳组织修复材料移植前局部表面有少量乳头样结构(一)，可见大量交织排列的胶原纤维，无任何细胞附着，标尺:30μπι。请配合参阅图14所示，正常鼓膜外耳道面，可见鳞状上皮脱肩(一)和脱髓鞘的鳞状上皮细胞(▲)，标尺:30μπι。请配合参阅图15所示，本发明的外耳组织修复材料移植后8周外耳道面，可见胶原纤维，表面有大量鳞状上皮细胞(一)，标尺:30 μ m0请配合参阅图16所示，正常鼓膜鼓室面，可见放射状纤维，表面有大量扁平上皮细胞(一)，标尺:30μπι。请配合参阅图17所示，本发明制备的外耳组织修复材料移植后8周鼓室面，可见胶原纤维，表面有成熟的扁平上皮细胞(一)，标尺:30μπι。请配合参阅图18所示，本发明的外耳组织修复材料移植后8周鼓室面，可见胶原纤维，表面有大量未成熟的扁平上皮细胞(一)，标尺:30 μ mD
[0038]利用本发明的制备方法获得的脱细胞真皮基质鼓膜及外耳组织修复材料，通过临床试验证明完全可以完成组织完整性修复，并且鼓膜的功能性可以得到基本的恢复，临床效果有了极大的提高，解决了临床上耳鼓膜修复材料的匮乏的问题，拓宽了耳鼓膜以及外耳组织修复材料的来源。
[0039]以上所述，为本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制，本领域技术人员利用上述揭示的内容做出些许简单修改、等同变化或修饰，均落在本发明的保护范围内。
【主权项】
1.一种脱细胞真皮基质鼓膜及外耳组织修复材料的制备方法，其特征在于包括以下步骤: 步骤A:选取哺乳动物体或人体的真皮组织； 步骤B:通过对比所述真皮组织和鼓膜组织的结构，确定所述真皮组织结构中与所述鼓膜组织的结构相近且相邻3层的真皮组织α层结构； 步骤C:去除所述真皮组织中除真皮组织α层结构以外的其他层，获得真皮组织α层初级原料； 步骤D:对所述真皮组织α层初级原料进行脱细胞处理，获得脱细胞真皮组织α层初级原料； 步骤Ε:将经步骤D处理的脱细胞真皮组织α层初级原料在无菌、恒温条件下，于平衡原液中混摇一定时间，复原所述脱细胞真皮组织α层初级原料中胶原蛋白、活性因子的生物性能； 步骤F:将经步骤Ε中处理后的脱细胞真皮组织的α层初级原料，在平衡液中处理，通过改变蛋白质膜的通透性和补充平衡离子的方式，封闭真皮组织α层初级原料的蛋白质的电位点，得到脱细胞真皮基质鼓膜及外耳组织修复材料。2.根据权利要求1所述的脱细胞真皮基质鼓膜及外耳组织修复材料的制备方法，其特征在于， 所述步骤F中，通过组合离子或者单一离子来调平所述脱细胞后的真皮组织α层初级原料的电位差，达到封闭所述脱细胞后的真皮组织α层初级原料的蛋白质的电位点的目的。3.根据权利要求1所述的脱细胞真皮基质鼓膜及外耳组织修复材料的制备方法，其特征在于， 所述步骤D中，在脱细胞处理的过程中，将1、V、VI型胶原蛋白、碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子-β、纤维连接蛋白固定。4.根据权利要求1所述的脱细胞真皮基质鼓膜及外耳组织修复材料的制备方法，其特征在于， 所述步骤C中，利用固定液对真皮组织α层初级原料进行固定。5.根据权利要求1所述的脱细胞真皮基质鼓膜及外耳组织修复材料的制备方法，其特征在于， 所述步骤D中，去除真皮组织α层初级原料免疫性，保留天然组织立体框架的胶原蛋白和弹力纤维物质，并维持其天然的材料的框架结构。6.根据权利要求1所述的脱细胞真皮基质鼓膜及外耳组织修复材料的制备方法，其特征在于， 所述步骤Ε中，所述恒温条件中，温度选择范围为16~37摄氏度。7.根据权利要求1所述的脱细胞真皮基质鼓膜及外耳组织修复材料的制备方法，其特征在于， 所述步骤Ε中，于平衡液中混摇的时间为4~24小时。8.根据权利要求1-7中任一项所述的脱细胞真皮基质鼓膜及外耳组织修复材料的制备方法，其特征在于，所制备的脱细胞真皮基质鼓膜及外耳组织修复材料直接用于人或动物的移植。
【专利摘要】本发明公开了一种脱细胞真皮基质鼓膜及外耳组织修复材料的制备方法，其包括以下步骤：步骤A：选取动哺乳物体或人体的真皮组织；步骤B：通过对比所述真皮组织和鼓膜组织的结构，确定所述真皮组织结构中与所述鼓膜组织的结构相近且相邻3层的真皮组织α层结构；步骤C：去除所述真皮组织中除真皮组织α层结构以外的其他层，获得真皮组织α层初级原料。本发明根据真皮特点及鼓膜组织结构的特殊性，进行研制改进，制备出了与人体鼓膜结构、组织特点极为相近的鼓膜修复材料，在完成组织完整性修复的基础上，鼓膜功能得到了基本的修复，使临床效果得到大大的提高；拓宽了制备脱细胞真皮基质鼓膜及外耳组织修复材料的原料来源，降低了制备该修复材料的成本。
【IPC分类】A61L27/50, A61L27/36
【公开号】CN105233343
【申请号】CN201510825102
【发明人】张小明, 李燕青
【申请人】北京清源伟业生物组织工程科技有限公司
【公开日】2016年1月13日
【申请日】2015年11月24日