鱼脑磷脂提取物及其在制备免疫调节剂中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物医药，具体地说是鱼脑磷脂在预防和治疗免疫低下中的应用；进 一步说是鱼脑磷脂在制备预防和治疗免疫低下的药物或保健食品中的应用。
【背景技术】
[0002] 恶性肿瘤，已经成为人类死亡的第一位或第二位原因，1996年以来全球每年新确 诊肿瘤病人1000万以上，约有700万人死于癌症，恶性肿瘤大多发生于免疫力低下人群，因 此市场和临床上对疗效好、毒副反应小、免疫激活保健品和药物需求量激增。
[0003] 白细胞介素是由多种细胞产生并作用与多种细胞的一类免疫细胞因子。白细胞介 素在传递信息，激活与调节免疫细胞，介导T、B细胞活化、增殖与分化及在炎症反应中起重 要作用。目前至少发现了 38种白介素，其中多种白介素参与机体免疫调节。例如巨噬细胞 分泌的IL-1，能够与抗原协同作用，活化T细胞、促进B细胞生长和分化，吸引中性粒细胞， 引起炎症介质释放；IL-2主要由T细胞产生，刺激NK细胞增殖，增强NK杀伤活性，目前IL-2 已通过生物工程技术大量生产，在肿瘤治疗和提高免疫中起重要作用。此外，其他的白介素 如IL-6、肿瘤坏死因子TNF-a均参与杀死和抑制肿瘤细胞作用。
[0004] 由于肿瘤的顽固性，细胞毒性药物难以克服肿瘤细胞及瘤体内乏氧部分的抗药 性，而通过改善患者的免疫状态却有其独特的优点。白细胞介素可以通过体液免疫、细胞免 疫调节机体的免疫能力，激活巨噬细胞、NK细胞等免疫细胞的活性，间接杀伤肿瘤细胞，参 与癌症的治疗，并且拮抗肿瘤患者由放疗和化疗导致的免疫抑制，因此不失为提高免疫力、 抗肿瘤的新途径。
[0005] 已有研宄表明，鱼脑磷脂具有多种生物活性，包括免疫调节的作用。作为弃物利用 的有效方式，鱼脑磷脂相关研宄在吸引越来越多的关注。本发明的申请人长期从事鱼脑磷 脂相关的研宄工作，对鱼脑磷脂的提取方法及活性进行了系统而完整的探查。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的之一，在于提供一种鱼脑磷脂提取物，所述提取物通过下述方法制 备：
[0007] (1)制备鱼脑组织匀浆，向其中添加5~10U/g木瓜蛋白酶，搅拌均匀，并调节混合 物pH值为6~7,4°C冷藏4~6h;
[0008] (2)室温条件下，按lg匀浆：1~3ml溶剂的比例向步骤⑴所得的混合物中加入 溶剂，搅拌，静置十分钟后抽滤，收集滤液，脱水旋干得提取物I;
[0009] 所述溶剂为氯仿和甲醇按照体积比2:1~2的混合物；
[0010] (2)将提取物I溶于氯仿后进行硅胶柱层析，以4~6倍柱体积的氯仿、2~4倍 柱体积丙酮依次洗脱（中性脂、糖脂和色素），然后用甲醇冲洗；
[0011] (3)甲醇洗脱组分脱除溶剂，即得鱼脑磷脂提取物。
[0012] 本发明另一方面的目的，在于提供上述提取物的制备方法，所述方法包括如下步 骤：
[0013] (1)制备鱼脑组织匀浆，向其中添加5~10U/g木瓜蛋白酶，搅拌均匀，并调节混合 物pH值为6~7,4°C冷藏4~6h;
[0014] (2)室温条件下，按lg匀浆：1~3ml溶剂的比例向步骤⑴所得的混合物中加入 溶剂，搅拌，静置十分钟后抽滤，收集滤液，脱水旋干得提取物I;混合物与溶剂的比例优选 lg:2ml；
[0015] 所述溶剂为氯仿和甲醇按照体积比2:1~2的混合物；优选2:1 ;
[0016] (2)将提取物I溶于氯仿后进行硅胶柱层析，以4~6倍柱体积的氯仿、2~4倍 柱体积丙酮依次洗脱（中性脂、糖脂和色素），然后用甲醇冲洗；
[0017] (3)甲醇洗脱组分脱除溶剂，即得鱼脑磷脂提取物。
[0018] 在本发明的研宄过程中，发明人发现，现有技术中用于提高鱼脑磷脂提取率的木 瓜蛋白酶在本发明的用法条件下，对于脑磷脂的提取率并不产生很大影响，但却有助于提 高提取物的免疫调节活性，提高提取物诱导免疫细胞产生白介素的能力。
[0019] 因此，本发明的再一目的在于提供所述的鱼脑磷脂提取物在制备免疫调节剂中的 应用。尤其是作为白介素诱导剂类免疫调节剂的应用。
[0020] 本发明所述的鱼脑磷脂提取物具有更好的免疫调节作用，可作用于多种免疫细 胞，增加IL-1、IL-2、IL-6、TNF-a的表达。有望应用于预防和治疗免疫低下及抗肿瘤。
【具体实施方式】
[0021] 本发明公开了一种鱼脑磷脂提取物及其制备方法，所述提取物通过下述方法制 备：
[0022] (1)制备鱼脑组织匀浆，向其中添加5~10U/g木瓜蛋白酶，搅拌均匀，并调节混合 物pH值为6~7,4°C冷藏4~6h;
[0023] 该步骤中，所述的木瓜蛋白酶的添加量优选7~8U/g;pH值优选7 ;
[0024] (2)室温条件下，按lg匀浆：1~3ml溶剂的比例向步骤⑴所得的混合物中加入 溶剂，搅拌，静置十分钟后抽滤，收集滤液，脱水旋干得提取物I;
[0025] 所述溶剂为氯仿和甲醇按照体积比2:1~2的混合物；
[0026] (2)将提取物I溶于氯仿后进行硅胶柱层析，以4~6倍柱体积的氯仿、2~4倍 柱体积丙酮依次洗脱（中性脂、糖脂和色素），然后用甲醇冲洗；
[0027](3)甲醇洗脱组分脱除溶剂，即得鱼脑磷脂提取物。
[0028] 更为具体的实施方式中，所述的鱼脑磷脂提取物的其制备方法包括如下步骤：
[0029] (1)制备鱼脑组织匀浆，向其中添加7~8U/g木瓜蛋白酶，搅拌均匀，并调节混合 物pH值为7,4°C冷藏4~6h;
[0030] (2)室温条件下，按lg匀浆：2ml溶剂的比例向步骤⑴所得的混合物中加入溶 剂，搅拌，静置十分钟后抽滤，收集滤液，脱水旋干得提取物I;
[0031] 所述溶剂为氯仿和甲醇按照体积比2:1的混合物；
[0032] (2)将提取物I溶于氯仿后进行硅胶柱层析，以4~6倍柱体积的氯仿、2~4倍 柱体积丙酮依次洗脱（中性脂、糖脂和色素），然后用甲醇冲洗；
[0033] (3)甲醇洗脱组分脱除溶剂，即得鱼脑磷脂提取物。
[0034] 本发明另一方面阐述了所述鱼脑磷脂提取物在制备免疫调节剂中的应用。尤其是 作为白介素诱导剂类免疫调节剂的应用。
[0035] 具体的实施方式中，所述的鱼脑磷脂提取物可作为原料，应用于免疫调节剂类药 物或食品组合物的制备。这些药物或食物组合物可通过激活免疫细胞分泌白细胞介素发挥 作用，用于治疗和预防免疫低下、肿瘤等。
[0036] 结合本领域现有技术，所述"药物"可以毫无疑义地理解为各种药物制剂，包括但 不限于加人各种医药辅料所制得的散剂、颗粒剂、片剂、胶囊、栓剂、悬浮液、乳化液、喷剂、 注射液或粉针剂等。根据不同剂型特点，在使用这些药物进行治疗时，可以通过各种相应的 途径给药，典型但不限于可经口服给药、注射给药及粘膜给药。所谓"食品组合物"，即通常 意义的食品或保健品。
[0037] 以下为本发明的具体实施例，这些实施例仅为进一步说明本发明，不应当理解为 对本发明任何形式的限制。
[0038] 实施例1.