80-100目筛。 混合制备好的蔓荆子，一起泡入乙醇中1-2天后，加热提取2次，每次1-2小时，去上清液， 合并提取液，100-110目滤过，再经截流分子量为6000-10000的超滤柱超滤，超滤液减压浓 缩相对密度为80°C时1. 36的浸膏，加热浓缩至膏状，置入双效真空浓缩器中，浓缩至90°C 时相对密度为1. 50的浓缩液，置0~5°C低温冷藏24小时；将冷藏液加0. 3%的助滤剂硅 藻土，过滤，滤液再置入双效真空浓缩器中，浓缩至每lml含0. 5g生药量，然后加糊精调和， 紫外线灭菌，装瓶。
[0062] 具体实施例4:
[0063] 在每年7月上旬至10月下旬蔓荆子果实陆续成熟时，边成熟边采摘，采摘完先在 室内堆放3-4d，然后摊开晒或烘干，筛去枝梗，扬净杂质，可以放入铁锅中文火翻炒10-15 分钟，再取其他原料钩藤1200g，益母草1100g，桑白皮1200g，决明子1100g，绞股蓝1200g， 丹参1200g，川芎1100g，栀子1100g，制首乌1100g，桑寄生1200g，槐角1200g，五味子 ll〇〇g，淫羊藿1200g，豨莶草1100g，山茱萸1200g，臭梧桐1200g，白芍1200g，将其混合一起 放入放入耐酸碱浸渍锅，在室温下，与70度以上乙醇一起浸渍3~7天，然后加热回流提 取2次，每次1~2小时，将2次提取液合并静置，过滤，分离后取滤液；用纱布过滤，残渣中 加入50-60%乙醇，60°C_70°C继续浸提2h，每10min搅拌一次，纱布过滤，合并浸提液，浓缩 成糊状成为组分2 ;将组分1和组分2合并后，置入双效真空浓缩器中，浓缩至80°C时相对 密度为1. 60的浸膏，浓缩后的膏剂加蜂胶或糊精调和装瓶。
[0064] 药理学毒性试验
[0065] 实验例1:本发明急性毒性试验
[0066] 一、试验材料：动物：昆明种小鼠，体重18_25g，雌雄各半，山东大学生物试验室育 种。药物：本发明（所有原材料混合煎煮2次，合并过滤，取药液）含0. 0365mg/ml。
[0067] 二、方法：
[0068] 1、LD50计算：采用改良寇氏法，将小鼠随机分成5组，每组10只，雌雄各半，将本 发明加蒸馏水溶解，配成最大浓度，按小鼠最大允许容量给药，所给剂量按生药量依次为 18,14. 4,11. 5,9. 2, 7. 4 (g.kg-1)，在动物禁食（不禁水）18小时后，一日内分两次给药（间 隔半小时），每次〇. 5ml，观察动物死亡情况。
[0069] 2、最大耐受剂量测定（MTD值）：取小鼠20只，雌雄各10只。将本发明加蒸馏水 溶解，配成最高浓度，按动物的最大耐受量，以注射灌喂器能抽动为准。在动物禁食（不禁 水）18小时后，一日内分两次给药（间隔半小时），每次0. 5ml(每ml含生药0. 36g)，总药 量为18g生药/kg.d，相当临床成人50Kg体重用量的300倍。给药后连续观察7天。
[0070] 三、试验结果：
[0071]在LD50计算中当用最大允许浓度和最大允许容量给予小鼠时（18g/Kg.d)，未见 小鼠死亡，即未测出LD50,只可求最大耐受剂量，在7天观察期中，动物其食欲、活动、毛色、 精神状态等皆正常，发育正常，未见有死亡。即选用相当于临床剂量的300倍药量，并无不 良反应发生，表明急性毒性极小，MTD> 18g/Kg.d。
[0072] 实验例2:急性毒性及长期毒性的试验结果
[0073] 急性毒性试验：通过小白鼠一次性灌胃给予本发明，最高浓度35%，最大灌胃容 量0. 4ml/10g，剂量14g/kg(每g药粉相当于10g生药），连续观察7天，未发现任何毒性反 应，因浓度和剂量无法增加，故未能测出该药的LD50。最大耐受量测定：以最高浓度，最大 灌胃容量，小白鼠灌胃给药3次，间隔5小时，然后连续观察7天，无一例死亡。药粉剂量为 >42g/kg.日（每g药粉相当于10g生药），按公斤体重计算相当于成人临床日用量的420 倍。
[0074] 长期毒性试验：为观察长期用药是否产生毒性反应，分别给予大鼠本发明饲服，按 成人临床日用量的70倍和35倍（即7g/kg/日和3. 5g/kg/日），连续给喂8周，未见大鼠 的行为、进食、体重出现异常，与对照组比，血常规，肝肾功能，各种重要脏器均无异常改变， 在所用药剂量范围内，未曾发现本发明的任何毒副反应。通过动物的急慢性毒性试验证 实，本发明安全范围较大，是一种安全可靠的保健品。
[0075] 药理学实验：
[0076] 高血压是导致心脑血管疾病重要的危险因素，是全球人类最常见的慢性病，积 极防治高血压是广受关注的重要课题。高血压的发病机制复杂，迄今尚未完全阐明。近 年来，一种细胞膜上的非选择性阳离子通道，瞬时受体电位通道C亚家族（transient receptorpotentialcanonical，TRPC)与高血压的相互关系正成为研究的热点。TRPC通道 组织分布广泛，受多种因素调节，广泛参与心血管病理生理过程。研究发现，瞬时受体电位 通道C亚族3亚型（TRPC3)和6亚型（TRPC6)与原发性高血压关系密切，作用机制与高血压 传统发病机制存在区别。然而，目前有关降压药物对TRPC通道影响的研究才刚刚开始。本 研究旨在了解自发性高血压大鼠（spontaneouslyhypertensiverats，SHR)主动脉TRPC3 和TRPC6的表达，用本发明、降压灵和氨氯地平治疗SHR大鼠后，观察药物对TRPC3和TRPC6 表达变化的影响，初步探讨TRPC3和TRPC6调控血压的可能机制，为临床防治高血压寻找更 好的治疗靶点提供实验依据。
[0077] 1材料与方法
[0078] 1. 1 材料
[0079] 1. 1. 1实验动物
[0080] 健康SHR和WKY大鼠，12周，雄性，体重240-280g，购自中国医学科学院中国协和 医科大学实验动物研究所，许可证编号SCXK(京）2009-0004,在山东医科大学实验动物中 心饲养。
[0081] 1. 1. 2主要试剂及其配制
[0082] (1)主要试剂
[0083] 雷米普利（瑞泰）赛诺菲_安万特制药有限公司降压灵（代文）诺华制药有限 公司苯磺酸氨氯地平（络活喜）辉瑞制药有限公司TRPC3、TRPC6兔抗多克隆抗体美国 Chemicon公司TrizolReagent美国Invitrogen反转录试剂盒ReverTraAce-a-日本 T0Y0B0膜蛋白提取试剂盒贝博生物有限公司GAPDH兔抗单克隆抗体北京博奥森生物技术 有限公司辣根酶标记羊抗兔IgG北京博奥森生物技术有限公司BCA蛋白浓度测定试剂盒北 京博奥森生物技术有限公司SDS-PAGE凝胶制备试剂盒北京博奥森生物技术有限公司
[0084] (2)主要试剂的配制
[0085] .4%多聚甲醛：多聚甲醛40g，用0. 1MPBS缓冲液定容至1L?蛋白电泳缓冲液： Tris6. 0g，甘氨酸28. 8g，SDS1. 0g，用去离子水定容至1L?转膜缓冲液：Tris2. 375g，甘氨 酸11. 25g，SDS0. 375g，甲醇200ml，去离子水定容至1L.TBS缓冲液：NaCl8. 0g，KCl0. 2g， 作18 3.(^，双蒸水定容至11^1831'缓冲液：183缓冲液7001111，20%吐温-20 1.651111，封 闭液：脱脂奶粉 5g，TBST(0? 01 % ) 100ml。
[0086] 1. 1. 3主要仪器与设备
[0087] 大鼠尾动脉无创血压计RBP-1型，淮北正华生物仪器有限公司高速冷冻离心 机Al1egra64R型，美国Beckman倒置显微镜日本OLYMPUS凝胶/发光图像分析系统 ChemiDOC-X-RS型，美国Bio-Rad超纯水仪ELIX10 型，美国Minipore梯度PCR仪S1000 双 槽，美国Bio-Rad全波长酶标仪MSS型，芬兰雷勃超低温冰箱MDF-382HT型，日本Sanyo微 型离心机Microl7型，美国Thermo,电子分析天平AUW120D型，日本岛津，三用电热恒温水 箱KW-1000DA型，江苏金坛市金为实验仪器厂。高压灭菌器LAC-5060S型，韩国莱博提弛恒 温摇床420型，美国Thermo电热恒温鼓风干燥箱DHG-9140A型，上海齐欣科学仪器有限公 司。电泳仪DYY-10C型，北京市六一仪器厂垂直电泳槽。美国Bio-Rad台式冷冻恒温摇床 SHA-2型，江苏金坛市金为实验仪器厂。722紫外光分光光度计UV-265型，日本岛津
[0088] 1. 2实验方法
[0089] 1. 2. 1动物分组及给药
[0090] 24只12周龄健康雄性SHR大鼠，随机分成4个组（n= 6) :SHR对照组、本发明组、 降压灵组和氨氯地平组。6只12周龄雄性WKY大鼠设为正常对照组，
[0091] 共5组。药物治疗组分别用本发明（lmg/kg?d，本发明提取原药溶于生理盐水 中）、降压灵（30mg/kg?d，降压灵原药溶于生理盐水中）、氨氯地平（5mg/kg?d，苯磺酸氨 氯地平原药溶于生理盐水中）灌胃4周。WKY对照组、SHR对照组给予等量生理盐水灌胃4 周。
[0092] 1. 2. 2动物血压测定
[0093] 用尾套法血压分析器测量药物治疗前后大鼠收缩压。大鼠在清醒状态下，置于 38°C恒温箱10分钟后，固