具抗发炎活性的豆类发酵萃取物、其制造方法及其组合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明是有关于一种豆类发酵萃取物及其制造方法，特别是有关于一种具抗发炎 活性的豆类发酵萃取物、其制造方法及其组合物。
【背景技术】
[0002] 发炎是身体的一种防御反应，慢性发炎反应和许多疾病相关，像是动脉粥状硬化、 败血症、糖尿病、关节炎、自我免疫疾病、神经性疾病、肺部疾病甚至癌症的病程发展有密切 关系，长时间发炎反应对人体有害且会导致疾病的发生，现代人与发炎相关疾病的死亡率 亦有连年增高的趋势。
[0003] 例如，动脉粥状硬化是一种与慢性发炎反应有关的病理现象，其致病机转是由于 动脉管壁内皮细胞或平滑肌细胞过度发炎、纤维化病变而造成，动脉粥状硬化会造成血管 管壁增厚，是导致心血管疾病的主因之一。
[0004] 已经有许多研究指出抗氧化物质具有良好的抗发炎功效。体内存在抗氧化防御 系统，若是增加体内抗氧化物质，像是血红素氧化酶（heme oxygenase-1 ;H0_1)、醌氧化酶 (NAD (P)H:quinone acceptor oxidoreductasel ;NQ0_1)、谷胱甘肤（Glutathione ;GSH)等， 可以有效的清除自由基、降低发炎反应所造成的影响、预防心血管疾病，抑制癌症血管新 生、转移侵袭的作用。
[0005] 因此，如何增强体内抗氧化防御能力，降低发炎反应成了预防医学的重要课题。虽 然市面上有许多抗发炎药物，但抗发炎药物具有强烈的副作用，目前的研究均着重于寻找 天然抗发炎物质，以取代或是降低用抗发炎药物的用药剂量。
【发明内容】
[0006] 本发明的一个方面在于提供一种豆类发酵萃取物的制造方法，包含以下步骤：将 一豆类浸泡于水中经高温高压灭菌，以形成一豆类基质。使豆类基质冷却达KTC至40°C。 于冷却后的豆类基质中加入一菌种后，进行一发酵制程，以获得一发酵产物，其中菌种为枯 草杆菌菌株（Bacillus subtiIis)，且发酵制程是于25°C至40°C发酵24至72小时。最后 将对发酵产物进行一萃取制程，以获得一上清液，其中上清液包含豆类发酵萃取物，且豆类 发酵萃取物具有抗发炎活性。
[0007] 根据本发明的一实施例，其中豆类为红豆。
[0008] 根据本发明的另一实施例，其中发酵制程更至少包含于冷却后的豆类基质加入一 糖类，糖类于豆类基质的浓度为〇. 5重量百分比至2重量百分比，且糖类是选自于由乳糖以 及蔗糖所组成的群组。
[0009] 根据本发明的再一实施例，其中萃取制程更至少包含：利用一溶剂与发酵产物以 重量比10 :1至30 :1的比例混合成一混合物后，于KTC至40°C搅拌混合物达2小时至4小 时，其中溶剂为水或浓度为50%体积百分比的乙醇。以及去除混合物的固体成份，以获得上 清液。
[0010] 根据本发明的又一实施例，其中固体成份是利用离心方式、过滤方式、沉淀方式或 上述方式的组合而去除。
[0011] 本发明的另一方面在于提供一种豆类发酵萃取物，其是利用本发明的制造方法所 制得，其中豆类发酵萃取物具有抗发炎活性。
[0012] 根据本发明的一实施例，其中豆类发酵萃取物是用以抑制一氧化氮的生成。
[0013] 根据本发明的另一实施例，其中豆类发酵萃取物是用以降低环氧合酶 2(CyclooxygenaseC0X_2)的活性。
[0014] 本发明的再一方面在于提供一种抗发炎的组合物，其中组合物包含一有效剂量的 本发明的豆类发酵萃取物。
[0015] 根据本发明的一实施例，其中组合物是呈选自以下群组的形式：医药组合物、饲料 组合物、饮料组合物、营养补充组合物、食用组合物以及保健食用组合物。
[0016] 藉此，经本发明所揭露的制造方法及所制造的豆类发酵萃取物，可将豆类的营养 转换成功能性成分而具有抗发炎活性，显示本发明的豆类发酵萃取物可用于抗发炎反应诉 求的医药组合物、饲料组合物、饮料组合物、营养补充组合物、食用组合物以及保健食用组 合物。
[0017] 上述
【发明内容】
旨在提供本揭示内容的简化摘要，以使阅读者对本揭示内容具备基 本的理解。此
【发明内容】
并非本揭示内容的完整概述，且其用意并非在指出本发明实施例的 重要/关键元件或界定本发明的范围。
【附图说明】
[0018] 为让本发明的上述和其他目的、特征、优点与实施例能更明显易懂，所附附图的说 明如下：
[0019] 图1绘示本发明一实施方式的豆类发酵萃取物的制造方法的步骤流程图；其中， 符合说明：
[0020] 110:步骤 120 :步骤
[0021] 130:步骤 140 :步骤
[0022] 141 :步骤 142 :步骤。
【具体实施方式】
[0023] 本说明书揭露内容提出一种豆类发酵萃取物的制造方法、一种豆类发酵萃取物以 及一种包含豆类发酵萃取物的组合物。其是将豆类浸泡于水中经高温高压灭菌，以形成豆 类基质。使豆类基质冷却后，加入枯草杆菌及糖类进行发酵制程，以获得发酵产物。最后对 发酵产物进行萃取制程，以获得包含豆类发酵萃取物的上清液，且豆类发酵萃取物具有抗 发炎活性。
[0024] 本发明前述所称的「枯草杆菌」是指BaciIIus subtiIis，为革兰氏阳性、兼性厌氧 的产孢杆菌，其已通过美国食品暨药物管理局（Food and Drug Administration, FDA)认可、 为GRAS (generally recognized as safe)级的菌种。在一例示中，前述的「枯草杆菌」尤指购 自台湾生物资源保存及研究中心（Bioresource Collection and Research Center, Taiwan) 编号为BCRC14716的菌株为较佳。然需说明的是，上述枯草杆菌菌株（BCRC14716)仅为本 发明具抗发炎活性的豆类发酵萃取物、其制造方法及其组合物的一实施方式。
[0025] 本发明前述所称的「豆类」是指任一种可供食用的豆类，且可为豆类的全部或局 部，例如豆皮、子叶、胚轴、胚根等。在本发明一例示中，适合的豆类可例如红豆（Phaseolus radiatus L. var. aureus Prain)。红豆为一年生草本花科植物，红豆种子主要成分为55%至 69 %的碳水化合物、20 %至23 %的蛋白质、0. 2 %至0. 6 %的脂质及多种氨基酸和维生素。 其中红豆中的维生素B含量及抗氧化物质较其他豆类高。
[0026] 请参阅图1，为豆类发酵萃取物的制造方法的步骤流程图。
[0027] 豆类发酵萃取物的制造方法，包含下列步骤。步骤110,取500克的红豆加入350mL 的一次水，于4°C下浸泡8小时后以121°C灭菌1小时，以形成一豆类基质。步骤120,使豆类 基质冷却达4°C至40°C。步骤130,于冷却后的豆类基质中加入50mL菌数约为9. 5Log CFU/ mL的枯草杆菌菌液，进行翻搅均匀步骤，分别加入IOOmL的0、5、10、15、20%的诸如无菌葡 萄糖、蔗糖或乳糖之类的糖类，使糖类于豆类基质中的浓度为〇、〇. 5、1. 0、1. 5、2. Owt%。将 上述无添加糖类及添加糖类的豆类基质，置入30°C或37°C中培养，发酵时间为24至120小 时。步骤140,将发酵产物进行萃取制程。其中萃取制程更至少包含下列步骤。步骤141， 磨碎发酵产物，将溶剂与磨碎的发酵产物以重量比10 :1至30 :1的比例混合成混合物，溶 剂为去离子水或浓度为50%重量百分比的乙醇，于4°C至40°C搅拌混合物2小时至4小时。 步骤142，将经搅拌后的混合物以离心力6000rpm离心10分钟去除混合物的固体成份，以获 得不同发酵萃取条件的上清液，其中上清液包含豆类发酵萃取物。将上清液干燥后备用，以 进行后续功能性分析。
[0028] 下文提出多个实施例来说明本发明的某些态样，是用以有利于本发明所属技术领 域中具有通常知识者，可在不需过度解读的情况下完整利用并实践本发明，而不应将这些 实施例视为对本发明范围的限制，但用于如何实施本发明的材料及方法。
[0029] 试验例1:总多酚化合物含量测定
[0030]多酚类化合物是植物二次代谢产物，为天然植物中萃取的多羟基酚类衍生物，已 知多酚类化合物具有如抗氧化作用及清除自由基等生物活性，自由基的种类相当繁多，包 括一氧化氮、氢氧基、过氧化氢、超氧自由基等，其中一氧化氮在发炎反应过程中扮演相当 重要的角色。因此在本试验例中，是以测定不同发酵萃取条件的豆类发酵萃取物的总多酚 化合物含量，以初步筛选可能具有抗发炎活性的豆类发酵萃取物的发酵萃取条件。
[0031] Folin-Ciocalteu比色法是最普遍测定总多酚化合物含量的方法，定量上以没食 子酸当量作为总多酚化合物相对含量的表示。Folin-Ciocalteu试剂中的钨钥酸可以将总 多酚化合物定量，自身被还原（Mo 6+变为Mo5+)生成蓝色化合物，颜色的深浅与总多酚含量 呈正相关。以去离子水配制2mg/mL没食子酸标准溶液，将其系列稀释至浓度分别为200、 160、120、80、40、20ii g/mL，以作为标准曲线用。另将7. 42gNa2C(U容于IOOmL去离子水，以 配得700mM Na2CO3溶液。取100