酶解-超声偶联法提取辣蓼总黄酮的工艺的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于中草药辣寥总黄酮的提取技术领域，尤其涉及一种酶解-超声偶联法 提取辣寥总黄酮的工艺。
【背景技术】
[0002] 辣寥（PolygonumhydropiperLinn.)为寥科寥属一年生草本植物。其味辛，温， 归肺、肝、大肠经，具有祛风利湿，散瘀止痛，解毒消肿等功效。兽医临床上将其用于治疗仔 猪白痢、牛子宫出血、牛腹泻、猪肠炎泄泻、鸡白痢鸡蛔虫病，猪蛔虫病、鸡绦虫和狗绦虫病； 除此之外，辣寥水煎液对病毒性角膜炎有很好的疗效。
[0003] 辣寥在我国分布广泛，资源丰富，在医药、食品等方面有着良好的开发前景。辣寥 的主要化学成分有黄酮、鞣质、挥发油、糖类等。现代药理研究表明，辣寥具有抗氧化、抗炎、 抗肿瘤等多种生物活性，其中黄酮类化合物是抗氧化作用的基础物质，也是控制药材质量 的考察指标成分。
[0004] 目前，传统方式提取辣寥总黄酮，其提取条件剧烈以致不利于保存其提取物的生 物活性，并且需消耗大量乙醇，生产成本较高，有效成分损失大。
【发明内容】
[0005] 本发明要解决的技术问题是提供一种提取条件温和、速度快、效率高、成本低的酶 解-超声偶联法提取辣寥总黄酮的工艺。
[0006] 为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：酶解-超声偶联法提取辣寥总 黄酮的工艺，包括以下步骤：
[0007] (1)将辣寥药材干燥、粉碎，分别加入重量为辣寥药材重量0. 2~0. 4%的果胶酶 和纤维素酶，混合均匀，加入pH值为4. 8的HAc-NaAc缓冲液，进行超声-酶解；
[0008] (2)用Na2C03溶液调节超声-酶解后的溶液pH值为9. 0,80~90 °C水浴10~ 20min使酶失活；
[0009] (3)加入乙醇浸提24h，过滤收集浸提液，滤渣再加入乙醇溶液重复浸提一次，过 滤，合并两次浸提液，蒸馏浓缩即得。
[0010] 超声-酶解温度为30~60°C，时间为1. 0~2.Oh。
[0011] HAc-NaAc缓冲液与辣寥药材的体积质量比为5~50mL:lg。
[0012] 步骤（3)中加入乙醇后提取液中乙醇的最终体积浓度为60~80%。
[0013] 针对目前辣寥总黄酮提取存在的问题，发明人结合酶解-超声提取技术，建立了 一种酶解-超声偶联法提取辣寥总黄酮的工艺，该法利用复合酶（果胶酶和纤维素酶）使 植物细胞壁输送、破裂，配合超声加速中药有效成分的释放；同时调节其提取温度、pH值使 得辣寥有效成分快速浸出。与传统方法相比，本发明工艺提取条件相对温和，有利于保持其 生物活性，能显著提高辣寥总黄酮的提取效率，而且速度快，能耗低，节省溶剂，成本较低； 与乙醇浸提法、水煎醇沉法、超声提取法、超声+果胶酶解法、超声+纤维素酶解法相比，本 发明所得总黄酮含量也有所提高。因此，本发明是一种理想的辣寥总黄酮提取工艺。具体 实施方式
[0014] 实施例1辣寥总黄酮的提取工艺
[0015] 方法1.酶解-超声偶联法
[0016] (1)将辣寥药材干燥、粉碎，称取辣寥粉10. 00g放入200mL烧瓶中，分别加入 0. 025g果胶酶和0. 025g纤维素酶，混合均匀，加入50mLpH值为4.8的HAc-NaAc缓冲液， 进行超声-酶解（超声温度为45°C，时间为1.5h);
[0017] (2)用Na2C03溶液调节超声-酶解后的溶液pH值为9. 0,85°C水浴15min使酶失 活；
[0018] (3)加入纯乙醇使提取液中乙醇最终浓度为60%，浸提24h，过滤收集浸提液，滤 渣再用60 %乙醇溶液100mL重复浸提一次，过滤，合并两次浸提液，蒸馏浓缩至20mL。
[0019] 方法2.乙醇浸提法
[0020] 称取辣寥粉10. 00g放入200mL烧瓶中，加入100mL60%乙醇溶液浸提24h，过滤， 过滤并收集浸提液，滤渣再加入60 %乙醇溶液100mL重复浸提一次，过滤，合并两次的浸提 液，蒸馏浓缩至20mL。
[0021] 方法3?水煎醇沉法
[0022] 称取辣寥粉10. 00g放入200mL烧瓶中，加入100mL蒸馏水100°C下煎煮1. 5h，过 滤并收集浸提液，滤渣再加入60 %乙醇溶液100mL浸提24h，过滤，合并两次的浸提液，蒸馏 浓缩至20mL。
[0023] 方法4?超声提取法
[0024] 称取辣寥粉10. 00g，放入200mL烧瓶中，加入50mLpH4. 8的HAc-NaAc缓冲液， 45°C下超声1. 5h;用似20)3溶液调pH至9. 0,85°C水浴15min;加入纯乙醇直至乙醇浓度为 60 %，浸提24h，过滤并收集浸提液，滤渣再加入60 %乙醇溶液100mL重复浸提一次，过滤， 合并两次的浸提液，蒸馏浓缩至20mL。
[0025] 方法5?超声+果胶酶解法
[0026] 称取辣寥粉10. 00g，放入200mL烧瓶中，加入0? 05g果胶酶与50mLpH4.8的 HAc-NaAc缓冲液，45°C下超声1. 5h;用Na2C03溶液调pH至9. 0,85°C水浴15min;加入纯乙 醇直至乙醇浓度为60 %，浸提24h，过滤并收集浸提液，滤渣再加入60 %乙醇溶液100mL重 复浸提一次，过滤，合并两次的浸提液，蒸馏浓缩至20mL。
[0027] 方法6.超声+纤维素酶解法
[0028] 称取辣寥粉10. 00g，放入200mL烧瓶中，加入0? 05g纤维素酶与50mLpH4.8的 HAc-NaAc缓冲液，45°C下超声1. 5h;用Na2C03溶液调pH至9. 0,85°C水浴15min;加入纯乙 醇直至乙醇浓度为60 %，浸提24h，过滤并收集浸提液，滤渣再加入60 %乙醇溶液100mL重 复浸提一次，过滤，合并两次的浸提液，蒸馏浓缩至20mL。
[0029] 实施例2辣寥总黄酮含量测定
[0030]将显色完全后的芦丁标准品置于1cm比色皿中，在波长400~700nm区间内用紫 外分光光度计进行扫描，确定最大吸收波长为510nm。在此波长下对系列浓度的芦丁标准品 进行测定，记录吸光度，以总黄酮浓度为纵坐标，吸光度为横坐标，绘制标准曲线。浓度-吸 光度直线回归方程：Y= 0. 0011X+0. 0125R2 = 0. 9990。测定上述各提取工艺中的辣寥总黄 酮含量，结果见表1。
[0031] 表1不同提取方法提取所得辣寥总黄酮含量
[0032]
[0033] 实施例3辣寥总黄酮的母体结构的检识
[0034] 对上述各提取液中总黄酮的母体结构进行检识，其结果如表2所示。结果表明，由 于提取方法不同，提取液中所得到的黄酮类物质也不尽相同，浸提法和水煎醇沉法所得到 的黄酮类物质的种类比超声酶解法所得的黄酮类物质少。
[0035] 表2不同提取方法所得总黄酮母体结构的检识结果
[0036] (+ :有此结构；_ :无此结构）
[0037]
【主权项】
1. 一种酶解-超声偶联法提取辣寥总黄酮的工艺，其特征在于包括以下步骤： (1) 将辣寥药材干燥、粉碎，分别加入重量为辣寥药材重量0. 2~0. 4%的果胶酶和纤 维素酶，混合均匀，加入pH值为4. 8的HAc-NaAc缓冲液，进行超声-酶解； (2) 用Na2CO3溶液调节超声-酶解后的溶液pH值为9. 0,80~90°C水浴10~20min 使酶失活；（3)加入乙醇浸提24h，过滤收集浸提液，滤渣再加入乙醇溶液重复浸提一次，过 滤，合并两次浸提液，蒸馏浓缩即得。2. 根据权利要求1所述的酶解-超声偶联法提取辣寥总黄酮的工艺，其特征在于：所 述超声-酶解温度为30~60°C，时间为I. 0~2. Oh。3. 根据权利要求1所述的酶解-超声偶联法提取辣寥总黄酮的工艺，其特征在于：所 述HAc-NaAc缓冲液与辣寥药材的体积质量比为5~50mL : lg。4. 根据权利要求1所述的酶解-超声偶联法提取辣寥总黄酮的工艺，其特征在于步骤 (3)中加入乙醇后提取液中乙醇的最终体积浓度为60~80%。
【专利摘要】本发明公开了一种酶解-超声偶联法提取辣蓼总黄酮的工艺，该法利用复合酶使植物细胞壁输送、破裂，配合超声加速中药有效成分的释放；同时调节其提取温度、pH值使得辣蓼有效成分快速浸出。与传统方法相比，本发明工艺提取条件相对温和，有利于保持其生物活性，能显著提高辣蓼总黄酮的提取效率，而且速度快，能耗低，节省溶剂，成本较低；与乙醇浸提法、水煎醇沉法、超声提取法、超声+果胶酶解法、超声+纤维素酶解法相比，本发明所得总黄酮含量也有所提高。因此，本发明是一种理想的辣蓼总黄酮提取工艺。
【IPC分类】A61K36/704
【公开号】CN105106327
【申请号】CN201510574506
【发明人】胡庭俊, 陶俊宇, 谭红连, 李璐, 韦英益, 陈海兰
【申请人】广西大学
【公开日】2015年12月2日
【申请日】2015年9月10日