皮肤粘膜抗菌组合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及日化、消毒、药物、医疗器械领域，特别是皮肤粘膜抗菌组合物。
【背景技术】
[0002] 在外界理化因子的损害、病原微生物的侵入、人体内分泌代谢素乱W及其他原发 性全身疾病等情况下，人体皮肤、粘膜会出现的一系列的疾患，如累及毛囊皮脂腺的慢性炎 症性皮肤病，俗称"青春痘"的瘦疮、好发于婴幼儿，同时成人也存在的湿疹、常见性的口腔 疾病如牙周炎、口腔溃瘍、離齿等、女性高发性的妇科疾病等。
[0003] 致病微生物，如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、瘦疮丙酸 杆菌、牙銀化嘟单胞菌、变异链球菌等可引起各种皮肤、粘膜疾患，同时一些非细菌感染的 原发性疾病也为微生物的侵入提供了条件，现有的抗微生物剂为化学成分抑菌剂或杀菌剂 和中草药，化学类如洗必泰、=氯生、西化氯锭、抗生素等成分，运些成分有的味苦，有的具 刺激性，且具有不同的副作用。长期使用洗必泰易使牙齿及口腔黏膜表面着色，使味蕾的味 觉降低，并抑制唾液的分泌，造成口干、灼痛等不适症状。=氯生曾被报道过具有致癌作用， 目前虽无科学研究可W证明=氯生会致癌，但最近的研究结果表明，=氯生会引起白鼠肝 癌和肝脏纤维化，其对人体的毒副作用需密切关注。2007年10月，在美国佐治亚州提出的 集体诉讼声称，许多用户使用宝洁公司生产的活性成分为西化氯锭的漱口水，造成牙齿染 色和他们的味觉丧失。而传统抗生素虽抗菌效果明显，但抗菌机理大多通过阻碍细菌细胞 壁的合成、抑制蛋白质的合成、影响核酸、叶酸的代谢等来进行抗微生物，微生物很容易通 过基因突变来改变代谢途径，进而对抗生素产生耐药性。中草药虽具有抑菌、消炎、止血、镇 痛等作用，但中草药不稳性，易被氧化变质，失去活性。
[0004] 抗菌肤是一类碱性多肤，由于其越来越多的功能被发现，可被称为宿主防御肤 化ostdefenceP巧tides,皿Ps)，一般由12~50个左右氨基酸组成，具有广谱抗菌性，对 细菌、真菌、病毒、寄生虫和肿瘤细胞有抑制或杀灭作用，可促进伤口愈合过程。此外，抗菌 肤还能作为免疫效应活化分子，调节机体免疫系统的功能，增强机体清除病原体的能力，中 和细菌内毒素LPS，降低炎性细胞因子的释放，减缓炎症反应引起的组织损伤。相对于抗生 素，抗菌肤在耐药性方面具有不可比拟的优点，抗菌肤可通过与微生物细胞膜作用，形成孔 桐，影响细胞内外渗透压，进而使细胞死亡。运种抗菌机理不易使细菌产生耐药性。因此， 抗菌肤作为抗微生物成分受到越来越多的青睐。
[0005] 然而，就广谱抗菌性而言，每种抗菌肤的抗菌谱不尽相同。如来源相同的家蚕抗 菌肤就如表1 (林立鹏，蓝希错.家蚕抗菌肤[J].蚕学通讯，2007, 27 ( 3) : 11-17.孙 伟，沈W红，向仲怀，等.家蚕抗菌肤基因研究进展[J].蚕业科学，2009, 35(1) : 196-203 .)所示表现出不同的抗菌谱。再如gerberth等人报道（gerbedhB,LeeJY,Bergman T,etal.AminoacidsequenceofPR39，isolationfrompigintestineofanew memberofthefamilyofproline-arginine-richantibacterialpeptides[J].EurJ Biochem，1991，202: 849 -854.)猪抗菌版Ca化elicidinPR-39 在较化的umol/L浓 度下对革兰氏阴性菌(大肠杆菌、鼠伤寒沙口氏菌和醋酸巧不动杆菌）和一些革兰氏阳性菌 (巨大芽抱杆菌、枯草杆菌和化脈链球菌）有作用，而对其他一些菌株，如普通变形杆菌、铜 绿假单抱菌和金黄色葡萄球菌，即使在200~300ymol/L浓度下也没有抑制作用。
[0006] 表1家蚕抗菌肤基因
[0007] 就细胞毒性而言，由于抗菌肤对微生物膜的破坏性，针对不同种类的抗菌肤，其 对真核细胞是否有毒性也需要进行考虑。抗菌肤在体内自然血液环境下无毒性，但其 对PBS悬浮的血细胞是否有毒性却令人质疑。有文献（HancockREW,S址1H(2006) Antimicrobialandhost-defensepeptidesasnewanti-infectivetherapeutic strategies.NatBiotechno1 24:1551 - 1557)报道称，抗菌肤选择性破坏原核细胞膜而非真核细胞，其原因是后者 细胞膜结构特点不同于前者，后者表面存在胆固醇，不存在负电荷和强跨膜电位。而抗菌肤 选择性破坏癌细胞而非正常细胞，其原因是正常细胞与癌细胞骨架等结构差异（Schweizer F(2009)Cationicamphiphilicpeptideswithcancerselectivetoxicity.EurJ 化armacol625:190 - 194)。尽管如此，也有文献报道抗菌肤对正常真核细胞有毒性， Johansson等人(Johansson,J. ;Gudmundsson,G.比；Rottenberg,M.E. ;Berndt, K.D. ;Agerberth,B.Conformation-dependentantibacterialactivityofthe naturallyoccurringhumanpeptide11-37.J.Biol.Chem. 1998, 273, 3718 - 3724.) 报道称，抗菌肤化thelicidin家族的化-37在13~25yM对一些真核细胞有毒性。Gusman 等人(Gusman,H. ;Travis,J. ;Helmerhorst,E.J. ;Potempa,J. ;Troxler,R.F.; Oppenheim,F.G.Salivaryhistatin5isaninhibitorofbothhostandbacterial enzymesimplicatedinperiodontaldisease.Infect.Immun. 2001, 69, 1402 - 1408.)报道称，抗菌肤histatin家族的histatin5对人口腔蛋白酶MMP-2andMMP-9有 抑制作用。
[0008] 除此之外，抗菌肤还有其他一些缺点，包括：体内半衰期过短、易被高盐离子失活、 易被蛋白酶水解、生产成本高等。抗菌肤的W上特点严重制约了其在产品中的应用。
[0009] 设及到皮肤粘膜抗菌领域，针对本领域中现有产品的缺点W及抗菌肤自身特性， 含抗菌肤的皮肤粘膜抗菌组合物设计有格外多的要求。含抗菌肤的皮肤粘膜抗菌组合物首 先要考虑到多肤本身的理化性质和生物学性质，包括分子大小、抗菌谱、溶解度、抑值、等电 点、构象稳定性、有效剂量；例如多肤具有两性电离和等电点的性质，在其等电点时溶解度 最低。其次是组合物的稳定性、其他添加物对多肤的稳定性和配伍性的影响；GOLDMAN等人 报道（GOLDMANMJ,ANDERSONGM,ST0LZEN-肥RGED,eta. 1Humanbeta-defensin-1 isasalt-sensitiveantibioticinlungthatisinactivatedincystic fibrosis[J],Cel, 1 1997，88(4): 553 -560.)，部分抗菌肤的抗菌作用和溶液中的化+ 浓度存在负相关性，当化C1浓度为150mmol/L(生理盐浓度)时即失去活性。HANCOCK等 人报道（HANCOCKREW,DIAMONDG.TheroleofcationicantimicrobialP巧tidesin innatehostdefences[J].TrendsinMicrobiology, 2000, 8 巧）：402-410.)许多因 素会降低抗菌肤的活性，如高浓度的一价和二价阳离子、聚阴离子（polyanion)、血清、阿朴 脂蛋白A-I(apolipoproteinA-I)和蛋白酶等。最后还要考虑到组合物使用效果和毒理 安全性、W及对皮肤黏膜的刺激性W及生产成本的平衡关系。
【发明内容】
[0010] 为解决上述问题，本发明的目的是提供一种皮肤粘膜抗菌组合物，本发明的皮肤 粘膜抗菌组合物不引起耐药性、稳定性高、效果好、无副作用、对人体刺激性低。
[0011] 本发明的皮肤粘膜抗菌组合物，包括序列为S