含有式x1-gqretpegaeakpwy-x2的环肽的冻干物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种药学适用的冻干物，其被指定用于向哺乳动物的肺（例如人）的 肺给药。
【背景技术】
[0002] 药学活性成分的活性本质上相当取决于运些活性成分如何分别进入机体或进入 待治疗器官的方式。
[0003]给药药物最常见的方式是肠胃外给药。目P，将药物通过皮肤注射（例如直接到血 流）到肌肉内或直接到皮肤下。
[0004] 另一种摄取药物的常见形式包括在口服给药到胃肠道中。在药物中所含的活性成 分在胃肠道中释放出来，并经由再吸收至机体内而到达血液和器官。
[0005] 药物还可W通过皮肤或粘膜给药。
[0006] 作为注射供替代的选择，建议使用口服吸入的方法。由此，药物W粉末形式W及可 能到达具有呼吸空气的肺室的液滴形式被递送至口腔和咽，。由此，运些药物经由肺组织被 递送到血液中并因此被全身性供给到机体。
[0007] 然而，现今药物的口服吸入仍然提出了大量的技术问题。特别的是，仅经由口服吸 入而施用的具有高分子量的活性成分（例如蛋白质）非常有限。在雾化或喷雾过程中，作 为活性成分的蛋白被热和压力物理性损坏或失活。在口服吸入前和口服吸入期间的储存 期间，活性蛋白成分是相当不稳定的。此外，运种肤活性成分可能已在肺部气室（Luftraum derLunge)被降解。
[000引为了解决在蛋白质吸入剂型中的运一问题，开发了高度多样化的药物制剂。因此， 为实现所需的溶解特性，为保证稳定性，为保护蛋白质的活性，运种蛋白质吸入剂型可含有 如巧盐或钢盐的盐、稳定剂和表面活性剂、特定的缓冲混合物、脂类外加剂和其他。制备蛋 白质药物过程中的其他外加剂包含例如白蛋白、渗透剂、抗氧化剂、用于避免聚集和沉淀的 化学物质、脂质体、明胶、藻酸盐、糖等。
[0009] 因此，所生产的和药用加工用于吸入的肤和蛋白质剂继而有意或无意地经由肺组 织达到血液中，并且可在血液中被检测到。
[0010] 总之，目前国际上只有两种注册的吸入用蛋白质/肤基药物，即扣Imozyme? (脱 氧核糖核酸酶）和技加bcra"(膜岛素）。为了保证活性和稳定性，运些制剂含有例如盐（分 别地为氯化钢、氯化巧，或巧樣酸钢、甘露醇、甘油、氨氧化钢）。
[0011] 用于生产人类医药用途用蛋白质/肤制剂的常规技术方式是用于除水的冷冻干 燥（例如J化armSci. 2009年9月；98 (9): 2886-908)。然而，在运些现有技术的方法中， 为了确保肤的稳定性和活性而加入了如例如二糖的助剂（AllisonSD等人，ArchBiochem Biophys. 1999年5月15日；365似：289-98)。除此之外，经证明将聚乙二醇（PEG)结合到 肤和蛋白质上W分别在除水后冷冻干燥期间保证活性和稳定性（Roberts等人，AdvDrug Deliv Rev. 2002年6月17日；54(4) :459-76, 2002年，Morris等人，Antimicrob Agents Chemother. 2012年6月；56 (6) :3298-308. doi :10. 1128/AAC. 06335-11) W及避免被蛋 白水解过程降解（Xee等人，Regul Pept. 2009年1月8日；152 (1-3):101-7 ;Baginski 等人，Pharm Res. 2012年6月；29化）：1425-34)或有利地影响分子质量（Veronese和 Pasut, Drug Discov Today. 2005年11月1日；10 (21): 1451-8 ;F*atton和Byron,化t Rev Drug Discov. 2007年1月；6(1):67-74)是成功的。
[0012] 现今，令人惊讶地发现了不含添加剂的对肺功能具有积极影响的特定肤的应用形 式，该应用形式变得明显及其合适。
【发明内容】
[0013] 一方面，本发明提供了式Xi-Gqretpegaeakpwy-Xz(I)的环肤，其为不含添加剂和/ 或稳定剂的冻干物的形式，其中
[0014] Xi包含具有1至4个、特别是1至3个残基的氨基酸（序列），所述氨基酸包含天 然或非天然氨基酸，特别是选自氨基酸（序列）C(切S)、KSP化ys-Ser-Pro)、K化ys)、鸟氨 酸、4-氨基下酸、0-丙氨酸，和
[0015] Xz包含天然氨基酸，特别是选自C(切s)、D(Asp)、G(Gly)和E(Glu)的组，并且其中
[0016] Xi包含在左侧位置1的N-末端氨基酸和X2包含在末端右侧位置的C-末端氨基 酸。
[0017] 本发明提供的冻干物在本文中也指，，本发明（在本发明内、根据本发明）的冻干物 "。根据本发明的冻干物中的肤在本文中也指，，本发明（在本发明内、根据本发明）的肤"。
[0018] 本发明的冻干物中可存在一种或几种式I的环肤，因此优选地为仅存在一种式I 的肤。
[0019] 式I的环状化合物是具有下列氨基酸序列的环化化合物
[0020] Xi-Gly-Gln-Arg-Glu-T虹-Pro-Glu-Gly-Ala-Glu-Ala-Lys-Pro-T巧-Tyr-XzI,
[00川其中Xi和X2如上定义。
[0022] 式I的新型化合物也是本发明的目的。
[0023] 式I化合物中的环可由键合两种式I化合物的氨基酸残基中的适当取代基而形 成，例如由酷胺键或二硫键，因此所述环优选地包含至少15个、更优选地为至少17个、高达 19或20个，例如17至19个氨基酸残基，其W环元件存在于式I的化合物中。
[0024] 优选地，环的形成通过Xi内氨基酸中（优选地在Xi的位置1的氨基酸中）适当取 代基和Xz内适当取代基之间的键而形成。
[00巧]在本发明式I的氨基酸序列中可使用的天然氨基酸是已知的，并且包含例如G (Gly)、A (Ala)、V (Val)、ULeu)、I (lie)、M(Met)、P (Pro)、F (Phe)、W灯rp)、S (Ser)、T灯虹）、 N (Asn)、Q (Gln)、C (CyS)、U (Sec)、Y灯yr)、D (Asp)、E (Glu)、H化1S)、K化yS)、R (Arg)。
[0026] 在本发明式I的氨基酸序列中可使用的非天然氨基酸包括
[0027] (i)具有天然氨基酸原则上的化学结构，但不同于a-氨基酸的氨基酸，
[0028] (U)D构型（即不同于天然心构型）的天然氨基酸，即存在于D-构型中而不存在 于k构型中位于位置2碳原子上的烷基基团的天然氨基酸，，
[0029] (iii)非天然氨基酸，例如不同于上面（i)和（ii)所定义的，包含2至12个（例 如2至6个）碳原子，至少一个氨基基团（例如一个或两个），和至少一个簇基基团（例如 一个或两个），任选地除了在天然氨基酸中存在的取代基，例如0H、-C0NH2、-NH-C(=畑2) N&、SH、（Cl4)烷基-S-、苯基、杂环基（例如包含5或6环元件并包含至少一个选自N、0、 S(优选地为脚的杂原子（例如一个或两个））之外、任选地与另一个如苯基（例如包括脯 氨酷、吗I噪基、咪挫基）的环稠合。
[0030] 本发明式I的非天然氨基酸包括鸟氨酸、4-氨基下酸、0-丙氨酸。
[0031] 另一方面，本发明式I的环状化合物包含
[0032]-具有氨基酸序列SEQIDNO:1的化合物
[0033]环（CGQRETPEGAEAKPWYC)
[0034] 其中二硫键形成于两个末端半脫氨酸残基之间；
[0035]-具有氨基酸序列SEQIDNO:2的化合物
[0036]环化SPGQRETPEGAEAKPWYE)
[0037] 其中酷胺键形成于连接到N末端赖氨酸残基的e-碳原子的氨基基团和连接到C 末端谷氨酸残基的丫-碳原子的侧链簇基基团之间；
[0038]-具有氨基酸序列SEQIDNO:3的化合物
[0039]环（KGQRETPEGAEAKPWYG)
[0040] 其中酷胺键形成于连接到N末端赖氨酸残基侧链的e-碳原子的氨基基团和C末 端甘氨酸残基的簇基基团之间；
[0041]-具有氨基酸序列SEQIDNO:4的化合物
[0042]环（鸟氨酸-GQRETPEGAEAKPWYG)
[0043] 其中酷胺键形成于连接到N末端鸟氨酸残基侧链的5-碳原子的氨基基团和C末 端甘氨酸残基的簇基基团之间；
[0044]-具有氨基酸序列SEQIDNO:5的化合物
[0045]环（4-氨基下酸-GQRETPEGAEAKPWYD)
[0046] 其中酷胺键形成于N-末端4-氨基下酸残基的氨基基团和连接到C-末端天冬氨 酸残基的P-碳原子的侧链簇基基团之间；
[0047]和
[0048]-具有氨基酸序列SEQIDNO:6的化合物
[0049]环（0-丙氨酸-GQRETPEGAEAKPWYE)
[0050] 其中酷胺键形成于N-末端0-丙氨酸（3-氨基丙酸残基）残基的氨基基团和连 接到C-末端谷氨酸残基的丫-碳原子的侧链簇基基团之间。
[0051] 式I的化合物W及氨基酸序列沈QIDNO: 1、沈QIDNO:2、沈QIDNO:3、沈QID NO:4、SEQIDNO: 5或SEQIDNO:6的化合物中，除了导致环形成的键，氨基酸通常如肤般 连接。
[0052] 本文中式I的环状化合物也指"本发明（在本发明内、根据本发明）的环状化合 物"，并且包括任何形式的式I的化合物，例如，游离形式和盐的形式，在生物环境中式I的 化合物通常W盐的形