式存在。
[0053] 在另一个方面，在本发明的冻干物中的式I化合物为盐的形式。
[0054]运样的盐优选地包括药学上可接受的盐，尽管包括药学上不可用的盐，例如为制 备/分离/纯化目的。
[00巧]在生物环境中的式I的化合物的盐通常是盐酸盐。
[0056] 游离形式的本发明式I的环状化合物可被转化成盐形式的式I的环状化合物且反 之亦然。
[0057] 本发明式I的环状化合物可W为异构体和异构体混合物的形式；例如光学异构 体。式I的环状化合物可包含，例如不对称碳原子并由此可W为对映体、非对映体及其混合 物的形式，例如外消旋体。式I的环状化合物可存在于（时-、（巧-或巧，S)-构型中，优选 地在不对称碳原子上各个有关取代基的（R)-或（S)-构型中。可对异构体混合物进行适当 分离，如根据例如类似于常规方法W得到纯的异构体。本发明包含任何异构体形式和任何 异构体混合物形式的式I的环状化合物。在天然氨基酸的情况下，取代基的构型通常和天 然氨基酸中一样。
[005引例如可W根据例如类似于常规方法，或如本文所规定的（例如通过固相肤合成）， 任选地根据采用适当的偶合剂（诸如二异丙基碳二亚胺和/或N-径基苯并S挫和适当溶 剂（如N，N-二甲基甲酯胺））对2-氯S苯甲基氯树脂的巧甲氧幾基/叔下基保护策略来 适当制备本发明的环状化合物。可将受保护的氨基酸从C末端的氨基酸开始相继偶合在肤 链上。可W用碱（如赃晚（诸如适当溶剂中20%赃晚，如N，N-二甲基甲酯胺））对巧甲氧 幾基保护基团进行脱保护。可W在酸的辅助下（诸如适当溶剂中的乙酸，如面代控（例如 邸2化)，例如乙酸和邸2化的1:1混合物）将完全、任选地（部分）受保护的肤从树脂上裂 解适当地下来。
[0059] 在含有半脫氨酸的肤的情况下，从树脂裂解后，如果需要的话，可W进行侧链的脱 保护，例如用强酸，如S氣乙酸灯FA)，例如95%TFA/5% &0。可W通过氧化末端半脫氨酸 残基来进行环化W获得二硫键的环化，例如通过在抑为8. 5对天然线性肤进行90小时充 气而得到。可W对所得的天然肤产物进行纯化，例如通过色谱法，例如通过在诸如RP-C18 硅胶柱的适当柱上的反相介质压力液相色谱法（RP-MPLC)，方便地采用诸如5%至40%梯 度的乙腊水溶液的梯度洗脱液。可W用醋酸置换S氣乙酸反离子，例如在诸如Lewatit MP64柱（乙酸盐形式）的柱上。随着在水中的最终洗涂，可W对如乙酸盐的经过纯化的肤 进行冻干，并且可W获得浅色的形式，例如白色粉末。
[0060] 在无半脫氨酸的肤的情况下，从树脂的裂解之后，例如仍对部分被保护的线性肤 酌情进行环化步骤。在对无半脫氨酸的肤进行选择性环化后，如果需要可W在TFA中进行 侧链脱保护。例如，可W通过如利用制备性RP-MPLC的色谱法进行纯化步骤。例如，如上所 述，可W用乙酸盐从由此获得的肤中置换=氣乙酸根离子。例如，对于含有半脫氨酸的肤， 可W对肤的乙酸盐形式进行冷冻干燥。
[0061] 所得的肤的分子量可W通过电喷雾离子化质谱法或MLDI-TOF-MS进行证实。例 如可W通过分析型高效液相色谱法来确定纯度。
[0062] 式I的环状化合物包含具有氨基酸序列沈QIDNO: 1、沈QIDN0:2、沈QID NO: 3、沈QIDNO:4、沈QIDNO: 5 或沈QIDNO:6的化合物。例如从HazemiP.，Tzotzos S. ,FischerB. ,AndavanG.S.B. ,FischerH. ,PietschmannH,LucasR-^RLemmens-Gruber R.在2010年11月25日发表于JMedChem.中第53卷22期的第8021至8029页的 "Essentislstructuralfe曰turesofTNF-曰lectin-likedom曰inderivedpeptidesfor activationofamiloride-sensitivesodiumcurrentinASAgcellstWW认为运些化合 物活化"阿米洛利敏感上皮钢通道巧化C)"并且因此对肺部的疾病治疗是有用的。阿米洛 利敏感钢离子通道巧化C)的活化设及经由肺组织转运钢离子。形成了导致被动被动式液 体转运的渗透梯度。如果该方式转移到肺部，阿米洛利敏感钢离子通道的活化例如可用于 减缓肺部积水，例如在肺水肿的情况下。
[0063] 在开发本发明的过程中，经发现，经由肺组织主动或被动转运本发明式I的环肤 (其中Xi和Xz如上所述，例如具有氨基酸序列沈Q ID N0:1至沈Q ID N0:6)而进入血液是 不被期望的并且不应发生的，因为其实质上有助于具有氨基酸序列SEQ ID NO: 1至SEQ ID N0:6的环肤的生理活性，如果运些环状化合物经由口服吸入到达肺部气室W致沉积到肺组 织的表面并由此激活定向尖端的阿米洛利敏感钢离子通道。
[0064] 令人惊奇的显示出（实施例10)，在吸入通过加入水从根据本发明的冻干物制备 的气雾剂之后，本发明的肤无法在血液中检测到。
[0065] 通常而言，吸入剂型是为了经由肺组织吸入肺后的逾越化bedreten)而开发或 已经被开发，从而可避免肠胃外注射。W往的吸入药物的祀标即为全身性活性。通过将试 剂分布于血液中，分子进入各组织和器官。但是，全身性应用的实质性缺点是机体中对器官 和组织的广谱毒性和副作用，运与待治疗的疾病是不相关的。
[0066] 当给药水性气雾剂时，与根据本发明制备的冻干物相比，所述肤进入激活钢通道 的空气和肺部上皮之间的屏障。由此，在本发明的肤在肺部的上皮组织，，局部"发挥作用， 而不是全身发挥作用。肤经由肺组织的步骤是不被期望的且也不会发生。
[0067] 与从文献中已知的肤制剂相比，通过由本发明的冻干物制备的不含有添加剂的水 性气雾剂来避免所吸入的肤经由肺部扩散至血液中是可W成功的。由此，获得了可W避免 可能的全身性毒性的特征的肤的极其积极的效果--同时在肺W外的其他器官。
[0068] 否则，提供了很大药用益处的官场非作用个可由此被排除出去。通过在肺部内表 面局部给药而不向血液中扩散，相比于全身性施用，显著降低活性的试剂是必要的。
[0069] 此外，令人惊讶地，在根据本发明的包含式I的环肤、特别是没有添加剂的氨基酸 序列SEQ ID N0:1至SEQ ID N0:6的环肤的冻干物中，在超过数月甚至数年几乎可W排除其 化学和生物不稳定性是明显的。即明显的是，本发明的式I的环肤（如氨基酸序列SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO:6的那些）的化学结构和生物活性没有被损坏，令人惊奇地其还不含有 通常使用的添加剂和/或稳定剂。
[0070] 给药本发明式I的环肤（特别是吸入用氨基酸序列SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO:6) 后明显的是环肤被构成为W溶解的形式（即在水溶液中）可长时间稳定而仍然无需添加 剂，例如在用于喷雾的装置（喷雾器）的储存容器中。此外已经证明，可WW SEQ ID N0:1 至SEQ ID N0:6的环肤在转变为吸入形式后不会被破坏并由此保持全部活性的方式制备本 发明式I的（特别是本发明氨基酸序列SEQ ID NO: 1至SEQ ID N0:6的）环肤，而令人惊 讶地是仍然无需加入通常使用的添加剂和/或稳定剂。
[0071] 为了制备本发明式I的（例如至少一种）肤（特别是适于喷雾形式的SEQ ID N0:1 至SEQ ID N0:6的肤）的溶液，可W将运些肤溶解在水中，并将所获得的溶液进行冻干，例 如无需其他添加剂，如例如通常使用的添加剂和/或稳定剂，由此获得粉末。在冷冻干燥之 前，任选地将溶液进行过滤W便去除浑浊物。
[0072]另一方面，本发明提供了据本发明的冻干物在制备适于喷雾的气雾剂中的应用， 特别地所述气雾剂无需添加剂和/或稳定剂的气雾剂。
[0073] 根据本发明的冻干物的应用在本文中也指，，根据本发明的应用"。
[0074]现已发现，式I的肤，特别是冻干形式的沈Q ID NO: 1至沈Q ID NO:6的那些肤， 在冷却环境稳定至少24个月，并在室溫下稳定至少6个月，所述气雾剂甚至无需加入其他 通常的添加剂和/或稳定剂。
[0075]可W将根据本发明的冻干物溶解在水中W用于给药，从而获得气雾剂，例如含有 或不含有添加剂，例如不含添加剂，例如用于直接制备气雾剂，或用于作为溶液储存，例如 在储存容器中。
[0076]另一方面，本发明提供了冻干物的应用，其中式I的肤（其中Xi和Xz如上所述） 存在于水溶液中，特别地无需添加剂和/或稳定剂。
[0077] 明显惊奇和有利的是，由此溶解的式I的环肤（其中Xi和Xz如上所述），特别是 氨基酸序列沈Q ID NO: 1至沈Q ID N0:6的环肤，至少7天内在溶液中是稳定，运说明当环 肤转变为可吸入形态时，其生物活性甚至在没有加入其他通常的添加剂和/或稳定剂的情 况下没有减弱。
[0078] 应用根据本发明的环肤（特别是氨基酸序列SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO:6)后，结 果是肤溶液被构成为可被转变为（例如W可将环肤喷雾的喷雾器的方式）气雾剂的方式。 由此，结果是获得了直径小于或等于5ym的气雾剂粒子。
[0079] 此外，变得明显的是，主要包含直径《5 ym的液滴的气雾剂特别适于给药，因为 其结果是气雾剂进入肺部的气室。液滴尺寸的下限仅仅受液滴尺寸的可行性影响。
[0080]另一方面，本发明提供了冻干物用于制备气雾剂的应用，其中粒子尺寸为直径 《5Jim。
[0081]另一方面，本发明提供了根据本发明的冻干物的应用，其W将由冻干物所制备的 吸入形式的气雾剂用于改善/调节肺功能为特点。
[0082]另一方面，本发明提供了由根据本发明的冻干物所制备的气雾剂的应用，特别是 将没有添加剂的气雾剂用于改善肺功能，例如用于治