疗肺水肿。
[008引W及另一方面，
[0084]用于改善肺功能的方法，例如用于治疗肺水肿，W将根据本发明的没有添加剂的 气雾剂W吸入形式给药至患者为特点；
[00财W及另一方面，
[0086] 根据本发明的冻干物在改善/调节肺功能的应用，或用与改善/调节肺功能的吸 入剂。
[0087] 适当剂量取决于各种因素，例如，从式I的环状化合物的化学性质和药物动力学 性质中，个别宿主（例如其体重），患者的年龄和个体病情W及疾病的性质和严重程度。然 而，一般而言，为了在大多数哺乳动物（例如人类）中获得令人满意的结果，一个人（每日） 可W服用（ausgehen)的剂量为（约）0.Img/kg体重到大概（约）200mg/kg，例如Img/kg体 重至lOOmg/kg体重，例如多次（例如多达4次（部分）剂量）给药会带来成功的结果。儿 童通常获得成人剂量的一半。
[0088] 进一步的研究表明，通过离体处理供体肺，即移植到患者体内之前，W式I的环肤 (其中Xi和X2定义如上，特别是具有SEQIDNO:I至SEQIDNO:6的氨基酸序列的）令人 惊讶地改善/调节肺功能。从而显示出，如果在移植前W本发明的冻干物的气雾剂（特别 是无添加剂的气雾剂）来处理待移植的肺，可实现显著的改善。
[0089]另一方面，本发明提供了调节/改善肺功能的体外方法，其W用水溶性气雾剂对 供体肺进行离体进行喷雾为特征，特别地水溶性气雾剂是由根据本发明的冻干剂无需添加 剂和/或稳定剂的条件而制成。
[0090] 在随后将肺移植到接受者之后，还（仍然）可对其进行处理。
[0091] 由此得到如图1中所示的结果。气雾剂中的根据本发明式I的环肤浓度由此为从 SnM至约 150nM。
【附图说明】
[009引图1显示了依赖浓度的具有氨基酸序列SEQIDNO: 1至SEQIDNO:6的环肤的活 性。X轴上WnM(对数标度）表明SEQIDNO: 1至SEQIDN0:6的环蛋白的浓度，y轴 表明钢离子电流。
[0093] 图2显示了模拟肺移植在体外的肺灌注（体外、离体）期间吸入式应用SEQID NO: 1的环肤的结果。在图2A中，X轴上的时间点Tl到T4表示吸入式应用SEQIDNO: 1的 肤后（每次1小时）进行的测量。y轴表示顺从性；而在图2B中，X轴还表示时间点Tl到 T4,而y轴是动静脉氧分压差Ap〇2。W注射用水（WFI)作为对照。显示了每组8个实验的 平均值。
[0094] 图3显示了具有氨基酸序列SEQIDNO: 1至SEQIDNO: 7的肤的冷冻干 燥周期，W°C计（y轴）的固定样本溫度（Fachtemperatur)(实线）和产物溫度 (Proclukttemperatur)(虚线）和W分钟计（X轴）的时间来绘制。
[0095] 图4示意性显示了按照图式的用于在冷阱中压缩气雾剂的实验组件，其中
[0096] 1表示装有冰和盐的聚苯乙締容器
[0097] 2表示具有溶解肤（对照物质）的小试管
[0098] 3表示喷雾器
[0099] 4表示储存室，和
[0100] 5控制模块。
[0101] 图5显示了具有氨基酸序列SEQIDNO: 1的环肤的气雾剂的平均粒子尺寸分布， W2个不同的喷雾器（类型（TYP)A和类型（TYP)B)生产。W激光衍射的方式进行测定（流 速：巧L/min)。误差指示=SD。线条显示了在气雾剂中直径《Sym的粒子的各自部分。绘 制WJim计的液滴的尺寸的X周，和W%计的累积量y轴。
[0102] 图6显示了具有氨基酸序列SEQIDNO: 1的环肤的气雾剂在各自位置的呼吸模拟 器中的分布：
[0103] 1 =吸入过滤器
[0104] 2=呼气过滤器
[0105] 3 =过滤器连接件
[0106] 4 =喷雾器Y件（包括单向阀的）
[0107]5 =喷雾器中的残余物
[0108] 由此使用两个喷雾器，类型灯YP)A和类型灯YP)B。
【具体实施方式】
[0109] 实施例1
[0110] 肤合成
[0111] 根据W下步骤制备肤：
[0112] 将氨基酸按顺序进行偶合；从固相上选择性裂解；纯化、冻干和选择性环化；保护 基团的裂解；纯化和冷冻干燥；分析研究。
[0113] 根据巧甲氧幾基/叔下基保护策略W载体（2-氯=苯甲基氯树脂）上固相肤合成 的形式完全自动化制备本发明的所有环肤、氨基酸序列SEQIDNO: 1至SEQIDN0:6的肤 W及具有氨基酸序列SEQIDNO: 7的肤。二异丙基碳二亚胺和N-径基苯并S挫被作为偶 联剂。所有偶合步骤在作为溶剂的N，N-二甲基甲酯胺中进行。由此将被保护的氨基酸相 继偶合到作为原始材料的各自的C末端的氨基酸上。在N，N-二甲基甲酯胺中的20%赃晚 中对巧甲氧幾基进行脱保护。在乙酸和二氯甲烧的1:1混合物中将完全、部分被保护的肤 从树脂上裂解下来。
[0114] 在含有半脫氨酸的肤的情况下，从树脂裂解后，在95%=氣乙酸、5% &0中进行侧 链脱保护，然后通过氧化末端半脫氨酸残基进行环化，对末端半脫氨酸残基的氧化是通过 在pH8. 5下对天然线性肤进行90小时的透气而实现的。可W利用反相介质压力液相色谱 法（RP-M化C)在RP-C18硅胶柱上W5%至40%梯度的乙腊对天然肤产物进行纯化。最后， 在LewatitMP64柱（乙酸形式）上W醋酸置换S氣乙反离子。在水中进行最后洗涂后，对 如乙酸盐的纯化的肤进行冻干，并且获得白色至灰白色的粉末。
[0115] 在无半脫氨酸的肤的情况下，从载体（树脂）的裂解之后对被部分保护的线性肤 进行环化步骤。在对无半脫氨酸的肤进行选择性环化后，在=氣乙酸中进行侧链脱保护，然 后进行制备性RP-MPLC，对于含半脫氨酸的肤类，W醋酸盐置换=氣乙酸根离子并对醋酸盐 形式的肤进行冻干。
[0116] 随后，对SEQIDNO: 1至SEQIDNO: 6的环状蛋白质利用反相HPLC进行关于纯度 和质量的分析。
[0117] SEQ ID 1的环状蛋白质的纯度是96. 3% .m/z巧SI) 1924. 2 (M++1)。
[011引沈Q ID 2的环状蛋白质的纯度是96. 3% .m/z巧SI) 1924. 2 (M++1)。
[0119]SEQID 3 的环状蛋白质的纯度是 98. 8% .m/z巧SI) 1888. 2 (M++1)。
[0120] SEQ ID 4 的环状蛋白质的纯度是 97. 4% .m/z (ESI) 1873. 4(M++1)。
[012U SEQ ID 5 的环状蛋白质的纯度是 99% .m/z (MALDI-T(F) 1901. 6 (M++1)。
[012引沈Q ID 6 的环状蛋白质的纯度是 99%.m/z (MALDI-T(F) 1902. 7 (M++1)。
[012引 SEQ ID 7 的环状蛋白质的纯度是 95%.m/z (MALDI-T(F) 1778. 02 (M++1)。
[0124] 具有氨基酸序列SEQIDNO:7序列的化合物
[01 巧]环（CGQREAPAGAAAKPWYC)
[0126] 其中二硫键形成于两个末端半脫氨酸残基之间，明显不具有生物活性且用于对比 目的。
[0127] 实施例2
[0128] 阿米洛利敏感钢离子通道的电生理研究巧naC)
[0129] 宏观钢离子电流来自利用"膜片错"技术W全细胞模式化onfiguration)的人体 上皮细胞A549(Hamill等人，PflugersArch. 1981，391 似：85-100.，1981)。对于"全细胞" 模式中的电流，采用W下电解液和电极溶液：
[0130]电解液：135mM甲横酸钢、IOmMNaCl、2.TmMKC1、1.SmMCaClzJmMMgCl2、5. 5mM葡 萄糖和IOmM肥阳S,抑为7. 4。
[0131] 电极溶液：120mM甲横酸钟、15mMKCl、6mM化ClUmMMgzATPJmMNasATPJOmM 肥PES和 0. 5mMEGTA(pH为 7. 2)。
[0132] 将其上具有培养细胞的盖玻片转移到固定在显微镜平台上Imllml容量的腔室中 (Axiove;rtl00,400倍放大），并且将细胞与上述电解液混合（superfundie;rt)。继而W适 当细胞（贴附在盖玻片上）对电流进行推导。对此，对填充有电解质溶液的微电极（具有 约1-3ym的所定义的热抛光的顶部开口的玻璃毛细管-对应于3-5MQ的电极顶部电阻） 进行连接，且将膜吸入W在膜和电极间形成，，千兆欧姆密封"从而使漏电流减少到最小。在 "全细胞"模式中，在电极顶部下的膜破裂，W便能够对流经细胞所述离子通道的电流进行 测量。接收到，，千兆欧姆密封"后，经由前置放大器（CV-4探头，AxonInstruments)和放 大器（AxopatchlD，AxonInstr.)产生所定义的膜控制电位，并对由此流经离子通道的电流 进行测量。
[0133] 脉冲程序为至-IOOmV下对细胞膜进行5秒的超极化，然后从20mV到+IOOmV进行 逐步去极化。
[0134] 在加入环状蛋白前（对照）和加入环状蛋白后进行步骤。利用PCLAMP6. 0程序 对由此获得的电流进行记录和分析。由此，从之前记录的电流中减去在阿米洛利的存在下 得到的电流，可W确定经由上皮细胞钢通道的阿米洛利敏感钢电流的结果。
[0135] 表1中列出了测定的结果，其中显示了SEQIDl至SEQID 7的环状蛋白对细胞 阿米洛利敏感型钢离子电流的活性。各个肤的活性表示为ECsa(WnM