Nonratt021972小干扰rna在制备心肌缺血损伤、交感神经疾病药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于心肌缺血损伤、心血管及交感神经系统疾病药物用途发明领域。
【背景技术】
[0002] 急性心肌肌缺血通常是由冠状动脉已经或者即将闭塞而引起的心肌需氧和供氧 之间的失衡所致。急性冠脉综合征是指急性心肌缺血导致的一系列症状，包括心肌梗死（ST 段抬高和压低、Q波型和无Q波型）和不稳定型心绞痛等症状。临床研究发现，切除颈上神 经节（superiorcervicalganglion，SCG)、星状神经节（stellateganglion，SG)等交感 神经节后可使50-60%冠心病患者的心绞痛症状消失，提示支配心脏的交感神经涉及心肌 缺血损伤反应。心脏同时接受心交感神经和心迷走神经的支配，在生理状态下，心迷走神经 对心脏的作用占主导地位，比心交感更占优势。在心脏外周信息传递中，心脏感觉传入神经 与颈部交感心脏传出节后神经元形成反馈环路，改变交感传出节后神经元的功能。颈部交 感神经节不是简单的信号中继站，而是对各种信息具有整合作用。心肌缺血伤害性信号可 通过感觉神经的传入信息影响颈部交感神经节细胞的功能，进而加强交感节后神经活动， 引起血压升高和心率加快等交感兴奋性增强的反射，进而加重心肌缺血损伤。心交感神经 兴奋增强本身也可导致血压升高，引发高血压。
[0003] 三磷酸腺苷（adenosine5' -triphophate，ATP)，是一种噪呤类物质，它通过兴奋P2X受体参与神经传递和神经调节。P2受体分有P2X和P2Y受体两大类，P2X受体为配体 门控型离子通道受体，P2Y受体为G-蛋白耦联受体。到目前为止，已有七种P2X受体亚型 P2\ 7和八种类型P2Y受体亚型（P2Yuun14)被克隆。心肌缺血发生时，心肌组织以及 交感神经末梢（颈上神经节节前、节后纤维）均可通过胞吐或外渗作用释放ATP，使心脏感 觉传入神经末梢兴奋，引发胸痛，由此产生的交感传出兴奋性反射常表现为血压升高和交 感神经活动增加。心交感兴奋性加强可加重心肌缺血、缺氧使心绞痛加重。酪氨酸羟化酶 (tyrosinehydroxylase，TH)是交感神经的标志物。
[0004] P2X7受体由595个氨基酸组成，其前395个氨基酸编码两个跨膜区、一个大的胞外 环和N端，P2X7受体的胞内C端长于其它成员。P2X7受体是双功能受体，受刺激持续时间、 强度和其他因素影响，产生两种不同反应：P2X7受体在低浓度激动剂短暂刺激时引起非选 择性阳离子内流，几乎无失活；在较高浓度激动剂长时间或反复激活后可形成质膜孔道，分 子量达800Da的大分子和离子可通透，细胞骨架重排，终致细胞死亡。
[0005] 本发明前期用SOLiD高通量测序并通过生物信息学预测和分子生物学验证 确定大鼠颈部交感神经节（颈上神经节和星状神经节）、心肌存在长非编码核糖核酸 N0NRATT021972[http://www.noncode·org]，并发现心肌缺血模型大鼠颈部交感神经节长 非编码核糖核酸N0NRATT021972表达较对照组明显增加，提示心脏的长非编码核糖核酸 N0NRATT021972与心血管、交感神经的病理变化有关。长非编码核糖核酸N0NRATT021972小 干扰核糖核酸是否可对心肌缺血损伤产生保护作用尚不清楚，是否可作用于颈部交感神经 节神经细胞P2X7受体影响心肌缺血引发的交感增强反射对心肌、心血管、心交感神经损伤 产生保护作用目前尚无文献报道。
【发明内容】
[0006] 本发明的第一个目的在于提供长非编码核糖核酸N0NRATT021972小干扰核糖核 酸的第一个新用途，即N0NRATT021972小干扰核糖核酸在制备预防治疗心肌缺血损伤（急 性冠脉综合征等）药物中的应用。
[0007] 本发明的第二个目的在于提供长非编码核糖核酸N0NRATT021972小干扰核糖核 酸的第二个新用途，即N0NRATT021972小干扰核糖核酸在制备预防治疗高血压药物中的应 用。
[0008] 本发明的第三个目的在于提供长非编码核糖核酸N0NRATT021972小干扰核糖核 酸的第三个新用途，即N0NRATT021972小干扰核糖核酸在制备预防治疗交感神经系统疾病 药物中的应用。
[0009] 长非编码核糖核酸N0NRATT021972小干扰核糖核酸可降低心肌缺血大鼠引起的 交感神经反射（血压升高、心率和呼吸加快等），从而减轻或缓解心肌缺血损伤、心血管病 变。长非编码核糖核酸N0NRATT021972小干扰核糖核酸在预防治疗心肌缺血损伤（急性冠 脉综合征等）、心血管和交感神经病变的作用机理为：影响P2X7受体介导的交感兴奋反射 传递，产生防治心肌缺血损伤、心血管和交感神经疾病的作用。
[0010] 本发明的技术效果：长非编码核糖核酸N0NRATT021972小干扰核糖核酸可降低心 肌缺血损伤引起的交感神经反射（血压升高、心率和呼吸加快等），避免因为心交感兴奋增 强所引起的进一步加重心肌缺血缺氧现象，从而减轻或缓解心肌缺血损伤。长非编码核糖 核酸N0NRATT021972小干扰核糖核酸抑制颈部交感神经节兴奋增强传递可防治心血管疾 病、抑制交感异常兴奋及相关病理过程可防治交感神经疾病。
【附图说明】
[0011] 图1为长非编码核糖核酸N0NRATT021972在心肌缺血大鼠颈上神经节、星状神经 节中表达量的变化；
[0012] 图2为长非编码核糖核酸N0NRATT021972小干扰核糖核酸对心肌缺血损伤模型大 鼠心电图的影响图。其中分别为对照组；假手术组；心肌缺血模型组；心肌缺血模型+亮蓝 G组；心肌缺血模型+乱序小干扰处理组；心肌缺血模型+N0NRATT021972小干扰核糖核酸 组；心肌缺血模型+嘌呤2X7受体小干扰核糖核酸组。
[0013] 图3为苏木精-伊红染色法（HE)染色观察长非编码核糖核N0NRATT021972小 干扰核糖核酸对模型大鼠缺血损伤心肌的影响图。图中分别为对照组；假手术组；心肌 缺血模型组；心肌缺血模型+亮蓝G组；心肌缺血模型+乱序小干扰处理组；心肌缺血模 型+N0NRATT021972小干扰核糖核酸组；心肌缺血模型+嘌呤2心受体小干扰核糖核酸组 (Scalebars:50μm)〇
[0014] 图4为N0NRATT021972小干扰核糖核酸对血清中肿瘤坏死因子（TNF-α)、白细胞 介素6(IL-6)浓度影响图。图中分别为对照组；假手术组；心肌缺血模型组；心肌缺血模型 +亮蓝G组；心肌缺血模型+乱序小干扰处理组；心肌缺血模型+N0NRATT021972小干扰核糖 核酸组；心肌缺血模型+嘌呤2X7受体小干扰核糖核酸组。wp〈0. 01与对照组比较；##p〈0. 01 与心肌缺血模型组比较。
[0015] 图5为N0NRATT021972小干扰核糖核酸对血清中去甲肾上腺素、肾上腺素浓度影 响图。图中分别为对照组；假手术组；心肌缺血模型组；心肌缺血模型+亮蓝G组；心肌缺 血模型+乱序小干扰处理组；心肌缺血模型+N0NRATT021972小干扰核糖核酸组；心肌缺血 模型+嘌呤2X7受体小干扰核糖核酸组。wp〈0. 01与对照组比较；##p〈0. 01与心肌缺血模型 组比较。
[0016] 图6为实时定量聚合酶链式反应检测N0NRATT021972小干扰核糖核酸对颈上神经 节、星状神经节P2X7受体信使核糖核酸表达的影响图。图中分别为对照组；假手术组；心 肌缺血模型组；心肌缺血模型+亮蓝G组；心肌缺血模型+乱序小干扰处理组；心肌缺血模 型+N0NRATT021972小干扰核糖核酸组；心肌缺血模型+嘌呤2X7受体小干扰核糖核酸组。 、〈0. 01与对照组比较；##p〈0. 01与心肌缺血模型组比较。
[0017] 图7为免疫组织化学检测N0NRATT021972小干扰核糖核酸对颈上神经节（图 7(&)#21受体免疫反应性表达的影响图。图中分别为对照组；假手术组；心肌缺血模 型组；心肌缺血模型+亮蓝G组；心肌缺血模型+乱序小干扰处理组；心肌缺血模型 +N0NRATT021972小干扰核糖核酸组；心肌缺血模型+嘌呤2心受体小干扰核糖核酸组。图 7(b)为统计分析数据的柱状图。、〈0. 01与对照组比较；##p〈0. 01与心肌缺血模型组比较 (Scalebars:20μm)〇
[0018] 图8为免疫组织化学检测N0NRATT021972小干扰核糖核酸对星状神经节（图 8(&)#21受体免疫反应性表达的影响图。图中分别为对照组；假手术组；心肌缺血模 型组；心肌缺血模型+亮蓝G组；心肌缺血模型+乱序小干扰处理组；心肌缺血模型 +N0NRATT021972小干扰核糖核酸组；心肌缺血模型+嘌呤2心受体小干扰核糖核酸组。图 7(b)为统计分析数据的柱状图。、〈0. 01与对照组比较；##p〈0. 01与心肌缺血模型组比较 (Scalebars:20μm)〇
[0019] 图9为蛋白印迹检测N0NRATT021972小干扰核糖核酸对颈上神经节嘌呤2心受体 蛋白表达的影响图。图中分别为对照组；假手术组；心肌缺血模型组；