化合物p7c3-a20在制备治疗脑缺血疾病药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及化合物的新用途，具体地说，涉及化合物P7C3-A20在制备治疗脑缺血 疾病药物中的应用。
【背景技术】
[0002] P7C3-A20属于P7C3系列化合物的一种，CAS号为1235481-90-9,化学结构式为：
[0003]
[0004] 它是一种氯丙基咔唑类化合物，口服生物利用度高，可通过血脑屏障，且在有效剂 量和高剂量下均未表现出毒性。已有国外报道发现P7C3这一类化合物在抑郁症、老年性疾 病如帕金森（PD)、肌萎缩性脊髓侧索硬化症（ALS)、认知退行性疾病、视网膜变性等疾病中 有保护作用。目前，尚无 P7C3-A20对脑缺血损伤的保护作用的报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供化合物P7C3-A20的新用途。
[0006] 在本发明的第一方面，提供了化合物P7C3-A20在制备防治脑缺血损伤的药物中 的应用。
[0007] 作为本发明的一种【具体实施方式】，所述的防治脑缺血损伤是指提高大脑皮层神经 元的生存率或减少脑梗死面积。
[0008] 在本发明的第二方面，提供了化合物P7C3-A20在制备药物中的应用，所述的药物 用于：
[0009] a)提高缺血大脑皮层神经元的生存率，或
[0010] b)减少脑缺血的脑梗死面积。
[0011] 在本发明的第三方面，提供了化合物P7C3-A20在制备防治脑梗死的药物中的应 用。
[0012] 本文中，所述的化合物P7C3-A20结构式为：
[0013]
[0014] 本文中，所述的"脑缺血"是指包括TIA、脑梗塞和烟雾病（但不仅限于此）在内 的颅内血管病变，其引起的主要病理变化为脑缺血损害。总的来说，所述的"脑缺血"可能 由以下原因引起：①颅内、外动脉狭窄或闭塞；②脑动脉栓塞；③血流动力学因素；④血液 学因素等。造成脑动脉狭窄或闭塞的主要原因是动脉粥样硬化。造成脑动脉栓塞的主要 原因包括动脉粥样硬化，以及因患有风湿性心瓣膜病、亚急性细菌性心内膜炎、先天性心脏 病、人工瓣膜和心脏手术等形成的栓子随血流进入脑内造成的栓塞。血流动力学因素包括 短暂的低血压引发的脑缺血，例如心肌梗死、严重心律失常、休克、颈动脉窦过敏、直立性低 血压、锁骨下动脉盗血综合征等。血液学因素包括口服避孕药物、妊娠、产妇、手术后和血小 板增多症引起的血液尚凝状态，红细胞增多症、镜状细胞贫血、巨球蛋白血症引起的黏桐度 增尚所引起的脑缺血。
[0015] 本发明优点在于：本发明通过细胞实验证实P7C3-A20可以提高缺氧缺糖模型 (〇⑶模型）中离体培养的小鼠大脑皮层神经元的生存率，通过动物实验证实P7C3-A20可以 明显降低大鼠大脑中动脉阻塞导致的脑梗死面积，这些结果表明P7C3-A20具有脑缺血保 护作用，能够防治脑缺血造成的脑损伤，在制备脑缺血损伤和/或脑梗死相关药物方面具 有广阔的应用前景。本发明为脑缺血提供了新的药物研发方向。
【附图说明】
[0016] 图1.神经元生存率检测结果。*P〈0. 05vs无 P7C3-A20处理组，N = 6。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合附图对本发明提供的【具体实施方式】作详细说明。
[0018] 实施例1
[0019] -、方法
[0020] 1、小鼠大脑皮层神经元的培养
[0021] (1)取孕鼠，E15-18天，脱颈椎处死，75%酒精擦拭腹部，剖腹，切取子宫。
[0022] (2)将子宫放置于含双抗的无菌去离子水的培养皿中，转移至细胞房内。
[0023] (3)将子宫迅速转移至冰冷的高糖DMEM中，用眼科剪从子宫角处撕开子宫，取出 胎鼠，剪刀断头，仔细剥离，取大脑；显微镜下分离出大脑皮层，仔细剥除脑膜和血管。
[0024] (4)将脑组织转入新鲜冰冷的高糖DMEM中，漂洗2次后转移至1 · 5mL EP管中，放 置冰上，用弯剪尽量剪碎脑组织。
[0025] (6)将剪碎的脑组织转移至小锥形瓶中，加入Accutase酶，锡箱纸封口，37 °C摇床 消化l〇min。
[0026] (7)消化结束后，加入ImL FBS终止消化，混匀，1000 rpm离心5min，舍弃上清液。
[0027] (8)加入5mL接种培养基，1000 rpm离心5min，舍弃上清液。
[0028] (9)加入少量接种培养基，混匀，200目细胞筛过筛，并用细胞计数板计数。
[0029] (10)加入接种培养基调整细胞密度，接种。
[0030] (11)接种后4-6h，根据细胞贴壁情况更换成Neurobasal生长培养基。
[0031] (12)接种36h后，半量换液，加入阿糖胞苷（终浓度为2. 5 μ g/mL)。
[0032] (13)第5天，全量换液。
[0033] (14)第7天，全量换液，加药处理或进行其他操作。
[0034] 其中，接种培养基：含10% FBS+10%马血清的高糖DMEM ;Neurobasal生长培养 基：2% B27添加物，1 %双抗，25 μ M L-谷氨酸。
[0035] 2、0⑶模型在体外模拟脑缺血
[0036] 待原代培养的小鼠大脑皮层神经元生长至第7天，弃细胞培养基，用PBS清洗两 次。加入无糖DMEM培养基，给药组加入溶于二甲基亚砜（DMSO)的P7C3-A20(购于上海技毅 生物科技有限公司，CAS号为1235481-90-9)。P7C3-A20的终浓度为10mM、30mM及lOOmM， 并将溶剂DMSO的浓度控制在0. 1 %。对照组则加入0. 1 %的DMS0。将神经元放置于三气培 养箱（含1% 〇2、5% C02、94% N2)中培养12小时，通过制造低氧低糖环境，模拟脑缺血。培 养12小时后，用CCK-8方法测神经元生存率。CCK-8细胞活力试剂盒购于日本Dojindo公 司，是一种广泛运用的细胞活力及生存率的检测试剂盒。
[0037] 二、结果
[0038] 结果见图1，可以看到OGD大幅度降低了神经元的生存率，而P7C3-A20化合物的处 理可显著减轻OGD导致的神经元的生存率下降（P〈0. 05)。
[0039] 实施例2
[0040] 一、方法
[0041 ] 用大鼠（Sprague-Dawley大鼠，体重250g左右，上海斯莱克实验动物有限公司） 制备永久性脑缺血损伤模型。过程如下：将大鼠麻醉，打开颅骨，直接在目视下将大脑中动 脉电凝，导致左侧大脑中动脉堵塞。30分钟后给予大鼠腹腔注射P7C3-A20 (30mg/kg)。复位 颅骨，缝合皮肤，即成功制备大鼠大脑中动脉堵塞导致的永久性脑缺血模型。大脑中动脉堵 塞后24小时，给予检测脑梗死面积。脑梗死体积检测采用2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑（购 自Amersco公司）染色法，即TTC染色法。
[0042] 二、结果
[0043] 结果见表1，可以看到：化合物P7C3-A20明显降低了脑梗死面积。
[0044] 表1对照组与P7C3-A20治疗组的脑梗死面积对比
[0045]
[0046] 注：#*P〈0.0 Olvs对照组，N = 9-10。表格中的数字为脑梗死占全脑体积的百分 比。
[0047] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人 员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为 本发明的保护范围。
【主权项】
1. 化合物P7C3-A20在制备防治脑缺血损伤的药物中的应用。2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的防治脑缺血损伤是指提高大脑皮 层神经元的生存率或减少脑梗死面积。3. 化合物P7C3-A20在制备药物中的应用，其特征在于，所述的药物用于： a) 提高缺血大脑皮层神经元的生存率，或 b) 减少脑缺血的脑梗死面积。4. 化合物P7C3-A20在制备防治脑梗死的药物中的应用。5. 根据权利要求1-4任一所述的应用，其特征在于，所述的化合物P7C3-A20结构式 为：
【专利摘要】本发明涉及化合物P7C3-A20在制备治疗脑缺血疾病药物中的应用。本发明通过细胞实验证实P7C3-A20可以提高缺氧缺糖模型中离体培养的小鼠大脑皮层神经元的生存率，通过动物实验证实P7C3-A20可以明显降低大鼠大脑中动脉阻塞导致的脑梗死面积，这些结果表明P7C3-A20具有脑缺血保护作用，能够防治脑缺血造成的脑损伤，在制备脑缺血损伤和/或脑梗死相关药物方面具有广阔的应用前景。
【IPC分类】A61P9/10, A61K31/403
【公开号】CN104997771
【申请号】CN201510406560
【发明人】缪朝玉, 王培 , 张赛龙, 王淑娜, 徐添颖, 管云枫
【申请人】中国人民解放军第二军医大学
【公开日】2015年10月28日
【申请日】2015年7月13日