心肌缺血模型+亮蓝 G组；心肌缺血模型+乱序小干扰处理组；心肌缺血模型+N0NRATT021972小干扰核糖核酸 组；心肌缺血模型+嘌呤2心受体小干扰核糖核酸组。图9(a)为蛋白印迹实验结果图，图 9(b)为实验数据分析比较柱状图。wp〈0. 01与对照组比较；##p〈0. 01与心肌缺血模型组比 较。
[0020] 图10为蛋白印迹检测N0NRATT021972小干扰核糖核酸对星状神经节嘌呤2心受体 蛋白表达的影响图。图中分别为对照组；假手术组；心肌缺血模型组；心肌缺血模型+亮 蓝G组；心肌缺血模型+乱序小干扰处理组；心肌缺血模型+N0NRATT021972小干扰核糖核 酸组；心肌缺血模型+嘌呤2心受体小干扰核糖核酸组。图10(a)为蛋白印迹实验结果图， 图10(b)为实验数据分析比较柱状图。#p〈0. 01与对照组比较；##p〈0. 01与心肌缺血模型 组比较。
【具体实施方式】
[0021] 下面结合实施例并对照附图对本发明作进一步详细说明。
[0022] 实施例1。
[0023] 用本技术领域公知的方法，制成适用于涉及颈部交感神经节或心肌？2心受体介导 心肌缺血损伤（急性冠脉综合征等）预防治疗的口服、注射或局部应用（含服等）的长非 编码核糖核酸N0NRATT021972小干扰核糖核酸制剂。
[0024] 实施例2。
[0025] 用本技术领域公知的方法，制成适用于涉及颈部交感神经节或心肌？2心受体介导 高血压预防治疗的口服、注射或局部应用的长非编码核糖核酸N0NRATT021972小干扰核糖 核酸制剂。
[0026] 实施例3。
[0027] 用本技术领域公知的方法，制成适用于涉及颈部交感神经节？2心受体介导交感神 经系统疾病预防治疗的口服、注射或局部应用的长非编码核糖核酸N0NRATT021972小干扰 核糖核酸制剂。
[0028] 为了更好地理解本发明的实质，下面以长非编码核糖核酸N0NRATT021972小干 扰核糖核酸对P2X7受体介导心肌缺血损伤和交感神经兴奋作用研究的实验和结果来证明 N0NRATT021972小干扰核糖核酸的用途。
[0029] 一、材料和方法。
[0030] 1.动物和分组。
[0031]健康Sprague-Dawley(SD)大鼠（体重180_220g)，雄性，由南昌大学医学院实验动 物科学部提供。大鼠随机分为对照组；假手术组；心肌缺血模型组；心肌缺血模型+亮蓝G 小干扰核糖核酸组；心肌缺血模型+乱序小干扰处理组；心肌缺血模型+N0NRATT021972小 干扰核糖核酸组；心肌缺血模型+嘌呤2心受体小干扰核糖核酸组。制备缺血模型采用结 扎大鼠左冠状动脉前降支，结扎冠状动脉。P2X7受体的拮抗剂亮蓝G按30毫克/公斤/天 腹腔给药。
[0032] 2.心肌缺血模型大鼠长非编码核糖核酸N0NRATT021972或嘌呤2X7受体小干扰核 糖核酸实验。
[0033] 长非编码核糖核酸N0NRATT021972小干扰核糖核酸（siRNA)序列由 Invitrogen(Carlsbad，CA)公司提供，靶序列为 5' -TGTGAATCATGGAAATATC-3' ；阴性对照 scrambledsiRNA(乱序小干扰核糖核酸）购至Invitrogen(Carlsbad,CA)公司。在体转染 试剂由Entranster?公司提供。根据Entranster?在体转染说明书，对心肌缺血造模成功 的大鼠进行长非编码核糖核酸N0NRATT021972小干扰核糖核酸在体小干扰实验。320μL N0NRATT021972小干扰核糖核酸或阴性对照乱序小干扰核糖核酸溶液通过用微量注射器舌 下静脉给药或用微量注射器直接注射至颈部交感神经节内。
[0034] Ρ2Χ7小干扰核糖核酸（siRNA)序列靶序列为 5'-GTGCAGTGAATGAGTACTΑ-3'， 舌下静脉给药。
[0035] 3.药物与试剂。
[0036] 兔抗P2X7单克隆抗体（ABcam公司）；鼠抗TH(酪氨酸羟化酶）多克隆抗体（Santa Crus公司）；即用型SABC组化试剂盒（武汉博士德公司）；β-actin抗体（北京中杉金 桥）；P2X7原位分子杂交试剂盒（武汉博士德公司）；大鼠肿瘤坏死因子-α定量酶联检测 试剂盒（上海森熊科技实业有限公司）；大鼠白细胞介素-6定量酶联检测试剂盒（上海森 熊科技实业有限公司）；NA，EPIELISAKit(肾上腺素和去甲肾上腺素素酶联免疫试剂盒）(UscnLifeScienceInc.) ;Trizol、2XEasyTaqPCRSuperMix及D2000 (marker)(天根 生化科技有限公司）。
[0037] 4.主要仪器。
[0038] 智能无创血压计BP_2006A(北京软隆生物技术有限公司）；发光检测仪 GL0MAX(PR0MEGA公司）；酶标仪（迪肯公司）；冰冻切片机（德国徕卡公司）TKR-200C小 动物呼吸机（江西特力麻醉呼吸设备有限公司）；Medlab生物信号采集处理系统（南京美 易科技有限公司）；消毒纱布、手巾、棉签等，碘酒及75%酒精，手术器械包：剪刀、眼科小弯 镊、血管钳、丝线等。
[0039] 5.大鼠心肌缺血模型制备。
[0040] 腹腔注射10%水合氯醛（0. 3ml/100g)进行麻醉。麻醉后大鼠取仰卧位，固定于 手术台，心电图电极固定在双上肢和右下肢皮下，前胸备皮、消毒，使用Medlab生物信号采 集处理系统记录标准II导联的心电图。暴露大鼠声门，行气管插管术，接通小动物呼吸机。 手术区域铺上洞巾，以胸骨角为标志点，在左胸第4肋间隙位置行皮肤纵切口，剪开表皮， 钝性分离结缔组织和肌肉，暴露肋骨，以止血钳游离肋骨旁的肌肉，撑开肋间隙，暴露心脏， 清理创口。并用玻璃分针挑破心包膜。右手持止血钳扩开肋间隙，增加心脏暴露区域，左手 轻挤胸廓将心脏挤出，拇指向上翻转心脏，可见左心耳与动脉圆锥间的左冠状动脉前降支， 用小号缝合针快速穿刺血管底部心肌，深度约1. 5-2. 0mm，结扎成功且快速回纳心脏，观察 心电图可见ST段呈弓背向上抬高，验证心肌缺血模型成功建立。待大鼠心电图平稳后，观 测数分钟，大鼠胸腔清创后逐层关闭胸腔。逐渐控制呼吸机潮气量和频率，使大鼠逐步摆脱 呼吸机。待大鼠恢复自主呼吸后，拔出气管插管，清除口腔内分泌物，给予生理盐水湿润或 刺激。碘伏和酒精创口消毒，并行右后肢肌肉注射抗生素，防止术后感染。
[0041 ] 6.血压、心率测定。
[0042] 使用BP-2006A智能无创血压计监测生理盐水对照组、结扎冠状动脉心肌缺血模 型组、假手术组和结扎冠状动脉P2X7受体、N0NRATT021972小干扰核糖核酸处理组大鼠血 压、心率的变化。在安静的监测室，将清醒状态的大鼠放入含鼠网的鼠袋中，尾巴置于鼠袋 外面，鼠袋温度控制在37°C，待大鼠安静后，加压感应器套在鼠尾根部三分之一处，启动无 创智能血压计，进入监测状态，点击开始键可自动测量各组大鼠血压和心率的变化。同一大 鼠在相同时间内重复测量三次血压和心率，取其平均值，每次操作由同一人完成。
[0043] 7.大鼠心率变异性（HRV)指标的测定。
[0044] 腹腔注射10%水合氯醛（0. 3ml/100g)麻醉大鼠。麻醉后仰卧位固定于手术台上， 心电图的电极固定在双上肢和右下肢皮下，使用Medlab生物信号采集处理系统记录标准 II导联的心电图。将采集的心电信号用心率变异性分析软件分析，采用短时程5min频域分 析法，取5min心电图作HRV分析。HRV频域分析法有关参数：
[0045] 低频（lowfrequency,LF):中心频率位于0· 04Hz-0. 15Hz的低频分量曲线的积分 值，即低频分量曲线与其横轴所夹的面积，单位为ms2。
[0046] 高频（highfrequency,HF):中心频率位于0· 15Ηζ-〇· 4Hz的高频分量曲线的积分 值，即高频分量曲线与其横轴所夹的面积，单位为ms2。
[0047] 低频/高频（LF/HF):低频与高频功率的比值，代表交感神经张力与迷走神经张力 的平衡。
[0048] 窦性R-R间期差数的均方根和（rMSSD):单位ms。
[0049] 窦性R-R间期标准差（SDANN):单位ms。
[0050] 8.苏木精-伊红（Hematoxylin-eosinstaining，HE)染色。
[0051] 1)心肌标本制备：分别于模型制作成功后14天，麻醉的大鼠，生理盐水灌注心脏， 用4%多聚甲醛固定后，取出整个心脏，0. 1MPBS清洗，4%多聚甲醛固定，蔗糖脱水24小时 后冰冻切片机切厚度为12μm冰冻切片。
[0052] 2)HE染色：取冰冻切片恢复至室温，放进苏木素中染色5min，自来水冲洗lOmin， 充分蓝化；再放进1 %的伊红溶液染色5min，自来水洗lOmin，酒精梯度脱水、二甲苯透明和 中性树胶封片。
[0053] 9.心肌酶测定。
[0054] 分别于连续给药14天后，腹腔注射10 %