为5000-10000的超滤柱超滤，超滤液减压浓缩相对密度为80 °C时1. 06的浸膏，作为组 分1 ;所述步骤b中，将提取的翠云草渣滓与所述其余原料茵陈1200g，牛筋草1100g，夏 枯草1200g，五味子1100g，柴胡1100g，灯心草1100g，玉米须1100g，桑寄生1100g，排钱 草ll〇〇g，连翘ll〇〇g，垂盆草ll〇〇g，陈皮ll〇〇g，白花蛇舌草1200g，鸡骨草1100g，小米草 lioog，车前草lioog，墨旱莲lioog，虎杖lioog，苍术lioog，丹皮1200g，半枝莲1100g，一 起放入占其质量5-10倍量水中，浸泡1-2小时，加热提取2次，每次1-2小时，去上清液，合 并提取液，100-120目滤过，将2次提取液合并静置，减压并浓缩至药液浓度为0. 6g生药/ mL，抽滤后，滤液的相对密度约为20°C时1. 08 ;减压至0. 03-0. 08MPa，温度保持在60-80°C， 浓缩至相对密度为1. 20,温度至60°C -70°C的浸膏，作为组分2 ;将组分1与组分2混合后 放入减压浓缩罐内，减压回收乙醇，浓缩至药液浓度为0. lg生药/mL，抽滤至滤液的相对密 度为20°C时1. 06 ;上述滤液经体积为10L的大孔吸附树脂柱吸附后，用10倍树脂柱体积 的去离子水或蒸馏水洗脱，再用5倍树脂柱体积的95%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，去除溶 剂，再调和蜂蜜，紫外线消毒杀菌后装瓶。
[0067] 本发明急性毒性试验
[0068] 1、最大耐受量测定试验
[0069] 试验材料：动物：昆明种小鼠，体重21_24g，雌雄各半，山东大学生物试验室育种。 药物：本发明口服液（按实施方法2制备）。
[0070] 用法用量：每只小鼠按0. 4ml/10g灌服25%浓度本发明，一日内连续灌服3次，每 隔4小时1次。
[0071] 结果：小鼠一日内连续3次灌服本发明，最大耐受量为30g/kg提取物，约相当于临 床或成人用量的357倍（成人每次服4片，一日3次，全天总用量为12片，即0. 35gX 12片 =4. 2g/ 成人）。
[0072] 结论：经小鼠最大耐受量测定证明，认为本发明临床口服用药较安全。
[0073] 2、长期毒性试验
[0074] 用法用量：本发明高剂量组-大鼠按5g/kg灌服本发明（内含提取物3. 57克）； 本发明低剂量组-大鼠按2g/kg灌服本发明（内含提取物1. 43克）。
[0075] 结果：
[0076] 1)对一般情况的影响：试验结果表明，按上述剂量给药，连续60天，大鼠在给药期 间，体重、行为活动、饮食均为正常，毛具有光泽，无稀便等。
[0077] 2)对红细胞、血红蛋白的影响：按上述剂量给大鼠连续灌服60天，对雌雄大鼠的 红细胞计数及血红蛋白均无明显的影响。
[0078] 3)对白细胞、淋巴细胞及嗜中性粒细胞的影响：结果证明，按上述剂量给大鼠连 续灌服60天，对雌雄大鼠的白细胞计数、淋巴细胞、嗜中性粒细胞均无明显的影响。
[0079] 4)对肝、肾功能的影响：血清谷丙转氨酶的测定采用比色法，血清尿素氮的测定 采用二乙酰一肟有显色法，结果经统计学处理证明，各给药组对大鼠血清谷丙转氨酶均有 明显的降低作用（P < 〇. 05)，但各组的值均在大鼠的正常值范围之内，各给药组对大鼠尿 素氮均无明显影响。
[0080] 5)对血清总蛋白、白蛋白的影响：血清总蛋白的测定采用双缩脲法，血清白蛋白 测定采用溴甲酚绿法，结果证明，按上述剂量给大鼠连续灌服60天，对雌雄大鼠的血清总 蛋白、白蛋白均无明显影响。
[0081] 6)对重要器官系数的影响：将各组大鼠处死后，分别称心、肝、脾、肺、肾及睾丸的 重量，并求出每只大鼠的重要器官系数，最后经统计学处理，结果证明，本发明按上述剂量 给大鼠连续灌服60天，对雌雄大鼠的重要器官系数均无明显影响。
[0082] 7)对重要脏器的病理检查：将上述各组大鼠取血后，处死，分别取出各重要脏器， 取材，进行常规固定、切片、HE染色，在显微镜下观察心、肝、脾、肺、肾、睾丸及卵巢组织是否 有病理改变，结果如下：
[0083] 心脏：心肌细胞、心内膜、心肌内结缔组织和毛细血管均无异常改变。
[0084] 肝脏：肝细胞、肝小叶及小叶间结构无异常改变。
[0085] 脾脏：红髓、白髓内细胞和组织结构均无异常改变。
[0086] 肺脏：各级支气管组织和上皮组织均未见异常，肺泡、肺泡囊、肺泡壁亦未见形态 学改变。
[0087] 肾脏：肾小球、肾小管及各种小管上皮均未见异常改变。
[0088] 睾丸：细精管内各级精母细胞可见，成熟精子细胞及精子大量存在。
[0089] 卵巢：组织结构和各种卵泡未见异常改变。
[0090] 上述结果证明，本发明连续给大鼠口服，对重要脏器无明显的病理改变。
[0091] 结论：
[0092] 上述长期毒性实验结果表明，本发明按5g/kg(内含提取物3.57克），2g/kg(内 含提取物1. 43克）给大鼠连续灌服60天，对大鼠体重、红细胞、血红蛋白、白细胞、白细胞 分类均无明显影响；对血清谷丙转氨酶、尿素氮、总蛋白、白蛋白、重要器官系数均无明显改 变；对重要脏器心、肝、脾、肺、肾、睾丸、卵巢经镜下观察无病理改变。根据上述实验结果，认 为该药口服用药无明显的毒性反应。
[0093] 药理学实验：
[0094] 对于肝脏损伤，主要通过AST、ALT、GGT三个指标来评定。其中AST (血清门冬氨酸 氨基转移酶）和ALT(血清丙氨酸氨基转移酶）存在于多个脏器和组织中，这2种酶明显升 高代表肝细胞遭到破坏，是肝脏受损的标志。酒精性脂肪肝可有AST和ALT轻度升高。谷 氨酰转肽酶（GGT)是诊断胆道系统疾病时常用的指标。
[0095] 试验结果显示，对于酒精性肝炎，本发明可使受试者的相关指标在治疗后出现显 著下降，ALT、AST、GGT分别下降61. 38%、21. 43%、23. 48%。治疗的有效率、显效率和总有 效率分别达到11. 11%、72. 20%和83. 31%。葵花本发明用于酒精性脂肪肝中医疗效评价 的治疗的显效率、有效率和总有效率分别达到22. 22%、51. 39%和73. 61%。在治疗药物性 肝炎的临床试验上，本发明使患者治疗后的ALT和AST分别下降80. 67%和70. 37%，有效 率和痊愈率分别达到11. 94 %和85. 07%，降酶疗效和退黄疗效分别达到92. 50 %和100%。 综上研究显示，本发明对酒精性脂肪肝、酒精性肝炎和药物性肝炎作用明确，药效显著，可 广泛用于上述疾病的治疗及辅助治疗。
[0096] 对正常大鼠有显著的利胆作用，胆汁流量增加持续2h。熊去氧胆酸流量增加持续 1小时。胆汁中胆固醇、胆红素给药前和给药后组间比较未见显著差异性。为此我们进行了 实验研究。
[0097] 1、材料与方法
[0098] 药物：本发明提醇沉液的制备：取一定量本发明原料药，水煎两次，水浴上浓缩至 一定体积后加95乙醇沉淀杂质，过液，滤液回收乙醇。配成100%浓度。
[0099] 对照组为市售葵花本发明，黑龙江葵花药业股份有限公司生产。熊去氧胆酸为日 本三菱化成生产。
[0100] 动物ICR小鼠，SD大鼠均由本院动物研究室提供。
[0101] 1. 1对四氯化碳引起的小鼠肝损伤的保护作用：雄性小鼠78只，体重18-23g，按体 重随机分层分成六组，每组13只。本发明3个剂量组0. 25g/kg、0. 5g/kg、lg/kg，阳性对照 药葵花本发明lg/kg，模型组，水对照组每天灌胃给药一次，连续6d，于第六天给药后lh除 水对照组外其余各组均皮下注射0. 15的四氯化碳菜油5ml/kg。16h后摘眼球取血用北京 化工厂产的试剂盒测定血清SGPT、SG0T。解剖出肝脏称重，根据处死时体重计算每只小鼠 的肝体比、数据以均值士标准差表示，组间进行t检验。
[0102] 1. 2对正常大鼠胆汁流量的影响1. 2. 1
[0103] 胆汁流量的测定：取大鼠60只，雄性，体重250~350g，称重随机分成五组，每组 12只，实验前禁食12h，不禁水。实验以10 %乌拉坦1. Og/kg腹腔注射麻醉，仰位固定于手术 台，沿腹正中线切开腹壁，找出十二指肠，在降部肠系膜中找到白色有韧性的胆管，在其下 穿二根丝线，结扎乳头部，向肝脏方向作"V"形切口，插入硬质塑料管，结扎固定，即可见有 淡黄绿色胆汗流出，试管收集胆汁，术后以盐水纱布覆盖腹腔，待稳定lh后，先收集30min 的胆汁，作为给药前的基础值，然后分组给药（经十二指肠）。本发明3个剂量组0. 25g/kg、 0. 5g/kg、lg/kg，水对照组，阳性药熊去氧胆酸0. 5g/kg。给药后每隔30min收集测量1次胆 汁。共4h。
[0104] 1. 2. 2胆汁成分的测定：将给药前，给药后4h收集的胆汁测定胆红素（伊利康生 物技术有限公司生产，咖啡因法）。胆固醇含量测定用东欧生物工程公司生产的试剂盒，酶 法测定。
[0105] 2实验结果
[0106] 2. 1对四氯化碳引起的小鼠肝损伤的保护作用：四氯化碳引起的SGPT、SG0T显著 升高P < 0. 01，说明造型成功。本发明使SG0T显著降低三个剂量组均P < 0. 05,本发明对 SGPT无明显影响。葵花本发明使SGPT、SG0T显著降低（P-~0. 05)。泽兰10g/kg组使肝 体比显著低于四氯化碳模型组。详见表1。
[0107] 表1本发明对四氯化碳中毒小鼠血清转氨酶的影响（X土S)
[0110] 注：组间进行t检验，与四氯化碳组比*P < 0. 05, #P < 0. 01
[0111] 2. 2对正常大鼠胆汁流量的影响：本发明0. 25g/kg组使正常大鼠胆汁流量增加， 持续2h，以给药后的30min增加最显著< 0. 05)。0. 5g/kg组给药2h各时相都显著增加 < 0. 05. lg/kg组给药后90min内各时相都比对照组显著升高（P < 0. 01，P < 0. 05)。阳 性药熊去氧胆酸也使流量增加，持续lh。P < 0. 05详见表2。
[0112] 表2本发明对麻醉大鼠胆汁流量的影响（X土S)
[0113]
[0114] 注t以给药前流量为100%，组问进行t检验，与对照组比*P < 0. 05, #P < 0. 01. 本发明给药前、给药后涓定胆汁中胆红素和胆同醇含量与对照组相比未见显著差异。详见 表3〇
[0115] 表3本发明对大鼠胆汁中胆固醇、胆红素排出量的影响（X土S)
[0118] 讨论：
[0119] 传统医学认为肝胆系的炎症、结石主要是湿热邪毒播体内而致，有人分析100例 肝炎病人的肝穿病理结果并结合中医辨证分型得出急性黄疽型肝炎100%属中医湿热的结 论，所以清除湿热邪毒用通腑泻下，利湿解毒是常之治则。
[0120] 全草（翠云草）：淡、苦，寒。清热解毒，利湿通络，化痰止咳，止血。用于黄疸，痢 疾，高热惊厥，胆囊炎，水肿，泄泻，吐血，便血，风湿关节痛，乳痈、烧、烫伤。考证：本品入药 始载于《百草镜》。《群芳谱》云："性好阴，色苍翠可爱，细叶柔茎，重重碎蹩，俨若翠钿。其 根遇土便生，见日则消，栽于虎刺、芭蕉、秋海棠下极佳。"《纲目拾遗》谓："其草独茎成瓣，细 叶攒簇，叶上有翠斑。"《植物名实图考》亦云："翠云草生山石间，绿茎小叶，青翠可爱。《群