二是可W吸收福照，阻止对组织深层的影响。对于大部分脱细胞产品的 生物力学特性主要取决于胶原纤维、胶原纤维束W及它们空间结构的组成。因此，通过光福 照/光敏剂交联术可W改善人工角膜的生物机械性能及其稳定性。本发明光氧化胶原交联 原理如下所示：
[0035]
[0036] 胶原肤链间存在离子键、氨键、范德华力及非极性基团产生的疏水剑等作用力。同 时，胶原分子内和分子间还存在醇醒缩合交联、醒氨缩合交联和醒醇组氨酸种交联，使胶原 肤链牢固连接起来，具备很高的抗张强度。 阳〇37] 实施例1
[0038] 一种人工角膜的制备方法，其包括的步骤如下：
[0039] (1)将动物脱细胞角膜基质在浓度为0. 〇5mg/ml光敏剂溶液中浸泡30min; W40] 似将浸泡后的动物脱细胞角膜基质取出放于培养皿中，用110皿波长紫外光照 射40min;在紫外光照射20min时换面，然后继续进行照射，照射的紫外光的功率密度在 3mw/cm^；
[0041] (3)用PBS溶液浸泡0. 6h，然后振荡0.化；
[0042] (4)换PBS溶液再浸泡0.化，然后振荡0.化。 阳0创实施例2
[0044] 一种人工角膜的制备方法，其包括的步骤如下：
[0045] (1)将动物脱细胞角膜基质在浓度为4. 5mg/ml光敏剂溶液中浸泡55min;
[0046] (2)将浸泡后的动物脱细胞角膜基质取出放于培养皿中，用380皿波长紫外光照 射56min;在照射28min时换面，然后继续进行照射；所述（2)步骤中，照射的功率密度在 5800mw/cm2;
[0047] 做用PBS溶液浸泡也然后振荡化； W48] (4)更换PBS溶液，再浸泡地，然后振荡化。 W例实施例3
[0050] 一种人工角膜的制备方法，其包括的步骤如下：
[0051] (1)将动物脱细胞角膜基质在0. 2mg/ml光敏剂溶液中浸泡50min;
[0052] (2)将浸泡后的动物脱细胞角膜基质取出放于培养皿中，用365nm波长紫外光照 射30min;照射的功率密度3000mw/cm2;在第15分钟时换面，尽量保证正反两面交联均匀。 阳〇5引 做用PBS溶液浸泡3h，然后振荡Ih;
[0054] (4)更换PBS溶液再浸泡3h，然后振荡比。
[0055] 上述实施例中，所述脱细胞支架可W是猪、牛、羊、马、兔、猴等动物组织脱细胞后 产品。所述光敏剂可W是NFK，3-经基犬尿酸（3-0H-FK)，君巧琳，核黄素，FMN，FAD，视黄醒 等色素光敏剂。所述光敏剂可W是稠环酿类等天然光敏剂、化嘟类及其衍生物等光敏剂。 优选的，所述光敏剂为0.Img/ml核黄素憐酸钢溶液。紫外光照射可W用紫外固化机的紫 外光照射。最优选的，所述光敏剂为0.Img/ml核黄素憐酸钢溶液与0.Img/ml视黄醒溶液 的混合溶液，光氧化胶原交联效果最好。在震荡时，可W施加超声波处理，其中超声功率为 400-600W，优选的为500W，通过超声波空化作用，可W有效的提高脱细胞处理效果，且可W 保证透过率，去除浑浊杂质。
[0056] 其中，所述动物脱细胞角膜基质是使用脱细胞方法，去除异种角膜中的免疫原性， 制备的一种天然角膜支架材料。可W利用脱氧胆酸钢脱细胞方法制作脱细胞猪角膜基质， 最大程度的去除异种抗原成分，同时最大限度的保留角膜基质中的天然成分，保持正常的 精密超微结构。
[0057] 所述去细胞人工角膜基质的制备方法如下：
[0058] 1)利用眼球取材钻等工具将新鲜猪眼球取下后，使用眼科弯剪等工具沿角膜缘外 2mm处取下包含部分巩膜环的整个猪角膜片，去除角膜片周围虹膜和结膜组织，得到的正常 猪角膜；
[0059] 2)将猪角膜放入PBS缓冲液中震荡洗去角膜上的血液，然后至纯水中浸泡12h;
[0060] 3)将角膜浸入质量百分比浓度为6%的脱氧胆酸钢脱细胞溶液中37°C水浴震荡 处理12h，其中可W施加超声波处理，其中超声功率为900W，通过超声波空化作用，可W有 效的提高脱细胞处理效果，且可W保证透过率，去除浑浊杂质；
[0061] 4)水浴震荡条件下，PBS缓冲液中清洗；
[0062] 5)将制备的去细胞人工角膜基质密封于无菌塑料袋中，行钻6° (25kGey)照射灭菌 后，4°C下保存备用。 W63] 实施例4
[0064] 一种人工角膜的制备方法，其包括的步骤如下：将去细胞人工角膜基质在0.Img/ ml核黄素憐酸钢溶液中浸泡30min后，取出放于培养皿中，用紫外固化机在365nm波长下照 射30min，照射的功率密度不低于lOOOmw/cm2。在照射后的第15分钟时换面照射，尽量保证 正反两面能够交联均匀。交联结束后，用PBS溶液浸泡化，再振荡比，换PBS溶液浸泡化， 再振荡比。优选的，照射的功率密度为5000mw/cm2,运样光氧化交联效果最好。在震荡时， 可W施加超声波处理，其中超声功率为600W，通过超声波空化作用，可W有效的提高脱细胞 处理效果，且可W保证透过率，去除浑浊杂质。 W65] 检测试验
[0066] 一、人工角膜的透过率检测
[0067] 透过率是角膜组织工程支架的一个重要指标，真正角膜的透过率也是随着波长的 增加而增大，在波长400皿时，透过率可达80%，500皿W上的波长可W100 %通过
[0068] I材料和方法：
[0069] 1. 1主要试剂和仪器
[0070] 生理盐水、玻璃烧杯、组织綴、紫外可见分光光度计、比色皿，擦镜纸。
[0071] 1.2实验方法
[0072] 将去细胞人工角膜固定于紫外可见分光光度计的样品仓中，样本表面滴加1滴人 工泪液（减少样本表面的光线折射）后，立即在380~SOOnm波长范围内，每隔IOnm波长 取一个检测点，连续检测样本的透过率。 柳7引 2结果
[0074] 如图1所示，S种型号的去细胞人工角膜在380-800nm波长范围内，透过率均大于 72. 0 %，且在400nm时，各个型号的去细胞人工角膜透过率都达到了 80. 0 %，而在500nm及 W上波长处，透过率接近90.0%。可见研发的去细胞人工角膜与真实角膜接近，能用于角膜 组织工程。 阳〇7引二、缝合力检测
[0076] 角膜缝合是角膜移植成功的关键。角膜移植手术中，医生使用圆弧针在角膜植片 周围进行缝合操作，除了要求医生能够准确控制圆弧针的运动，使其精确地从植片上的刺 入点刺入，穿过角膜移植手术中的植片组织和植床组织，然后从植床上的刺出点刺出外，去 细胞人角膜植片也应具备足够承受10-0尼龙缝线缝合时的切割力能力W及承受正常眼内 压。 阳077] 1材料和方法
[007引 1. 1主要试剂和仪器
[00巧]5-0缝合线、力学试验机、组织綴、玻璃烧杯、生理盐水。
[0080] 1. 2实验方法
[0081] 用两根5-0的缝线分别扎入去细胞人工角膜两端边缘处，将两根缝线分别固定在 力学试验机两端夹具上，用50mm/min的速度向两端拉伸，至缝线撕裂去细胞人工角膜，记 下缝线撕裂去细胞人工角膜的最大拉力，即为缝合力。 阳0間 2结果
[0083] 如图2所示，随着位移不断增大，去细胞人工角膜拉力呈现上升趋势，达到最大载 荷后，慢慢下降。=种不同型号的去细胞人工角膜的最大载荷均大于1.00N，可见去细胞人 工角膜具备良好的生物力学性能，能够承受缝合线缝合的切割力。
[0084] 二、DNA残留检测 阳0化]1材料和方法
[0086] 1. 1主要试剂和仪器
[0087] 试剂：蛋白酶K消化用试剂：蛋白酶K，蛋白酶K缓冲液
[0088] DNA纯化用试剂：裂解液，磁珠，DNA结合液，漂洗液，溶出液
[0089] 巧光染色法检测试剂：PicoGreen染料
[0090] 仪器：磁力架，96孔板（黑色），巧光酶标仪，面ase-化ee无菌离屯、管、吸头，离屯、 机，满混悬器，高精度天平化0001)，恒溫水浴锅，超净工作台，加样枪。
[0091] 1.2实验方法 阳〇9引 1.2. 1蛋白酶K消化
[0093] 取待测去细胞人工角膜（201411003) 12片，无菌条件下将上述样品水分吸干，超 净工作台吹干2小时。精确称重约20mg-个用于消化抽提检测，=个平行样。
[0094]将样品加入 540y1TLbuffer,60y1ProteinK，56°C水浴解育 12hW上。 阳0巧]先用TLBuffer配制一系列浓度标准DNA(0、375ng/ml、750ng/ml、1500ng/ml、 3000ng/ml、6000ng/ml),并取上标准品DNA按下表加样消化，56°C水浴解育12hW上。
[0097] 1. 2. 2DNA纯化
[0098] 样品消化完毕后，罔心取上