鸡胚活性肽在制备保护细胞活力的产品中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及生物技术领域，尤其设及鸡胚活性肤在制备保护细胞活力的产品中的 应用。
【背景技术】
[0002] 皮肤作为人体最大的器官覆盖全身，是身体的保护层，对人体起着极其重要的作 用。而面部皮肤不仅能够抵御外界细菌侵入身体，也是衡量一个人健康貌美的标准。常见 的面部皮肤问题有：细纹、红血丝、癒痕、肤色暗沉等。造成运些皮肤问题的主要原因是：面 部皮肤长年累月的暴露在空气中，紫外线的照射，空气中漂浮着的污物、尘埃、细菌自然的 有害物质刺激皮肤表面。加上自身分泌的油脂、汗液、死细胞等，运些因素会影响皮肤正常 功能的发挥，造成面部皮肤细胞的活力下降甚至死亡，从而导致一系列的皮肤问题。
[0003] 鸡胚即鸡的胚胎，是受精鸡蛋解化至一定天数后，还未破壳可食用完整的生命体。 研究表明，鸡胚中包含的营养成分包括蛋白质、多肤、氨基酸、碳水化合物（葡萄糖、果糖、 半乳糖、阿拉伯糖、巧喃糖等）、脂类、脂肪酸等。另外，鸡胚中还包括抗感染成分和生物活性 物质。所述的抗感染成分有球蛋白、干扰素、胎儿蛋白、溶菌酶和憐酸二醋酶；所述的生物活 性物质有唾液酸、儿苯酪胺、膜岛素样生长因子-1、膜岛素、激肤酶、组胺酶、胆碱、红细胞生 成素、脱氧核糖核酸酶和核糖核酸酶等。相对于未解化的鸡蛋，鸡胚中营养成分，特别是小 分子蛋白或多肤的含量更加丰富，而脂肪、胆固醇等含量则大幅下降。
[0004] 鸡胚营养丰富，具有潜在的护肤抗衰、消火抗过敏、保健和药用价值。但目前对鸡 胚中肤的研究目前还较少，应对其进行在化妆品、保健品消火抗过敏的研究中进一步的开 发和利用。
【发明内容】
[0005] 有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供鸡胚活性肤在制备保护细胞活力的 产品中的应用。本发明实验证明，鸡胚活性肤能够促进细胞的生长，维持细胞的活性。
[0006] 本发明提供了鸡胚活性肤在制备保护细胞活力的产品中的应用。
[0007] 在本发明的实施例中，细胞为人成纤维细胞。
[0008] 在本发明的实施例中，鸡胚活性肤保护细胞活力保护的剂量为250μg/mL~ 500μg/血。
[0009] 在本发明实施例中，鸡胚活性肤保护细胞活力保护的剂量为250μg/mL。
[0010] 本发明还提供，鸡胚活性肤在制备的化妆品中的应用；化妆品为具有修复红血丝、 美白、桂皱、活肤细胞复苏修复或去癒痕的功能的化妆品。
[0011] 一种化妆品，包括鸡胚活性肤、透明质酸、黄原胶、荷荷己油、熊果巧和甘油。
[001引其中，鸡胚活性肤的浓度为0. 5mg/mL~3.Omg/mL，透明质酸的质量分数为0. 3%， 黄原胶质量分数0. 3 %，荷荷己油质量分数1 %，熊果巧质量分数0. 5 %，甘油的质量分数为 3 %,余重为去罔子水。
[0013] 人成纤维细胞是普遍存在于结缔组织中的一种中胚层来源的细胞，位于真皮层。 能够分泌胶原、纤连蛋白和胶原酶等细胞外基质成分。促进成纤维细胞的活性能够使皮肤 恢复弹性、改善细纹、红血丝、癒痕、肤色暗沉等问题。
[0014] 本发明经试验证实，本发明提供的鸡胚活性肤能够保护人成纤维细胞的活性，与 不添加本发明鸡胚活性肤的对照组相比，添加鸡胚活性肤的实验组成纤维细胞的活性得到 保护。因此，鸡胚活性肤能够作为改善细纹、肤色暗沉，去除红血丝、癒痕的化妆品。
[0015] 本发明制得的鸡胚活性肤中，共检测到活性肤300条，分别来自69种不同的蛋 白质。根据PSMs任eptide-SpectralMatch)，运些蛋白质主要为：0va化umin(登录号 P01012)、ApolipoproteinB(登录号Q197X2)、Ovotransferrin(登录号E1BQC2)、Histone 册.2 (登录号P84229)、Apovitellenin-1 (登录号P02659)、0voglobulinG2typeAB(登 录号I0J174)、0voglobulinG2(登录号I0J170)、Vitellogenin-2(登录号P02845)、 A1 地a-1-acidglycoprotein(登录号A7肥B0)和HistoneH4(登录号P62801)。
[0016] 本发明的鸡胚活性肤中，鸡胚活性肤的浓度为0.Ig/yL。
[0017] 本发明提取得到的鸡胚活性肤中包括18种游离氨基酸，其中包括7种必需氨基 酸，分别为苏氨酸、鄉氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸和色氨酸。另外还包括11 种非必需氨基酸，分别为天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、蛋氨酸、酪氨酸、组氨 酸、精氨酸、脫氨酸和脯氨酸。
[0018] 本发明的鸡胚活性肤中，游离氨基酸的浓度为14. 3mg/mL。
[0019] 本发明提供的鸡胚活性肤的制备方法包括：将鸡胚去壳、匀浆后，破碎细胞；经膜 酶酶解后，离屯、收集上清液，超滤截留分子量小于lOkDa的组分。
[0020] 本发明所采用的鸡胚为解化至14~19天的鸡胚。
[0021] 具体的，鸡胚的获取方式为，取SPF级受精鸡蛋，放入解化箱内进行解化，解化溫 度控制在37. 5°C，相对湿度60%，每2小时自动翻蛋一次，待解化至14~19天，
[0022] 作为优选，采用解化至16~17天的鸡胚。
[0023] 受精鸡胚解化至14天~19天的鸡胚的胚胎处于干细胞高度增长期，各种器官基 本形成。在鸡胚的解化过程中，蛋白质的代谢十分剧烈，解化期间，蛋白质和多肤的含量呈 持续上升状态。研究表明，在解化的第14天~19天，鸡胚中蛋白质和多肤的增加幅度最大， 游离氨基酸的含量也在此期间达到最高。
[0024] 制备鸡胚多肤前，解化鸡胚停止解化。具体为，将解化鸡胚放置于-20°C停止解化。 [00巧]本发明中，所述匀浆采用组织匀浆机。
[002引具体为：将解化至14d~19d的鸡蛋表面消毒，去除蛋壳后W组织匀浆机匀浆。作 为优选，匀浆的溫度为4°C，时间为20min转速为2500r/min。
[0027] 经组织匀浆，鸡胚组织粉碎，细胞在匀浆机的机械作用下初步破碎。为了进一步破 碎细胞，进行冻融和超声破碎。
[0028] 在本发明实施例中，破碎细胞包括冻融和超声破碎的步骤；
[0029]冻融的冷冻溫度为-20°C~-40°C，时间为60h~80h;溶解溫度为4°C~8°C;
[0030] 超声破碎的溫度为4°C~8°C，功率为800W~1200W，时间为15min~25min。
[0031] 在一些实施例中，破碎细胞包括冻融和超声破碎的步骤；
[0032]冻融的冷冻溫度为-30°C，时间为72h;溶解溫度为4°C;
[0033]超声破碎的溫度为4°C，功率为lOOOW，时间为20min。
[0034] 冻融使细胞在冷冻-融化的过程中，由于细胞内形成冰粒而使剩余胞液的盐浓度 增高而引起细胞破碎。本发明中，溶解的溫度为4°C，溶解至细胞匀浆融化。经冻融后，细胞 膜进一步的破裂，再进行超声波破碎，从而使细胞膜的破碎程度更加完全，提高了活性肤的 提取效率。
[0035] 在本发明中，经过超声破碎的组织匀浆与等体积的水混合后，进行酶解。
[0036] 所述酶解指在组织匀浆与膜酶共同解育，使蛋白质发生分解的过程。
[0037] 本发明中，酶解时膜酶的质量分数为2. 5%。即将膜酶加入组织匀浆至质量分数为 2. 5%。
[0038] 在本发明中，膜酶的酶活力为37000u/g。
[003引在本发明中，酶解的溫度为45°C~55°C，抑值为7. 3~7. 7,酶解时间为40min~80min。
[0040]在一些实施例中，酶解的溫度为50°C，抑值为7. 5,酶解时间为比。
[0041] 离屯、后，弃除组织碎片，收集上清液。该上清液中富含蛋白质、活性肤和游离氨基 酸。
[004引在本发明的实施例中，离屯、的转速为45(K)r/min，离屯、的时间为20min，离屯、的溫 度为4°C。
[0043] 超滤截留具体指使上清液经过lOkDa的滤膜，收集lOkDaW内的超滤液。
[0044] 本领域技