>[0127] 表1.在用大豆抗毒素混合物仅处理11天后微生物区系中有3个属显著变化
[0128]
[0129] 1 分析数据来自 MultiTag测序，其由Metabiomics 实施(http: //metabiomics .wrn/ services/)〇
[0130] 粪便微生物区系概貌的这种变化与体重减少显著相关（p〈 0.0 5)(溶媒组，从 529.25 ± 8.15g到529.00 ± 10.32g;大豆抗毒素混合物组，从529.88 ± 5.84到523.88 土 6.44g)，体重减少主要是脂肪量下降的结果（图7)。
[0131 ]粪便微生物区系概貌的改变还与血浆瘦素的降低以及血浆GLP-I (图8)和血浆胰 岛素（图9)的增加显著相关(p〈0.05)。
[0132] 大豆抗毒素混合物在仅处理11天后可刺激Blautia属菌种急剧增加。该属的菌种 是耗氢的生物，它们所具有的某些基因也表明它们能够处理多酚类分子并且能够合成乙酸 (Int. J.Syst.Evol .Microbiol .，2008，58:1896-902)。能达到结肠的膳食成分如纤维主要 被发酵为SCFA，但在这个过程中也会产生氢气和二氧化碳。在人结肠厌氧发酵期间所产生 的氢的微生物处理对于此生态系统的最佳运作是重要的（综述参见Annu. Rev. Food Sci.Technol. ,2010,1:363-95)。在结肠中发现了其它2种主要的耗氢微生物，产甲烷和硫 酸盐还原细菌。两者似乎主要都是为了利用氢而出现，并且彼此之间以及与Blautia的物种 相互竞争。
[0133] 在人肠道群落（community)关系的简化模型中，给无菌小鼠移植多形拟杆菌 (Bacteroides thetaiotaomicron)(能够将糖发酵成SCFA和氢）和史氏甲烧短杆菌 (Methanobrevibacter smithii)(能够利用氢和碳产生甲烧)可导致血清乙酸水平增加，肝 脏甘油三酯升高和肥胖增加，而多形拟杆菌与Desulfovibrio piger(能够使氢与硫反应产 生硫化氢）的定植则不可(Proc Natl Acad Sci.USA,2006,103:10011-10016)，将多形拟杆 菌与Blautia hydrogenotrophica(能够使氢与来自发酵的碳反应产生乙酸)一起移植会产 生比多形拟杆菌与史氏甲烷短杆菌共移植高得多的循环乙酸水平(J Biol Chem，2010， 285: 22082-22090)。不幸的是，在该定植配对研究中没有报道所获得的肝脏甘油三酯和脂 肪库的量。然而，这些数据表明，一种利用氢类型的细菌更有利于宿主累积热量，而其他的 细菌最善于在与碳水化合物发酵菌组合时产生乙酸或硫化氢(常与结肠病理状态相关联）。 不希望受限于任何理论，我们认为，大豆抗毒素激发的Blautia的蓬勃生长会在肠道中造成 其它两类耗氢微生物区系之间对氢的竞争。结果，结肠中更高的乙酸水平(其充当饱腹感激 素的配体，并起作用而产生无活性的饥饿激素(ghrelin))会诱发肥胖的下降。事实上，与氢 相似，大豆抗毒素是强还原剂，并且与产甲烷菌和硫酸盐还原菌不同，Blautia能够处理分 子如多酚（J Biol Chem, 2010,285:22082-22090) 〇
[0134] 实施例5.利用活化大豆豆荚纤维修正在2型糖尿病中观察到的GI生态失衡、改善 葡萄糖调节、和改良体质的人体研究
[0135] 受试者和方法
[0136] 适当筛选所需数目的受试者以满足必要的条件，实施适当的实验室评估，记录阳 性的主要和次要后果响应的测量所得，记录不良事件，并且对患者进行充分的随访。
[0137] 概述
[0138] 本设计用于示例说明具有空腹血糖障碍的超重受试者，在可随意获取饮食的条件 下，在第1餐之前1小时内或者在第2餐之前1小时以及在第3餐之前1小时内服用活化大豆豆 荚纤维后，将会：
[0139] 1.排泄的粪便与在干预开始时分析的粪便相比，以及与服用安慰剂的受试者相 比，具有增加的短链脂肪酸，减少的甲烷和硫化氢气体，增加的乙酸和增加的抗氧化剂，和
[0140] 2.与初始的口服葡萄糖耐量试验(OGTT)相比，以及与服用安慰剂的受试者相比， 具有改善的OGTT(以在摄入75g葡萄糖之前、期间和之后120分钟时的血糖和胰岛素水平来 度量）；和
[0141 ] 3.与在干预开始时的过夜空腹血糖值相比，以及与服用安慰剂的受试者相比，具 有较低的过夜空腹血糖水平（以早餐前的血糖监测结果来度量）。
[0142] 4.体质得到改善（以体重降低，体脂或％体脂降低，腰围测量值降低来度量），和
[0143] 5.与服用安慰剂的受试者相比，餐前食欲降低，用餐中饱腹感增加，和
[0144] 6.在干预第3周时，与服用安慰剂的受试者相比，会发现标准餐后GLP-I以及PYY水 平增加，活性饥饿激素水平降低。
[0145]在本研究中，受试者每天在第一餐或第二餐之前的1小时内以及在第三餐之前的1 小时内口服180ml活化大豆豆荚纤维配制物，或者口服安慰剂，其中所述安慰剂含有与活化 大豆豆荚纤维相同的总膳食纤维水平，但其是作为无活性的纤维素。安慰剂配制物含有与 活化大豆豆荚纤维的食物颜色、风味和总膳食纤维含量相匹配的纤维素。安慰剂由Merl in Development同时制备，它们将活化的大豆豆荚纤维制备成适口的、便于混合的粉。
[0146] 受试者每周报告测量结果和对任何副作用的评估。要求他们在开始活化大豆豆荚 纤维或安慰剂干预之前、以及在4周处理期结束时收集粪便样品。还要求他们记录任何副作 用及频率(检查表评估）。要求他们记录在干预的第3周的标准化餐食期间的食欲(你有多 饿)和饱腹感(你有多饱）。给他们提供合适的文书用以记录上述内容。
[0147] 受试者筛选和选择
[0148] 总共选择了 30名受试者，15名分配到活化大豆豆荚纤维，15名分配到安慰剂。
[0149] 受试者的资格
[0150] 1)年龄在18-70岁，BMI为25-40的健康男性和女性是适格的。2)空腹血糖在100_ 200mg/dl。3) 2个月期间体重稳定。
[0151]研究排除的受试者
[0152] 如下的人：
[0153] a)使用影响葡萄糖的药物的，
[0154] b)使用影响胰岛素的药物的，
[0155] c)使用影响体重的药物的，
[0156] d)使用影响菌群的药物的，
[0157] e)患有肠道疾病或者最近有肠道疾病病史的，
[0158] f)曾做过胃或肠手术的，
[0159] g)甲状腺功能减退的，
[0160] h)怀孕的，
[0161] i)患有心脏疾病的。
[0162] 实验室评估
[0163] 在筛选潜在参与者时、研究开始时、4周处理期结束时进行差异性检验。
[0164] 1)筛选:筛选受试者以排除甲状腺功能减退、怀孕和心脏疾病。下列测试对此是足 够的：T4(甲状腺素），T3(三碘甲状腺氨酸），TSH(促甲状腺激素），尿妊娠试验，血压、ECG(心 电图）。
[0165] 2)研究开始:通过初次筛选的受试者在第1周开始时评估如下指标：
[0166] a)空腹血糖和胰岛素水平
[0167] b)SMA 20(计算机连续多通道分析-20,一种具有20种不同分析物的代谢检查组）， 包括尿酸和肝功能测试
[0168] c)甘油三酯
[0169] d)胆固醇，包括各组分
[0170] e)糖化血红蛋白Al(HgbAl)
[0171] f)体重，每次等规模采样
[0172] g)体脂％和总体脂，通过DXA(双能X射线吸收测量法)确定
[0173] h)身高
[0174] i)腰围和臀围测量
[0175] j)响应75g 口服葡萄糖挑战的血糖、胰岛素 GLP-I、PYY和饥饿激素
[0176] k)使用视觉模拟评分(visual analog scale)的食欲和饱腹感评价
[0177] 1)收集粪便并冷冻保存，但直到研究结束时才进行分析
[0178] 3)研究评估结束：
[0179] a)研究开始时步骤2中所有实验室工作和评估已完成，
[0180] b)分析来自初始样品和最终样品的粪便微生物组DNA，
[0181] c)粪便分析，包括:pH、SCFA、乳铁蛋白、白细胞、黏液、分泌的免疫球蛋白A、抗麦醇 溶蛋白分泌的免疫球蛋白A、致病细菌、酵母、真菌、寄生物、甘油三酯、支链脂肪酸、长链脂 肪酸、和胆固醇。
[0182]研究设计
[0183]选择参与的受试者允许自由饮食，并给予其评价单用于评估餐前和餐后的食欲和 饱腹感。排除的食物包括酒精。强调用低热量流质代替高热量流质，例如果汁、牛奶、甜茶 (加糖的茶）、普通软饮料、含糖咖啡等。受试者被随机分配到活化大豆豆荚纤维或安慰剂处 理。无论是实验者还是受试者均不知晓谁接受了大豆豆荚纤维或安慰剂。鼓励受试者在早 餐或午餐之前1小时内和在晚餐之前1小时内服用治疗剂。
[0184]持续期间
[0185]在开始时发给受试者4周量的活化大豆豆荚纤维或安慰剂，并指示他们在第一餐 或第二餐之前1小时内服用整180ml体积，并在第三餐之前1小时内再服用含有活化大豆豆 荚纤维或安慰剂的180ml体积。其后4周自由饮食，但指示志愿者使用活化大豆豆荚纤维或 安慰剂作为唯一的餐间零食。
[0186] 结果
[0187] 本研究旨在用于示例说明活化大豆豆荚纤维：
[0188] 1)与在干预开始时分析的粪便相比，以及与服用安慰剂的受试者相比，排泄的粪 便具有更高的短链脂肪酸，更低的甲烷和硫化氢气体，更多的乙酸和更多的抗氧化剂，
[0189] 2)改善对OGTT的葡萄糖和胰岛素响应，表现是胰岛素曲线下面积减少(提高胰岛 素敏感性）；
[0190] 3)降低空腹血糖值
[0191] 4)导致体重减轻，体脂减少，和(或)体脂％降低
[0192] 5)与初次OGTT测量的最终数值相比，以及与标准餐期间安慰剂组的观察结果相 比，GLP-I和PYY对口服葡萄糖挑战的响应增加，而OGTT以及标准餐之后1小时的空腹饥饿激 素水平降低;和
[0193] 6)降低奠便pH;
[0194] 7)增加粪便SCFA
[0195] 8)增加粪便乳铁蛋白 [0196] 9)降低粪便白细胞
[0197] 10)粪便黏液减少
[0198] 11)增加粪便分泌免疫球蛋白A
[0199] 12)增加粪便抗麦醇溶蛋白分泌免疫球蛋白A
[0200] 13)降低粪便致病细菌
[0201] 14)粪便酵母、真菌和寄生物减少 [0202] 15)增加粪便甘油三酯
[0203] 16)降低粪便支链脂肪酸 [0204] 17)粪便长链脂肪酸没有变化 [0205] 18)增加粪便胆固醇。
[0206]如果受试者服用活化大豆豆荚纤维超过4周，特别是至少8周，受试者将会经历显 著的体重减少，主要是由于脂肪丧失。
[0207]实施例6.利用活化大豆豆荚纤维组合二肽基肽酶-4(DPP_4)抑制剂修正在2型糖 尿病中观察到的GI生态失衡和通过持续增加 GLP-I改善葡萄糖调节的人体研究
[0208] 受试者和方法
[0209] 适当筛选所需数目的受试者以满足必要的条件，实施适当的实验室评估，记录阳 性的主要和次要后果响应的测量所得，记录不良事件，并且对患者进行充分的随访。
[0210] 概述
[0211] 本设计用于示例说明胰岛素抵抗的2型糖尿病(T2D)受试者，在自由饮食条件下， 在第1餐或第2餐之前1小时内以及在第3餐之前1小时内服用DPP-4抑制剂和活化大豆豆荚 纤维达4周后：
[0212] 1.与在处理开始时，以及与仅服用DPP-4抑制剂的受试者相比，在处理结束时排泄 的粪便被表征为正常，和
[0213] 2.与研究开始时相比以及与仅服用DPP-4抑制剂的受试者相比，具有改善的胰岛 素敏感性，胰岛素敏感性通过口服葡萄糖耐量试验(OGTT)测量。这是通过在口服75g葡萄糖 之前、期间和120分钟后测量血液葡萄糖和胰岛素水平，并与其初始OGTT比较进行的，和 [0214] 3.与仅服用DPP-4抑制剂的受试者相比，具有改善的空腹血糖值，和
[0215] 4.与其基线值相比以及与仅服用DPP-4抑制剂的受试者相比，经历体质改善，其可 通过体重降低，体脂或％体脂降低，腰围测量值降低来测量，和
[0216] 5.与其基线值相比以及与仅服用DPP-4抑制剂的受试者相比，在用标准餐之前食 欲减少，标准餐用餐中饱腹感增加，和
[0217] 6.与其基线值以及与仅服用DPP-4抑制剂的受试者相比，发现在OGTT后1小时以及 标准餐后1小时的GLP-I以及PYY水平增加，饥饿激素水平降低。
[0218] -般规定
[0219]在本研究中，T2D患者被随机分配为口服180ml活化大豆豆荚纤维配制物或者含有 纤维素的安慰剂配制物，每天在第一餐或第二餐之前的1小时内以及在第三餐之前的1小时 内服用。患者和实验人对本分配均是不知情的。还指示所有的患者每天在第一餐之前的早 晨服用一次IOOmg推荐剂量的西他列汀（Sitagliptin)(Januvia?)，作为管理其糖尿病的 治疗。
[0220]受试者每周报告任何副作用的测量和评估结果。要求他们在试验开始之前以及在 4周治疗期结束时收集粪便样品。还要求他们记录任何副作用及频率(检查表评估）。要求他 们记录在试验开始和结束时的OGTT期间、以及在治疗第3周时的标准餐之前和期间的食欲 (你有多饿)和饱腹感(你有多饱）。给他们提供合适的文书用以记录上述内容。
[0221 ] 受试者筛选和选择
[0222]总共选择了 24位受试者，12位被指派接受西他列汀+安慰剂(含有与活化大豆豆荚 纤维相同的总膳食纤维含量、并模拟活化大豆豆荚纤维的颜色和味道)或西他列汀+活化大 豆豆荚纤维。
[0223]受试者的资格
[0224] 1)年龄在18-70岁，BMI为25-45的T2D男性和女性是适格的。
[0225] 2)空腹血糖大于125mg/'dl。
[0226] 3)2个月内体重稳定。
[0227] 研究排除的受试者
[0228] 如下的人：
[0229 ] a)使用除西他列汀之外的影响葡萄糖的药物，
[0230] b)使用除西他列汀之外的影响胰岛素的药物，
[0231] c)使用影响体重的药物，
[0232] d)使用影响菌群的药物，
[0233] e)患有肠道疾病或者最近有肠道疾病病史，
[0234] f)曾做过胃或肠手术，
[0235] g)甲状腺功能减退者，
[0236] h)怀孕者，
[0237] i)患有心脏疾病。
[0238] 实验室评估
[0239] 在筛选可能参与者时、研究开始时、4周处理期结束时进行差异性检验。
[0240] 4)筛选:筛选受试者以排除甲状腺功能减退、怀孕和心脏疾病。下列测试能够满足 此目的：T4，T3，TSH，尿妊娠试验，血压和ECG。还测量空腹血糖、空腹胰岛素和HgbAl水平作 为糖尿病状态的评估。
[0241] 5)研究开始:通过初次筛选的受试者在第1周开始时评估如下指标：
[0242] a)空腹血糖、胰岛素和HgbAl水平
[0243] b)SMA 20,包括尿酸和肝功能试验
[0244] c)血液甘油三酯
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