0387] 1)研究开始和每天
[0388] a)疼痛和不适的严重程度以5分制量表进行评估(0,无；1，轻度;2,中度;3,强烈； 4,严重）。
[0389] b)粪便稠度数据评分如下：1，很硬;2,硬;3,成形;4,松软;5,水样。没有大便赋值 为0〇
[0390] c)急迫性(0%，感觉不需要排泄一 100%，感到非常需要排泄）
[0391] d)大便频率(每天大便次数）
[0392] e)腹胀(0,没有感到腹胀；1，轻度;2,中度;3,严重）
[0393] f)排便不完全感评估(0,完全排泄的感觉；I，不完全;2,便秘）
[0394] g)体重
[0395] 2)研究开始时
[0396 ]收集粪便并冷冻保存，但直至研究结束再进行分析。
[0397] 3)研究评估结束
[0398]对初始样品和最终样品进行粪便微生物组DNA分析和完全粪便分析。
[0399] 研究设计
[0400] 被选择参与研究的受试者允许自由饮食。排除的食物包括酒精。鼓励受试者每天 在两餐之前1小时内服用活化大豆豆荚纤维或安慰剂，但在第三餐之前必须食用测试剂。
[0401] 在开始时给予受试者4周量的活化大豆豆荚纤维或安慰剂，并指示其在第一餐或 第二餐之前1小时内服用含有两种配制物中任一种的整180ml体积，并在第三餐之前1小时 内服用另一个含有两种配制物中任一种的180ml体积。
[0402]受试者每周报告IBS症状的测量和评估结果。在筛选和治疗期间，通过基于交互式 电话的系统收集每日症状数据。
[0403] 结果
[0404] 本研究设计用于示例说明活化大豆豆荚纤维而非安慰剂：
[0405] 1)改善疼痛和不适的严重程度；
[0406] 2)提高粪便稠度；
[0407] 3)降低排泄急迫性；
[0408] 4)减少大便频率；
[0409] 5)降低腹胀；
[0410] 6)增加排便完全感
[0411] 7)将粪便概貌变成健康GI微生物组的代表性概貌：
[0412] a)降低奠便pH
[0413] b)增加粪便SCFA
[0414] c)增加粪便乳铁蛋白 [0415] d)降低粪便白细胞 [0416] e)降低粪便黏液
[0417] f)增加粪便分泌免疫球蛋白A
[0418] g)增加粪便抗麦醇溶蛋白分泌免疫球蛋白A [0419] h)降低粪便致病细菌
[0420] i)降低粪便酵母、真菌、寄生物 [0421] j)增加粪便甘油三酯 [0422] k)降低粪便支链脂肪酸 [0423] 1)粪便长链脂肪酸无变化
[0424] m)增加粪便胆固醇。
[0425]利用活化大豆豆荚纤维治疗治疗特发性腹泻，例如寄生物感染、病毒感染和对食 物的症状性反应，预期在可以改善疼痛和不适的严重程度，增加粪便稠度，减少排泄急迫 性，减少大便频率，减少腹胀的感觉。
[0426] 实施例9.利用活化大豆豆荚纤维或安慰剂治疗妊娠期糖尿病的人体研究
[0427] 受试者和方法
[0428] 适当筛选所需数目的受试者以满足必要的合格条件，实施适当的实验室评估，记 录阳性的主要和次要后果响应的测量所得，记录不良事件，并且对患者进行充分的随访。 [0 429] 概述
[0430]本随机、安慰剂对照的临床试验被设计用于示例说明活化大豆豆荚纤维在妊娠期 糖尿病中的功效和耐受性。受试者被分配在第1餐或第2餐之前1小时内以及在第3餐之前1 小时内服用活化大豆豆荚纤维而非安慰剂，历时4周后：
[0431 ] 1.具有改善的血糖控制
[0432] 2.能够承受治疗
[0433] 一般规定
[0434] 在本研究中，受试者被随机选择每天在进食第一餐或第二餐之前的1小时内以及 在第三餐之前的1小时内口服180ml活化大豆豆荚纤维配制物或者安慰剂配制物。受试者和 实验者对于治疗分配都是不知情的。安慰剂配制物含有与活化大豆豆荚纤维的食物颜色、 风味和总膳食纤维含量相匹配的纤维素。安慰剂由Merlin Development制备，并与活化大 豆豆荚纤维同时制备。两种配制物由Merlin Development编码，编码与它们保持在一起，并 由研究诊所的药剂师秘密保存，直至在研究结束时收集完全部数据为止。
[0435] 受试者每周报告任何副作用的测量和评估结果。要求他们在开始活化大豆豆荚纤 维或安慰剂干预之前以及在4周处理期结束时收集粪便样品。在筛选、治疗和随访期间，每 天由患者使用指尖取血收集血糖数据。
[0436] 受试者筛选和选择
[0437] 年龄至少18岁的妇女，在24-28周患有妊娠期糖尿病（美国糖尿病协会(ADA)标 准），在节食和运动无效后需要干预治疗，不是已知的1型或2型糖尿病，没有在接受会干扰 葡萄糖代谢的药物治疗，对大豆不过敏，没有先兆子痫，没有在服用抗生素，并且没有在服 用质子栗抑制剂。
[0438] 症状和实验室评估
[0439] 在治疗期间和分娩后8-12周内对血糖控制进行评估。在治疗开始之前、治疗期间、 和分娩后8-12周进行粪便分析。
[0440]研究设计
[0441] 被选择参加的妇女在怀孕24-28周被诊断患有妊娠期糖尿病，并且在经过10天的 节食和运动之后恢复。除了节食建议之外，还鼓励受试者每天在两餐之前1小时内服用活化 大豆豆荚纤维或安慰剂，但在第三餐之前必须食用测试剂。
[0442] 在开始时给予妇女8周量的活化大豆豆荚纤维或安慰剂，并指示她们在第一餐或 第二餐之前1小时内服用含有两种配制物中任一种的整180ml体积，并在第三餐之前1小时 内服用另一个含有两种配制物中任一种的180ml体积。
[0443] 受试者每天早晨通过指尖取血测量空腹血糖，并且每周在诊所看病时报告这些数 值。在治疗2-3周和分娩后8-12周进行治疗组与安慰剂组的比较。
[0444] 结果
[0445] 本研究设计用于示例说明活化大豆豆荚纤维而非安慰剂：
[0446] 1)改善血糖控制直至足月；
[0447] 2)没有严重的不良事件；
[0448] 3)不改变剖宫产、早产、新生儿死亡率，与分娩相关的新生儿和产妇创伤数，住院 天数
[0449] 4)将粪便概貌改变为健康GI微生物区系的代表性概貌：
[0450] a)降低奠便pH
[0451 ] b)增加粪便SCFA
[0452] c)增加粪便乳铁蛋白
[0453] d)降低粪便白细胞
[0454] e)降低粪便黏液
[0455] f)增加粪便分泌免疫球蛋白A
[0456] g)增加粪便抗麦醇溶蛋白分泌免疫球蛋白A
[0457] h)降低粪便致病细菌
[0458] i)降低粪便酵母、真菌、寄生物
[0459] j)增加粪便甘油三酯
[0460] k)降低粪便支链脂肪酸
[0461 ] 1)粪便长链脂肪酸无变化
[0462] m)增加粪便胆固醇。
[0463] 实施例10.活化大豆豆荚的生产
[0464] 将三十(30)株毛豆品种（IA2032)的大豆植株播种并培植在温室中。在生殖阶段6 (R6)、或者当绿色豆荚包含的种子（豆子）已经充满豆荚时，从3株植株收获二十（20)个豆 荚。将豆荚置于塑料袋中并运送到实验室。将五(5)个豆荚转移到充满Millipore水的50ml 离心管中。试管上放一个盖，将试管颠倒几次以清洗豆荚。排掉水并重复漂洗。用相似的方 式清洗另外3组的5个豆荚。
[0465]如下对所有20个豆荚进行薄切片:将含有种子的豆荚垂直地置于食品处理机的食 品推杆中，该食品处理机经过改装，在中心有一20ml注射器。将豆荚置于该注射器中，注射 器保持豆荚垂直，并将其传送至切片刀片处，距离切割表面约2mm。食品处理机(KitehenAid? Model KFP720WH1)使用盘状切片附件，开启处理机，将豆荚和种子切成薄的横截片。将切成 片的豆荚组织转移到4个150mm培养皿中，培养皿中装有用6ml Millipore水预先浸泡的S&S Blue Ribbon#589滤纸。
[0466] 移去培养皿的盖子，用UVitron Sunray 600,紫外泛光灯（310W/m2)将组织暴露于 UV-B辐射。设置暴露为2.0分钟并将盖子复位。将来自1个培养皿的组织立即转移到50ml离 心管中，并置于_80°C冰箱中。这些样品代表温育Oh。将其它含有豆荚切片的培养皿置于平 台上的密封干燥器中，使它们与平台下面的装有饱和氯化钾的皿隔离，以将湿度固定在 83%。将干燥器置于黑暗中。
[0467] 在22.5°C温育24h，48h或72h后，将组织转移到50ml离心管中，然后保存在_80°C。 除去离心盖，用Chem Wipe纸巾覆盖试管，用橡皮筋固定。将试管置于冷冻干燥器中过夜。
[0468] 干燥后的组织使用Glen Mills磨以I .Omm筛研磨。将经干燥的组织转移到磨的料 斗中并收集粉。将磨机筛变成〇.5mm尺寸，将先前研磨的材料添加到料斗中并研磨以产生细 粉。
[0469] 为了测量通过该处理被活化的大豆化合物，实施了高效液相色谱（HPLC)。称量 0.2g粉到Iml微量离心管中，添加 Iml甲醇，并将试管在水浴中超声处理，将水位调整到刚好 使小瓶浮起来。超声处理1小时后，将微量离心管高速离心5分钟。将上清液转移到Iml离心 过滤器的滤膜上并离心5分钟，以除去细颗粒。将滤液转移到自动进样器小瓶中用于HPLC分 析。HPLC分析在具有Waters UV-可见光2996光电二极管阵列检测器的Waters 2695(Waters Associated ,Mil ford, MA)上实施。
[0470] 用Luna II C18反相柱（4.6x250mm;5ym;Phenomenex,Torrance,CA)分离大豆化合 物。使用装有同种填料的预柱以保护分析柱。溶剂A为0.1 %乙酸水溶液，溶剂B为100 %乙 臆。
[0471] 注射30μ1体积的样品，并且HPLC被编程为流速1.0 ml/min，使用158min，然后 58%B 50min，然后90%B lOmin，随后保持90%B lOmin。通过光电二极管阵列检测器在 220-400nm收集光谱。
[0472]数据
[0473] 图10的HPLC谱显示了没有温育（Oh温育）时观察到的大豆化合物种类，在温育达 7 2h后出现新的UV吸收峰。植物组织中的酶系统需要温育才能响应物理伤害(切片)和UV-B 辐射而加工出新分子。特别地，在72h鉴定的峰代表大豆抗毒素111(峰13)、大豆抗毒素 II (峰14)和大豆抗毒素1(峰15)。还鉴定了拟雌内酯(峰9)和甘氨醇(峰4)。未知的峰正在鉴定 中。从这些数据可以显见，这种处理是活化大豆豆荚组织以产生生物活性分子的有用方法。
[0474] 图11显示了所产生的3个大豆抗毒素种类的定量。一个柱条代表了 3种大豆抗毒素 的总和，如果实施温育96h，其高达1.5mg/g粉。丰度最高的物质是大豆抗毒素 III和大豆抗 毒素 I，总共占所产生的大豆抗毒素的约80 %。
[0475] 等同物
[0476] 应当理解，尽管本发明联系其详细说明书进行了描述，但是前述说明书只是意图 举例说明，并不限制本发明的范围，其范围由随附的权利要求的范围限定。其它方面、优点 和修饰均在下述权利要求的范围内。
【主权项】
1. 一种组合物，包括： 分离的植物组织，其每克植物组织具有至少0.25mg的大豆抗毒素含量。2. -种组合物，包含分离的大豆豆荚组织，所述大豆豆荚组织含有一种或多种大豆抗 毒素。3. 权利要求2的组合物，其中该一种或多种大豆抗毒素的组合总含量是至少lmg每克大 豆豆荚组织。4. 权利要求2的组合物，其中该一种或多种大豆抗毒素的组合总含量是至少5mg每克大 豆豆荚组织。5. 权利要求2的组合物，其中该一种或多种大豆抗毒素的组合总含量是至少10mg每克 大豆豆荚组织。6. 权利要求2-5中任一项的组合物，其中该大豆豆荚含有可溶性和不溶性膳食纤维。7. 权利要求1-6中任一项的组合物，其配制为适用于口服递送。8. -种食物产品，其包含来自大豆豆荚组织的膳食纤维。9. 权利要求8的食物产品，其还包含一种或多种大豆抗毒素。10. 权利要求9的食物产品，其中大豆抗毒素的组合总量是至少lOOmg。11. 一种组合物，其包含含有一种或多种大豆抗毒素的粉。12. 权利要求11的组合物，其中所述粉用大豆豆荚组织制成。13. 权利要求11-12中任一项的组合物，其中所述粉含有组合总含量为至少lmg大豆抗 毒素每克粉的一种或多种大豆抗毒素。14. 权利要求11-12中任一项的组合物，其中所述粉含有组合总含量为至少5mg大豆抗 毒素每克粉的一种或多种大豆抗毒素。15. 权利要求11 -12中任一项的组合物，其中所述粉含有组合总含量为至少1 Omg大豆抗 毒素每克粉的一种或多种大豆抗毒素。16. -种用于治疗患有或者易患超重或肥胖的受试者的方法，该方法包括向受试者口 服施用根据权利要求1-15中任一项的组合物或食物产品的步骤。17. -种用于治疗易患或者正在患有糖尿病的受试者的方法，该方法包括向受试者口 服施用根据权利要求1-15中任一项的组合物或食物产品的步骤。18. -种用于改变受试者的胃肠道微生物组的方法，其中受试者的胃肠道微生物组包 括处理脂肪和蛋白质的第一细菌群体，和发酵碳水化合物并导致短链脂肪酸增加的第二细 菌群体，该方法包括如下步骤： 向受试者施用包含有效量的一种或多种大豆抗毒素的组合物，从而改变该受试者的胃 肠道内的所述第一细菌群体和所述第二细菌群体的相对丰度。19. 权利要求18的方法，其中第一群体包括瘤胃菌(Ruminococcaceae)属，第二群体包 括 Blautia 属。20. -种用于改变受试者的胃肠道微生物组的方法，该方法包括如下步骤： 向其微生物区系类群被确定为含有低于5%丰度的Blautia水平的受试者施用包含有 效量的一种或多种大豆抗毒素的组合物，以将Blautia水平增加到至少20 %丰度。21. -种用于治疗受试者中胃肠道生态失衡的方法，包括向受试者口服施用有效量的 包含一种或多种大豆抗毒素的组合物的步骤。22. -种制造包含大豆豆荚膳食纤维和一种或多种大豆抗毒素的粉的方法，该方法包 括如下步骤： 获得大豆豆荚组织， 切片或切碎该大豆豆荚组织， 干燥该大豆豆荚组织，和 将大豆豆荚组织粉碎成粉。23. 权利要求22的方法，进一步包括向该大豆豆荚组织添加一种或多种大豆抗毒素的 步骤。24. -种粉，其是根据权利要求22或23的方法制造的。25. -种食物产品，其包含根据权利要求22或23的方法制造的粉。
【专利摘要】本发明提供了，除其他事项外，包含大豆抗毒素的可食用大豆豆荚纤维的组合物及其制造方法。在一些实施方案中，提供了治疗超重、肥胖、前驱糖尿病、糖尿病或胃肠生态失调的受试者的方法，包括口服施用包含含有大豆抗毒素的可食用大豆豆荚纤维的组合物或食品。
【IPC分类】A61P3/10, A61P3/04, A61K31/352, A61P1/00, A23L33/105, A61K36/48, A23L11/00, A23L33/21
【公开号】CN105555286
【申请号】CN201480026749
【发明人】M·L·海曼, S·M·布伊
【申请人】微生物治疗有限责任公司
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2014年3月10日
【公告号】CA2902248A1, EP2983662A1, US20140275233, WO2014150139A1