一种由地龙制成的治疗瘢痕的药物及其制法与质检方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药领域，具体涉及一种地龙与鹰爪花根的活性药物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 瘢痕是继发于创伤后创面修复过程中形成的结构异常的纤维化组织，过度愈合的 创面形成增生性瘢痕或瘢痕疙瘩影响美观，甚至瘢痕挛缩导致畸形，影响机体的功能。目前 瘢痕的治疗方法主要有药物、压迫、放射、激光以及外科手术等治疗方法，但尚无一种方法 具有绝对的权威性，各种治疗方法都在不断地探索之中。因此，如何调控瘢痕使其增生至适 当的程度，成为当今医学研究的热点。
[0003] 本发明药物是经发明人多年来精心研制，主要用于治疗瘢痕。经研究表明，本发明 药物对瘢痕具有较好的治疗效果。
[0004] 在本发明药物中原料药的基原如下： 地龙为钜蚓科环毛蚓属动物参环毛蚓和通俗环毛蚓、威廉环毛蚓、栉盲环毛蚓等的全 体。前一种药材习称"广地龙"，后三种药材习称"沪地龙"。
[0005] 鹰爪花根为番荔枝科鹰爪花属植物鹰爪花的根。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种治疗瘢痕的药物。
[0007] 本发明的另一目的是提供该药物的制备方法。
[0008] 本发明还提供了该药物的质量检测方法。
[0009] 本发明还提供了该药物的制药用途。
[0010] 本发明的目的是由以下方式实现的： 一种治疗瘢痕的药物是由以下重量份的原料制成的：地龙1~2重量份，鹰爪花根1~2 重量份。
[0011] 该药物优选是由以下重量份的原料制成的:地龙1重量份，鹰爪花根2重量份。
[0012] 该药物优选是由以下重量份的原料制成的:地龙2重量份，鹰爪花根1重量份。
[0013] 该药物优选是由以下重量份的原料制成的:地龙1重量份，鹰爪花根1重量份。
[0014] 该药物可以制备成任意外用剂型。优选制备成软膏剂。
[0015] 该药物软膏剂的制备方法为：取地龙、鹰爪花根，混合，加入3~15倍量的水浸泡 0.5~2小时，煎煮0.5~2小时，煎煮2~4次，每次0.5~2小时，提取液合并，滤过，滤液浓缩 后加入1倍量无水乙醇使沉淀，静置12~24小时，滤取上清液，浓缩至相对密度为1.05~ 1.25,加入对羟基苯甲酸乙酯，羊毛脂与凡士林，混匀，制成软膏剂。
[0016] 优选采用如下方法制备:取干燥的地龙、鹰爪花根，第一次加11倍量水浸泡1小时， 煎煮1小时，第二次加4倍量水煎煮1小时，合并水煎液，滤过，滤液浓缩后加入1倍量无水乙 醇使沉淀，静置24小时，滤取上清液，浓缩至相对密度为1.15,加入对羟基苯甲酸乙酯，羊毛 脂与凡士林，混匀，制成软膏剂。
[0017] 该药物科采用如下方法检测:采用高效液相色谱法进行蚯蚓素和6-羟基嘌呤的含 量测定： (1) 色谱条件：色谱柱:Phenomenex Luna Cis;流动相：比例为10~30:70~90的甲醇-水，其中水中含〇. 02 m〇L/L醋酸钠、0.2mL/L三乙胺、4mL/L四氢呋喃，用冰醋酸调pH至6.0; 流速:0·5~2·OmL/min;柱温：15~20°C ;检测波长:200~220nm;进样量:5~20yL; (2) 对照品溶液制备:取6-羟基嘌呤对照品、蚯蚓素对照品适量，用流动相溶解，配制成 对照品混合溶液； (3) 供试品溶液的制备:取本品，置具塞锥形瓶中，精密称定，加三氯甲烷，超声提取，加 0.3 m〇L/L~0.9m〇L/L盐酸回流，置分液漏斗中，分取酸液层，三氯甲烷液再用0.3 m〇L/L~ 0.9m〇L/L盐酸提取，合并酸水液，酸液加浓氨试液调pH值为8~10，用三氯甲烷提取，合并三 氯甲烷液，蒸干，残渣用流动相溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，即得； (4 )测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各5~20yL，注入高效液相色谱 仪，进行检测。
[0018] 优选采用如下方法检测:采用高效液相色谱法进行蚯蚓素和6-羟基嘌呤的含量测 定： (1) 色谱条件:色谱柱:Phenomenex Luna Cis;流动相：比例为20:80的甲醇-水，其中水 中含0.02 moL/L醋酸钠、0.2mL/L三乙胺、4mlVL四氢呋喃，用冰醋酸调pH至6.0;流速：ImL/ 11^11;柱温 ：18°(：;检测波长:21〇11111;进样量 :2(^; (2) 对照品溶液制备:取6-羟基嘌呤对照品、蚯蚓素对照品适量，用流动相溶解，配制成 对照品混合溶液，即6-羟基嘌呤(0.0350mg/mL)、蚯蚓素(0.0650mg/mL); (3 )供试品溶液的制备:取本品5g，置IOOmL具塞锥形瓶中，精密称定，加三氯甲烷50mL， 超声提取30min，加0.6 m〇L/L盐酸30mL回流Ih，置分液漏斗中，分取酸液层，三氯甲烷液再 用0.6moL/L盐酸提取3次，每次25mL，合并酸水液，酸液加浓氨试液调pH值为9，用三氯甲烷 提取3次，每次30mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣用流动相溶解转移至IOmL量瓶中，加流动 相稀释至刻度，摇匀，用0.45 μπι微孔滤膜滤过，即得； (4) 测定:分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各20yL，注入高效液相色谱仪，进 行检测。
[0019] 所述的药物可用于制备治疗瘢痕、甲癣的药物或保健品。
[0020] 实验一:本发明药物对兔耳增生性瘢痕作用的实验研究 本研究采用兔耳瘢痕模型，观察并研究了本发明药物对增生性瘢痕组织作用的影响， 为增生性瘢痕防治药物临床应用提供理论和实验依据。
[0021] 1材料和方法 1.1材料 本发明药物:参照本发明说明书【具体实施方式】中的实施例1制备。
[0022] 对比药物A:参照本发明说明书【具体实施方式】中的实施例2制备。
[0023] 对比药物B:参照本发明说明书【具体实施方式】中的实施例3制备。
[0024] TrizolRNA提取试剂、PCR试剂（TIANGEN)，RT试剂盒（Τ0Υ0Β0)，转化生长因子β? (TGF-m)抗体(武汉博士德有限公司），三步法染色试剂盒和DAB试剂盒(北京中杉金桥生物 技术有限公司）。
[0025] 1.2 方法 1.2.1动物模型的建立 健康成年日本大耳白兔20只，体重1.8~2.5kg，雌雄不论，购自黑龙江中医药大学实验 动物中心，分笼饲养。
[0026] 动物癒痕模型的制作参照Morris(Morris D E，Wu L，Zhao L L，et al .Acute and chronic animal models for excessive dermal scarring：quantitative[J].Plast Reconstr surg，1997，100:674- 681)方法并加以改良：速眠新臀部肌注(0.2mL/kg)麻醉。 常规消毒兔耳腹侧面，在每侧的兔耳腹侧中部沿长轴避开血管做4个边长为Icm的正方形切 口，完整切除全层皮肤及软骨膜，保留软骨，其间相距lcm，创面用湿盐水纱布压迫止血、油 纱覆盖，其上用弹力胶带固定，每日更换敷料1次，直至其痊愈后形成瘢痕增生块。
[0027] 1.2.2动物分组及处理 20只日本大耳白兔共制备160个全层皮肤缺损创面，伤后21d创面均上皮化，局部涂抹 本发明药物、对比药物A、对比药物B。
[0028] 造有瘢痕的兔子随机分为5组，其中实验治疗组3组:本发明药物治疗组:给予本发 明药物治疗、对比药物A治疗组:给予对比药物A治疗、对比药物B治疗组:给予对比药物B治 疗，另外两组分别为：阳性对照组:相同容积的生理盐水对照组、阴性对照组:未处理的瘢痕 组，各组4只兔子(32个瘢痕），均每天涂抹1次，用药11天后（即术后32d)取材、取每组瘢痕数 的一半;取材后继续涂抹剩余的瘢痕，均每天涂抹1次，用药11