胰再生源蛋白在制备促进过度炎症伤口愈合的药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及胰再生源蛋白或其衍生物在制备促进过度炎症伤口愈合的药物中的 应用。
【背景技术】
[0002] 炎症是机体对感染、刺激或损伤的防御性反应，通常情况下，它对人体是有益的， 能够帮助人体清除因刺激或损伤产生的坏死细胞或感染细胞等。然而过度的炎症反应会损 伤机体组织，导致一些疾病的发生，比如类风湿性关节炎、银肩病、伤口不愈合等。过度炎症 是皮肤伤口特别是糖尿病皮肤伤口不愈合的主要原因之一。过度炎症反应导致皮肤角质形 成细胞和成纤维细胞的增殖及迀移能力下降，细胞的凋亡增加，从而抑制伤口的正常愈合。 糖尿病伤口愈合困难已成为糖尿病病人入院率最高的主要原因。在糖尿病病患中，15%的 糖尿病病人具有伤口不愈合的症状，而在这些病人中84%病人会因为伤口不能愈合而面临 截肢的危险。因此，找到抑制糖尿病伤口炎症的药物及方法对糖尿病伤口的治疗具有重要 意义。
[0003] 胰再生源蛋白（regenerating islet-derived protein，Reg)属于 C-类凝集素 (C-type lectin)家族，含有一个N端信号肽，和一个Zn2+依赖的而非Ca2+依赖的C类凝集 素结构域。人源REG3A(由REG3a编码）蛋白属于其中一种，与其对应的是鼠源的Reglll γ 蛋白（由Reg3g编码），两者具有高度同源性。REG3A/RegIIIy蛋白最初被发现在胰腺损伤 时产生，具有促进胰腺再生的能力，在胰腺受损后能促进胰岛细胞的增殖，后来发现REG3A 能在急性肝功能衰竭中防止肝细胞凋亡，从而有望成为治疗急性肝功能衰竭的药物之一。 Reg蛋白同时还能作为一种控制肠道菌群的扩散和防止病原菌感染肠道的抗菌蛋白。
[0004] 本发明人实验室于2012年首次报导REG3A/RegIII γ在皮肤受损时产生，而且能 通过抑制角质形成细胞分化来促进皮肤角质形成细胞增殖，从而调节正常伤口的愈合，开 辟了 Reg蛋白在皮肤伤口研究的新领域。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的之一在于提出一种胰再生源蛋白的新用途，所述胰再生源蛋白能有 效抑制皮肤伤口过度炎症反应，促进伤口特别是糖尿病伤口愈合。
[0006] 本发明的另一目的在于提出了一种新的胰再生源蛋白衍生物，以及其在制备抑制 炎症反应、促进伤口愈合、抗感染的药物中的应用。
[0007] 本发明中，所述胰再生源蛋白包括SEQ ID N0.1所示的人源的胰再生源蛋白 REG3A、SEQ ID N0. 2所示的鼠源的胰再生源蛋白Reglll γ。
[0008] 其中，人源的胰再生源蛋白REG3A，含175个氨基酸，成熟肽为149个氨基酸（第 27个至175个氨基酸），其序列如SEQ ID NO. 1所示：
[0010] 鼠源的胰再生源蛋白Regllly，含174个氨基酸，成熟肽为148个氨基酸（第27 个至174个氨基酸），其序列如SEQ ID N0. 2所示：
[0012] 本发明提出的一种胰再生源蛋白衍生物，其包括SEQ ID N0.3所示的胰 再生源蛋白衍生物C-REG3A (40-173)、SEQ ID N0. 4所示的胰再生源蛋白衍生物 C-Reglllγ (40-174)。
[0013] 其中，所述胰再生源蛋白衍生物C-REG3A(40-173)，即人源胰再生源蛋白REG3A的 CTLD结构域，由REG3A第40到第173的134个氨基酸构成，其序列如SEQ N0. 3所示：
[0015] 其中，所述胰再生源蛋白衍生物C-Regllly (40-174)，即鼠源再生源蛋白 Reglll γ的CTLD结构域，由Reglll γ第40到第174的135个氨基酸构成，其序列如SEQ ID Ν0. 4 所示：
[0017] 本发明中，所述胰再生源蛋白可以是来源于天然的、合成的、基因重组的、动物的 或人的。所述胰再生源蛋白衍生物可以是合成的或是基因重组获得。
[0018] 胰再生源蛋白或其衍生物可利用现有技术制备，例如，通过PCR方法扩增得到目 的基因，用含有REG3A/RegIII γ蛋白或其衍生物的基因序列的表达载体转化适当的原核 生物的宿主细胞，如大肠杆菌，获得基因工程菌株，基因工程菌株发酵获得胰再生源蛋白或 其衍生物。
[0019] 本发明提出胰再生源蛋白在制备促进过度炎症伤口愈合的药物中的应用。本发明 提出了所述胰再生源蛋白可应用于制备抑制伤口过度炎症反应发生、促进糖尿病伤口愈合 的药物中。其中，所述胰再生源蛋白包括SEQ ID Ν0.1所示的人源胰再生源蛋白REG3A、SEQ ID NO. 2所示的鼠源胰再生源蛋白Reglll γ。其中，所述药物是利用所述胰再生源蛋白抑 制过度炎症反应促进伤口愈合。其中，所述伤口为慢性炎症伤口、压迫性溃疡伤口、褥疮伤 口、烧伤伤口、手术伤口等。其中，所述慢性炎症伤口包括糖尿病伤口、糖尿病足部溃疡等。
[0020] 本发明中，所述皮肤伤口炎症指皮肤在伤口发生时的炎症反应，炎症是机体对于 刺激的一种防御反应，通常情况是有益的，但是有的时候，过度的炎症反应会对机体造成损 伤。
[0021] 本发明中，所述过度炎症是指机体在炎症反应中，无法抵抗致炎症因子或感染引 起的损伤，常表现为炎症因子如TNF、IL-6的持续高表达或扩散，不断损伤组织，造成炎症 过程迀延不愈。
[0022] 本发明中，所述过度炎症伤口可以是慢性炎症伤口、压迫性溃疡伤口、褥疮伤口、 烧伤伤口、手术伤口等。其中，所述慢性炎症伤口包括糖尿病患伤口、糖尿病性足部溃疡。慢 性炎症相对于急性炎症，致炎因子持续时间较长，数月至数年以上。
[0023] 本发明还提供了胰再生源蛋白在制备治疗糖尿病伤口愈合的药物中的应用。本发 明还提供了胰再生源蛋白在抑制糖尿病皮肤伤口过度炎症发生中的应用。局部应用胰再生 源蛋白能降低糖尿病伤口周围炎症反应，促进伤口愈合。在一个具体实施方案中，通过将胰 再生源蛋白注射糖尿病伤口，从而抑制皮肤伤口过度炎症发生，促进伤口愈合。
[0024] 本发明还提供了胰再生源蛋白或其衍生物在抑制Toll-样受体3的配体poly (I : C)诱导的炎症中的应用，其中，胰再生源蛋白、胰再生源蛋白衍生物均可用于作为Poly(I : C)诱导的炎症反应的抑制剂。所述胰再生源蛋白抑制伤口周围炎症因子TNF-α及IL-6的 表达。研究表明：非感染伤口的炎症反应主要依赖Toll-样受体3,而本发明中，胰再生源蛋 白或其衍生物抑制Toll-样受体3的配体poly (I :C)诱导的人原代角质形成细胞TNF-a 和IL-6的表达，从细胞水平证明胰再生源蛋白或其衍生物对伤口炎症有抑制作用。
[0025] 本发明提出了胰再生源蛋白衍生物在制备抑制炎症反应、制备促进伤口愈合的药 物中的应用。本发明提供了利用胰再生源蛋白衍生物抑制炎症反应、促进伤口愈合的方法。 在一个具体实施方案中，通过将胰再生源蛋白衍生物注射伤口，从而促进伤口愈合。其中， 所述胰再生源蛋白衍生物包括SEQ ID N0.3所示的人源胰再生源蛋白衍生物C-REG3A、SEQ ID NO. 4所示的鼠源胰再生源蛋白C-RegIII γ。
[0026] 其中，所述伤口包括感染伤口或非感染伤口；所述非感染伤口包括正常伤口、慢性 炎症伤口、压迫性溃疡伤口、褥疮伤口、烧伤伤口、手术伤口；所述慢性炎症伤口包括糖尿病 伤口、糖尿病足部溃疡。
[0027] 本发明还提供了胰再生源蛋白或其衍生物在化妆品、护肤用品中作为伤口愈合促 进剂或伤口发炎抑制剂或抗感染剂的应用。胰再生源蛋白或其衍生物可用于配制成化妆 品、护肤品、日常用品或药品等。其中，所述胰再生源蛋白包括SEQ ID NO. 1所示的人源的胰 再生源蛋白REG3A、SEQIDN0.2所示的鼠源的胰再生源蛋白RegIII γ。其中，所述胰再生 源蛋白衍生物包括SEQ ID N0. 3所示的人源的胰再生源蛋白衍生物C-REG3A、SEQ ID N0. 4 所示的鼠源的胰再生源蛋白衍生物C-RegIII γ。
[0028] 本发明还提供了胰再生源蛋白衍生物在制备杀菌药物、在制备抗感染药物中的应 用。本发明胰再生源蛋白衍生物可作为杀菌剂。胰再生源蛋白衍生物可用于制备抗感染药 物。其中，