专利名称：包含脂肪酶的洗涤剂组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及对气味生成具有改善的洗涤效果的脂肪酶变体以及它们的制备方法。 它尤其涉及疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)脂肪酶的变体。发明背景 脂肪酶可用作例如洗涤剂酶以从衣服和其他纺织物上除去脂质或脂肪污渍。因 此，将来源于疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)(别名嗜热羊毛状腐质 霉(Humicola lanuginosa)，EP 258068 和 EP305216)的脂肪酶以商品名 Lipolase (Novozymes A/S的产品)销售用于去污剂。WO 0060063描述了疏绵状嗜热丝孢菌 (T. lanuginosus)脂肪酶的变体，它在洗涤剂溶液中具有特别好的一次洗净性能。WO 9704079、W09707202和WO 0032758也公开了疏绵状嗜热丝孢菌(T. lanuginosus)脂肪酶 的变体。在一些专利申请中，受关注的是最小化产生气味的短链脂肪酸的形成。因此，已知 具有脂肪酶的衣物洗涤剂有时可留下连结到被奶弄污的布料上的残余气味(EP 430315)。 WO 02062973公开了其中通过连结C-末端延伸已经减少了气味生成的脂肪酶变体。最近公 布的WO 07087508公开了其中已经通过将突变导入在亲本脂肪酶中鉴定的一个或多个区 域中减少了气味生成的脂肪酶变体。WO 07087503描述了具有脂肪酶活性的多肽，所述多肽 在说明书中的给定测试条件下还具有至少0. 8的RP和至少1. 1的BR。发明概述在第一方面，本发明涉及包含具有脂肪酶活性的第一多肽的洗涤剂组合物，其中 所述多肽为具有至少一种以下参数的多肽(a)相对于280nm(A280)的吸光度，小于500LU/ A280的脂肪酶活性(LU)，其中将一单位LU (ILU)定义为在pH7、30°C下每分钟能释放1微摩 尔丁酸的酶量，并且所述多肽的吸光度在280nm测量；(b)小于0. 5的气味性能风险(R)，其 中R通过计算从多肽洗涤样本释放的丁酸量和从基准多肽洗涤样本释放的丁酸量之间的 比率得到，上述两个丁酸量的值已经用从非多肽洗涤样本中释放的丁酸量校正；或者(C) 至少1. 8的效险因子(BR)，其中将BR定义为平均洗涤性能(平均RP)除以气味性能风险 (R)。在第二方面，本发明涉及包含具有脂肪酶活性的第二多肽的洗涤剂组合物，所述 多肽在以下位点上包含氨基酸改变T231R+N233R+I255A+P256K和至少一个以下位点(a) S58A+V60S+A150G+L227G ；或者(b)E210V/G ；这些位点对应于 SEQ ID NO :2。在另一方面，本发明涉及使用包含多肽的洗涤剂组合物减少在脂质水解期间生成 短链脂肪酸时的气味的形成。附图简述
图1显示脂肪酶比对。序列表SEQ ID NO :1显示编码来自疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanoginosus)的脂 肪酶的DNA序列。
SEQ ID NO :2显示来自疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanoginosus)的脂肪酶 的氨基酸序列。SEQ ID NO :3显示来自犁头霉属(Absidia reflexa)的脂肪酶的氨基酸序列。 SEQ ID NO :4显示来自伞状犁头霉(Absidia corymb if era)的脂肪酶的氨基酸序 列。SEQ ID NO :5显示来自米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)的脂肪酶的氨基酸序列。SEQ ID NO :6显示来自米根霉(Rhizopus oryzae)的脂肪酶的氨基酸序列。SEQ ID NO :7显示来自曲霉菌曲霉(Aspergillus niger)的脂肪酶的氨基酸序列。SEQ ID NO :8显示来自塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)的脂肪酶的氨基酸 序列。SEQ ID NO :9显示来自尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporrum)的脂肪酶的氨基酸序 列。SEQ ID NO 10显示来自异孢镰孢菌(Fusarium heterosporum)的脂肪酶的氨基 酸序列。SEQ ID NO :11显示来自米曲霉(Aspergillus oryzae)的脂肪酶的氨基酸序列。SEQ ID NO :12显示来自沙门柏干酪青霉(Penicillium camemberti)的脂肪酶的
氨基酸序列。SEQ ID NO 13显示来自臭曲霉(Aspergillus foetidus)的脂肪酶的氨基酸序列。SEQ ID NO :14显示来自曲霉菌曲霉(Aspergillus niger)的脂肪酶的氨基酸序 列。SEQ ID NO :15显示来自米曲霉(Aspergillus oryzae)的脂肪酶的氨基酸序列。SEQ ID NO 16显示来自Landerina penisapora的脂肪酶的氨基酸序列。发明详述使用脂肪酶移除脂质和脂肪污渍是本领域已知的，其中导致释放游离短链类脂如 丁酸的脂肪酶的活性与不可取的气味相关联。甘油三丁酸酯底物的水解导致丁酸的释放。 已经令人惊讶地发现，本发明的多肽具有低的比活性，以LU/A280进行测量；对甘油三丁酸 酯在中性PH下，参见实施例2和表3。效险因子(BR)通过用相对(洗涤)性能(洗涤效果，RP)除以气味性能风险(风 险，R)进行计算。洗涤性能可通过自动化机械应力检测分析法(AMSA)进行测量，参见实施 例3，气味产生可直接通过气相色谱仪进行测量，参见实施例4和表3。减少的气味影响BR 并且可导致BR提高。此外，已经发现本发明的多肽产生的气味减少并且BR随本领域已知 的脂肪酶增加，参见实施例5和表3。脂肪酶活性(LU)如本文所用，术语“脂肪酶活性”是指羧酸酯水解酶活性，该 酶催化三酰基甘油的水解，形成二酰基甘油和羧酸酯。就本发明的目的而言，脂肪酶活 性按照以下方法测定使用阿拉伯树胶作为乳化剂，通过乳化甘油三丁酸酯(glycerin tributyrate)制备脂肪酶的底物。在30°C，pH7或9条件下水解甘油三丁酸酯，随后在pH 自动恒定器中进行滴定实验。将一单位脂肪酶活性(ILU)定义为在30°C，pH7条件下能够 每分钟释放1微摩尔丁酸的酶量。气味性能风险(R)如本文所用，术语“气味性能风险”是指从多肽洗涤样本释放的丁酸量和从基准多肽洗涤样本释放的丁酸量之间的比率，上述两个丁酸量的值已经用从 非多肽洗涤样本中释放的丁酸量校正。相对性能(RP)如本文所用，术语“相对性能”是指与基准多肽的洗涤性能相比较 的所述多肽的洗涤性能。就本发明的目的而言，相对性能按照实施例3所述的方法进行测定。
基准多肽如本文所用，术语“基准多肽”、“基准酶”或“基准脂肪酶”是指SEQ ID NO 2的成熟部分，它具有T231R+N233R取代。效险因子(BR)如本文所用，术语“效险因子”是指与气味产生风险(R)相比较的 平均相对性能(平均RP)，用下式计算BR = RPavg/R。氨基酸修改形式的侖名根据本发明描述脂肪酶变体时，使用以下命名法以便于参考初始氨基酸位置 取代氨基酸。根据该命名法，例如在位点195上将谷氨酸取代成甘氨酸以G195E表示。在相同 位点上缺失甘氨酸以G195*表示，插入附加氨基酸残基如赖氨酸以G195GK表示。其中特异 性脂肪酶与其他脂肪酶相比包含“缺失”并且在同样位点插入一个氨基酸用*36D表示，指 在位点36插入一个天冬氨酸。多个突变用加号分开，即，R170Y+G195E，代表在位点170和195上分别用精氨酸和
甘氨酸取代酪氨酸和谷氨酸的突变。当施加所述的比对方法时，X231指示在亲本多肽中对应于位点231的氨基酸。 X231R指示氨基酸被R取代。就SEQ ID NO :2而言，X为T，因此X231R指示R在位点231 取代T，其中在一个位点(例如231)的氨基酸可被另一个选自一组氨基酸的氨基酸取代，例 如所述组由R和P和y组成，这将用X231R/P/Y表示。在所有情况下，使用公认的IUPAC单字母或三字母氨基酸缩写。同一性如本文所用，术语“同一性”是指两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列 之间的相关性，这种相关性用参数“同一性，，描述。就本发明目的而言，两个氨基酸序列的比对通过来自EMBOSS软件包(http:// emboss, org)，版本2. 8. 0的Needle程序进行测定。Needle程序执行全序列比对算法，如 Needleman, S. B.和 Wunsch，C. D. (1970) J. Mol. Biol. 48，443-453 所述。使用的取代矩阵为 BL0SUM62，空位开放罚分为10，空位延伸罚分为0. 5。本发明的一个氨基酸序列(“发明序列”；例如SEQ ID NO 2的氨基酸1至269)和 一个不同氨基酸序列(“外源序列”)之间同一性程度以两个序列的比对中的精确匹配数除 以“发明序列”的长度或“外源序列”的长度来计算，无论其中哪一个序列是最短的。结果 表示为同一性百分比。当“发明序列”和“外源序列”在重叠的相同位点具有相同氨基酸残基时发生精确 匹配。序列长度是该序列的氨基酸数目(例如SEQ ID NO :2的长度是269)。可使用上述方法计算同一性以及同源性并用于比对。在本发明的上下文中已经如 下所述计算同源性和比对。同源性和比对就本发明的目的而言，同源性程度可通过本领域已知的计算机程序进行合适的测定，例如 GCG 程序软件包提供的 GAP (Program Manual for the Wisconsin Package，第 8 版，1994 年 8 月，Genetics Computer Group,575 Science Drive,Madison,Wisconsin,USA 53711)(Needleman, S. B.和 Wunsch，C. D.，(1970)，Journal of Molecular Biology,48, 443-45)，使用GAP以及以下设置进行多肽序列比对GAP产生罚分为3. 0，并且GAP延伸罚 分为0.1。 在本发明中，在犁头霉属(Absidia reflexa)、伞状犁头霉(Absidia corymbefera)、米黑根毛霉(Rhizmucor miehei)、德氏根霉(rhizopus delemar)、曲霉菌 曲霉(Aspergillus niger)、塔宾曲霉(Aspergillus tubigensis)、尖抱键抱菌(Fusarium oxysporum)、异抱键抱菌(Fusariumheterosporum)、米曲霉(Aspergillus oryzea)、沙门 柏干酪青霉(Penicilium camembertii)、臭曲霉(Aspergillus foetidus)、曲霉菌曲霉 (Aspergillus niger)、疏绵状嗜热丝抱菌(Thermomyces lanoginosus)(别名Humi col a lanuginose)和Landerina penisapora的脂肪酶序列中的相应(或同源)位点通过图1所 示的比对进行限定。为了发现比对中不显示的脂肪酶序列中的同源位点，受关注的序列与图1中显 示的序列进行比对。使用对GAP程序中存在的大多数同源序列进行的GAP比对将新序列 与图1中的本比对进行比对。在GCG程序软件包中提供了 GAP (Program Manual for the Wisconsin Package,第8版，1994年8月，Genetics Computer Group,575 Science Drive, Madison, Wisconsin, USA 53711) (Needleman, S. B.禾口 Wunsch，C. D. ， (1970)，Journal of Molecular Biology，48，443-45)。多肽序列比对使用以下设置GAP产生罚分为3.0，并且 GAP延伸罚分为0. 1。具有脂肪酶活件的多肽来源可使用任何适用的多肽。在一些实施方案中，多肽可为真菌多肽。多肽可为来源于以下酵母属的酵母多肽如假丝酵母属(Candida)、克鲁维酵 母属(Kluyveromyces)、毕赤酵母属(Pichia)、糖酵母属(Saccharomyces)、粟酒裂殖酵 母属(Schizosaccharomyces)、或耶氏酵母属(Yarrowia)；或者更优选的来源于以下菌 属的丝状真菌多肽如顶孢霉菌属(Acremonium)、曲霉属(Aspergillus)、出芽短梗霉属 (Aureobasidium)、隐球酵母属(Cryptococcus)、线黑粉酵母属(Filobasidium)、镰孢菌 属(Fusarium)、特异腐质霉属(Humicola)、稻瘟病菌属(Magnaporthe)、毛霉属(Mucor)、 胃(Myceliophthora)、@ 胃貞胃M (Neocallimastix) > J^C^M (Neurospora) > 拟青霉属(Paecilomyces)、青霉属(Penicillium)、厌气性瘤胃真菌属(Piromyces)、裂 褶菌属(Schizophyllum)、踝节菌属(Talaromyces)、嗜热子囊菌属(Thermoascus)、草 根霉属(Thielavia)、弯颈霉属(Tolypocladium)、嗜热真菌属(Thermomyces)或木霉属 (Trichoderma)。此外多肽可为具有脂肪酶活性的卡尔斯伯酵母(Saccharomyces carlsbergensis)、啤酒糖酵母(Saccharomyces cerevisiae)、糖化酵母(Saccharomyces diastaticus)、道氏酵母(Saccharomyces douglasii)、克鲁维酵母(Saccharomyces kluyveri)、奇异酵母(Saccharomyces norbensis)、或卵形酵母(Saccharomyces oviformis)多月太。作为另外一种选择，多肽为棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)、泡盛曲霉(Aspergillus awamori)、烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、臭曲霉(Aspergillus foetidus)、曰本曲霉(Aspergillus japonicus)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、曲 霉菌曲霉(Aspergillus niger)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、塔宾曲霉(Aspergillus turbigensis)、拟杆镰孢菌(Fusarium bactridioides)、蜀黍专化型镰孢菌(Fusarium cerealis)、克地,廉抱菌(Fusarium crookwellense)、黄色,廉抱菌(Fusarium culmorum)、 禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)、禾谷镰孢菌(Fusarium graminum)、异孢镰孢菌 (Fusarium heterosporum)、Fusarium negundi、尖抱德抱菌(Fusarium oxysporum)、 多枝镰孢菌(Fusarium reticulatum)、粉红镰孢菌(Fusarium roseum)、接骨木 德抱菌(Fusarium sambucinum)、Fusarium sarcochroum、前病德抱菌(Fusarium sporotrichioides)、硫色,廉抱菌(Fusarium sulphureum)、族囊,廉抱菌(Fusarium torulosum)、类丝抱德抱菌(Fusarium trichothecioides)、,廉抱霉(Fusarium venentum)、 特异腐质霉(Humicola insolens)、疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanoginosus)(别 ^ :Humicola lanuginose) λ τ|<: M ^ β (Mucor miehei)(Myceliophthora
thermophila)、粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)、产紫青霉(Penicillium purpurogenum)、哈茨木毒(Trichoderma harzianum)、康宁木毒(Trichoderma koningii)、 长枝木霉(Trichoderma longibrachiatum)、里氏木霉(Trichoderma reesei)、绿色木霉 (Trichoderma viride)多月太。在一些实施方案中本发明涉及嗜热真菌脂肪酶多肽。在一些实施方案中，本发明涉及疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus) 脂肪酶多肽。在一些实施方案中本发明涉及多肽，其中多肽与SEQ ID NO :2具有至少50%，至 少60%，至少70%，至少80%，至少85%，至少90%，至少95%，至少96%，至少97%，至少 98%，至少99%或100%的同一性。鉴定具有脂肪酶活件的多肽的改变下文涉及的位点是SEQ ID NO 2中的氨基酸残基位点。使用在段落“同源性和比 对”中描述的方法，寻找在不同脂肪酶中的氨基酸残基的对应或同源位点。在一些实施方案中本发明涉及具有脂肪酶活性的第一多肽，其中所述多肽具有至 少其中一种以下参数(a)相对于280nm(A280)的吸光度小于500、小于450、小于400、小 于350、小于300、小于250、小于200、小于150、小于100或小于50LU/A280的脂肪酶活性 (LU)，其中将一单位LU(ILU)定义为在pH7、30°C下每分钟能释放1微摩尔丁酸的酶量，并且 所述多肽的吸光度在280nm测量；(b)小于0. 5、小于0. 4、小于0. 3、小于0. 2、小于0. 1、或 小于0. 05的气味性能风险(R)，其中R通过计算从多肽洗涤样本释放的丁酸量和从基准多 肽洗涤样本释放的丁酸量间的比率得到，上述两个丁酸量的值已经用从非多肽洗涤样本中 释放的丁酸量校正；或者(c)至少1. 8、至少1. 9、至少2. O、至少2. 5、至少3. O、至少4. O、至 少5. O、或至少6. O的效险因子(BR)，其中将BR定义为平均洗涤性能(平均RP)除以气味 性能风险(R)。在一些实施 方案中本发明涉及第一多肽，其中所述多肽包含在以下位点上的改 变位点 T231R+N233R+I255A+P256K 和至少一个以下位点(a) S58A+V60S+A150G+L227G ；或 (b)E210V/G ；这些位点对应于SEQID NO :2。
在一些实施方案中本发明涉及第一多肽，所述多肽还包含在位点I86V或T143S中 的至少一个位点上的氨基酸改变。在一些实施方案中本发明涉及第一多肽，其中所述多肽还包含至少一个改变，所 述至少一个改变选自在对应于SEQ ID NO 2的位点E1、D27、N33、S83、G91、N94、K98、E99、 D102、Dill、G163、I 202、E210、S216、L259或L269的位点上取代、缺失或添加至少一个氨
基酸。
在一些实施方案中本发明涉及第一多肽，其中至少一个改变选自由下列组成的 组=SEQ ID NO 2 的 E1N/*、D27N、N33Q、S83T、G91N、N94R、K98I、E99K、D102A、D111N、G163K、 I 202L、E210A、S216P、L259F、或 L269APIA。在一些实施方案中本发明涉及第二多肽，所述多肽包含在位点 T231R+N233R+I255A+P256K 和下列至少之一的氨基酸改变(a) S58A+V60S+A150G+L227G ； 或(b)E210V/G ；这些位点对应于SEQ ID NO :2。在一些实施方案中本发明涉及第二多肽，所述多肽还包含在位点I86V或T143S中 的至少一个位点上的氨基酸改变。在一些实施方案中本发明涉及第二多肽，其中所述多肽还包含至少一个改变，所 述至少一个改变选自在对应于SEQ ID NO 2的位点E1、D27、N33、S83、G91、N94、K98、E99、 D102、D111、G163、I202、E210、S216、L259或L269的位点上取代、缺失或添加至少一个氨基酸。在一些实施方案中本发明涉及第二多肽，其中至少一个改变选自由下列组成的 组=SEQ ID NO 2 的 E1N/*、D27N、N33Q、S83T、G91N、N94R、K98I、E99K、D102A、D111N、G163K、 I202L、E210A、S216P、L259F、或 L269APIA。在一些实施方案中本发明涉及第一多肽，其中所述多肽包含改变，所述改变选自 由下列组成的组(a)T231R+N233R+L269APIA ； (b) S58T+V60K+A150G+T231R+N233I+D234G ； (c)S58T+V60K+I86V+D102A+A150G+L227G+T231R+N233R+P256K ； (d)S58N+V60S+I86P+T231R +N233R+P256S ； (e)S58N+V60S+I86S+L227G+T231R+N233R+P256S ；和(f)S58N+V60S+I86T+L 227G+T231R+N233R+P256L。在一些实施方案中本发明涉及第一多肽或第二多肽，其中所述多肽包含改变，所 述改变选自由下列组成的组(a) S58A+V60S+S83T+A150G+L227G+T231R+N233R+I255A+P256 K ； (b)S58A+V60S+I86V+A150G+L227G+T231R+N233R+I255A+P256K ； (c)S58A+V60S+I86V+T1 43S+A150G+L227G+T231R+N233R+I255A+P256K ； (d)S58A+V60S+I86V+T143S+A150G+G163K+S 216P+L227G+T231R+N233R+I255A+P256K ； (e)E1*+S58A+V60S+I86V+T143S+A150G+L227G+T2 31R+N233R+I255A+P256K ； (f)S58A+V60S+I86V+K98I+E99K+T143S+A150G+L227G+T231R+N23 3R+I255A+P256K；(g)E1N+S58A+V60S+I86V+K98I+E99K+T143S+A150G+L227G+T231R+N233R+ I255A+P256K+L259F ； (h)S58A+V60S+I86V+K98I+E99K+D102A+T143S+A150G+L227G+T231R+N 233R+I255A+P256K ； (i)N33Q+S58A+V60S+I86V+T143S+A150G+L227G+T231R+N233R+I255A+P 256K ； (j)El*+S58A+V60S+I86V+K98I+E99K+T143S+A150G+L227G+T231R+N233R+I255A+P256 K；(k)E1N+S58A+V60S+I86V+K98I+E99K+T143S+A150G+S216P+L227G+T231R+N233R+I255A+P 256K ； (l)D27N+S58A+V60S+I86V+ffllN+N94R+DlllN+T143S+A150G+L227G+T231R+N233R+I25 5A+P256K ； (m)ElN+S58A+V60S+I86V+K98I+E99K+T143S+A150G+E210A+S216P+L227G+T231R+N233R+I255A+P256K ； (η)A150G+E210V+T231R+N233R+I255A+P256K ；和(ο)I202L+E210G+T2 31R+N233R+I255A+P256K0表1 多肽中可包含的改变
权利要求
一种包含具有脂肪酶活性的多肽的洗涤剂组合物，其中所述多肽是具有下列至少之一的多肽(a)相对于280nm(A280)的吸光度，小于500LU/A280的脂肪酶活性(LU)，其中将一单位LU(1LU)定义为在pH7、30℃下每分钟能释放1微摩尔丁酸的酶量，并且所述多肽的吸光度在280nm测量；(b)低于0.5的气味性能风险(R)，其中R通过计算从多肽洗涤样本释放的丁酸量和从基准多肽洗涤样本释放的丁酸量之间的比率得到，上述两个丁酸量的值已经用从非多肽洗涤样本中释放的丁酸量校正；或(c)至少1.8的效险因子(BR)，其中将BR定义为所述平均洗涤性能(RP平均)除以所述气味性能风险(R)。
2.如权利要求1所述的组合物，其中所述多肽包含在位点T231R+N233R+I255A+P256K 和下列至少之一的氨基酸改变(a)S58A+V60S+A150G+L227G ；或(b)E210V/G；其中所述位点对应于SEQ ID NO :2。
3.如前述任一项权利要求所述的组合物，其中所述多肽包含至少一个在位点I86V或 T143S上的氨基酸改变。
4.如权利要求2所述的组合物，其中所述多肽还包含至少一个改变，所述至少一个改 变选自在对应于 SEQ ID NO 2 的位点 El、D27、N33、S83、G91、N94、K98、E99、D102、Dili、 G163、1202、E210、S216、L259或L269的位点上取代、缺失或添加至少一个氨基酸。
5.如权利要求4所述的组合物，其中所述多肽包含至少一个改变，所述至少一个改变 选自由下列组成的组:SEQ ID NO 2 的 ElN/*、D27N、N33Q、S83T、G91N、N94R、K98I、E99K、 D102A、D111N、G163K、I202L、E210A、S216P、L259F、或 L269APIA。
6.一种包含多肽的洗涤剂组合物，所述多肽包含在位点T231R+N233R+I255A+P256K和 至少下列之一的氨基酸改变(a)S58A+V60S+A150G+L227G ；或(b)E210V/G；其中所述位点对应于SEQ ID NO :2。
7.如权利要求6所述的组合物，其中所述多肽包含至少一个在位点I86V或T143S上的氨基酸改变。
8.如权利要求6所述的组合物，其中所述多肽还包含至少一个改变，所述至少一个改 变选自在对应于 SEQ ID NO 2 的位点 El、D27、N33、S83、G91、N94、K98、E99、D102、Dili、 G163、1202、E210、S216、L259或L269的位点上取代、缺失或添加至少一个氨基酸。
9.如权利要求8所述的组合物，其中所述多肽包含至少一个改变，所述至少一个改变 选自由下列组成的组:SEQ ID NO 2 的 ElN/*、D27N、N33Q、S83T、G91N、N94R、K98I、E99K、 D102A、D111N、G163K、I202L、E210A、S216P、L259F、或 L269APIA。
10.如权利要求1所述的组合物，其中所述多肽包含改变，所述改变选自由下列组成的组(a)T231R+N233R+L269APIA ；(b)S58T+V60K+A150G+T231R+N233I+D234G；(c)S58T+V60K+I86V+D102A+A150G+L227G+T231R+N233R+P256K；(d)S58N+V60S+I86P+T231R+N233R+P256S；(e)S58N+V60S+I86S+L227G+T231R+N233R+P256S；禾口(f)S58N+V60S+I86T+L227G+T231R+N233R+P256L。
11.如权利要求1所述的组合物，其中所述多肽包含改变，所述改变选自由下列组成的组(a)S58A+V60S+I83T+A150G+L227G+T231R+N233R+I255A+P256K；(b)S58A+V60S+I86V+A150G+L227G+T231R+N233R+I255A+P256K；(c)S58A+V60S+I86V+T143S+A150G+L227G+T231R+N233R+I255A+P256K；(d)S58A+V60S+I86V+T143S+A150G+G163K+S216P+L227G+T231R+N233R+I255A+P256K；(e)Er+S58A+V60S+I86V+T143S+A150G+L227G+T231R+N233R+I255A+P256K；(f)S58A+V60S+I86V+K98I+E99K+T143S+A150G+L227G+T231R+N233R+I255A+P256K；(g)ElN+S58A+V60S+I86V+K98I+E99K+T143S+A150G+L227G+T231R+N233R+I255A+P256K +L259F ；(h)S58A+V60S+I86V+K98I+E99K+D102A+T143S+A150G+L227G+T231R+N233R+I255A+P256K ；(i)N33Q+S58A+V60S+I86V+T143S+A150G+L227G+T231R+N233R+I255A+P256K； (j)Er+S58A+V60S+I86V+K98I+E99K+T143S+A150G+L227G+T231R+N233R+I255A+P256K；(k)ElN+S58A+V60S+I86V+K98I+E99K+T143S+A150G+S216P+L227G+T231R+N233R+I255A +P256K ；(1)D27N+S58A+V60S+I86V+G91N+N94R+D111N+T143S+A150G+L227G+T231R+N233R+I255 A+P256K ；(m)ElN+S58A+V60S+I86V+K98I+E99K+T143S+A150G+E210A+S216P+L227G+T231R+N233R +I255A+P256K ；(n)A150G+E210V+T231R+N233R+I255A+P256K ；和 (o)202L+E210G+T231R+N233R+I255A+P256Ko
12.如权利要求6所述的组合物，其中所述多肽包含改变，所述改变选自由下列组成的组(a)S58A+V60S+I83T+A150G+L227G+T231R+N233R+I255A+P256K；(b)S58A+V60S+I86V+A150G+L227G+T231R+N233R+I255A+P256K；(c)S58A+V60S+I86V+T143S+A150G+L227G+T231R+N233R+I255A+P256K；(d)S58A+V60S+I86V+T143S+A150G+G163K+S216P+L227G+T231R+N233R+I255A+P256K；(e)Er+S58A+V60S+I86V+T143S+A150G+L227G+T231R+N233R+I255A+P256K；(f)S58A+V60S+I86V+K98I+E99K+T143S+A150G+L227G+T231R+N233R+I255A+P256K；(g)ElN+S58A+V60S+I86V+K98I+E99K+T143S+A150G+L227G+T231R+N233R+I255A+P256K +L259F ；(h)S58A+V60S+I86V+K98I+E99K+D102A+T143S+A150G+L227G+T231R+N233R+I255A+P256K ；(i)N33Q+S58A+V60S+I86V+T143S+A150G+L227G+T231R+N233R+I255A+P256K ； (j)Er+S58A+V60S+I86V+K98I+E99K+T143S+A150G+L227G+T231R+N233R+I255A+P256K；(k)ElN+S58A+V60S+I86V+K98I+E99K+T143S+A150G+S216P+L227G+T231R+N233R+I255A +P256K ；(1)D27N+S58A+V60S+I86V+G91N+N94R+D111N+T143S+A150G+L227G+T231R+N233R+I255 A+P256K ；(m)ElN+S58A+V60S+I86V+K98I+E99K+T143S+A150G+E210A+S216P+L227G+T231R+N233R +I255A+P256K ；(n)A150G+E210V+T231R+N233R+I255A+P256K ；和 (o)202L+E210G+T231R+N233R+I255A+P256Ko
13.如权利要求1所述的组合物，其中所述多肽与SEQID NO :2具有至少50%，至少 60%，至少70%，至少80%，至少85%，至少90%，至少95%，至少96%，至少97%，至少 98%，至少99%或100%的同一性。
14.如权利要求6所述的组合物，其中所述多肽与SEQID NO 2具有至少50%，至少 60 %，至少70 %，至少80 %，至少85 %，至少90 %，至少95 %，至少96 %，至少97 %，至少 98%，至少99%或100%的同一性。
15.如权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含(a)0重量％至10重量％的沸石助洗剂；(b)0重量％至10重量％的磷酸盐助洗剂；和(c)任选地，0重量％至5重量％的硅酸盐；并且 其中所述组合物任选地具有大于7. 5的储备碱度。
16.如权利要求6所述的组合物，其中所述组合物包含(a)0重量％至10重量％的沸石助洗剂；(b)0重量％至10重量％的磷酸盐助洗剂；和(c)任选地，0重量％至5重量％的硅酸盐；并且 其中所述组合物任选地具有大于7. 5的储备碱度。
17.如前述任一项权利要求所述的组合物，其中所述组合物包含光漂白剂，所述光漂白 剂选自氧杂蒽染料光漂白剂、光引发剂以及它们的混合物。
18.如前述任一项权利要求所述的组合物，其中所述组合物包含织物调色剂。
19.如权利要求18所述的组合物，其中所述织物调色剂选自直接紫9、直接紫99、酸性 红52、酸性蓝80以及它们的混合物。
20.如权利要求19所述的组合物，其中所述织物调色剂选自直接紫9、直接紫99、酸性 红52、酸性蓝80以及它们的混合物。
全文摘要
本发明涉及包含某种脂肪酶的组合物以及此类组合物的制备和使用方法，所述方法包括使用此类组合物清洁和/或处理位点。
文档编号C11D3/386GK101960007SQ200980106830
公开日2011年1月26日 申请日期2009年2月26日 优先权日2008年2月29日
发明者A·斯文森, D·亚弗, J·C·F·克内策尔, J·温德, K·博奇, M·E·比约恩瓦德, N·J·兰特, P·F·苏特, P·K·汉森, T·C·海恩斯, T·H·卡利森 申请人:宝洁公司