人羊膜间充质干细胞外泌体的用途
【专利摘要】本发明涉及干细胞领域，公开了干细胞外泌体的新用途，具体是公开了人羊膜间充质干细胞外泌体的新用途。实验结果显示人羊膜间充质干细胞能够促进HDF细胞的生长，并且可以提高细胞内SOD酶的活性，减少因紫外线辐射诱导产生的氧自由基对细胞的攻击和损害，降低细胞的死亡率。表明人羊膜间充质干细胞外泌体具有抗光老化的功效。同时表明所述人羊膜间充质干细胞外泌体无光毒性作用。因此本发明提供了人羊膜间充质干细胞外泌体在制备抗老化的制剂中的应用。本发明还提供了包含人羊膜间充质干细胞外泌体的抗老化的制剂。
【专利说明】人羊膜间充质干细胞外泌体的用途
【技术领域】
[0001] 本发明涉及干细胞领域，具体涉及干细胞外泌体的新用途，尤其是人羊膜间充质 干细胞外泌体的新用途。
【背景技术】
[0002] 外泌体最早发现于体外培养的绵羊红细胞上清液中，是细胞主动分泌的大小均 一，直径为40?lOOnm，密度1. 10?I. 18g/ml的囊泡样小体。外泌体的应用主要集中在临 床诊断及抗肿瘤方面。
[0003] 间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是具有自我更新和多向分化能力 的细胞，产生并释放营养性物质，通过旁分泌途径促进细胞修复及血管生成，在再生医学领 域有重要作用。Lai等通过质谱技术分析发现：MSCs的外泌体中含有丙酮酸激酶（pyruvate kinase，PK)人乳脂肪球 EGF 因子蛋白（milkfat globule_EGFfactor8protein，MFGE8)及 跨膜四蛋白等857种蛋白质，它们参与细胞结构的维持运动信息交流以及组织的修复与再 生。许多的研究表明MSCs外泌体在治疗组织损伤性疾病中具有重要的作用。
[0004] 目前还没有人羊膜间充质干细胞外泌体在美容护肤品中的应用。
【发明内容】
[0005] 有鉴于此，本发明目的在于针对现有技术存在的问题，提供人羊膜间充质干细胞 外泌体在美容护肤品中的应用。
[0006] 本发明采用MTT法测定人羊膜间充质干细胞外泌体对人真皮成纤维细胞生长的 影响，结果显示人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉在浓度=400 yg/ml时对HDF细胞无明 显的抑制作用，镜下观察细胞也无明显的死亡等症状。实验组的细胞存活率与对照组相比 较，都没有出现显著的细胞死亡，而=1〇〇 U g/ml人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉能够 促进HDF细胞的生长。
[0007] 本发明还检测了人羊膜间充质干细胞外泌体对紫外损伤人真皮成纤维细胞的保 护作用，结果显示，人羊膜间充质干细胞外泌体无论是20 y g/ml，还是10 y g/ml都在不同 程度上提高了细胞内SOD酶的活性，可以减少因紫外线辐射诱导产生的氧自由基对细胞的 攻击和损害，降低细胞的死亡率。
[0008] 由此可见，人羊膜间充质干细胞外泌体具有抗光老化的功效。
[0009] 进一步，本发明进行了光毒性试验结果显示涂抹人羊膜间充质干细胞外泌体后 lh、24h、48h和72h均未观察到皮肤刺激反应，表明所述人羊膜间充质干细胞外泌体无光毒 性作用。
[0010] 因此本发明提供了人羊膜间充质干细胞外泌体在制备抗老化的制剂中的应用。
[0011] 其中，所述制剂可以为药品或护肤品。
[0012] 所述药品可以本领域公知的外用制剂，如搽剂、软膏剂、乳剂、糊剂、膜剂、涂膜剂、 凝胶剂、气雾齐IJ、喷雾齐IJ、贴剂等等。所述护肤品可以本领域公知的类型，如面霜，乳液、精华 液、面膜、眼霜、原液等等。
[0013] 本发明还提供了一种抗老化的制剂，包含人羊膜间充质干细胞外泌体。
[0014] 在一些实施方案中，所述人羊膜间充质干细胞外泌体为人羊膜间充质干细胞外泌 体冻干粉。人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉更加便于储存、运输与应用。
[0015] 在一些实施方案中，所述人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉的制备方法为：取人 羊膜间充质干细胞外泌体，加入海藻糖混匀后，滤膜过滤，分装后超低温冷冻12h，然后在 IOPa的真空度、-50°C的条件下冷冻12h?48h。
[0016] 在一些优选实施方案中，所述海藻糖的加入量为至海藻糖终浓度为l〇wt%。
[0017] 在一些优选实施方案中，所述滤膜孔径为0. 22 m。
[0018] 在一些优选实施方案中，所述超低温为-80°C。
[0019] 在一些实施方案中，本发明所述抗老化的制剂为护肤品。
[0020] 本发明还提供了一种抗老化的润肤霜，包括人羊膜间充质干细胞外泌体和基质， 所述基质包括乳化剂、增溶剂、抗结剂、润滑剂、润肤剂、稳定剂、溶剂、防腐剂。
[0021] 在一些实施方案中，所述乳化剂选自ZY-92、ZY-921、白油、硬脂酸、汉生胶、三乙醇 胺中的一种或几种。
[0022] 在一些实施方案中，所述增溶剂选自C16-180H中的一种或几种。
[0023] 在一些实施方案中，所述抗结剂为BTH。
[0024] 在一些实施方案中，所述润滑剂为DC-200。
[0025] 在一些实施方案中，所述润肤剂为甘油。
[0026] 在一些实施方案中，所述防腐剂为极美。
[0027] 在一些实施方案中，所述稳定剂为乙二胺四乙酸二钠、0. OlM磷酸盐缓冲液。
[0028] 在一些实施方案中，所述溶剂为水。
[0029] 在一些实施方案中，所述抗老化的润肤霜由如下重量份原料制成：
[0030]
【权利要求】
1. 人羊膜间充质干细胞外泌体在制备抗老化的制剂中的应用。
2. 根据权利要求1所述的应用，所述制剂为药品或护肤品。
3. -种抗老化的制剂，包含人羊膜间充质干细胞外泌体。
4. 根据权利要求3所述的制剂，所述人羊膜间充质干细胞外泌体为人羊膜间充质干细 胞外泌体冻干粉。
5. 根据权利要求4所述的制剂，所述人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉的制备方法 为：取人羊膜间充质干细胞外泌体，加入海藻糖混匀后，滤膜过滤，分装后超低温冷冻12h， 然后在IOPa的真空度、-50°C的条件下冷冻12h?48h。
6. 根据权利要求3所述的制剂，其为护肤品。
7. -种抗老化的润肤霜，包括人羊膜间充质干细胞外泌体和基质，所述基质包括乳化 齐?、增溶剂、抗结剂、润滑剂、润肤剂、稳定剂、溶剂、防腐剂。
8. 根据权利要求7所述的润肤霜，所述乳化剂选自ΖΥ-92、ΖΥ-921、白油、硬脂酸、汉生 胶、三乙醇胺中的一种或几种；所述增溶剂选自C16-180H中的一种或几种；所述抗结剂为 BTH ;所述润滑剂为DC-200 ;所述润肤剂为甘油；所述防腐剂为极美；所述稳定剂为乙二胺 四乙酸二钠、0. OlM磷酸盐缓冲液；所述溶剂为水。
9. 根据权利要求7或8所述的润肤霜，由如下重量份原料制成：
O
10. -种制备权利要求9所述抗老化的润肤霜的方法，包括如下步骤： (1) 、将A组分中各成分于70?80°C水浴溶解； (2) 、B组分中用甘油将汉生胶和乙二胺四乙酸二钠分散均匀后水浴溶解； (3) 、D组分中先用稳定剂溶解人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉； (4) 、将A组分倒入B组分中，均质乳化，降温到37?50°C后加入C组分和D组分中各 成分，均质均匀得到人羊膜间充质干细胞外泌体润肤霜； 其中，步骤（1)、（2)和（3)不分先后顺序。
11. 一种抗老化的眼霜，包括人羊膜间充质干细胞外泌体和基质，所述基质包括乳化 齐?、润滑剂、增稠剂、增溶剂、润肤剂、稳定剂、溶剂、防腐剂、抗皱剂。
12. 根据权利要求11所述的眼霜，所述乳化剂为PEA ;所述润滑剂为IPP ;所述增稠剂 为AVC ;所述增溶剂选自C16-180H中的一种或几种；所述润肤剂为合成角鲨烷；所述稳定 剂为0. OlM磷酸盐缓冲液；所述溶剂为水；所述防腐剂为极美；所述抗皱剂选自Polylift 或Polylift中的一种或几种。
13. 根据权利要求11或12所述的眼霜，由如下重量份原料制成：
O
14. 一种制备权利要求13所述抗老化的眼霜的方法，包括如下步骤： (1) 、将A组分中各成分于70?80°C水浴溶解； (2) 、B组分用部分去离子水加热溶解、搅拌均匀； (3) 、D组分中先用稳定剂溶解人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉； (4) 、将A组分倒入B组分中，搅拌均匀，降温至37?50°C后加入C组分和D组分，搅拌 均匀，得到人羊膜间充质干细胞外泌体眼霜； 其中，步骤（1)、（2)和（3)不分先后顺序。
【文档编号】A61Q19/08GK104382827SQ201410705462
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2014年11月28日 优先权日:2014年11月28日
【发明者】陈海佳, 王一飞, 葛啸虎, 麦锦连, 王小燕, 马岩岩, 舒辉萍 申请人:广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司