专利名称：焦磷酸测序法检测oatp1b1基因多态性的试剂盒及方法
技术领域：
本发明属于分子生物学领域，具体的是涉及焦磷酸测序法检测0ATP1B1基因多态性的试剂盒及方法。
背景技术：
肝脏是生物转化解毒的主要器官，在肝脏中存在多种类型的药物转运体，对于药物的吸收、分布和排泄起重要作用，如多药耐药相关蛋白，乳腺癌耐药蛋白，有机阴离子转运多肽家族等。0ATP1B1是有机阴离子转运多肽家族中最为重要的成员，0ATP1B1的编码基因SLC01B1不仅具有高度多态性，且已发现多个具有功能意义的突变型。目前已研究证实，0ATP1B1除靶向转运非结合型胆红素、胆汁酸、甲状腺激素等多种内源性物质外，还介导多种具有重要临床意义药物的肝脏跨膜转运，如抗恶性肿瘤药(伊立替康、甲氨喋呤)、调血脂药(普伐他汀、阿托伐他汀、匹伐他汀、罗苏伐他汀、西伐他汀)、抗高血压药(缬沙坦、奥美沙坦、波生坦)、抗高血糖药(瑞格列奈、那格列奈)。OATPIBI与它们的吸收、分布及排泄等过程密切相关，进而关乎药物的疗效和毒副作用。OATPIBI的编码基因SLC01B1不仅具有高度多态性，且已发现多个具有功能意义的突变型。对于主要由0ATP1B1转运的他汀类药物而言，当SLC01B1突变导致功能降低时，就会使其进入肝细胞的量减少，降脂疗效下降，血药浓度升高，毒副作用增加。研究表明在OATPIBI功能缺陷的*5/*5(rs4149056)基因突变者体内，普伐他汀的血药浓度增加57 130%，匹伐他汀的血药浓度增加162 191%，阿托伐他汀的血药浓度增加144%，罗伐他汀的血药浓度增加62 117 %。全基因组关联研究(Genome-wide Association Study,GffAS)表明0ATP1B1功能缺陷的*5/*5基因突变者是导致辛伐他汀出现肌病不良反应的主要因素。根据0ATP1B1 (rs4149056)基因多态性，临床推荐他汀类药物使用剂量如下表。0ATP1B1 (rs4149056)基因多态性临床推荐他汀类剂量
权利要求
1.一种焦磷酸测序法检测0ATP1B1基因多态性的试剂盒，其特征在于，包括如下引物 (1)扩增引物 上游引物5/ -ACA CTC TCT TAT CTA CAT AGG TTG-3'； 下游引物5' -GGT ACT ATG GGA GTC TCC CCT ATT-3'； 其中，下游引物的5'进行生物素标记； (2)测序引物5'-CAC GAA GCA TAT TAC CCA T-3'。
2.一种应用权利要求I所述的试剂盒检测0ATP1B1基因多态性的方法，包括如下步骤 (1)DNA提取； (2)聚合酶链反应 配制 50 μ IPCR扩增体系，包含10XPCR buffer 5. O μ I, dNTP 3. O μ 1，OATP1B1-上游引物 O. 5μ l,0ATPlBl(rs4149056)下游引物 O. 5μ I, rTaqO. 5 μ 1，水 39. 5μ 1，模板 I. Ομ I ；循环程序为95°C 5min预变性；依次在95°C 30S,55°C 30S,72°C 30S，进行35个循环；72°C保持5min，最终保持在4°C，得扩增产物； (3)焦磷酸测序单链样本纯化； (4)焦磷酸测序及结果分析。
全文摘要
本发明公开了一种焦磷酸测序法检测OATP1B1基因多态性试剂盒及方法。所述试剂盒OATP1B1基因多态性进行检查，具体是指rs4149056(T＞C)单核苷酸多态性。试剂盒包含如SEQ ID NO.2-4所示的引物。本发明的试剂盒，可以实现准确、快捷、高通量OATP1B1基因多态性的检测，从而达到对其底物实现安全合理有效的个体化给药。
文档编号C12Q1/68GK102643908SQ201210094448
公开日2012年8月22日 申请日期2012年4月1日 优先权日2012年4月1日
发明者周宏灏 申请人:周宏灏