一种复合光合菌肥的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明是属于一种微生物菌服技术范围，具体的说是涉及到一种复合光合菌服的 制备方法。 技术背景
[0002] 光合细菌列为细菌口，真细菌纲，红螺菌目，下分为红螺菌亚目和绿菌亚目，其中 红螺菌目下又分为红螺菌科(紫色非硫细菌)和着色菌科(紫硫细菌)。归属于红螺菌目的光 合细菌能在厌氧条件下进行光合作用，且不释放氧。细胞中含有细菌叶绿素和多种类胡萝 h素，及细胞色素、泛丽和铁氧化还原型的非血红素铁蛋白。根据《伯杰细菌手册》第八版， 红螺菌科的光合细菌能光合同化简单的有机物质，大多数种不能W硫化物作为唯一光合电 子供体而生长，当硫化物或硫代硫酸盐作为电子供体时，元素硫不是一个中间的氧化产物。 当由硫化物形成元素硫时，元素硫不能进一步氧化为硫酸盐。所有的种都不能利用元素硫 作为电子供体。主要包括H个属；红螺菌属，红假单胞菌属，红微菌属。红螺菌属中比较有 代表性的菌种为；深红红螺菌，纤细红螺菌，黄锡红螺菌，莫氏红螺菌，度光红螺菌。红假单 胞菌属中比较有代表性的菌种为；沼泽红假单胞菌，绿色红假单胞菌，嗜酸红假单胞菌，胶 质红假单胞菌，芙膜红假单胞菌，球形红假单胞菌等。红微菌属主要代表菌种为万尼氏红微 菌。
[0003] 着色菌科(紫硫细菌）在光照下，能利用硫化氨、硫代硫酸盐、分子氨及其他无机或 有机还原剂把二氧化碳还原成有机物，同时能固定大气中的氮。大多数种是严格厌氧的(只 有一个种一沙氏外硫红螺菌能在黑暗中微好氧生长)，在有元素硫和硫化物时，具有光自养 同化二氧化碳的能力，元素硫在细胞内居中地W球状积累，有一个属(外硫红螺菌属积累在 细胞外面。硫酸盐是硫化合物的最终氧化产物。许多菌株能利用分子氨作为电子供体。所 有的菌株能光合同化一些简单的有机物质，其中最广泛被利用的是醋酸盐和丙丽酸盐。没 有同化型硫酸还原作用的菌株仅在有硫化物或其它还原的硫化合物作为细胞硫来源时，才 能利用有机物质，绝大多数菌株在无硫化氨或硫时，可利用有机物质，因此所有的类型都是 潜在的混合营养菌。
[0004] 着色菌科内包括着色菌属，囊硫菌属，八球硫菌属，硫螺旋菌属，芙硫菌属，闪囊菌 属，板硫菌属，可变杆菌属，外硫红螺菌属。
[0005] 作为菌服，光合细菌能促进±壤物质转化，改善±壤结构，提高±壤服力，促进作 物生长。光合细菌大都具固氮能力，能提高±壤氮素水平，通过其代谢活动能有效地提高 ±壤中某些有机成分、硫化物、氨态氮，并促进有害污染物（如农药、化服）的转化。同时 能促进有益微生物的增殖，使共同参与±壤生态的物质循环。此外，光合细菌产生的丰富 的生理活性物质如脯氨酸、尿嚼巧、胞嚼巧、维生素、辅酶Q、类胡萝h素等都能被植物直接 吸收，有助于改善作物营养，激活植物细胞的活性，促进根系发育，提高光合作用和生殖生 长能力。光合细菌发酵液中含有多种生理活性物质，如叶绿素A、B，类胡萝h素，多种维生 素（尤其是B族维生素），多种植物激素（如144、643、484、己帰、细胞分裂素）、核酸、水杨 酸、多种氨基酸w及单细胞蛋白质等。该些生理活性物质具有或促进植株根系生长、或促进 植株叶片生长、或促进果实中某些特异性成分的积累、或增加作物产量，从而改善农产品品 质。光合细菌能增强作物抗病防病能力。光合细菌含有抗细菌、抗病毒的物质，该些物质能 纯化病原体的致病力W及抑制病原体生长。同时光合细菌的活动能促进放线菌等有益微生 物增殖，抑制丝状真菌等有害菌群生长，从而有效地抑制某些植病的发生与蔓延。由于光合 细菌具有抗病防病作用，能延长果品储存期。光合细菌可提高植株叶绿素含量，促进±壤 中固氮菌、根瘤菌、放线菌等微生物菌群的生长，在烟草、萝K甘墓、大豆等作物上喷施光 合细菌后，均能提高±壤中固氮菌、根瘤菌、放线菌及细菌数量，而丝状真菌则减少，起到 ±壤修复的作用。光合细菌还具有减轻农药对农作物的毒害和降解残留农药。因此，光合 细菌在种植上具有广阔的应用前景。
[0006] 但现有有关光合细菌的研究主要是针对红螺菌科进行研究，尽管也有些是一些 复合光合细菌，但其主要是针对红螺菌科内进行混合培养，如专利号200910039525. 5 " - 种农用光合细菌制剂的生产方法"使用的菌种为沼泽红假单胞菌和球形红细菌。专利号 201210255225. 2 "高活菌数光合细菌原代菌种的制种方法"使用的菌种为沼泽红假单胞菌。 专利号200410048678. 3"高浓度光合细菌制剂的制备方法"使用的菌种为沼泽红假单胞菌， 芙膜红假单胞菌和球形红假单胞菌；专利号201310734863. 7 "-种复合光合菌剂及其制备 方法"使用的菌种为球形红假单胞菌，沼泽红假单胞菌及深红红螺菌菌种；从现有文献上来 看，大部份复合光合细菌只是对红螺菌科中的菌进行混合培养，还未有报道红螺菌科与着 色菌科的菌之间进行混合培养。
[0007] 国内对着色菌科(紫色硫细菌）的研究仅见于少数几篇文献，刘蔚等分离到一株桃 红芙硫菌，认为其具有较好的净水能力及生物服料的能力，特别可W解决我国大部份±壤 内因缺硫而影响农作物生长W至减产的问题。四川大学的冯匙对紫硫细菌中的桃红芙硫菌 进行了研究，他认为桃红芙硫菌适于应用到制作菌服和处理含硫污染物方面。但要投入实 际运用，首要要解决的问题是，该菌的生长速度缓慢，一般要培养两周W后才会有明显的生 长趋势，培养20-40天才能做为菌剂使用，且0D650的值不高于1，活菌含量低于1亿/毫 升，较长的生长周期不利于大规模的应用。而到目前为止，还未见有关沙氏外硫红螺菌服制 备方法技术方案公开。也未有着色菌科(较强硫化氨的降解能力，促进硫元素的物质循环） 与红螺菌科中的菌进行复合培养作为菌服的技术方案进行公开。
【发明内容】
[0008] 针对现有技术的不足，本发明提供一种着色菌科中的沙氏外硫红螺菌与红螺菌科 中的纤细红螺菌混合培养，生长速度快，菌体含量高，培养时间短，而且服效活性高、稳定性 高、作用效果快的复合光合细菌服的制备方法。
[0009] 为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：采用着色菌科中的沙氏外硫红 螺菌菌种与红螺菌科中的纤细红螺菌按W下步骤进行培养： m、沙氏外硫红螺菌半固体种子活化培养；将沙氏外硫红螺菌种穿刺在半固体沙氏外 硫红螺菌培养基中，25-3(TC光照培养7-10天，待穿刺的菌线变红并长出菌苔，即可为活化 的沙氏外硫红螺菌种； 植、纤细红螺菌平板活化：将纤细红螺菌菌种在平板上划线活化，温度25-35C活化培 养3-5天，挑取大个菌落作为活化种子； 口 )、沙氏外硫红螺菌种子培养；将活化的菌种接种至沙氏外硫红螺菌种子液体培 养基中，温度25-35 °C，光照强度为；1000-3000lux，光照厌氧培养7-10天，检测种子的 0D660 > 1. 2,活菌数> 6亿C化/ml即为种子培养液； 错、纤细红螺菌种子培养；将挑取大个纤细红螺菌菌落作为活化种子接种到种子培 养基中，温度25-35 °C，光照强度为；1000-30001UX，光照静置培养3-5天，检测种子的 0D660 > 0. 8,活菌数> 4亿C化/ml即为种子培养液； 巧、发酵培养；将沙氏外硫红螺菌种子培养液与发酵培养基W 1 ;3-1 ;5的接种量接 种，同时将纤细红螺菌种子培养液与发酵培养基按1 :6-1 ;10的接种量接入，在光照培养罐 中厌氧培养，培养温度25-35°C，光照强度为；1000-40001ux，揽拌速度为120转/分钟，待 培养至第H天，开始流加300 g/L的硫代硫酸轴溶液至发酵培养基硫代硫酸轴的浓度至1-3 g/L，继续培养3-5天，待检测其0D650 > 6,活菌数> 50亿C化/ml,其中沙氏外硫红螺菌不 低于25亿C化/ml,纤细红螺菌不低于20亿C化/ml,即可放罐，灌装，包装成品。
[0010] 所述的半固体沙氏外硫红螺菌培养基为：氯化馈0. 4-1. 2g/l，磯酸二氨钟 0. 5-lg/L，二水氯化巧 0. 05-0. 2g/L，氯化镇 0. 1-0. 5g/l，苹果酸轴 2-10 g/l，醋酸轴 l-3g/ L，九水硫化轴0. l-lg/l，琼脂8-lOg/L，氯化轴0. 5-4g/L, 12rC灭菌15分钟，用醋酸调PH 至7. 0-7. 2,其中九水硫化轴先配制成0.1 g/mL单独灭菌。
[0011] 所述的沙氏外硫红螺菌种子液体培养基为：氯化馈0.4-1. 2g/l，磯酸二氨 钟0. 5-lg/L，二水氯化巧0.05-0. 2g/L，氯化镇0. 1-0. 5g/l，苹果酸轴2-10 g/l，醋酸 轴l-3g/l，九水硫化轴0. 1-lg/L，氯化轴0. 5-4g/L，12rC灭菌15分钟，用醋酸调PH至 7. 0-7. 2,其中九水硫化轴先配制成0.1 g/mL单独灭菌。
[0012] 所述的纤细红螺菌种子液体培养基为：氯化馈0. 8-1. 2g/l，磯酸二氨钟0. 5-lg/ L，二水氯化巧0. 05-0. 2g/L，氯化镇0. 1-0. 5g/l，苹果酸轴2-10 g/l，醋酸轴l-3g/l，氯化 轴l-2g/^，酵母膏0.2-lg/L，12^C灭菌15分钟，用灭菌醋酸调PH至7.0-7.2。
[0013] 所述的纤细红螺菌平板固体培养基为种子液体培养基加入20 g/L的琼脂形成的。
[0014] 所述的发酵培养基；氯化馈1. 2g/l，磯酸二氨钟0. 8g/l，二水氯化巧0.1 g/l，氯化 镇0. 3g/l，苹果酸轴4g/l，醋酸轴8g/l，酵母膏0.4g/L，氯化轴Ig/L，12rC灭菌15分钟， 用苹果酸调PH至6. 8-7.0。
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