述的红豆杉苗为南方红豆杉实生苗。
[0019] 有益效果：
[0020] 将解磷细菌荧光假单胞CLW17和AM真菌地表球囊霉制成的复合菌剂接种于南方 红豆杉，结果表明，该菌剂明显促进南方红豆杉苗的生长发育和紫杉醇的积累。因此，本发 明为开发南方红豆杉专用肥料提供了优良的菌种组合。
【附图说明】
[0021] 图1为CLW17、G. versiforme对南方红豆杉苗的促生效果。
【具体实施方式】
[0022] 根据下述实施例，可以使本领域的技术人员更好地理解本发明。实施例所描述的 仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
[0023] 以下实施例所用的焚光假单胞菌Pseudomonas fIuorescens (菌株号CLW17) 在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC M 2010158;该菌株记载在中国专利 ZL201010221242. 5 中。
[0024] 以下实施例所用的丛枝菌根真菌地表球囊霉Glomus versiforme在中国丛枝 菌根真菌种质资源库BGC的保藏编号为BGC NM03C，在国家自然科技资源平台资源号为 1511C0001BGCAM0032〇
[0025] 实施例1 :接种菌剂的制备
[0026] (1)把AM真菌地表球囊霉（G. versiforme)的孢子用30% H2O2消毒lOmin，然后 无菌水漂洗数次，把漂洗过的AM真菌的孢子用白三叶草（Trifolium Nepens L.)为载体富 集培养，培养基质为灭过菌的土和沙（2:1)混合物，培养2月后，去掉地上部分，制成含有孢 子、菌丝及侵染根段的混合物作为AM真菌接种剂；
[0027] (2)将CLW17活化2~3次后，用接种环挑取少量菌体接种于含有50mL NB培养基 (牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化钠5g，蒸馏水lOOOmL，pH 7. 2~7. 4) IOOmL三角瓶中，30°C， 200r/min振荡培养48h后作为接种剂。
[0028] 实施例2 :菌剂接种温室盆栽试验
[0029] 将实施例1中制备的接种剂分别接种于南方红豆杉1年生实生苗根部，以空白NB 培养基和AM菌剂扩繁的基质为对照，共设4个处理。4个处理分别为（1)G. versiforme，接 种量为 25 克 / 株；（2) CLW17,接种量为 50mL/ 株；（3) CLW17+G. versiforme，AM 接种量为 25 克/株，解磷细菌接种量为50mL/株；（4)空白对照CK。每处理15个重复，置于温室统一管 理，光照为12h/天，适时饶水。
[0030] 南方红豆杉实生苗360天生长情况（见表1)。从表1可看出，接种CLY07菌剂明 显促进了南方红豆杉实生苗的生长。接种处理南方红豆杉实生苗的苗高、地径、生物量与 CK相比均有不同程度的增长。其中，以双接种效果最好，苗高和地径比不接种对照（CK)分 别增长了 76. 79%和16. 43% ;生物量比CK分别增长了 85. 50%。
[0031] 表1溶磷细菌CLW17、AM真菌对南方红豆杉生长的影响
[0032]
[0033] 注：P〈0. 05,同列不同行小写字母不相同代表差异显著。
[0034] 实施例3 :温室盆栽苗紫杉醇含量的检测试验
[0035] 对实施例2中的南方红豆杉苗接种1年后，分别将不同处理的根、茎、叶于56°C下 烘干磨碎成粉状物备用。分别称取5克粉状物置于500ml具塞三角瓶中，量取250ml甲醇 浸提lh，然后超声萃取20min，过滤。重复以上步骤3次。过滤液合并于37°C下真空旋转蒸 干，将得到的干物质溶于IOml甲醇，过0.45μπι滤膜后即得到紫杉醇粗提物，置于-20°C备 用。以紫杉醇（Sigma)为标准物，采用HPLC进行不同处理紫杉醇含量的测定。
[0036] 由表2可以看出，单接种AM真菌地表球囊霉（G. versiforme)以及混合接种解 磷细菌荧光假单胞菌CLW17和G. versiforme对南方红豆杉苗根、茎、叶药用成分紫杉醇 有一定的积累作用；其中，以双接种效果最好，根、叶的紫衫醇含量分别为824. 61、143. 83、 88. 26 μ g .g4干重，而不接种处理仅为161. 61、20. 95、55. 62 μ g .g4干重。但单接种CLW17 对紫杉醇的积累几乎没有效果，与对照CK没有差异。
[0037] 表2解磷细菌CLW17、AM真菌G. versiforme对南方红豆杉苗紫杉醇积累的影响
[0038]
[0040] 注：P < 0. 05,同列不同行小写字母不相同代表差异显著。
【主权项】
1. 一种复合微生物肥料，其特征在于，它包括焚光假单胞菌Pseudomonas f luorescens 和地表球囊霉Glomus versiforme ; 其中， 焚光假单胞菌Pseudomonas fluorescens在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为 CCTCC M 2010158 ； 地表球囊霉Glomus versiforme在中国丛枝菌根真菌种质资源库BGC的保藏编号为 BGC NM03C，在国家自然科技资源平台资源号为1511C0001BGCAM0032。2. 权利要求1所述的复合微生物肥料在促进红豆杉苗紫杉醇积累中的应用。3. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的红豆杉苗为南方红豆杉实生苗。4. 权利要求1所述的复合微生物肥料在促进红豆杉苗生长中的应用。5. 根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的红豆杉苗为南方红豆杉实生苗。
【专利摘要】本发明公开了一种复合微生物肥料，它包括荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens和地表球囊霉Glomus versiforme；其中，荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC M 2010158；地表球囊霉Glomus versiforme在中国丛枝菌根真菌种质资源库BGC的保藏编号为BGC NM03C，在国家自然科技资源平台资源号为1511C0001BGCAM0032。本发明还公开了上述复合微生物肥料在南方红豆杉促生长及紫杉醇积累中的应用。本发明能为将来开发南方红豆杉专用微生物肥料提供优良的菌株资源。CCTCC M 201015820100624
【IPC分类】C05F11/08, A01C21/00
【公开号】CN104987139
【申请号】CN201510089892
【发明人】任嘉红, 雷海英, 茹文明, 韩明跃, 陈艳彬, 郭俊娥
【申请人】长治学院
【公开日】2015年10月21日
【申请日】2015年2月27日