专利名称：一种制备总缬草素的新方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，是一种制备总缬草素(Valepotriates)的新方法。
背景技术：
总缬草素具有镇静、催眠及抗惊厥作用，效果显著，并且毒性低。传统的总缬草素的提取方法包括以下一些步骤(详见专利US3869476)1、提取 用酸性有机溶剂(如含1％乙酸的二氯甲烷液)对缬草属植物(其中包括蜘蛛香)的根及根茎干燥药材粉末进行浸泡、渗漉，得到提取液；2、除酸 将提取液用碱性或中性水溶液(如Nacl和NaOH水溶液)萃取直至提取液pH值呈中性；3、除水 加干燥剂(如无水Na2SO4)到提取液中，以除去提取液中的水分。
4、回收溶剂 将提取液在30℃减压回收溶剂，得到浸膏；5、溶解 将浸膏溶于90％乙酸中，并过滤；6、萃取 在上述90％乙酸溶液中加入苯进行萃取，弃去苯层；7、稀释 将大量冰水加入90％乙酸溶液中；8、萃取 加苯至上述稀乙酸溶液中进行萃取，弃去稀乙酸层，得到苯提取液；9、除酸 将苯液用碱性或中性水溶液(如Nacl和NaOH水溶液)萃取直至苯液pH值呈中性或微酸性；10、除水 加干燥剂(如无水Na2SO4)到苯液中，以除去苯液中的水分；11、除色素 加活性炭至苯液中，以除去苯液中的色素；12、回收溶剂 将苯液在30℃减压回收溶剂，得到总缬草素。总缬草素的得率为原药材的2～3％。
传统制备总缬草素的工艺复杂，步骤繁多，耗时长，并且大量使用毒性大的有机溶剂(如苯和乙酸)，对操作人员的身体有害，对环境污染大。
发明内容
本发明提供一种工艺简单、使用溶剂品种少、毒性小的总缬草素的制备新方法。总缬草素的制备方法包括超声提取和减压回收溶剂两个步骤一、总缬草素的提取将蜘蛛香(V.jatamansi.Jones)干燥根茎药材粉末用石油醚浸泡，然后在30℃超声提取过滤得到提取液。
二、总缬草素的纯化将提取液30℃减压回收石油醚至干即得总缬草素浸膏。
经13C和1H核磁共振检测，检测结果说明得到的总缬草素主要包括缬草素、二氢缬草素和乙酰缬草素三种成分，它们占该提取物的80％以上。二氢缬草素化学结构式 二氢缬草素核磁共振结果13C-NMRδ88.3(1-C)，142.2(3-C)，110.8(4-C)，32.5(5-C)，35.1(6-C)，76.7(7-C)，64.1(8-C)，39.4(9-C)，48.7(10-C)，169.8(11-C).21.0(12-C)，63.3(13-C)，173.0(15-C).43.3(16-C).25.7(17-C)，22.3(18，19，24，25-C)，171.1(21-C)，43.2(22-C)，25.5(23-C)1H-NMRδ5.83(d，J＝5.36Hz，1H，1-H)，6.5(1H，s，3-H)，2.97(1H，m，5-H)，2.24(2H，m，6-H)，4.95(1H，t，J＝5.72Hz，7-H)，2.72(1H，dd，J1＝5.33Hz，J2＝5.35Hz，9-H)，3.07(1H，d，J＝4.91Hz，10-H)，2.83(1H，d，J＝4.91Hz，10-H’)，2.00(3H，s，12-H)，4.69(1H，d，J＝12.29，13-H)，4.46(1H，d，J＝12.29，13-H’)，2.24(4H，d，J＝6.56Hz，16，22-2H)，0.98，0.95(各6H，s，18，19，24，25-3H)，2.19，2.21(各1H，m，17，23-H)乙酰缬草素化学结构式 乙酰缬草素核磁共振结果13C-NMRδ92.5(1-C)，148.6(3-C)，108.2(4-C)，141.1(5-C)，118.3(6-C)，83.3(7-C)，64.0(8-C)，42.9(9-C)，60.7(10-C)，47.8(11-C)，170.8(13-C)，20.9(14-C)，170.3(16-C)，42.9(17-C)，25.5(18-C)，22.3(19，20-C)，170.3(22-C)，44.0(23-C)，79.2(24-C)，26.6(25-C)，26.7(26-C)，169.5(28-C)，22.2(29-C)1H-NMRδ5.98(1H，d，J＝10.1Hz，1-H)，6.71(1H，s，3-H)，5.38(1H，d，J＝2.63Hz，6-H)，5.86(1H，t，J1＝J2＝2.70Hz，7-H)，3.41(1H，dd，J1＝10，J2＝2.5Hz，9-H)，4.66，4.75(各1H，AB，d，J＝12.3Hz，10-H)，2.88，3.03(各1H，AB，d，J＝4.8，11-H)，2.06(3H，s，14-H)，2.18(3H，m，17，18-H)，0.99(6H，d，J＝6.5Hz，19，20-H)，2.89(2H-s，23-H)，1.51(6H，s，25，26-H)，1.98(3H，s，29-H)，。缬草素化学结构式 缬草素核磁共振结果3C-NMRδ92.5(1-C)，148.4(3-C)，108.3(4-C)，140.9(5-C)，118.6(6-C)，83.0(7-C)，64.1(8-C)，43.0(9-C)，60.8(10-C)，47.8(11-C)，170.8(13-C)，20.9(14-C)，172.4(16-C)，43.3(17-C)，25.8(18-C)，22.3(19，20-C)，170.2(22-C)，43.0(23-C)，25.5(24-C)，22.2(25-C)，22.2(26-C)1H-NMRδ5.98(1H，d，J＝10.1Hz，1-H)，6.70(1H， s，3-H)，5.37(1H，d，J＝2.9Hz，6-H)，5.82(1H，t，J1＝J2＝2.8Hz，7-H)，3.44(1H，dd，J1＝10.1Hz，J2＝2.6Hz，9-H)，4.66，4.74(各1H，AB，d，J＝12.2Hz，10-H)，2.86，3.02(各1H，AB，d，J＝4.9，11-H)，2.06(3H，s，14-H)，2.10~2.25(6H，m，17，18，23，24-H)，0.90，0.94，0.97，1.00(各3H，s，19，20，25，26-H)。
总缬草素镇静、催眠、抗惊厥作用的验证观察药物对小鼠自发活动的影响、对戊巴比妥钠睡眠时间的影响、对戊巴比妥钠阈下剂量的影响和对戊四氮诱发惊厥的影响是验证药物具有镇静、催眠、抗惊厥作用常用的动物实验，故用其验证总缬草素对实验性动物的镇静、催眠、抗惊厥作用。
1、实验动物昆明种小白鼠，雌雄兼用，18～22g，每10只/笼群养，自由觅食和饮水，室温23±2℃，自然光照。2、实验方法(1)对小鼠自发活动的影响 选取体重18～22g健康小鼠，雌雄不拘，随机分3组，每组10只，空白组小鼠腹注1％CMC-Na液，其余两组小鼠腹注或灌胃给不同剂量的总缬草素混悬液(含1％CMC-Na，下同)，以2分钟内小鼠活动时间和前肢上举次数为指标，观察给药后30，60分钟的活动变化。
(2)对戊巴比妥钠睡眠时间的影响 选取体重18～22g健康小鼠，雌雄不拘，随机分5组，每组10只，空白组小鼠灌胃1％CMC-Na液，阳性对照组小鼠腹注0.5mg/kg安定注射液，其余三组小鼠灌胃不同剂量的总缬草素混悬液。各组小鼠于灌胃60分钟后，腹注戊巴比妥钠50mg/kg，以翻正反射消失至恢复时间作为睡眠时间。
(3)对戊巴比妥钠阈下剂量的影响 选取体重18～22g健康小鼠，雌雄不拘，随机分5组，每组10只，空白组小鼠灌胃1％CMC-Na液，阳性对照组小鼠腹注0.5mg/kg安定注射液，其余三组小鼠灌胃不同剂量的总缬草素混悬液。各组小鼠于灌胃60分钟后，腹注戊巴比妥钠25mg/kg，以翻正反射消失达1分钟以上的鼠数作为入睡动物数。
(4)对戊四氮诱发惊厥的影响 选取体重18～22g小鼠，雌雄不拘，随机分3组，每组10只，对照组腹注戊四氮生理盐水液85mg/kg；给药组腹注总缬草素混悬液30分钟后，腹注戊四氮生理盐水液85mg/kg。以小鼠跌倒并呈阵发性惊厥为指标，观察各组发生惊厥的小鼠数目。3、实验结果1)对小鼠自发活动的影响见表1表1总缬草素对小鼠自主活动的影响组别 剂量g/kg 给药途 给药前给药后30 给药后60径分钟 分钟活动时间 对照组 30.8±8.3 31.6±5.629.3±7.6(秒) 总缬草素 0.008腹注 29.7±7.5 3.3±3.5**4.5±1.2**0.2 灌胃 28.4±11.4 6.7±3.2**5.5±4.2**前肢上举对照组 10.6±1.1 9.5±2.49.0±1.6次数 总缬草素 0.008 腹注13.9±2.3 1.2±1.2**1.5±1.0**0.2灌胃14.3±11.0 4.8±2.5*3.5±3.1*注①x±SD②与对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01(下同)结果，与对照组比较，总缬草素能明显抑制小白鼠的自主活动，2)对戊巴比妥钠睡眠时间的影响见表2表2对戊巴比妥钠睡眠时间的影响(n＝10)组别 剂量(g/kg)睡眠时间(min)空白组112.8±34.7阳性对照组组0.0005 251.2±47.6**总缬草素低剂量组 0.05 118.8±55.8总缬草素中剂量组 0.10 147.9±36.8*总缬草素高剂量组 0.20 202.0±62.8**由表2中结果可以看出，高、中剂量组总缬草素均能明显延长戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间。3)对戊巴比妥钠阈下剂量的影响见表3表3 对戊巴比妥钠阈下剂量的影响(n＝10)组别 剂量(g/kg) 动物数 入睡动物数空白组 10 1阳性对照组0.0005 10 10**总缬草素低剂量组 0.0510 4总缬草素中剂量组 0.1 10 8**总缬草素高剂量组 0.2 10 9**从表3中可以看出，高、中剂量组总缬草素可明显提高阈下剂量戊巴比妥钠小鼠入睡数。4)对戊四氮诱发惊厥的影响见表4表4总缬草素对戊四氮诱发的小鼠惊厥的影响组别 剂量g/kg动物数 惊厥动物数戊四氮 0.08510 10戊四氮+总缬草0.085+0.064 10 2**素结果，与对照组比较，总缬草素能对抗戊四氮诱发的小鼠惊厥。
本发明总缬草素制备工艺简单，缩短了工艺流程，降低了成本，减少了环境污染。
实施例2取4.8kg干燥的蜘蛛香根茎粉末用42升石油醚浸泡2小时，然后30℃超声提取2小时，然后过滤，得到提取液，再以同法超声提取2次，合并提取液，将提取液30℃减压回收石油醚，得到105g总缬草素褐色浸膏。
实施例3取48kg干燥的蜘蛛香根茎粉末用420升石油醚浸泡1天，然后30℃超声提取20小时，然后过滤，得到提取液，再以同法超声提取2次，合并提取液，将提取液30℃减压回收石油醚，得到1kg总缬草素褐色浸膏。
权利要求
1.一种制备总缬草素的方法，包括以缬草属植物为原料对总缬草素的提取和纯化，其特征在于所用的原料为蜘蛛香的根茎，所用的提取溶剂为石油醚，30℃下超声提取，再减压回收石油醚，得总缬草素浸膏。
全文摘要
本发明涉及医药技术领域，是一种制备总缬草素的新方法。本发明采用缬草属植物蜘蛛香干燥根茎粉末作为原料，用石油醚浸泡后，30℃下超声提取，再减压回收石油醚，即得总缬草素浸膏。本发明制备工艺简单，使用有机溶剂少，避免了对环境的污染。
文档编号C07D493/10GK1396166SQ01113388
公开日2003年2月12日 申请日期2001年7月12日 优先权日2001年7月12日
发明者秦路平, 陈磊, 郑汉臣 申请人:中国人民解放军第二军医大学