专利名称：一种从植物中提取多甲氧基黄酮的方法
技术领域：
本发明属于中药的提取方法，更具体的说，涉及从芸香科柑桔属植物的果实中提取多甲氧基黄酮的方法。
背景技术：
芸香科柑桔属植物的产地分布很广，广东、福建、四川、江苏、浙江、江西、湖南、云南、贵州等省均有栽培。经研究表明，在芸香科柑桔属植物的果实中含有氨基酸、挥发油、黄酮类、生物碱等物质。其中黄酮为多甲氧基黄酮，主要为川陈皮素(Nobiletin，5，6，7，8，3`，4`-六甲氧基黄酮)、红橘素(tangeretin，5，6，7，8，4`-五甲氧基黄酮)、甜橙素(seniensetin，5，6，7，3`，4`-五甲氧基黄酮)、七甲氧基黄酮(heptamethoxyflavone，3，5，6，7，8，3`，4`-七甲氧基黄酮)、异甜橙素(isosenensetin，5，7，8，3`，4`-五甲氧基黄酮)等，结构式分别如下。
川陈皮素 红橘素七甲氧基黄酮 甜橙素
异甜橙素经研究表明，其中的川陈皮素和红橘素具有抗真菌感染、治疗高血压和糖尿病、预防和治疗慢性风湿病、治疗老年痴呆、减肥等多种药用功能。而它们混合物具有抗血球凝集、抑制肿瘤细胞生长等多种药理作用。
因此近年来，相关领域的研发人员在进行从芸香科植物，如柚子、柑桔等中直接提取多甲氧基黄酮的研究。但一直以来，存在着一些缺陷，如所提取的多甲氧基黄酮总含量不高，杂质多，颜色较深，如中国专利《柑桔多甲氧基黄酮抗癌药物组合物及其制备》中(公开号CN1436528A，
公开日2003年8月20日)，所提取的有效成分总含量约为30-40％，达不到注射用标准；价格高，目前市售的多甲氧基黄酮的价格较高，因此只适用于做标准品使用，作为药品难以为广大的患者接受。
技术方案本发明的目的是克服现有技术中所提取的多甲氧基黄酮总含量低的缺陷，提供一种可以从芸香科柑桔属植物的果实中提取高含量多甲氧基黄酮的方法，以符合注射用标准。
本发明公开了一种从芸香科柑桔属植物的果实中提取多甲氧基黄酮的方法，包括以下步骤1)醇提植物果实粉碎，用乙醇浸提；2)萃取回收乙醇后，加氯仿萃取后用酸萃取；再用碱萃取；调PH至中性；3)层析回收氯仿后，干燥，上硅胶柱，用氯仿丙酮混合液进行洗脱；4)收集洗脱液，干燥；其中所述的植物为芸香科柑桔属植物。
其中所述的醇提步骤中，乙醇浓度为75％，按体积重量比计，乙醇的加入量为植物果实的3-7倍，优选为5倍量；浸提3-6次，优选4次；每次8-15小时，优选12小时。
其中所述的萃取步骤中，按体积重量比计，氯仿、酸、碱的加入量均为植物果实的0.1-0.5倍，优选0.3倍；氯仿萃取2-7次，优选5次；酸、碱均萃取2-4次，优选3次；酸、碱的浓度均为1-5％，优选3％。
其中所述的萃取步骤中，酸可以选用硫酸、盐酸，优选盐酸；碱可以选用氢氧化钠、氢氧化钾，优选氢氧化钠。
其中所述的层析步骤中，氯仿与丙酮的体积比为70--98∶30-2，优选95∶5。
本发明的提取应该在常温下进行，温度高则提取得到的杂质多，不易纯化。而在萃取过程中，一定要先用酸反萃取，再用碱反萃取，除去挥发油，然后再调PH。
本发明提取的多甲氧基黄酮颜色为白色或黄白色。经HPLC检测，总黄酮的含量在80％以上，其中川陈皮素的含量高于34％，红橘素的含量高于36％，达到了静脉注射的药用标准，可以直接药用。当选用的某些植物，如柑时，总黄酮可高达98％。
同时本发明也充分考虑了大规模生产的一些因素，生产工艺简单，所以本发明的提取方法适合于工业化应用。而且本发明制备多甲氧基黄酮生产成本低，目前市售的含98％的多甲氧基黄酮的价格为每克500元人民币，而用本发明的制备工艺获得的同样纯度的多甲氧基黄酮的价格约每公斤4000-5000元人民币。这使得以后的药品价格更贴近患者成为可能。
具体实施例方式
实施例1柑的幼果粉碎后，过1厘米的筛得原料粗粉。称取50千克粗粉放入提取罐中，在常温下加入250升75％浓度的乙醇，浸提4次，每次浸泡12小时，每2小时循环一次，控制温度不超过30℃。-0.08M帕条件下回收乙醇。至无醇味，将浸提液转入萃取罐，加入15升氯仿，萃取5次。将水液排放，加入15升3％的盐酸，萃取3次。水液排放后，加入15升3％氢氧化钠，萃取3次。水液排放后，调PH值至中性，回收氯仿，干燥。用97∶3的氯仿丙酮溶液溶解，上硅胶柱，并用97∶3的氯仿丙酮溶液洗脱，收集黄色溶液变为无色以后的液体，并以薄层层析色谱跟踪。干燥，粉碎，收总黄酮0.25千克，经HPLC检测，总黄酮的含量为98.6％。
实施例2甜橙干燥果皮粉碎后，过1厘米的筛得原料粗粉。称取10公斤粗粉放入提取罐中，在常温下加入60升80％浓度的乙醇，浸提3次，每次浸泡10小时，每2小时循环一次，控制温度不超过30℃。-0.08M帕条件下回收乙醇。至无醇味，将浸提液转入萃取罐，加入5升氯仿，萃取2次。将水液排放，加入5升2％的硫酸，萃取2次。水液排放后，加入5升4％氢氧化钾，萃取2次。水液排放后，调PH值至中性，回收氯仿，干燥。用80∶20的氯仿丙酮溶液溶解，上硅胶柱，并用80∶20的氯仿丙酮溶液洗脱，收集黄色溶液变为无色以后的液体，并以薄层层析色谱跟踪。干燥，粉碎，收总黄酮0.048千克。经HPLC检测，总黄酮的含量为86.1％。
实施例3酸橙幼果粉碎后，过1厘米的筛得原料粗粉。称取10公斤粗粉放入提取罐中，在常温下加入30升75％浓度的乙醇，浸提6次，每次浸泡15小时，每2小时循环一次，控制温度不超过30℃.-0.08M帕条件下回收乙醇。至无醇味，将浸提液转入萃取罐，加入1升氯仿，萃取7次。将水液排放，加入1升2％的硫酸，萃取6次。水液排放后，加入2升4％氢氧化钾，萃取6次。水液排放后，调PH值至中性，回收氯仿，干燥。用95∶5的氯仿丙酮溶液溶解，上硅胶柱，并用95∶5的氯仿丙酮溶液洗脱，收集黄色溶液变为无色以后的液体，并以薄层层析色谱跟踪。干燥，粉碎，收总黄酮0.047千克。经HPLC检测，总黄酮的含量为88.6％。
权利要求
1.一种从植物中提取多甲氧基黄酮的方法，包括以下步骤1)醇提植物果实粉碎，用乙醇浸提；2)萃取回收乙醇后，加氯仿萃取后用酸萃取；再用碱萃取；调PH至中性；3)层析回收氯仿后，干燥，上硅胶柱，用氯仿丙酮混合液进行洗脱；4)收集洗脱液，干燥；其中所述的植物为芸香科柑桔属植物。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是所述的醇提步骤中，乙醇浓度为75％，按体积重量比计，乙醇的加入量为植物果实的3-7倍；浸提3-6次，每次8-15小时。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征是所述的醇提步骤中，按体积重量比计，乙醇的加入量为植物果实的5倍；浸提4次，每次12小时。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是所述的萃取步骤中，按体积重量比计，氯仿、酸、碱的加入量均为植物果实的0.1-0.5倍；氯仿萃取2-7次；酸、碱均萃取2-4次；酸、碱的浓度均为1-5％。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征是所述的萃取步骤中，按体积重量比计，氯仿、酸、碱的加入量均为植物果实的0.3倍；氯仿萃取5次；酸、碱均萃取3次；酸、碱的浓度均为3％。
6.根据权利要求1、4或5所述的制备方法，其特征是所述的萃取步骤中，酸为盐酸，碱为氢氧化钠。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是所述的层析步骤中，氯仿与丙酮的体积比为70-98∶30-2。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征是所述的氯仿与丙酮的体积比为95∶5。
全文摘要
本发明公开了一种从植物中提取多甲氧基黄酮的方法，通过醇提、萃取、层析、收集干燥等步骤从芸香科柑桔属中提取含量高于80％的多甲氧基黄酮。本发明的提取工艺简单，成本低。适宜于工业化大生产。
文档编号C07D311/00GK1683361SQ20051002430
公开日2005年10月19日 申请日期2005年3月10日 优先权日2005年3月10日
发明者潘福生, 叶杉 申请人:杭州华东医药集团生物工程研究所有限公司