专利名称：一种从淫羊藿属植物制备高含量(98％)淫羊藿甙的技术的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种从淫羊藿属植物中制备含量大于98%的淫羊藿甙的方法。
背景技术：
淫羊藿属小檗科植物心叶淫羊藿(Epimedium brevicornum Maxim·)、箭叶淫羊藿(Epimedium sagittatum Maxim.)、柔毛淫羊藿(Epimedium pubescens Maxim·)、或車月鲜淫羊藿(Epimedium koreanum Nakai)的干燥茎叶。淫羊藿主要含有主要含黄酮类化合物、木脂素、生物碱、挥发油等，其中黄酮类主要包括淫羊藿甙(icariin)、淫羊藿次甙(icarisoside)等，；朝鲜淫羊藿含淫羊藿式、淫羊藿新式(epimedoside)A、B、C、D、E等；箭叶淫羊藿含淫羊藿甙、脱水淫羊藿甙元-3-0-α-鼠李糖甙，淫羊藿甙元-3-0-α-鼠李糖甙，槲皮素等。目前主要研究内容是分离纯化淫羊藿甙的工艺，淫羊藿甙主要用于改善心脑血管系统功能、增强机体免疫能力、促进DNA合成及预防和治疗性功能障碍等，淫羊藿甙还有抗衰老和抗肿瘤作用。 目前，淫羊藿甙提取方法主要有水提醇沉、醇提水沉、酶法提取、超声波提取、微波助提等，纯化方法有絮凝剂纯化法、大孔树脂联合纯化法、硅胶层析柱纯化法、聚酰胺层析纯化法等。但是现有工艺生产的产品存在以下几个问题产品含量普遍偏低、产品生产成本较高、产品有毒有机溶剂残留量较高、提纯步骤冗长、生产周期长、生产工艺对环境污染较严重。中国专利文献公开的“一种制备高纯度淫羊藿甙的方法”(申请号01120115)，其特征在于它是采用高速逆流色谱(HSCCC)法从淫羊藿粗提物中制备高纯度的淫羊藿甙，其溶剂体系由A、B、C三个组分组成，A组分可以为氯仿，二氯甲烷，四氯化碳，1，2- 二氯乙烷等氯代物；B组分可以为甲醇，乙醇，乙腈，丙酮等；C组分为水，体积比依次为2-6 1-5 1-4。“从淫羊藿中提取分离淫羊藿苷及总黄酮的方法”(申请号200810196890)，其特征在于包括如下步骤a.将淫羊藿药材加至逆流提取罐内，再将20-40%乙醇缓慢倒入提取罐中，乙醇用量为淫羊藿重量的10-30倍，提取2-4次，每次1-1. 5小时；每次按5L/kg药材量添加新的溶剂；b.合并上述数次提取液，以离心机分离；收集上清液；c.以孔径为O. 02-0. I μ m的微滤膜除沉过滤，跨膜压力为O. 1-0. 3Mpa，料液温度为30-60度，得透过液；d.将所得透过液通过截留分子量为1000-50000的超滤膜分离，跨膜压力O. 5-lMpa，料液温度30-50°C，得超滤液；e.将所得超滤液以截留分子量为200-500的纳滤膜处理，跨膜压力为l-2Mpa，料液温度30-50°C，得截留液；f.将截留液干燥，干燥温度60°C以下，干燥物水份(5.0%，干燥物即为淫羊藿有效成分富集物。
发明内容
本发明的目的是为从淫羊藿属植物中制备高含量(98% )淫羊藿甙开发一种新工艺，以便解决目前市场上生产该产品的技术中所存在的问题，以便得到高回收率和高含量的淫羊藿甙产品。本发明的目的主要通过以下技术过程来实现具体步骤如下I)从淫羊藿中提取淫羊藿甙将淫羊藿叶子粉碎过10目，加其重量12-15倍量的含水有机溶剂(I )加热回流提取三次，每次提取I. 5小时，过滤提取液，用含水有机溶剂(I )洗涤提取渣，合并提取液及洗涤液，减压浓缩至一定的比重，就得到淫羊藿甙的粗提液；上述含水有机溶剂(I )中有机溶剂的含量为40-95v% ;上述有机溶剂包括甲醇、乙醇、甘油、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯；2)粗分离淫羊藿甙利用极性或者弱极性的大孔树脂进行初分离。将非离子型的极性或者弱极性大孔网状吸附树脂置于乙醇中浸泡24小时，然后用乙醇、去离子水依次冲 洗树脂；将经过上述过程活化过的树脂，用重力沉降法装柱；将过程I)中得到的粗提液经过滤后，清夜上样，在采用含水有机溶剂(II )对大孔树脂进行洗脱，分段收集，用HPLC法检测洗脱过程，在270nm直到检测不出淫羊藿甙；减压浓缩收集的各部分洗脱液，就得到粗分离的淫羊藿甙产物；上述含水有机溶剂(II )中有机溶剂的含量为20-90v% ;上述含水有机溶剂(II )中的有机溶剂包括甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇；3)纯化粗分离淫羊藿甙利用溶剂处理法对粗分离淫羊藿甙进行纯化。将过程2)得到的粗分离的淫羊藿甙产物，用含水有机溶剂(III)加热溶解，过滤，不溶物再用含水有机溶剂(III)加热溶解一次，合并两次过滤液，减压浓缩至含有机溶剂至一定浓度，静置，放凉，析晶，过滤结晶物，用有机溶剂(IV)洗涤结晶物；上述含水有机溶剂(III)中有机溶剂的含量为30-90v% ;上述含水有机溶剂(III)中有机溶剂包括甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇；上述有机溶剂(IV)包括甲醇、乙醇、丙酮；4)重结晶处理利用溶剂处理法对初结晶物进行重结晶处理。将过程3)得到的初结晶物，用含水有机溶剂(V )加热回流溶解，过滤，清夜浓缩至一定的浓度，静置，结晶，过滤结晶物，再用含水有机溶剂(VI)对结晶物加热溶解，过滤，过滤液静置，结晶，过滤结晶物，就得到含量大于98%的淫羊藿甙产物；上述含水有机溶剂(V )中有机溶剂含量为50-90v% ;上述含水有机溶剂(V )中有机溶剂包括甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇；上述含水有机溶剂(VI)中有机溶剂含量为70-95v% ;上述含水有机溶剂(VI)中有机溶剂包括甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇；所述步骤I)中淫羊藿属植物包括心叶淫羊藿、柔毛淫羊藿、朝鲜淫羊藿和巫山淫
牛隹ο所述步骤2)中所用的大孔网状吸附树脂包括聚丙乙烯树脂、聚苯乙烯树脂、聚甲基丙烯酸酯树脂、丙烯酰胺与苯乙烯共聚物树脂。所述步骤3)、过程4)中有机溶剂的用量为15-30倍量；所述步骤3)、过程4)中静置，析晶时间为24_48小时。该发明所述说的一种从淫羊藿属植物制备高含量(98% )淫羊藿甙的技术优势在于a)联合使用大孔树脂和有机溶剂纯化法相结合，使产品的回收率和纯度都有明显的提闻。b)简化生产工艺，缩短生产周期，使生产成本有所降低。
c)使用了无毒无害的有机溶剂，大大降低了产品中有毒有害溶剂的残留量，提高了广品的品质。
图I为粗分离淫羊藿甙产物的HPLC分析图谱图2为初结晶淫羊藿甙产物的HPLC分析图谱图3为重结晶淫羊藿甙产物(98% )的HPLC分析图谱具体实施实例实例I :I)提取将200g淫羊藿甙含量为O. 6%原料经过粉碎，放入3000ml三角瓶中，·加入2000ml、70%含水乙醇溶液，提取三次，一次I. 5H/次，合并三次提取液，减压浓缩至d=1.08(比重)，约300ml，加去离子水稀释至500ml，静置、放凉、过滤，清夜490ml待用，经HPLC检测，清夜中淫羊藿甙的浓度为2. 4mg/ml，有效成分回收率为98%。2)粗分离将I)中待用的490ml清夜上样于经过处理的200g大孔树脂HPD-100 (沧州宝恩)，HPLC检测上样过程，上样结束后，用去离子水洗脱杂质，再用梯度洗脱淫羊藿甙，收集50%含水乙醇洗脱部分，减压浓缩，得到粗分离产物3. Og,经HPLC检测，含量为38%，有效成分回收率为94. 8% .3)初结晶将2)中得到的粗分离产物3. Ogj 65%含水丙加热溶解，回流两次，合并两次清夜，浓缩至d = I. 05 (比重)，加丙酮调节浓缩液中丙酮含量为50 %，静置、结晶、过滤，得到初结晶粉末I. 65g J^HPLC检测含量为65. 4%，有效成分回收率为90%。4)重结晶将3)中得到的I. 65g初结晶用不含水丙酮热回流溶解两次，每次30min，合并两次清夜，浓缩至1/3体积，冷却结晶，结晶再用不含水丙酮重结晶一次，得到最终结晶产物O. 98g J^HPLC检测含量为98. 23%，有效成分回收率为80%。实例2 I)提取将200g淫羊藿甙含量为O. 6%原料经过粉碎，放入3000ml三角瓶中，加入2000ml、70%含水乙醇溶液，提取三次，一次I. 5H/次，合并三次提取液，减压浓缩至d=1.06(比重)，约350ml，加去离子水稀释至600ml，静置、放凉、过滤，清夜580ml待用，经HPLC检测，清夜中淫羊藿甙的浓度为2. 07mg/ml，有效成分回收率为100%。2)粗分离将I)中待用的580ml清夜上样于经过处理的200g大孔树脂DM-130 (山东鲁抗)，HPLC检测上样过程，上样结束后，用去离子水洗脱杂质，再用梯度洗脱淫羊藿甙，收集40 %含水乙醇洗脱部分，减压浓缩，得到粗分离产物2. 45g，经HPLC检测，含量为47. 2 %，有效成分回收率为96% .3)初结晶将2)中得到的粗分离产物2. 45g，用80%含水丙加热溶解，回流两次，合并两次清夜，浓缩至d= 1.08(比重)，加丙酮调节浓缩液中丙酮含量为70%，静置、结晶、过滤，得到初结晶粉末I. 58g J^HPLC检测含量为70. 2%，有效成分回收率为92%。4)重结晶将3)中得到的I. 58g初结晶用乙醇热回流溶解两次，每次30min，合并两次清夜，浓缩至1/4体积，冷却结晶，结晶再用无水乙醇重结晶一次，得到最终结晶产物1.05g，经HPLC检测含量为98. 86%，有效成分回收率为87%。实例3
I)提取将200g淫羊藿甙含量为O. 6%原料经过粉碎，放入3000ml三角瓶中，加入2000ml、70%含水乙醇溶液，提取三次，一次I. 5H/次，合并三次提取液，减压浓缩至d=1.08(比重)，约300ml，加去离子水稀释至500ml，静置、放凉、过滤，清夜500ml待用，经HPLC检测，清夜中淫羊藿甙的浓度为2. 3mg/ml，有效成分回收率为95. 8%。2)粗分离将I)中待用的500ml清夜上样于经过处理的200g大孔树脂LX-Il (西安蓝晓)，HPLC检测上样过程，上样结束后，用去离子水洗脱杂质，再用梯度洗脱淫羊藿甙，收集50 %含水乙醇洗脱部分，减压浓缩，得到粗分离产物3. 2g，经HPLC检测，含量为35. 7 %，有效成分回收率为95% .3)初结晶将2)中得到的粗分离产物3. 2g，用80%含水丙加热溶解，回流两次，合并两次清夜，浓缩至d = I. 08 (比重)，加丙酮调节浓缩液中丙酮含量为60 %，静置、结晶、过滤，得到初结晶粉末I. 7g J^HPLC检测含量为63. 9%，有效成分回收率为91%。4)重结晶将3)中得到的I. 7g初结晶用80%热回流溶解两次，每次30min，合并两次清夜，浓缩至1/4体积，调节乙醇含量至50%，冷却结晶，结晶再用不含水丙酮重结晶 一次，得到最终结晶产物I. 02g J^HPLC检测含量为98. 67%，有效成分回收率为84%。
权利要求
1.一种从淫羊藿属植物制备高含量(98% )淫羊藿甙的技术，其特征在于 1)从淫羊藿中提取淫羊藿甙将淫羊藿叶子粉碎过10目，加其重量12-15倍量的含水有机溶剂(I )加热回流提取三次，每次提取I. 5小时，过滤提取液，用含水有机溶剂(I )洗涤提取渣，合并提取液及洗涤液，减压浓缩至一定的比重，就得到淫羊藿甙的粗提液；上述含水有机溶剂(I )中有机溶剂的含量为40-95v% ;上述有机溶剂包括甲醇、乙醇、甘油、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯； 2)粗分离淫羊藿甙利用极性或者弱极性的大孔树脂进行初分离；将非离子型的极性或者弱极性大孔网状吸附树脂置于乙醇中浸泡24小时，然后用乙醇、去离子水依次冲洗树脂；将经过上述过程活化过的树脂，用重力沉降法装柱；将过程I)中得到的粗提液经过滤后，清夜上样，在采用含水有机溶剂(II )对大孔树脂进行洗脱，分段收集，用HPLC法检测洗脱过程，在270nm直到检测不出淫羊藿甙；减压浓缩收集的各部分洗脱液，就得到粗分离的淫羊藿甙产物；上述含水有机溶剂(II )中有机溶剂的含量为20-90v% ;上述含水有机溶剂(II )中的有机溶剂包括甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇； 3)纯化粗分离淫羊藿甙利用溶剂处理法对粗分离淫羊藿甙进行纯化；将过程2)得到的粗分离的淫羊藿甙产物，用含水有机溶剂(III)加热溶解，过滤，不溶物再用含水有机溶剂(III)加热溶解一次，合并两次过滤液，减压浓缩至含有机溶剂至一定浓度，静置，放凉，析晶，过滤结晶物，用有机溶剂(IV)洗涤结晶物；上述含水有机溶剂(III)中有机溶剂的含量为30-90v% ;上述含水有机溶剂(III)中有机溶剂包括甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇；上述有机溶剂(IV)包括甲醇、乙醇、丙酮； 4)重结晶处理利用溶剂处理法对初结晶物进行重结晶处理；将过程3)得到的初结晶物，用含水有机溶剂(V )加热回流溶解，过滤，清夜浓缩至一定的浓度，静置，结晶，过滤结晶物，再用含水有机溶剂(VI)对结晶物加热溶解，过滤，过滤液静置，结晶，过滤结晶物，就得到含量大于98%的淫羊藿甙产物；上述含水有机溶剂(V)中有机溶剂含量为50-90v%;上述含水有机溶剂(V )中有机溶剂包括甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇中的一种或者更多；上述含水有机溶剂(VI)中有机溶剂含量为70-95v%;上述含水有机溶剂(VI)中有机溶剂包括甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇。
2.按权利要求I所述的一种从淫羊藿属植物制备高含量(98%)淫羊藿甙的技术，其特征在于所述步骤I)中淫羊藿属植物包括心叶淫羊藿、柔毛淫羊藿、朝鲜淫羊藿和巫山淫羊藿。
3.按权利要求I所述的一种从淫羊藿属植物制备高含量(98%)淫羊藿甙的技术，其特征在于所述步骤2)中所用的大孔网状吸附树脂包括聚丙乙烯树脂、聚苯乙烯树脂、聚甲基丙烯酸酯树脂、丙烯酰胺与苯乙烯共聚物树脂。
4.按权利要求I所述的一种从淫羊藿属植物制备高含量(98%)淫羊藿甙的技术，其特征在于所述步骤3)、过程4)中有机溶剂的用量为15-30倍量；所述步骤3)、过程4)中静置，析晶时间为24-48小时。
全文摘要
本发明涉及一种从淫羊藿属植物中制备含量大于98％的淫羊藿甙的方法。它是将淫羊藿叶子粉碎过目，从淫羊藿中提取淫羊藿甙，利用极性或者弱极性的大孔树脂进行初分离，利用溶剂处理法对粗分离淫羊藿甙进行纯化，利用溶剂处理法对初结晶物进行重结晶处理；该发明的技术优势在于a)联合使用大孔树脂和有机溶剂纯化法相结合，使产品的回收率和纯度都有明显的提高。b)简化生产工艺，缩短生产周期，使生产成本有所降低。c)使用了无毒无害的有机溶剂，大大降低了产品中有毒有害溶剂的残留量，提高了产品的品质。
文档编号C07H1/08GK102807595SQ20111015294
公开日2012年12月5日 申请日期2011年6月2日 优先权日2011年6月2日
发明者王平, 李雪松, 任晓峰, 李建, 卢义德, 苗志宏 申请人:汉中天然谷生物科技有限公司