带官能化辅助支链的酰化假二肽的制作方法

专利名称：：带官能化辅助支链的酰化假二肽的制作方法
技术领域：
：本发明涉及有关化学领域，更特别地涉及肽化学的领域.确切地，本发明涉及带官能化辅助支链(brasauxiliaire)的酰化假二肽，该化合物可接枝或不接枝成缀合物(conjugu6s)形式，其辅助支链赋予该分子原始的生物活性及物理化学性质.辅助支链的化学性质通过微调其肽的原始性质或赋予其新性质，赋予耽化假二肽额外尺寸.这些带有官能化辅助支链的分子可缀合接合到药效团、抗原或媒介物分子，生物缀合涉及偶合两种或两种以上的化学实体，以形成具有与单个组成性质不同的新分子配合物.具有固有药理性质的天然或合成产物可彼此组合，得到具有原始化合物或比原始化合物改善的物理化学与药理性质的新实体.生物缀合作用的应用涉及人的药物、动物药物以及诊断方法的各个领域.,支*曾经叙述多种相同双官能或异双官能类偶合刑，其可用于接合各种分子，其分子包括氨基酸、肽、蛋白质、糖类、寡錄、多珐、核酸、寡核苷酸、多核苷、脂类，以及实际上每一种带有一个可能形成键的官能团的分子.近年来对由两个带有不同信息的分子组成的抗原构建体的合成进行过相当多的研究，Good等人1(1987),《Science》，235:1059-1662例如合成过含有同时被辅助T淋巴细胞和B淋巴细胞识别的抗原决定簇的肽.Bessler及Jung(1992)《Res.Im迈unol》，5:548-553描述由肽以及免疫刺激剂组成的缀合物.Hoffmaim等人[(1997)《FEMSImmunol.Med.Microbiol.Microbiology》，17:225-234描述了在脂肽与由峰毒肽衍生的合成肽之间形成的缀合物.Ulrich和Myers[(1995)《VaccineDesign》，Plenm出版，纽约，495-524观察到除非半抗原和MPL添加剂处在相同的脂类体内(一裤酰基脂类A),否则免疫反应无效.Ulrich及Myers提示MPL佐刑与半抗原间可能存在有共价鍵.亊实上，证实半抗原-佐刑缀合物用作疫苗的佐刑是非常有效的Ikeda等人[(1999)《Chem.Pharm.Bull》，47(4)，568-568报告了脂类A的结构类似物与具有肽性质的肺瘤抗原之间的合成，且证实其具有体外致有丝分裂的活性.这种缀合概念对于蛋白质，甚至对于蛋白质-多糖对都是有效的.的确，人们知道，单独使用多糖作为疫苗对于5岁以下的儿童仅能产生微弱的免疫反应，原因在于该反应取决于T细胞.[Gotschlich等人，(1977);《AntibodiesinHumanDiagnosisandTherapy》，Peltola等人，(1977)，《Pediatrics》》60:730-737.相反地，与媒介蛋白质连接的多糖类没有给出特别强的免疫反应.这种现象于1931年由Avery及Goebel发现[(1931)，《J.Exp,Med.》，54:437-447.这些年来开发的多种疫苗反映出在这个领域所取得的进展.特别地应提到为抗流行性感冒嗜血杆菌(Haemophilusinfluenzae)以及不同血清型的肝炎链球菌(Streptococcuspneumoniae)的疫苗[Powell及Newman，(1995)，《VaccineDesign》》，Plenum出版，纽约l.对于后者，己经开发多效价疫苗[Sood及Fatton，(1998)，《Exp，Opin.Invest.Drugs》，7:(3)，333-347，使用由与多糖-蛋白质单元结合的佐刑组成的配合物产生了新前景.化学合成生物缀合物的技术已获得很好发展，今天能够进行多項几年前认为无法进行的研究主题，同时可使用大量可利用的相同或异双官能反应刑，以及使用在大量参考文献中描述的缀合方法[Hermanson，(1996)，《BioconjugateTechniques》，Academic出版,纽约,例如，可以提及还原胺化方法[Roy等人，(1984)，《Canad.J.Biochem.CellBiol.》62:270-279，Hermansson，(1995)，472页，该方法允许栽带搭官能团的分子，与在肽或蛋白质分子上的伯胺，与肽-多糖缀合物或与药效(基)团缀合.这种反应导致形成极为穗定的二
发明内容更确切地，本发明的目的是由官能化氨基酸得到的假二肽(pseudodipeptide)，其游离的胺基官能被脂肪酸酰胺化，假二肽的一端栽有官能化辅助支链.更明确地，本发明的目的是N-酰化假二肽，该假二肽的一端部带有一个呈中性或带电荷的酸基，其另一端部带有一个官能化辅助支链，该化合物具有通式I:X-(CH2)m-CH-(CH2)n-CO-Y-(CH2)p-CH-(CH2)q-ZII0)NHRNHR2其中R！及R2各自表示由含有2至24个碳原子的饱和或不饱和的直链或支链羧酸得到的酰基，该酰基未被取代的或带有一或多个选自羟基、烷基、烷氣基、酰氣基、胺基、酰氨基、酰疏基以及(CrCM)烷硪基的取代基.下标m、n为0至10的值，下标p及q为1至10的值Y表示O或NH，x及z表示官能化辅助支链或呈中性或带电荷的酸基，其选自下述基团-羧基-羧基[(CrCs)烷氧基-羧基[(CVCs)烷硫基-膦酰基[(CVCs)烷氣基-膦酰基l(CVCs)烷砥基-二轻基磷酰氧基[(d-Cs)烷氧基-二羟基磷酰氧基(CVCs)烷硖基-二鞋基裤酰氣基-羟基磺酰氧基-羟基磺酰基(Q-Cs)烷氣基-羟基磺酕基[(CrCs)烷硫基-鞋基磺酰氧基l(CrCs)烷氣基-羟基磺酰氣基[(OCs)烷碟基l-[羧基(d-Cs)烷基I氨基羰基-[二羧基(Q-Cs)烷基l氨基羰基-l氨合(CrCs)烷基l氨基羰基-(羧基氨基(CLCs)烷基)氨基羰基但限制条件为取代基X或Z中至少一个表示官能化辅助支链.X或Z辅助基具有通式(H):A-(CO)r-(CH2)s-W(II)式中A表示O、S或NH下标r为0或1的值，下标s为1至10的值.W选自下述基团-甲酰基-乙耽基-氛基-卣素(卤代)-氨基-溴-或碟-乙跣氛基-耽基耽氨基(acylamido)-二跣基亚胺基,就基-烷硫基(alkylthio)-羟基-1，2-二羟基乙基-烷氣基-耽氧基-乙烯基-乙炔基-游离羧基-呈酯、混合肝、酰胺或酰肼形式的羧基，-叠氮基-氛碟基(thiocyano)本发明特别涉及新的N-跣化假二肽，该假二肽的一端部带有一个呈中性或带电荷的酸基，其另一端部带有一个官能化辅助支链，该化合物具有通式I:X-(CH2)m-CH-(CH2)n-CO-Y-(CH2)p-CH-(CH2)q-ZII(1》隨1NHR2其中R,及R2各自表示由含2至24个碳原子的饱和或不饱和的直链或支链羧酸得到的酰基，其为未被取代的或带有一个或多个选自鞋基、烷基、烷氧基、耽氧基、氨基、跣氨基(acylamino)、耽疏基(acylthio)以及(C广C24)坑疏基的取代基.下标m、n为0至10的值，下标p及q为1至10的值，X及Z各自表示呈中性或带电荷的酸基或官能化辅助支链，但限制条件为取代基X或Z中至少一个表示官能化辅助支链.Y表示0或NH,酸基X或Y优选地选自下述基团-羧基-羧基[(CrCs)烷氣基-羧基[(CrCs)烷疏基J-膦酰基l(d-Cs)烷氣基-膦酰基[(CrCs)烷硫基l-二羟基砩酰氧基[(CrCs)烷氣基-二羟基磷酰氣基-轻基磺酰氣基-羟基磺酰基[(CrCs)烷氣基-羟基磺跣基[(CrCs)烷硖基l-羟基磺酰氣基[(CVCs)烷氣基l-羟基磺耽氣基[(CVCs)烷硫基以及含X或Z的辅助基团满足通式II,但二羟基乙基除外.若取代基X或Z表示呈中性酸基，涉及游离羧酸、磺酸、膦酸或裤酸.若酸基呈电荷形式，则涉及盐化的羧酸、磺酸、膦酸或磷酸形式，特别地，通过添加无机或有机械盐化，优选地治疗上相容的无机或有机碱进行盐化.若这些碱不是治疗上相容的，这些械可按识别、纯化及分离的方式使用.在治疗上相容的盐化械中，特別列举例如氣氧化钠、氣氣化钟或氩氣化锂的械金属威，铵盐，械土金厲械，例如氣氣化钙或氣氣化IS,镁盐，亚铁金属盐等，有机械，例如由伯、仲、叔胺得到的城，械性反应的氨基酸，例如賴氨酸或乌氨酸或氨基棘.治疗上不可使用的械例如是马钱子械、番木整械、N-甲基葡萄糖胺或N-甲基，马啉.如前述，由此衍生的盐类将作为分离、鉴定或純化的手段.当m等于l,而n等于0时，该分子由丝梭酸或天冬A酸得到.m等于2，而n等于O时，该分子特別地衍生自髙丝氛酸或谷氨酸.若Y4H、p-3以及q"l，則可能涉及瓜氨酸、乌A酸或粗氨酸衍生物.若p等于4及q等于l，則特别地涉及高精我酸或賴我酸，若取代基X或Z表示通式(III)的辅助基o-co-(cw(川)下标s为1至10的值，但更特別等于4、5或6W优选地选自下列基团-甲耽基-氨基-羟基-l,2-二羟基乙基在本发明的目的假二肽中，特別值得注意的为实际优选通式iv化合物X-(CH2)m-CH-(CH2)n-CO-NH-(CH2)P-CH-(CH2)q-ZNHRiNHR2式中R,及R:各自分別表示衍生自含2至24个破原子的饱和或不饱和的直链或分支链羧酸的酰基，其酰基未被取代的或带有一个或多个选自羟基、烷基、垅氣基、酰氣基、A基、酰氨基、酰碟基及(c,-c")烷碟基的取代基，下标m及n为0至IO的值，下标p及q为1至10的值，以及其中取代基X或Z中的一个为欺基或二羟基裤耽氣基或欺基[(C广C!)烷氧基或欺基[(C,-Cs)烷碟基l或{欺基[(d-Cs)烷基氨碁羰基或[二羧基(C,-Cs)坑基氨基羰基或{羧基[氨基(C,-C5)坑基)-氨基羰基；以及其中另一个取代基为耽氣基，它选自6-氨基己酰氧基、6-氧代己耽氧基、6-羟基己酰氣基、6,7-二羟基庚酰氣基或3-羧基丙耽氧基.R,及R,定义包括具有含2到24个碳原子的、相同或不同的、饱和或不饱和的、支链或直链的不同链长的酰化衍生物，其可带有一个或多个逸自烷基、氨基、酰氨基、羟基、坑氣基、酰氣基、酰硫基及坑硖基的取代基.在相关的耽化基团中，由月桂酸、2-羟基辛酸、3-羟基肉豆蔻酸、2-癸酰氣基辛酸、3-月桂氣基肉豆鬼酸、3-肉豆寇氣基肉豆难酸以及3-棕榈氧基肉豆珐酸得到的酰化基团是目前优选的耽化基团.本发明特別涉及作为优选化合物的在下表列出的假二舦<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>本发明特别涉及下列实际优选的化合物-N-[[(R)-3-十二耽基氣十四酰基氨基-D-天冬A酸，a-N-{(4R)-5-羟基-4-[(R)-3-羟基十四狭基我基戊基》耽胺及其与无机械或有机械的加成盐(实施例1.2)-3-[(R)-3-十二耽基氧十四Sfc基氨基-4-氣代-5-氣杂-9-[(R)-3-羟基十四昧基氨基j-癸-l，10-二醉-l-二氣裤酸醋10-(6,7-二羟基庚酸癍)及其与无机减或有机威的加成盐(实施例2.1)-3-[(R)-3-十二酰基氣十四酰基我基-4-氣代-5-氛杂-9-(R)-3-羟基十四耽基氨基-癸-l，10"二醇-l-二氣磷酸瞎10(6-氣代已酸醋)及其与无机械或有机碱的加成盐(实施例2.2)-N-(R)-3-十二酖基氧十四酰基氛基-D-天冬氨酸，a-N-((4R)-5-幾基-4-[(R)-3-羟基十四酰基氨基戊基)酰胺5-0-(6,7-二羟基庚酸酯)及其与无机减或有机械的加成盐(实施例2.3)-N-[(R)-3-十二酰基氣十四酰基氨基-D-天冬A酸，a-N-U4R)-5-幾基-4-[(R)-3-雍基十四耽基氨基戊基}耽胺5-0-(6-氣代己酸豳)及其与无机械或有机碱的加成盐(实施例2.4)-(3RS,9R)，(3R，9R)及(3S，9R)-3-[(R)-3-十二酰基氣十四耽基氨基]-4-氣代-5-氮杂-9-[(10-3-羟基十四酰基氨基-癸-l,10-二醉1-二氣确酸豳10-(6-氨基己酸醋)及其与无机械或有机碱的加成盐(实施例2.6、2.7及2.8)-3-[(R)-3-十二酰基氣十四酰基氨基"-氧代-5-氣杂-9-[(R)-3-羟基十四酰基氨基]-癸-l,10-二醇1-二氣磷酸薛10-(6-羟基己酸酯)及其与无机械或有机械的加成盐(实施例2.9)-2-[(R)-3-十二耽基氣十四酰基氛基l-4-(二羟基磷耽氣基)-丁酸(2-[(R)-3-羟基十四耽基A基-5-(6-氣代己基〉氨基》戊癍及其与无机械或有机械的加成盐(实施例2.10)-N-(R)-3-十二酰基氣十四酰基-D-天冬氨酸，a{(4R)-5-(6-氨基已酰氧基)-4-(R)-3-羟基十四耽基氨基]戊基}酰胺及其与无机械或有机减的加成盐(实施例2.16)-N-[(R)-3-十二酰基氣十四酰基-D-天冬A酸，(X-N-{(4R)-5-丁二酰氣基-4-(R)-3-羟基十四酰基氛碁戊基))酰胺及其与无机械或有M的加成盐(实施例2.19)-N-{00-3-十二酰基氣十四耽基〗H)-天冬我酸，ot{(411)-5-(6-氨基己酰氡基)-4-(R)-3-羟基十四耽基氨基戊基)酰胺P-N-[US)-1-羧基-5-氨基戊基酰胺及其与无机械或有机城的加成盐(实施例2.22){(R)-3-十二耽基氣十四酰基]-D-天冬我酸，a-N-{(4R)-5-(6-氨基已酰氧基)-4-[(R)-3-羟基十四耽基氨基戊基)耽胺P-N-[US)-1，2-二羧基乙基1耽胺及其与无机碱或有机械的加成盐((实施例2.24)这些化合物的区別在于原本令人感兴趣的药理性质，主要有关免疫调理方面的药理性质.它们在制备混合配方的疫苗组合物，或作为与多肽或多糖性质的抗原或与由与多糖蜒合的多肽构成的化合物形成的共价缀合物方面是特別有意义的.它们特別可以用于预防原虫、微生物及病毒感染或用于治疗某些自体免疫病.这些化合物罔其辅助支链具有或多或少的亲水或疏水特性，通过它们形成非共价締合物的性质而用作有意义的治疗分子的栽体.能使它们与有意义的治疗分子偶合的化学性质及其两亲特性，可促进締合它们的分子配制及输送至细胞腹受体以及输送至细胞壁及胞质.本发明的化合物可单独使用，或呈与治疗有利的分子共价或非共价结合使用，可采用口服、肠胃外、直肠、局部、皮下或粘膜下用药.它们可单独使用，或呈与治疗有利的分子共价或非共价结合使用，可采用活体外与血细胞同时培育，以便促进形成免疫合格的细胞，随后通过肠胃道途径将其细胞注回到活体内.这些分子具有类似的性质，当例如用于疫苗接种时，可作为免疫系统的佐刑，与适当抗原共价或非共价结合，可用作抗病毒、寄生虫、微生物或真苗来源的疾病，这些緩合或緩合的分子还可能用于治疗某些自体免疫病.相反地，若干本发明的化合物，在共价或非共价结合后，显示出在它们诱导产生细胞分裂素，或来自造血器官及淋巴器官的免疫活性干细胞成熟的能力方面具有不同的性质.若干本发明的化合物可在有或没有适当批原存在下促进单核细胞成熟且分化成为功能性树状细胞，且对増强体液及细胞的免疫力有作用.若千本发明的化合物促进属于造血系统的一部份细胞，特別是骨髄内部细胞的分化，并且能改善及校正某些免疫系统的病症.它们特別显示出抗病毒的性质.根据本发明的化合物由于毒性低故特别令人感兴趣.它们与抗原呈共价或非共价结合使用，用于预防或治疗人体及动物体传染病，依据特定适应症以及个体体重，使用刑量为每单位刑量0.005毫克至100毫克，以及每日0.005毫克至200毫克.本发明还有一个目的是一种N-酰化假二肽的制备方法，该假二肽一端带有一个呈中性或带电荷的酸基，另一端带有一个官能化辅助支链，该化合物具有通式I，该方法包括下列步脒借助正文保护刑(blocageorthogonaux)保护(bloque)于位置(q+l)的按官能团和于co-官能化氨基酸的位置w的YH，还包括使余下呈游离的羧酸官能团与还原刑反应而获得对应的醇，还包括释放出位里(q+1)的胺官能团，然后利用式IU)H(其中R,如前面所定义)的羧酸的官能衍生物进行跣化，以及随后释放末端官能团，而获得通式V的官能化氨基醇Y-(CH2〉p-CH-(CH2)q-OH(V)NHR2式中Y表示H0或优选地仰,，R,表示衍生自含2至24个碳原子的饱和或不他和羧酸的耽基，该耽基为未经取代的或带有一个或多个如上定义的取代基，p及q各自表示1至IO的整数，该氨基醇在肽縮合刑存在下于情性溶剂中与通式VI的w-官能化的氨基酸衍生物缩合X-(CH2)rCH-(CH2)n-COOH(VI)■，式中R,为衍生自含2至24个破原子的饱和或不饱和徵酸的耽基，其为未经取代的或带有一个或多个如前面定义的取代基，m及n为0至IO的整数，以及X为如上定义的可呈酯形式的酸基，而获得通式VII假二肽<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>(VII)式中取代基R'及R,以及下标m、n、p及q如酋面所定义，若有所需要，可使用通式VIII的取代、烷基化或耽化的试刑使该游离末端醉官能团进行取代、烷基化或酰化，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>(VIII)式中A是离去基团、0H、SH或NH,官能下标r优选地等于l,但也可等于O.下标s优选地为2至6,但一般可取1至10的值W优选地选自下列一个基团-甲耽基、-乙耽基、-氛基、-面素、-氨基、-溴-或碘乙耽基氨基、-酰基酰氨基(acylamido)、-二耽基亚氨基、-巯基、-烷碟基、-羟基、-1,2-二羟基乙基、-耽氣基、-乙烯基、-乙炔基、游离或呈晚、混合肝、酰肤或耽肼形式的羧基、-叠氣基、-氛硫基或其前体.若有所需，于偶合刑存在下，该产物进行催化氣化或若干其它去保护处理，获得通式I衍生物X-(CH2)m-CH-(CH2》nCOY-(CH2〉p-CH-(CH2VZ(I)NHRNHR2式中取代基及下标X、Y、Z、R"R"n、m、p及q具有前迷相同定义.本发明还涉及一种获得通式IV的膦耽基假二肽化合物的方法<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>式中R,及IU各自表示衍生自舍2至"个碳原子的饱和或不饱和的直链或支链羧酸的酰基，其酰基为未经取代的或帝有一个或多个选自鞋基、烷基、烷氣基、酰氣基、氨基、酰氨基、酰硫基(acylthio)以及(C1-C24)烷硫基(thio)的取代基，下标m、p及q为1至10的值，下标n为0至IO的值，X及Z各自表示呈中性或帝电荷的酸基或官能化辅助支链，其特征在于使用通过酸解或氣解不穗定的保护刑(blocage),分別保护(bloque)式H,N(CH!),CH服(CH:),-,C00H二氨基酸的于(q+l)位的胺官能团以及于w位的胺官能团，将仍然呈游离的欺酸官能团与还原刑反应而获得对应的醇，使(q+l〉位梭官能团游离，然后利用式R,0H(其中R,已如前定义)羧酸的官能衍生物酰化，然后通过氣解释放出末端胺官能团而获得通式IX的氨基醉H2N-(CH2)rCH-(CH2)q.OH(IX)NHR2式中IU表示衍生自含2至24个破原子的饱和或不饱和的羧酸的酰基，其耽基为未经取代的或带有一个或多个如前面定义的取代基，p及q表示l至10的整数，其特征还在于在肽缩合刑存在下，于情性溶刑中与通式VI的w-羟基化氨基酸衍生物缩合X-(CH2)m-CH-(CH2)n-COOH(Vl>NHR，式中为衍生自含2至24个碳原子的饱和或不饱和羧酸的酰基，其酰基为未经取代的或带有一个或多个如前面定义的取代基，迈为1至IO的整数，n为0至IO的整数，以及X为式(RO)2P-0的二烷氧基-或二芳氧基-碑耽氣基基团，以<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>荻得通式X的假二肽(RO)2PO-(CH2)m-CH"(CH2)n-CO-NH-(CH2)p.CH-(CH2)q-OH(X)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>式中取代基Ri、L以及下标ro、n、p及q如前定义，以及R为氣解不穂定基，若有所需，可使用通式VIII的取代、烷基化或耽化试刑，以取代、坑基化或耽化游离末端醉官能团A-(C0〉广(CH,),-W(VIII)A为离去基，0H、SH或NH,官能团下标r为优选地等于l，也可取0值，下标s优选地为2至6的值，也可取1至10的值，W优选地选自下列基团-甲就基、-乙醜基、-氛基、-卣素、-氨基、-溴-或碘乙耽氨基、-耽基耽A基、-二酰基亚氨基、-巯基、-烷硫基、-羟基、-1,2-二羟基乙基、-酰氣基、-乙蜂基、-乙炔基、游离羧基，或呈欲、混合肝、醜胺或酰肼形式的欵基、-叠氣基、-氛疏基或其前体，若有所需，在偶合刑存在下，将该化合物进行催化氣化或若干其它去保护处理，因而获得通式XI衍生物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>式中取代基W，R,、R,以及下标m、n、p、q、r、s具有前迷相同定义.本发明进一步涉及一种获得通式XII的裤酰基假二肽化合物的方法X-(CH2)m-CH-(CH2)n-C0-O(CH2)(CH-(CH2〉p-Z(XII)NHRiNHR2式中R,及Ra各自表示衍生自含2至24个破原子的饱和或不饱和的直链或支链羧酸的耽基，其耽基为未经取代的或帝有一个或多个选自羟基、汰基、汰氣基、酰氣基、A基、酰A基、酰硖基以及(C广C")垅疏基的取代基，下标迈、p及q为1至10的值，下标n为0至10的值，以及式中X及Z各自表示酸基或官能化辅助支链，该方法包括使用酸解或氣解不穗定的保护刑，分别保护式H,N(CH:)pCHNBU(CH,)"C0-0H二氨基酸于(q+l)位的胺官能团以及于w位的缺官能团，将仍然呈游离的欺酸官能团与还原剂反应而获得对应的醇，使(q+l)位肤官能团游离，然后利用式R,OH(其中IU己如前定义)羧酸的官能衍生物酰化，然后通过氛解释放出末端胺官能团，然后通过w官能化坑基反应性(活性)睇，如三象甲基磺酸鐮，进行胺官能团的坑基化，而获得通式nn的氨基醇W-(CH2》,NH-(CH2〉p-CH-(CH2)q-OH(XIII)NHR2式中L表示衍生自含2至24个破原子的饱和或不他和欺酸的酰基，其跌基为未经取代的或帝有一个或多个如前面定义的取代基，p及q表示1至IO的整数，下标s优选地包括2至7,但可取1至10，其中氨基醇在缩合刑存在下于惰性溶刑中与通式H的co-雍基化氨基酸衍生物缩合X-(CH2)m-CH-<CH2)n-COOH(VI)NHR,式中R,衍生自含2至24个破原子的饱和或不饱和欺酸的耽基，其酰基为未经取代的或带有一个或多个如前面定义的取代基，m为1至IO的整数，n为0至10的整数，以及X为式(ROVP-0的二统氣基"或二芳氡基-裤酰氣基基团，获O得通式XIV的假二肽(RO)2PO-(CH2)m-CH-(CH2)n-CO-0-(CH2)q-CH-(CH2)p-NH-(CH2》,W(XIV》式中取代基R,、R,以及下标迈、n、p，q及s定义如前，以及R为氣解不穗定基团，然后进行催化氣化反应或去保护处理，因而获得通式XV衍生物(HO)2P-CHCH2)m-CH-(CH2)nGO,0-(CH2)q-CH《CH2〉p-NH-(CH2)rW丄I1(XV)0NHRNHR2式中W、R'、R,以及下标m、n、p、q、r及s如前面所定义.W选自下列基团-甲耽基、-乙耽基、-氛基、-鹵素、-氨基、-溴-或碘乙耽氨基、-酰基耽氨基、-二醜基亚胺基、-Ht氣基、-乙蝉基、-乙炔基、游离或呈豳、混合酐、酰胺或耽肼形式的羧基、-叠氣基、一泉破基或其前体.本发明进一步涉及一种制迭通式IV的欺基假二肽的方法X-(CH2)m-CH-(CH2)n-CO-NH-(CH2)p-CH-(CH2)q-Z(IV),NHR2式中R,及IU各自表示衍生自含2至24个破原子的他和或不饱和直链或支链羧酸的酰基，其酰基为未经取代的或带有一个或多个选自羟基、烷基、垅氣基、酰氣基、氨基、醜泉基、酰破基以及(C广Cu)坑碟基的取代基，下标m、p及q为1至10的值，下标n为0至10的值，以及其中X及Z各自表示酸基或官能化辅助支链，其方法包括使用酸解或氣解不穗定的保护刑，分别保护式H,N(CH,),C肺H,(CH,),-,C00H二氨基酸于(q+1)位的胺官能团以及于co位的胺官能团，将仍然呈游离的羧酸官能与还原剂反应而获得对应的醇，使(q+l)位胺官能游离，然后利用式R:0H(其中己如前定义)欺酸的官能衍生物酰化，然后通过氣解释放出末端胺官能团而获得通式IX的氨基醇H2N-(CH2》p-CH-(CH2〉q-OH(IX)NHR2式中R,表示衍生自含2至24个破原于的饱和或不饱和羧酸的跌基，其耽基为未经取代的或带有一个或多个如前面定义的取代基，p及q表示1至IO的整数，其方法包括在肽飨合刑存在下于惰性溶剂中，氨基酵与通式VI的co-欺基氨基酸官能衍生物缩合X"(CH2)m-CH-(CH2VCOOH(VI)NHR,式中R,为衍生自含2至24个破原子的饱和或不他和羧酸的酰基，其酰基为未经取代的或带有一个或多个如前面定义的取代基，边为1至IO的整数，n为0至10的整数，以及X为RO-CO-基形成通式XVI的假二肽RO-CO-(CH2)nrCH-(CH2VCO-NH-(CH2VCH-(CH2)q-OH(XVI)NHRiNHR2式中取代基R"Ib以及下标in、n、p及q定义如前，以及R为进行氣解的不穗定基团，例如像千基，若有所需，使用通式VIII的取代、烷基化或酰化刑，使其游离末端醉官能取代、统基化或耽化A-(CO),-(CH,)'-W(VIII)式中A为离去基团，0H、SH或mh官能，下标r优选地等于l，但也可取O的值，下标s优选地为2至6的值，但可取1至10的值，W优选地选自下列基团-甲it基、-乙耽基、-氛基、-由素、-氨基、-溴-或碘乙酰A基、-酰基耽A基、-二酰基亚胺基、-汰基、-坑硖基、-羟基、-1,2-二羟基6基、-酰氣基、-乙烯基、-乙炔基、游离或呈癍、混合肝、耽胺或酰肼形式的羧基、-4氛基、-氛碟基或其前体，若有所需，在偶合刑存在下，将其进行催化氣化或去保护处理而获得通式XVII衍生物HO-CO-(CH2)m-CH-(CH2》n>CO-NH-(CH2〉p-CH>(CH2VO-(COV(CH2〉,-WNHR,NHR2(XVII》其中取代基W、R,、IU以及下标m、n、p、q、r及s如前面所定义.本发明还涉及一种获得通式IV的膦耽基二肽的方法X-(CH2)m-CH-(CH2)n-CO-NH-(CH2)p-CH-(CH2)q-Z(IV)IINHRiNHR2式中R，及R,各自表示衍生自含2至24个硖原子的饱和或不饱和的直链或支链歡酸的酰基，其耽基为未经取代的或带有一个或多个逸自羟基、坑基、坑氣基、耽氣基、氨基、耽氨基、酰碟基以及(C,-C")坑疏基的取代基，下标边、p及q为1至10的值，下标n为0至10的值，以及式中X及Z各自表示酸基或官能化辅助支链，该方法包括使用不穗疋保护基团通过酸解使通式XVI假二肽的游离羟基官能保护<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>式中取代基R"R,以及下标ffl、n、p及q定义如前，以及R为进行氛解的不稳定基团，例如像辛基，然后幹放呈癍形式存在的羧酸官能，将任选地呈活性形式的这种羧酸官能与还原刑反应，生成相应的伯醉，这种醉官能团用磷跌化刑处理转化成裤酸薛，用酸处理释放被保护的羟基官能团，然后用通式vin反应剂进行取代、酰化或坑基化反应<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>(VIII)式中A为离去基、0H、SH或Nm官能，下标r优选地等于l,但也可取0的值，下标s优逸地为2至6的值，但一舦可取1-10的值，W选自下列的基闭-甲酰基、-乙酰基、-泉基、-鹵素、-氨基、-渙-或琳-乙酰氛基、-酰基耽氨基、-二酰基亚胺基、~疏基、-坑硖基、-轻基、-1,2-二择基乙基、-跌氣基、-乙蜂基，-G炔基、-游离或呈酯或其它衍生物形式的羧基.若有所需，在偶合刑存在下，例如通过氣解将生成的产物去保护，以获得通式XI的产妆<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>式中取代基W,L、R,以及下标m、n、p、q、r及s具有前面的意义，本发明还涉及一种获得通式n的聘酰基二肽的方法X-(CH2〉m-CH-(CH2》n.CO-NH-(CH2)P-CH-(CH2VZ(I"NHRNHR2式中R,及Ri各自表示衍生自合2至24个碟原子的饱和或不他和的直链或支链羧酸的酰基，其酰基为未经取代的或带有一个或多个选自鞋基、坑基、烷氣基、酰氣基、氨基、耽氨基、酰碟基以及(C广C")烷碟基的取代基，下标迈、p及q为1至IO的值，下标n为0至10的值，以及式中X及Z各自表示酸基或官能化辅助支链，该方法包括将通式XVI假二肽中以勒形式存在的欺睃官能去保护RO-CO-(CH2)m-CH-(CH2)n-CO-NH-(CH2)p-CH-〈CH2)q-OH(XVI》■，NHR2式中取代基R,、R，以及下标m、n、p及q定义如前，以及R是氣解时不稳定的基团，例如像苯甲基，然后在肽偶合刑存在下，如此生成的酸与部分保护的二氨基链坑或氛基酸进行肽偶合反应，例如像3-笨甲氣基羰基氨基-l-氨基丙坑、天冬氨酸二苯甲88或e-N-苯甲氣基羰基-L-賴氨酸苯甲蹄，然后，如果希望，偶合产物与通式VIII反应刑进行取代、酰化或坑基化反应A-(C0)'-(CH2).-W(mi)式中A为离去基团、0H、SH或NH,官能团，下标r优选地等于l，但也可取0的值，下标s优选地为2至6的值，但一舭可取1-10的值，W优选地选自下列的基团-甲耽基、-乙酰基、-氛基、-卤素、-氨基、-涣-或碘-乙酰氨基、-酰基耽A基、-二酰基亚胜基、-巯基、-烷硖基、-羟基、-1，2-二羟基乙基、-酰氧基、-乙烯基、-乙炔基、-游离或呈睇或其它衍生物形式的歡基.若有所需，在活性剂存在下，例如通过氣解将如此生成的产物去保护，以获得通式xvni的产物R3-NH-CCHCH^-ChHCI^n-CO-NhKCH^-CHKCH^-CHCOVtCHgVWNHR，NHR2(XV川)式中取代基W、R"R:以及下标m、n、p、q、r及s具有前面的意义，L代表氨基烷基、羧基烷基、二羧基秌基或氨基羧基烷基.有酰氨基的中心的立体化学是由最初使用的泉基酸的构型决定的，而酖氨基的立体化学由最初仗用的脂肪酸构型决定.可从具有L或D构型的二氨基酸或外消旋混合物开始.可始于L，D构型的羟基化氨基酸或其外消旋混合物.全部通式I或IV或XII或XVI化合物的立体异构体或非对映异构体都是本发明的一部分.通常本发明化合物的制备方法是将w-官能化的含N-酰基的氨基酸的酸官能与氛基醉(由还原单-N-酰化二A基酸的欺基得到)的胜官能团偶合，接着O-耽化或-烷基化仍然呈游离的醉官能团，以加入官能化辅助支链，它在联结后可任选地进行改性而幹放出反应性的官能团.最终产物去保护而释放出酸官能团.本发明化合物的实际优选地制备方法(田l)中，w-官能化氨基酸是w-雍基化的a-泉基酸，例如丝氨酸或高丝氨酸，其进行一系列N-保护反应(例如呈叔丁氣基羰基衍生物形式)，通过0-坑基化羧酸欲形成,癍以及裤酸化OH官能团，以引入保护的磷酸欲基.典型的磷酸酴保护基可以是苯基、苄基或邻-二甲苯基.苯基是实际优逸的基闭.其次通过去除保护基(例如使用三象乙酸处理叔丁氣基羰基衍生物)释放出胺官能团，然后用活化的脂肪酸衍生物进行酰化，该衍生物优选地为3-羟基十四睃衍生物，例如卜十二耽基ll十四酸.活化形式可是耽基氣、活性癍、混合肝或任何其它允许形成酰胺鍵的化学形式.然后，通过任选地氨解除去可能存在的卡酯，而获得于a位直带有一个耽基酰氨基以及w位置带有一个(R0)J(0)O-基的欺睃.根振在有机制备中[OrganicPreparationsandProceduresInternational,23(1992):191-194描迷的方法，利用铜配合物，通过一系列在w位胺官能闳的选择性保护反应，例如至节氣羰基衍生物形式，去除铜配合物，以及保护a位置的胺官能团，例如呈叔丁氣基羰基衍生物形式，优逸地由a,w-二氨基酸，例如乌氨酸或赖氨酸获得肽偶合反应的对偶(partenaire).可使用其它的保护基.根据在《四面体通讯》[TetrahedronLetters,32(1991)928-926中描述的方法，使用例如硼烷-二甲基碟化物配合物或通过用硼氣化钠预制的混合酐处理，将游离羧酸官能团还原转成伯醉.a位置的胺官能在酸性介质(例如经由三氣6酸处理)释放，然后用活化脂肪酸衍生物，优逸地3-鞋基十四酸衍生物，如3-千氧基十四酸进行H-耽化.若有所需，游离0H官能团在这个阶段例如呈苄氧基甲基醚形式保护.w-氨基官能可通过用对存在的其它保护基为情性的反应刑处理而幹放，若保护基为苄氣基羰基，例如像在含三乙胺的羟基溶刑中进行逸择性氣解反应.在实际优选合成方法中，在IIDQ或其它肽偶合刑存在下，如此所得胺与如前迷制备的ot-酰肢化w-磷耽化欺酸偶合，获得经保护的假二肽化合物.在EDC1或其它醋化刑存在下，使用to-官能化酸，例如6-庚烯酸，对该产物的仍为游离的羧基官能团进行O-跌化(困5〉.该酯的烯基官能在催化量或立体化学计算量的四氣化械存在下进行二羟基化反应，然后任选地呈千基酸形式存在的磷酸癍及lfe基官能闭的保护基在适当催化刑存在下通过氣解去除(实施例2.1〉.在后述步脒，邻二醇使用例如高碘酸进行氣化反应，产生反应性茫官能(实施例2.2).搭官能团还原成为伯醉，结果获得帝有w-痒基酰基基团的衍生物(实施例2.9),在该方法的一种实施方案中，诠肽偶合产物可使用o)-氨基链坑酸衍生物，例如6-卡氣基羰基氨基己酸进行0-酰化(两11〉.如此所得产物在催化刑存在下通过氣解反应进行完全的去保护反应，获得带有氨基链就酰基辅助支链的假二肽(实施例2.6)在笫二种优逸方法中，肽偶合反应的酸对偶(私对)化合物为D-或L-天冬氨酸，或必要时D-或L-谷A酸衍生物(困2).天冬氨酸衍生物可使用脂肪酸，优选地3-羟基化脂肪酸衍生物，例如3-十二耽基氣十四酸，在酰化刑存在下，由该A基酸P-节鐮的胜官能团进行N-ftk化反应得到.此种产物与前述类型的氨基醇偶合，然后让如此得到的假二肽在催化刑，例如在钯/破或在我体上的铂存在下进行氣解反应，得到带有羧酸官能闭的假二肽(实施例1.2);或例如使用亚氨基鱗酸盐方法进行碑汰化反应，接着氣解反应，获得带有一个歡酸官能团以及一个磷酸官能团的假二肽(实施例1.3).在一种实施方案中，先前获得的假二肽的羟基官能团(困2)可使用co官能化酸进行S)b化.优选地，(o-官能化酸是w-烯酸或w-氨基坑酸.在庚締酸的愔况下(田8),假二舦得到0-庚耽基衍生物，其随后在四氣化锇存在下相继地进行二羟基化反应，随后去保护(实施例2.3)以及高硖酸氣化反应(实施例2.4);使用还原刑，例如像祸氣化钠还原如此形成的醛官能团，得到带有w-雍基链坑酰基官能团的假二肽(实施例2.5).在w-氨基链烷酸，例如6-氨基己酸或甘A酸的N-节氣基羰基衍生物的情况下(困24),假二肽进行酰化反应，获得经保护的O-氨基酰基衍生物，其随后通过氣解进行去保护反应(实施例2.16及2.18).在第二个实施方案中(困13)，困2所迷的中间假二肽进行游离羟基官能的保护反应，优选地至四氣吡喃基醚形式，然后以8S形式存在的歡基官能通过氣解或其它去保护方法去保护，然后优选地呈混合肝形式活化后，使用还原刑，例如硼&化钠还原；如此生成的羟基官能团进行磷酸化反应，优选地采用亚氨基辨酸盐(Phosphora边idUe)方法进行磷酸化反应，然后在酸性介质中水解四氣吡喃基鍵，如此再生的羟基官能团用w-官能化欺酸进行酰化反应.优选地w-官能化酸为co-烯酸或w-氨基链坑酸.在6-爷氣基羰基A基己睃的情况下，假二肽获得经保护的0-我基酰基衍生物，其随后进行氣解反应(实施例2.7，实施例2.8).另外，前一节的单磷酸化中间体(田15)可通过如下步槺得到天冬氨酸P-苄I8的N-耽化衍生物与一种保护形式，例如呈苄氣基甲基鍵、四氣吡喃基酸或由乌A酸得到的我基醉硅甲基醚形式(闺l)的肽进行偶合反应(田2〉，接着幹放出至节翻形式的酸官能团，将酸官能团还原成伯醇，裤酸化这种官能团，以及将呈苄氣基甲基醚、四氣吡^基鍵或甲硅坑基醚形式的被保护醇官能团去保护.在笫三个实施方案中，田2所示的中间假二肽使用二欺酸衍生物，优选地丁二酸肝，且在械或偶合刑存在下进行O-耽化反应(田27)，然后如此形成的新W通过氣解进行去保护反应(实施例2.19).使用丁二酸肝处理去保护的0-A基酰基衍生物，获得带有丁二耽基胺基耽基的假二肽(实施例2.17).在笫三个优选实施方隶法中，由前迷乌A酸或賴我酸所得的A基醇用co-烯基三氣甲烷磺酸翁，如庚-6-蜂基三象甲就磺酸醋进行坑基化(困17),这种带有仲胺的氨基醇与前迷a-酰胺化w-裤酸化酸于EDC1或其它酰化刑存在下反应获得糖.然后蝉碁在四氣化械存在下进行二羟基化反应，然后保护基在适当催化刑存在下通过氣解去除，邻二醇官能团通过高碘酸钠氣化，得到反应性ft官能团(实施例2.10).在笫四种优逸方法中(田19〉，根据Synthesis(1989),36-37中描迷方法制备的N-保护丝氨酸衍生物，例如对甲氧基,氧基羰基衍生物，使用溴乙酸节酶进行O-烷基化.胺官能团的保护基例如可使用在二氣曱坑中的三氧乙酸处理去除，胺官能团优选地使用3-雍基脂肪酸衍生物，例如3-十二酰基氣十四酸，在酰化刑存在下，或使用酰基氣或脂肪酸的任何其它活化形式进行N-跣化反应.如此所得丝氨酸的N-跣化O-烷基化衍生物在肽偶合刑，如IIDQ存在下与前迷氨基醇(闺1)偶合，游离的0H官能团然后用co-官能化链汰酸在活化反应刑，例如破化二亚胺存在下进行汰化.优选地，这种官能化酸为w-蜂酸或w-氨基链链坑酸衍生物，例如，使用庚-6-埤酸，假二肽获得0-(6-庚烯耽基)衍生物，其循序地在四氧化锇存在下进行二氣化反应，接着通过氛解以及高碘酸氣化反应去保护(实施例2,11).在笫五种实际优选的方法中，起始A基酸为半胱氛酸或高半脒氨酸(闺20).例如，半胱脍仗用溴乙酸对甲氣基苄據进行S-汰基化，然后优选地，使用3-羟基化脂肪酸衍生物，如3-十四酰基氣十四酸，在酰化剂存在下，或使用耽基面或任何其它脂肪酸活化形式进行N-耽化.如此所得半胱氨酸S-烷基化N-酰化衍生物在IIDQ或其它肽偶合刑存在下与5-A基-2-a)-3-羟基十四酰基A基戊-l-醉偶合.游离的OH官能然后用co-官能化链秌酸，其以活化敏，如O-苯并三唑基癍形式进行O-酰化.优选地，这种酸为co氨基链坑酸，如7-(对-甲氧卡氣基羰基氨基)庚酸.如此所得产物在含水酸性环境下进行完全去保护反应，如此获得带有7-氨基庚耽基辅助支链的假二肽(实施例2.12).在另一优选方法(闺21)中，丝我酸的N-对-甲氧基爷氣基羰基衍生物在强械介质中使用亚甲基丙二节ft进行O-坑基化.氨基保护基通过酸处理去除，然后如此释放出的胺官能团，优选地在酰化刑存在下，使用3-耽基羟基化脂肪酸，例如3-十二酰基氣十四酸，或使用脂肪酸官能衍生物，如酰基氣，或任何其它脂肪酸活化形式进行N-酰化.如此所得丝A酸的N-耽化(H坑基化衍生物在IIDQ或任何其它肽偶合刑存在下与前述氛基醉偶合(田l).然后假二肽的游离0H官能用w-官能化链烷酸进行O-耽化.优选地，这种酸为w-蜂酸或(O-氨基链烷酸衍生物，例如庚-6-烯酸.如此假二肽获得0-(6-庚烯跌基)衍生物，其随后在四氣化锇存在下进行二羟基化反应，然后通过氣解及高碘酸氣化反应进行去保护，获得带有6-氣代己酰基辅助支链以及丙二酰基的衍生物(实施例2.13).在另一个也是优选的方法(困22)中，前迷6-氨基己耽基衍生物(图ll)使用例如浹乙酸O-丁二耽亚氨基SS作为耽化刑，使用溴乙耽氨基进行N-酰化.这种反应获得带有6-(浃乙酰氨基)己酰基辅助支链衍生物(实施例2.14).在笫八个优选方法(困23)中，O-磷酸化的高丝氛酸苄酯(麥考困l)使用3-千氣基十四酸进行N-酰化，优选地使用由3-苄氣基十四酸及氣甲酸异丁酯制备的混合肝进行N-酰化.然后苄新如前述进行选棒性氣解.衍生自鸟氨酸的二氨基醉w-N-苄氣基羰基衍生物(麥考困1)用3-十二耽基氧十四酸在偶合刑存在下或使用活化敏或其它脂肪酸活化形式进行Na-酰化，以及(o-氨基官能通过选摔性氛解幹放.这种胺在IIDQ或其它肽偶合剂存在下与高丝氨酸的N-(3-苄氣基十四狭基)O-(二苯基-氣裤酰基)衍生物偶合.如此所得假二肽使用w-官能化链坑酸，例如在破化二亚胺存在下进行O-酰化.优选地，这种酸为w-蜂酸或to-氨基链烷酸衍生物.例如，使用庚-6-辟酸，假二肽得到O-(6-庚烯酰基)衍生物，其接着在四氣化锇存在下进行二羟基化反应，然后在适当催化刑存在下通过氣解进行去保护以及高碘酸氣化反应，录终获得带有6-氣代己酰基辅助基的衍生物.在笫九种优逸方法(困29、31和")中，闺2所迷的中间假二肽进行呈醋形式存在的羧基官能的去保护il应，然后，这种欺基官能团在偶合剂存在下与官能化氨基链烷偶合.优选地，官能化氨基链烷是ot，w-二氨基链烷或氨基酸的衍生物.在l-氨基-3-千氣基羰基氨基丙烷的情况(困29)下，偶合反应产物随后进行氩解反应(实施例2.20).在N、Z-赖氨酸苄醋(图31)以及天冬氨酸ct，P-二节酯的情况下(困34),偶合反应产物优选地通过氩解进行去保护反应(实施例2.21及2.23)，或利用w-官能化链烷酸，优选地6-氛基己酸的N-节氣基羰基衍生物进行O-酰化反应.然后，如此所得的酯可通过氦解或采用其它的去保护方法进行去保护(实施例2.22及2.24).本发明还涉及呈纯对映异构体和/或立体异构体或立体异构体混合物形式的通式V、VI、IX、XIII及XVI中间产物.本发明还涉及含有至少一种呈中性或带电形式的通式I化合物作为活性组分的药物组合物，它与无毒的，在药学上可接受的惰性赋形剂或栽体结合或混合.更特别地，本发明涉及药物组合物，它含有至少一种通式I化合物的盐作为活性成分，还有一种治疗上相容的有机或无机碱.本发明涉及以通式I化合物为主要成分的药物组合物，它与药学的赋形刑或栽体结合或混合，呈纯对映异构体形式，或呈立体异构体混合物形式.在所要求的药物形式中，可以列举适合经粘膜、经皮、局部、吸入、肠胃道外、消化道用药方式，例如片刑、糖衣刑、胶囊、可注射溶液或悬液、气雾刑、凝胶、骨剂或渗透液刑.优选地，根据本发明的化合物可接枝于抗原上，调节免疫反应，也可接枝在药效基团，改善治疗效果或靶向作用(ciblage)，优选地可采用注射途径施用，例如呈含水溶液或含水悬浮液的缀合物形式，任选地使用胺或轻烷基胺中和的缀合物形式.作为实例，可以列举H1N1抗原，Plasmodium的SYVPSAEQI九肽抗原以及药效基团，例如AZT，d4T以及抗生素，例如大环内醋类(macrolides)以及具有作用于中枢神经系统(SNC)的物质.用困1至86中列出的以下实施例将说明本发明，但不限制其范围.具体实施方式通过以下实施例示例性而非限制地说明本发明的具体实施方式.实施例第一系列实施例合成中间产物的制备实施例1.1l-(二苯氣基磷耽氧基)-3-l(R)-3叶二酰基氣-十四酰基氨基-4-氣代-5-氛杂-9-(11)-3-苄氧基十四跣基氨基1-癸-10-醇(困1).l丄l4-(二苯氣基磷酰氣基)-2-〖(R)3-十二酰基氣-十四酰基氨基l丁酸a.N-叔丁氣基羰基-DL-离丝氨酸往高丝氨酸氩溴化物(2克；16.78毫摩尔)在水(20毫升)中的溶液，加入1M氮氣化钠溶液(16.78毫升)，然后加入碳酸铯(3.01克，9.23毫摩尔).搅拌5分钟后，溶液于冰/水浴中冷却.然后加入二嗜烷(60毫升)及焦碳酸叔丁醋.反应混合物于冰-冷水浴中维持搅拌l小时，随后于室温维持搅拌S小时.真空蒸去溶刑，无水残余物直接用于下面步骤。b.N-叔丁氣基羰基-DL-萬丝氨酸苄醋往前一步骤的残余物内加入二甲基甲酰胺(20毫升)，进行蒸发至干，然后往反应混合物内加入二甲基甲耽胺(60毫升)及苄基溴(4,5毫升；20.13毫摩尔).此时形成白色沉淀.混合物于搅拌下維持16小时.然后真空去除溶刑，残余物使用乙酸乙醋(2x20毫升)纯化.有机相先用水(20毫升)，然后用盐水(20毫升)洗涤.用硪酸镁干燥后，蒸去溶剂，残余物可用于下面步骤.c.N-叔丁氣泉羰基-(M二塞氣泉磷酰基)-DL-ife丝氡酸苄酯往前一步骤无水残余物在二氣曱烷(60毫升)中的溶液，加入4-(N，N-二甲基氨基)吡啶(DMAP)(4.11克；33.56毫摩尔).反应混合物撹拌10分钟，然后加入吡啶(12毫升)及氯磷酸二苯酴(6.95毫升；33,56毫摩尔).溶液于室温搅拌18小时，然后先用1N盐酸(5x20毫升)，然后用水(30毫升)，再用盐水(30毫升)洗涤，有机相用疏酸镁干燥，在真空下蒸去溶刑.使用硅胶柱闪式色谱纯化(使用己坑/乙酸乙酴混合物洗脱，4/1)，回收砩酸化产物(7.49克；82.4%),呈结晶固体状.熔点63.5-64.0TC.d.O-(二笨氣基磷酰l、-DL審丝氨酸苄醋，三氣乙酸盐前一步骤磷酸化产物(7.88克；15.4毫摩尔)在三象乙酸(15毫升)中的溶液，于室温维持搅拌2,5小时.然后在高真空下蒸去溶刑，采用硅胶柱闪式色谱纯化(甲醇/二氣甲烷洗脱，10/1)，回收去保护胺的三象乙酸盐(7.17克；88.9%)，呈结晶固体.熔点=73.0-73.510.e.2-『(R)-3-十二醜基氣十四酰基氨基l-4-(二笨氣泉磷酰氣泉、丁酸苄酯制备根据在Bu11.Chem.Soc.Jpn.，60(1987)，2205-2214中描述的方法得到的(R)-3-十二酰基氧十四酸(4,2S4克；10.07毫摩尔，1当量)在四氢呋喃THF(30毫升)中的溶液，该溶液冷却直到-151C.然后加入N-甲基吗啉(1.108毫升；10.07毫摩尔，1当量)及氣甲酸异丁醋(1.31毫升；10.07毫摩尔，1当量).反应混合物在-151C维持撹拌30分钟.然后加入0-(二苯氧基磷酕基)-DL-高丝氨酸爷醋(5.724克；10.07毫摩尔；1当量)在THF/Et3N混合物(30毫升/5毫升)中的溶液.于室温攬拌18小时后，在真空下蒸去溶剂.残余物用水(20毫升)稀释，然后使用乙酸乙酯(2x30毫升)萃取.合并有机相，相继地用水(20毫升)、盐水(20毫升)洗涤，然后在蒸去溶剂前用硫酸镁干燥.用硅胶柱闪式色谱纯化(己烷/乙酸乙酹洗脱液，2/1),回收期望的节醋(7.455克；87%),呈结晶固体状.熔点(PF)-31.0。-32.10C.1H-RMN(CDCI3,250MHz),5,ppm:7.4-7,1(m,15H);6,90(2d,1H,~-7.6Hz,NH);5.3-5.1(m，3H);4.7(m'1H);4.35(m,2H);2.45(m,2H);2.4-2.1(m,4H);1.6(m,4H);(m,34H);0,9(t,6H).13C-RMN(CDCI3,63MHz),5,ppm:173.01;171.08;169.66;150.18(d,2JP,C=7,1Hz〉;135.01;129.60;128.33;128.14;127.96:125.21;119.80(d,3JP,c-5.0Hz〉;70.69;67.05;65.19(d,2Jp,c=5.6Hz);49.13;40.97;40.77(2d'旧st.);34.20;33.98;33.82;31.70;29.42;29.34;29.14;28.94;25.01;24.77;22,47;13.91.f.4-(二笨基氣磷酰氣基)-2-(m-3-十二酰基氣十四耽基氨基l丁酸前一步骤所得节醋(2.23克，26毫摩尔)在HPLC级甲醇MeOH(300毫升)中的溶液置于三颈圃底烧瓶中，在室温及氩的大气压下，在10%碳栽钯(l克)存在下氣化l小时.然后过滤去除催化刑，滤液经浓缩获得无色液体.薄层层析及NMR时使其液体均化，未经进一步純化处理直接用于偶合步稞Rf-0.75(CH2CI2/MeOH/Et3N10/1/0.5》.，H-RMN(CDC'3,250MHz),S,ppm:7.4.7.1(m,10H》;6.85(d,1H，NH);5.15(m,1H);4.6(m,1H);4.35(m,2H);2.45(m，2H);2.4-2.15(m,4H);1.6(in,4H);1.4-1.1(m,34H);0.9(t，6H).13C-RMN(CDCI3,63MHz),S.ppm:173.35;173.30(2dlast.);172.75;170.37;150.0(d,2Jp.c-7.5Hz);129.55;125,28;119,71(d,3JP,c-4.4Hz);70.78;65.65(d，2JP,c=5.9Hz》；49.00;40.77;40.63(2dlast.);34.13;33.86;33.76;31.59;29.31;29.25;29.03;28.82;24.88;24.68;22.36:13.76,l丄2(2R)-5-氨基-2-[(R)-3-爷氣基十四酰基氨基-戊-l-酵a.D-AJL酸铜盐往D-鸟我酸(5.25克，30毫摩尔)在IN氣氣化钠(30毫升)中的溶液，加入硫睃铜五水合物(3.814克，15.3毫摩尔)在水(50毫升)中的溶液.在室温下攬拌2小时后，蒸去熔刑至千.这时，往残余物加入甲酵(60毫升)，形成紫色固体，闺体经分离后，相继地用二嗜坑及甲醇洗涂，以便直接用于下面步槺.b.(叫-2-氣基-5-(千碁I^基A碁)成酸铜紫色固体溶解于1N氣氣化钠(40毫升)及二嗜统(70毫升〉.反应混合物在水冷水浴中冷却，然后加入氣甲酸爷欲(5.14毫升，36毫摩尔)，在冰-冷水浴中扰拌3小时，然后在室温下挽拌15小时后，紫色沉淀来用过滤回收，相继地用95%乙醉(40毫升)、水(50毫升)及6醉(60毫升)洗涤.沉淀物在烘箱中千燥(湿度小于45X:，于真空下)，二步稞的产率为8.27克，即93i理论产芈.(麥考文献OrganicPreparationsandProceduresInternational,23:(1992)191-194)c.(2R)-5-(辛基氣羰基氨基)-2-(叔丁氣基羰基A基)戊酸前一步稞所得钢盐溶解于2N盐酸(400毫升)中，然后加入乙二胺四乙酸(BDTA)(8.15克，27.8毫庫尔).混合物攬拌2.5小时后，通过加入5N氣氣化钠(约160毫升)，中和至pH7,此时形成白色沉淀.然后混合物在冰-冷水浴中挽拌2.5小时.沉淀经过滤，用冷水洗涂至流出液是无色的，然后在烘箱在601C以下干燥.此固体溶解于1N氣氧化钠(156毫升)，溶液在水-冷水浴中冷却.然后，往这种溶液加入在二喝烷(160毫升)的焦破酸叔丁酶(7.7克，35.2毫庫尔).反应混合物于0TC挽拌45分钟，随后于玄湿下挽拌16小时.蒸去有机溶剂，残余物溶解于乙酸乙癍(70毫升)中.然后水相通过加入2N盐酸酸化至pH约3,用乙酸乙酯(IOO毫升)洗涤.有机相合并，用水(30毫升)及盐水OO毫升)洗涤，然后在真空下蒸发.采用娃败柱闪式色谦纯化(二氣甲坑/甲醇洗脱液，20/1)，可曰收需要产物，呈无色油状(二步碟产率，'8.42克，即理论产率的76.W)(Rf-0.19,CH,Ch/MeOH,20/1).d.m)-s-(节基i^碁A碁》4-(叔T氣碁浆碁A碁〉成-i-醉往前面所得二氨基戊酸衍生物(5.45克，14.8毫庫尔)在THF(60毫升)中的冷溶液(-15X:)，加入N-甲基吗啉(l.65毫升，14.8毫摩尔)及氣甲酸异丁癍(9,6毫升，14，8毫摩尔).反应混合物于-l51C挽拌1分钟，接着加入硼氣化钠(5.1克，44.6毫摩尔)在10毫升水中的溶液，在-151C攬拌10分钟后，往混合物加水(400毫升)以终止反应.溶液随后用乙酸乙酯AcOEt(100毫升x2〉洗涤.有机相合并，用水(50毫升)及盐水(60毫升)洗涤，然后用硫酸镁干燥.蒸去溶刑，残余物在乙酸乙酯/己坑混合物中结晶，获得预期的结晶产物(4.94克，94,94产率).熔点-47.5-48TC，e.(2R)-5-(辛基氣數基氨基卜2-氨基-戊-l-醇，三IL乙酸盐制备前面获得的(2R)-5-(爷基氣羰基氨基)-2-(叔丁氧基羰基氨基)戊-l-醇(6.32克，18毫摩尔)在三象乙酸U5毫升)中的溶液，然后在室温下挽拌2.5小时.随后蒸去溶刑，残余物用硅胶柱闪式色谱純化(甲醇/二氣甲坑洗脱液，10/1),可以回收三氣乙酸盐，呈油状(5.45克，82..盐酸盐化合物在133.0-134.3C熔化(由甲醇再结晶)f.(2R)-5-(辛基H狻基^基)-2-[(R)-3-辛基IL十曰gfe基A基〗往(R)-3-千基氧十四酸(5.27克，15.8毫摩尔)[Bull.Chem.Soc.Jpn.,60:(1987)，2197-2204在THF(30毫升)中冷却至-151C的溶液，加入N-甲基吗啉(1.89毫升，15.8毫摩尔)及氣甲酸畀丁酶(2.21毫升，15.8毫摩尔).反应混合物在-15C搅拌30分钟后，加入如前获得的三氧乙酸盐(15.25克，14.4毫摩尔)在THF/三乙胺混合物(30毫升，1.44毫摩尔)中的溶液.在室溫持续挽拌16小时，然后反应混合物用水(30毫升)及乙酸乙欲(60毫升)稀释.有机相经分离后，水相用乙酸乙酯(60毫升)洗涤.有机相合并，用水(30毫升)及盐水(30毫升)洗涤，然后在真空下蒸发溶刑前用碟酸镁干燥.残余物在6酸6癍/己烷混合物中再结晶，获得预期产物至蛣晶态(5.8克，71.2X),PF-117.5。-1181C.Rf-O.32，乙酸乙薛-石油鍵3/1.1H-RMN(CDCIj,250MHz),S,ppm:7.4-7.2(m,竭;6.5(d,1H,NH);5.1(s,2H);4.9(m，1H,NH):4.5(2d,AB,2H);3.8(m,2H);3.5(m,2H);3.1(m,2H):2.4(m,2H》;1.61.4(m,6H):1.4.1.2(m,18H);0.9(t,3H》."C-RMN(CDCI3.63MHz),S,ppm:172.24;156.49;138.06;136,53;128.46;128.04;127.87;76.76;71.39;66.60;65.44:51:54;41.43;40.65;33,78;31.87;29.61;29.30;28.01;26.47;25.05;22.65;14,09.g.(210[(R)-3-苄基氣十四酰基氨基1在三颈瓶内，催化刑(150毫克20X钯/碟)添加到(2R)-5-(苄基氣羰基氛基)-2-[00-3-苄基氣十四酰基氨基〗戊-l-醇(3.0克，5.27毫摩尔)在HPLC级乙醇(300毫升)/三乙胺(6毫升)混合物中.抽真空排放空气，然后往瓶内装入氣气.反应混合物在室湿下氣化2小时，然后过滤去除催化刑，滤液经浓缩得到预定产物，呈均质白色固体.Rf=0.2;CH2C鋒0H尼taN5/1/0.5.PF"7.48。C.1H-RMN(CDCI3,250MHz),S,ppm:7.冬7.2(m,5H〉；6.75(d,1H,NH);4.5(2d'AB,2H);3.9(m,2H);3.5(m,2H):2.3一2.3(m,7H);1.7-1.2(m,24H);0.9(t,3H).13C-RMN(CDCIa,63MHz),5，ppnv.171.86;138.13;128.37;127.87;127.75:76.81;71.50;64.57;51.38;41.51:41.17;33.89;31.82;29.26;28.57;28.03;25.07;22.60;14.04,1.1.3.1-(二笨氣基磷耽氣基)-3-(R)-3-十二酰基氣-十四汰基-氨基-4-氣代-5-氣杂-9-(R)-3-苄氣基十四-癸-l0-1IDQ(2-异丁氣基-l-异丁氣基羰基-l,2-二氣喹啉)(364克，1.2毫摩尔，1.2当量)添加到(2RS)-4-(二苯基氣裤Bt氣基)-2-[(R)-3-十二醜基氧十四酰基氨基丁酸(850克，l.0毫摩尔，l当量)在无水二氣甲烷(20毫升)中的溶液，此添加步棵系在室温及在氣气流下进行.反应混合物拢拌15分钟后，加入(2R)-5-氨基-2-(R)-3-千基氧十四耽基氨基戊-l-醇(757克，1.0亳摩尔，1当量)在无水二氣甲烷(io毫升)中的溶液.挽拌4小时之后，溶液蒸发至干.用硅肢柱闪式色谦纯化(二氣甲坑/丙稱洗脱液，5/2)，能够回收裤酸化假肽(620毫克，53w，呈无定形固体状(Rf一0.49,在二氣甲坑-已醇-三乙胺，10/1/0.5中).'H-薩(CDCI3,250MHz〉,5,ppm:7.40-7,15(m,15H),7.00(m,1H),6.90及6.80(2d,2diast，1H),6.65(d,1H)(3xNH),5.15(m,1H),4.50(m,3H),4.30(m,2H),3.85(m,2H),3.45(m,2H),3,15(m,2H),2.41-2.14(m'8H〉，1.6-1.4(m,8H),1.4-1.1(m,54H),0.9(t,9H,3CW3〉."C-RMN(CDCI3,63MHz》，5'ppm:173.11，171.68,170.52(2diast.),169.94(2di站t.),150.0(d,2JP,c-7.2Hz),138.20(2diast,),129.58,127.99,127,49,127.26,125.24,119.73(t,3JP,c:5,0Hz),76,48,71.12,70.71,85.86(6largi),64.22,50.96,49.71(6largi),41.邻,41.05,39,07,34.13，34.00,32.70,31.61,29,34,29.06，28.87,27.98,25.2524,92,24.72,22,38,13.80.实例1.2N-[(R)-3-十四酰基氣十四酰基-D-天冬A酸，ot{(4R)-5-羟基-4-[(R)-3-羟基十四酰基A基-戊基)酰胺(-OM-197-MC〉(田2)1.2.1N-(R)-3-十二耽基氣十四酰基-D-天冬A酸，P-苄酶往(R)-3-十二酰基氣十四酸(3.35克，7.85毫摩尔)在-lSTC无水THP(25毫升)中的溶液，在氣气流下，相继加入N-甲基吗啉(0,86毫升，7.85毫摩尔，1当量)及氣甲酸异丁《(1.02毫升，7.85毫摩尔，1当*).可快速地观察到N-甲基吗啉盐酸盐沉淀.在-15C拢拌30分钟后，加入市售的H-D-Asp(OBn)-OH(Sonn化学公司，CH-DUlsdolf)(175克，7.8S毫摩尔，l当量)在CH，CN/H:0，3.5/1混合物(85毫升)中的溶液，该溶液含有三乙胺(3.7毫升).然后反应混合物在室溫下挽拌一夜.然后蒸去有机溶剂，水相冷却至ot:,用iox柠檬酸水溶液酸化至pH-3，再用乙酸乙醋(2x)萃取.有机相用碟酸镁干燥，过滤及蒸发.在硅胶柱闪式色语純化(2/1，石油鍵/乙酸乙癍洗脱液，含M乙酸)，接着共蒸发甲苯，能够囬收N-[(R)-3-十二耽基氣十四酰基氨基-D-天冬A酸P-苯菊(4.00克，81X),呈白色结晶固体状(Rf-O.42，在1/1石油Si/乙酸6敏中，含2X乙酸，辨钼酸化合物及紫外光显色刑).PF-67-69TC.1.2.2N-(R)-3-十二就基氣十四酰基-D-天冬JL酸，a-N-{(4R)-5-羟基-4-(R)-3-苄基氣十四耽基氨基ft胺B-苄麻(ASM-1)往如上所得的p-节醋(363毫克，0.57毫摩尔)及(2R)-5-氨基-2-[(R)-3-苄氣基十四Bt基氨基]-戊-l-醇(1.1.2节)(250毫克，0.57毫毫摩尔，IO当量)在无水二氣甲就(6毫升)中的溶液，在0TC(冰/水浴)在氣气流下相继加入市售H0At(l-羟基-7-氣杂苯并三唑)(94毫克，0.69毫摩尔，1.2当量)，然后加入市售N,N，-二异丙基破化二亚胺(109稞升，0.69毫摩尔，1.2当重).反应混合物在OTC挽拌1小时，随后在室温下挽拌一夜.反应介质随后用水、1N盐酸溶液及1饱和碳酸氣钠溶液洗涤，再分离相.有机相用碟酸镁干燥，过滤及蒸发.经用硅胶柱闪式色傳純化(二氣甲秌/丙酮洗脱液，3/1),可以回收偶合反应产物(436毫克，72S),呈白色结晶固体状(Rf"0.27，在5/1二氣甲坑/丙明中，确钼酸化合物及紫外光显色剂).<formula>formulaseeoriginaldocumentpage38</formula>N-[(10-3-十二跣塞氣十四酰塞l-D-天冬A酸，cx-N-f(4R)-5-羟基-4-(R)-3-羟基十四耽泉氨基酰胺('0M-197-MC)N-[(R)-3-十二酰基氣十四酰基-D-天冬氨酸e-苄欲，aN-{(4R)-5-鞋基-4-[(R)-3-苄氧基十四酰基氨基-戊基)耽胺(417毫克，0.40毫摩尔)在1/1甲醇/乙酸乙薛混合物U6毫升〉中的溶液，在104钯/碳(20毫克)存在下，在室湿及大气压氣气下氣化3小时.过滤去除催化刑，用4/1二氣甲烷/甲醇混合物(50毫升)洗涂，滤液用蒸发至干，再用叶轮泵抽干，获得游离酸(345毫克，100X),呈白色结晶固体状(Rf"O.30，在含0.5X乙酸的9/l二氣甲坑/甲醇中，礴钼睃化合物显色刑).PF-135-1371C.ES/MS:m/z868.7[M+H+，890.7[M十Na〗、868.7[M+K*，912.7[M-H+2Na]+(困3).1.2.4N-[(R)-3-十二耽基氣十四酰基]-L-天冬氨酸，a-N-f(4R)-5-鞋基-4-[(R)-3-羟基十四酰基A基]-戊基)狭胺同样的反应顺序应用到市售H-L-Asp(OBn)-OH(Fluka公司，Buchs，瑞士)，获得L-天冬氨酸系列的差向异构体产物.实例1.3N-[(R)-3-十二酰基氣十四耽基-D-天冬A酸，a-N-{(4R)-5-二羟基磚耽氧基-4-[(R)-3-羟基十四耽基氨基]-戊基)酰胺(》0M-197-MC-MP)(困2)1.3.1N-(R)-3-十二耽基氣十四耽基l-D-天冬A酸，oc-N-((4R)-5-二苄氣基磷耽氣基-4-[00-3-苄氣基十四酰1A基]-戊基)酰胺-P苄fil往如上所得的N-[(R)-3-十二耽基氣十四酰基]-D-天冬氨酸，a-N-{(4R)-5-羟基-4-[(R)-3-千氣基十四酰基泉基戊基}耽胺P-苄癍(300毫克，0.29毫摩尔)及IH-四唑(60毫克，0.86毫摩尔)在无水THF(12毫升)中的溶液，在室湿及在氣气流下加入85X二苄基二乙基亚氨基裤酸癍(231橄升，0.66毫摩尔).快速观察到在反应介质中形成白色晶体.在扰拌30分钟后，反应混合物冷却至-20C，然后加入mCPBA(57-86、183毫克，1.06毫摩尔)在二氣甲烷(8毫升)的溶液，注意晶体消失.在室温下挽拌45分钟后，加入碟代碟酸钠饱和溶液，然后反应混合物再度挽拌IO分钟.溶液用醚稀脊，然后有机相经分离后，用他和疏代硫酸钠溶液(5次)、饱和碳酸氣钠溶液(2次)及1M盐酸溶液(l次)洗涤.有机相用碟酸镁干燥，过滤及蒸发.用硅胶柱闪式色谱純化(5/1二氣甲烷/丙拥洗脱液)，能够W收碑酸三癍(294毫克，79S),呈白色固体状af"O.27,在5/l二氣甲坑-丙稱中，裤钼酸化合物及紫外光显色刑)"C-闘(62,89MHz,CDCI3〉，5,ppm:173.26:171.37:171,01;170.60;170.03;138.22;135.50;135.40;135.28:128,40;128.33;128.16;128,08;127.94;127.82;127.76:127.53;127,41;76.43;71.03:70.90;69.28;66.47;49,09:48.37;41,62;41,35:41.24;39.02:38.88;25.05;24.94;24.82;22.48;13.90.1.3.2.M-[(R)-3-十二耽基氣十四酰基-D-天冬JL酸，cc-N-{(4R)-5-二羟基壤醜氣基-卄[(R)-3-羟基十四酰基A基1-戊基)耽胺H)M-197-MC-MP)如上述制备的鱗酸二节欲(249毫克，190毫升)在HPLC级6酵(12毫升)中的溶液，在10X钯/壤(30毫克)存在下，在室湿及氣的大气压力下氩化4小时.采用槺孔过滤除去催化刑，滤液蒸发至干，然后残余物使用叶轮泵脱水获得粗制游离磷酸欲(180毫克，100WES/MS:m/z850.M+H-P(0)(OH),〗，948.M+H厂970.M+Na〗'(困4).实例1.4确定合成中间物的差向异构比率采用原始氨基酸构型确定带有酰基胺基不对称中心的立体化学.但天冬氨酸或谷A酸衍生物与由乌氨酸或赖氛酸得到的A基醉间进行的肽偶合，在某些条件下可能导致偶合反应的酸对偶在C-a出现差向异构现象.为了说明该反应的差向异构芈，下迷方法应用于由天冬氨酸得到的化合物.试样UO徵克)蒸发入徵管内，然后再溶解在40银升6M盐酸中，接着在110TC在氣气下进行水解24小时.然后试样蒸发至千，随后再度溶解在IOO徵升O.1M四硼酸盐援冲液，pH9.2中.随后使用OPA-IBLC试刑(邻-苯二甲醛-N-异丁炔基-L-半胱A酸)用下迷比例进行预管柱(pr—colonne)衍生化5徵升0.1M四硼酸納緩冲液，pH9.22徵升170oMOPA,260fflMIBLC甲醇溶液2橄升欲分析溶液用Hyp。rsil0DS柱(250x4.6毫米，5徵米Supelco)的HPLC分析，能够定量測定存在于起始试样中的来自L及D型天冬氛酸两种衍生物(Briickner等人，1995,J.Chro迈atogr.A711，201-215)HPLC操作条件如下柱Hypersil0DS(250x4.6,5微米，Supelco)移动相A:23mM乙酸納，pH5.9B:甲醇-乙猜(12:l)注入5橄升流速1毫升/分钟洗脱A:B梯度25分钟内96:4至80:20探测紫外光338纳米在这些色嫌条件下，观察到L-及D-天冬氨酸衍生物的保留时间为16.1及17.2分钟.笫2系列实施例带有官能化附属支链的假二肽的制备实施例2.13-[(R)-3-十二酰基氣十四酰基氨基]-4-氣代-5-氣杂-9-[(R)-3-羟基十四酰基胺基-癸-1,10-二醉-l-二氣磷酸鐮10-(6,7-二羟基庚酸酴)(歸0M-197-FV6)(田5)2丄1.l-(二笨氣基磷耽氣基)-3-(R)-3-十二酰基氣十四酰泉泉泉]-4-氣代-5-11杏-9-[(R)-3-芊氣基十四酰基A基-癸-l0-酵往l-(二苯氧基裤酰氣基)-3-[(R)-3-十二酰基IL十四耽基氨基〗-4-氣代-5-氣杂-9-[(R)-3-苄氣基十四酰基氨基]-10-醉(困1.1)(875毫克，0.74毫摩尔)在无水二氣甲坑U5毫升)中的溶液，加入6-庚烯酸(141槺升，1.04毫摩尔，1.4当量).溶液冷却至Ot:.然后加入EDCI("毫克，0.33毫摩尔，1.4当量)及DMAP(41毫克，0.33毫摩尔，O.14当量).反应混合物在0t:挽拌30分钟，随后在室湿下挽拌3小时.用二氣甲秌稀幹后，有机相相继地用水，1N盐酸溶液及水洗涤.然后，有机相用硖酸镁干燥，在40TC真空下蒸发.用硅胶柱闪式色语純化(1/1石油醚/乙酸乙酴洗脱液)，能够回收l-(二苯氣基确酰氣基)-3-(R)-3-十二耽基氣十四酰基氨基-4-氣代-5-氣杂-9--4-氣代-5-氣杂-9-(R)-3-苄氣基十四缺泉4UU-10-称(6.7-二羟泉庚烯酸欲)往在叔丁醇/水混合物(5毫升/5毫升)中含K3Fe(CN)(373毫克，1.13毫摩尔，3当量)，破酸軒(157毫克，1.13毫摩尔，3当重)及1，4-二氣杂双环[2.2.2辛坑(DABC0)(10.7毫克，0.095毫摩尔，0.25当量)的溶液，加入如上所得化合物(486毫克，0.38毫摩尔)，然后加入四氣化锇在25)t叔丁醉(48徵升，4.75毫摩尔，0.0125当量)中的溶液.反应混合物在室温(271C)强力攬拌16小时.加入碟代疏酸钠(Na2S2Os，60毫克)，连续挽拌近l小时直到介质颜色变成褐色，然后变成绿色或淡蓝色为止，反应混合物用鍵秭幹，分离有机相.水相用醚彻底洗涤，有机相合并，用碟酸镁干燥，然后在401C真空下蒸发.如此获得预期的粗制二醇呈缘色油状.通过硅胶柱闪式色详純化(5/2二氣甲坑/丙酮洗脱)，能够回收純的l-(二苯氣基磷酰氣基)-3-(R)-3-十二酰基氣十四跌基氛基-4-氧代-5-氣杂-9-00-3-苄氣基十四9t基氨基-10-醉6,7-二羟庚烯酸敏(198毫克，40X)，呈无定形固体状(Rf-0.24，在5/2二氣甲坑/丙酮中，裤钼酸显色刑)."C-薩(62.89MHz,CDCW,S,ppm:173.46;173.33;171,34;170.58;170.02;150.13;138.23;129.80;128,26:127.87;127.54;125.50;120.01;119.80;71.79;71.23;70,97;66.63;66.03;65,54;49.93;47.90;41.46;39.17;33.98;33,79;32.86:32.45;31.77;29.49:29.21;29.03;28.51;25.50;25,07;24.87;24.77;24.66;22.54;13.卯.HPLC(210nm):TR-32,535min.ES/MS:m/fe1343.0(M+Na+〉；1321.0(M+H*);1071.0(M+H+彿酸羊苯翁).2.1.3.l-(二笨氣基磷ft氣基)-3-a)-3-十二耽基氣十四跣基氨基-4-氣代-5-氣杂-卜[(R)-3-轻基十四酰基氨基-10-酵(6,7-二羟基庚嫌酸酴)前面得到的二醇(198毫克，0.15毫摩尔)在HPLC級乙醇(20毫升)/乙酸乙麻(1.4毫升)混合物中的溶液，在105t钯/碳(70毫克)存在下，在室温及氣的大气压力下氣化2.5小时.过滤去除催化剂.滤液蒸发至干，然后残余物用叶轮果抽干，获得粗制去爷基化产物(168毫克，91W，呈无定形闺体状，13C.RMN(62.89MHz,CDCIa)，S,ppm:173.15;173.51;172.82;171.04;170.49;170.35;150.05;129.79;129.42;125.53;119.91;119.83;"9,72:71,80:70.93;68.58;66.47:65,94;65.52;50,02:48.12;42.59;41,26;39.13;36.92;34.2。;33.85;32.32;31.74;29.50;29.18;29.00;28.15;25.47;25.Q7;24.85;24.73;24.56;22,51;13.99.HPLC(210nm):TR-30.7min.ES/MS:m々1253.0M+Na，；1231.0M+H广.2.1.4.3-[a)-3-十二酰泉氣十四耽基AJU-4-氣代-5-氣杂-9-[(R)-3-羟基十四狭塞A基-癸-1.10-二酵-l-二氣磷酸酯10-(6.7-二fe基庚嫌酸敏)(》OM-197-FV6)往氣化餘PtO:(91毫克)(在氣气氛下预先活化10分钟获得铂風)在HPLC級乙醇(l毫升)中的悬浮液，添加前面获得的三醇(168毫克，0.14毫摩尔)在肝LC级乙醇(8毫升)/乙酸乙麻混合物(8毫升)中的溶液.溶液在室溫(27C)在氛的大气压力下氣化24小时.过滤去除催化剂.滤液蒸发至干，然后残余物用叶轮泵抽干，获得粗制鱗酸敏产物(130毫克，885i).HPLC(210nm):Ti-23.6分钟.ES/MS:m/zl078.9[M+H，，1100.8[M+Na]*,1116.8[M+K*(困6).实施例2.2.3-[(R)-3-十二酰基氣十四酰基氨基-4-氧代-5-氛杂-9-[(R)-3-羟基十四酰基氨基-癸-l,10-二醇1-二氣裤酸酹10-(6-氣代己酸醋)(=0M-197-FV7)(困5)2.2.1.3-00-3-十二狭泉氣十四耽基4^基1-4-<1代-5-氣杂-9-[(R)-3-羟基十四耽基氨基].10-二酵l-二氣璘酸8810-(6-氣代己酸醋)("0M-197-FV7)将1.86毫升0.1M高碘酸钠(39.62毫克，20当量)加入在1:1水/异丙醇混合物中的10毫升(9.28毫摩尔，1当量)上述制备的去保护三醉，进行高硖酸氣化反应.采用LC/UV跟錄反应，2小时后表明二醉官能团定量转化成醛.在高碘酸氣化步碟(困7)后对ES/MS光谦所观察的分子离子迈/z1046.8证明了预期反应.基于这种光谱，m/zl068([M+Na])钠与迈/zl084.8([M+K+)钾的加合物清晰可见，以及对应于m/z948.8裤耽基损失的片段.加入1至2滴乙二醇结束该反应.产物純化可用在C18栽体上的SPE进行，产率90X(5毫克二醉比例)，实施例2.3.N-[(R)-3-十二狭基氣十四跌基氨基-D-天冬A酸，ct-N-{(4R)-5-轻基-4-[(R)-3-羟基十四酰基氨基-戊基)耽胺5-0-(6,7-二羟基庚烯酸欲)(-OM-197-FV5)(困8)2，3丄N-[(R)-3-十二酰泉氣十四酰基A基l-D-天冬A酸，cc-N-{(4R)-5-羟基-4-[00-3-苄氣基十四酰基JUU-AJU-酰胺-6-芊欲，5-0-(6-庚酸酯)往N-[(R)-3-十二映基氣十四Bt碁A基-D-天冬A酸，a-N-{(4R)-5-幾基-4-[(10-3-,氣基十四耽基A基]-戊基}-酰胺P_苄酯(1.2.2.节)(122毫克，0.116毫摩尔)在无水二氣甲坑(5毫升)中的溶液，加入6-庚烯酸(22徵升，0.160毫摩尔，1.4当量).溶液冷却到01C.然后，加入EDC1(49.3毫克，025毫摩尔，2.1当重)及DMAP(5.6毫克，0.046毫摩尔，0.4当量).反应混合物在0TC攬拌30分钟，然后在室温下挽拌6小时.在用二氣甲坑稀释后，有机相相继地仗用水、盐酸(2x〉、碳酸氣钠(2x)及水(2x)洗涤.如此获得纯的预期庚烯酸醋(U9克，89X),呈白色固体状(Rf-0.62,在5/1二氣甲就/丙胡混合物中，显色刑辨钼酸)."C-RMN(62.89MHz,CDCI3),5,ppm:173.63;173.38;171.72;171.11;170.08;138.14;135.28;128.46:128.34:128.24;128.05;127.64;127.53;114.62;76.49;71.14;71.02;66.66;65.49;49.17:47,79;41.69;41.35;39.09:35.46;34.33;33.80;33.65;33.21;31.79;29.52;29.23;29.06;28.46;28.16;22.56;14.00.HPLC(210nm):TR=36.9min.ES/MS:m/tr1159,0[M+H+;"76.0M+NH4*.PF-81.5-84'C,aD20-+7.3(CHCI3):2,3.2.N-[(R)-3-十二酰l氣十四就泉iUU-D-天冬氨酸，a-N-f(4R)-5-羟泉_4-[(R)-3-苄氣泉十四酰基氨泉]-戊基l-耽胺&-芊醋，5-0-(6,7-二羟庚酸gJT)往如上所得庚埤酸酶(60毫克，0.052毫摩尔)在水/丙拥混合物(5/3毫升)的溶液中，加入N-甲基吗淋氣化物(9毫克，0.076毫摩尔，1.5当量)，随后滴加四氣化锇在2.5t叔丁醉中的溶液(123樣升，0.012毫摩尔，O.23当量).反应混合物在宜湿下扰拌24小时.Na,S,0"20毫克)添加到反应混合物，随后在室温下扰拌1小时至2小时.然后溶液用酸萃取数次，有机相合并，用破酸镁干燥及浓縮.用硅胶柱闪式色谱纯化(5/2二氣甲坑/丙拥洗脱液)，能够回收纯的预期二酵(35毫克，57W,呈白色固体状(Rf-0.15，在5/l二氣甲烷/丙酮混合物中，显色刑，磷钼酸).，3C-RMN(62.的MHz,CDCI3),S,ppm:173.67;173.39;171.81;171.34;170.27;170.01;138.18;135,27;128.56;128.42;128.18;127.50;127.";76.68;71.82;71.37;71.17;66.85;66.74;65.66;49.27:47.99;41.88;41.51;39.31;35.60;34.42;33.的33.51;31.80:29.60;29.49;29.30;28.55;25.65;25.60:25.19;25,12;24.97;24,77:24.14;22.65:14.08.HPLC(210nm):TR-34.16min.ES/MS:m/fc1193.0M+H*J;1212.0M+NH4r.2.3.3.N-[(R)-3-十二酰基氣十四酰基JL基-D-天冬JL酸，oc-N-{(4R)-5-羟基-4-[(R)-3-Jfe基十四酰基A基]-戊基}酰胺5-0-(6.7-二羟基庚酸豳)(》0M-197-MC-FV5)如上所得二醇(35毫克，0.029毫摩尔)在HPLC级甲醇(2毫升)/乙酸乙薛(2毫升)混合物中的溶液，在宝温与氣的大气压力下，在含105i钯的钯/破(10毫克)存在下进行氣化2.5小时.过滤去除催化刑.滤液蒸发至干，然后残余物用叶轮泵抽干，获得粗制N-[(R)-3-十二跌基氣十四耽基氨基-D-天冬氨酸，a-N-{(4R)-5-羟基-4-[(II)-3-羟基十四酰基氨基戊基}酰胺5-0-(6，7-二羟基庚酸》)(26毫克，88S)，呈白色固体状.HPLC(210nm):1>26.90分钟.PF一94-97C[》!°-+11.1TC(CHCl，/MeOH-l:0.1)ES/MS:迈/z1012.7[M+HK,1034.M+Na+，1050.7[M十(闺9).实施例2.4.N-[(R)-3-十二跣基氣十四耽基A基-D-天冬我酸，cx-N-{(4R)-5-羟基-4-[(R)-3-羟基十四耽基氨基-戊基)耽胺5-0-(6-氣代己酸酯)H)M-197-MC-Fn)(困8)2.4.1.N-KR)-3-十二酰l氣十四酰基A塞l-D-天冬氨酸，oc-N-{(4R)-5-羟基-4-(R)-3-羟基十四酰基A基]-戊基)酰胺5-0-(6-氣代己酸雜)(》OM-197-MC-FV6)1.98毫升0.1M高磉酸钠(42.25毫克，20当量)添加到在1:1异丙醉-水混合物中的10毫克(9.88徵摩尔，1当量)如上制备的去保护三醉(2.3.3.节).溶液在玄溫下挽拌2小时.通过加入1至2滴6二醉中止反应.在这个高硖酸氣化步稞后，在ES/MS光语(困IO)上观察到m/z980.6[M+Hr分子离子，证明存在睡官能团.也可见到对应于迈/z1002.8([M+Nar)钠及m/z1018.6([M+KD奸的加合物峰，通过在C18栽体上SPE純化能够回收OM-197-MC-FV6产物，产率90、实施例2.5.N-[(R)-3-十二耽基氣十四酰基A基]-D-天冬氛酸，ct-N-{(4R)-5-羟基"-[(R)-3-雍基十四酰基表基-戊基)酰胺5-0-(6-羟基己酸醋)H)M-197-MC-FV7)(困8)2.5.1.N-〖(R)-3-十二ft基氣十四ttb基AJU-D-天冬^酸，a-N-{(4R)-5-羟基-4-[(R)-3-羟基十四酰基氨基酰胺5-0-(6-羟基己酸欲)—0M-197-MC-FV7)往如上所得6-氣代己酸衍生物(4.5毫克，0.0043毫庫尔)在90X异丙醇(20毫升)中的溶液，加入硼氣化钠在甲醉溶液(l毫克/毫升)(0.2毫升)中的溶液.混合物在251C攬拌3分钟，然后加入过量乙酸(O.2毫升).采用C18柱制备HPLC纯化能够回收90X产物OM-197-MC-FV7(2.3毫克，51X)在异丙醇中的溶液.实施例2.6.(3RS，9R)-3-[(R)-3-十二酰基氣十四耽基教基"-氣代-S-氣杂-9-[(R)-3-轻基十四耽基氨基-癸-l,10-二醇1-二氣磷酸艏10-(6-氨基己酸敏)('OM-197-MP-AC-RS,R)(困11)2.6.1.l-(二苯氣基磷狭氣基)-3-(10-十二酰基氣十四耽基泉笊]-4-氣代-5-氣杂-9-(R)-3-辛氣泉十四酰基A基]-癸-10-酵(6-卑fL灰拔基JL塞已酸醋)往1-(二苯氣基裤酰氧基)-3-[(R)-十二酰基氧十四酰基氨基—4-氣代-5-氛杂-9-[(R)-3-苄氣基-十四跌基我基-癸-10-醇(田1)(230毫克；0.20毫摩尔)在无水二氣甲坑(8毫升)中的溶液，添加6-苄氣基羰基氨基巳酸(88毫克，0.33毫摩尔，1.65当重).溶液冷却至OTC.接着加入EDC1(200毫克，1.04毫摩尔，5,2当量〉及DMAP(13毫克，O.IO毫摩尔，O.5当重).反应混合物在OC挽拌30分钟，随后在室温下扰拌4小时.仗用二氣甲坑稀幹后，有机相经分离，相继地用水、1N盐酸和水洗涤，然后，有机相用硖酸镁干燥，在401C真空下蒸发.通过碰肢柱闪式色谱纯化(7/1.2二氣甲坑/丙嗣洗脱液)，能够回收純癍(115毫克，41X)，呈无定形固体状(Rf-0.77,在5/2二氣甲坑/丙稱中，碑钼酸显色刑)13C-,(62.89MHz,CDCI3》，5,ppm:173.27:171.20:170.34;169,88;156.36;150.16:150.13;138.28;136.56:129.80;128.35;128.26;127^0;127.51;125,45:119.97;119.83;71.05;66,37;65.97;65.61;49.94;47.81:41.39;40.66;39.09;34.32;34.25:33.95;33.65;31.78;29.50;29.38;29.22;29.03;28.55;28.44;25.95.;25.06;24.87;24.26;22.55;14.00.HPLC(210run):TR-33.497min.ES/MS:1424.0M+H广；1174,0M+H-(PhO)2OPOHr.2.6.2.1-(二苯氣基磷酰氣基)-3-(R)-十二酰基氣十四酰泉氨基-4-氣代-5-氣4-9-(R)-3-袅基-十四酰基A基-癸-10-gl如上所得产物(115毫克；0.81徵庫尔)在HPLC級G醇(15毫升)/水醋酸(0.4毫升)混合物中的溶液，在钯(10X破栽钯)(80毫克)存在下，在室溫及氣的大气压力下氣化4小时.过滤去除催化刑.滤液蒸发至干，然后残余物用叶轮泵抽干，获得去爷基化产物(90毫克，97W,呈无定形闺体状.HPLC(210nm):T.-29.185分钟.ES/MS:迈/zl200.0M十H]、952.0[M+H-(FhO)!OPOHr,2.6.3.3-(R)-十二狭基氣十四Bfe基A基]-4-氣代-5-fe森-9-〖(10-3-羟基十四酰基氨基-1,10-二酵-l-二氣鱗酸敏10-(6-A基己酸醋)(》OM-197-MP-AC)往氧化铂Pt(h(30毫克)在(HPLC級)乙醉(l毫升)(预先在氣气氛下活化10分钟获得铂累)中的溶液，加入如上所得A基醉(90毫克，75毫摩尔)在HPLC级乙醉(5毫升)/lN盐酸(0.1毫升)混合物中的溶液.溶液于室温在氣的大气压力下氣化24小时，过滤去除催化刑，滤液蒸发至干，然后残余物使用叶轮泵抽干，能够获得期望的A基裤酸醋(60毫克，HPLC(210nio》T'-28.51分钟.BS/MS;坦/zl047.SM+H+;1069.6(M+Na)*，949.6[M+H-(HO),OPOHr(田12).实施例2.7(n，9R)3-[(R)-3-十二耽基氧十四酰基氨基-4-氣代-5-氣杂-9-[(R)-3-羟基十四酰基A基-癸-l，10-二酵1-二氣碑酸欲10-(6-氨基己酸酴)(-0M-197-MP-AC-R,R)(田13)2.7.1，N-[(R)-3-十二酰基氣十四酰基-D-天本氨酸，a-N-{(4R)-5-(2-四氣-4-[00-3-辛氣基十四酰基JL基酰按&-苄酯"3>1-1-0-|1>肝)往N-[(R)-3-十二酰基氣十四耽基-D-天冬氛酸p-千癍，a-N-{(4R)-5-羟基-4-[(R)-3-苄氣基十四酰基氨基]-戊基)酰胺(1，5克；1.43毫摩尔)在无水二氣曱烷(30毫升)中的溶液，在室湿及氩气流下相继地加入3，4-二氣-2H-吡喃(DHP)(327稞升，3.58毫摩尔)，然后加入对甲苯磧酸吡啶镇(PPTS)(108毫克，429毫庫尔).在宜温下挽拌18小时后，再加入3,4-二氣-2H-吡喃(DHP)(130橄升，1.43毫庫尔).然后溶液又在宜温下攬拌9小时，然后用二氣甲坑稀释，相继地使用5X碳酸氣钠溶液及水洗涤，有机相用硫酸钹干燥，过滤及蒸发.通过硅胶柱闪式色谗纯化(先6/1，然后7/1二氣甲坑/丙酮洗脱液洗脱)，能够回收N-[(R)-3-十二跣基氧十四酰基-D-天冬氨酸，a-N-[(4R)-5-(2-四氣吡喃基)氣-4-[00-3-苄氣基十四酰基泉基]戊基}跌胺P-爷酯(1.45克；90W,呈白色结晶固体状(Rf-0.57,在5/1二氯甲坑/丙嗣中；裤钼酸化合物及紫外光显色刑).2.7.2N-[(R)-3-十二耽塞氣十四酰基〗-D-天冬氨酸，a-N-((4R)-5-(2-四氣吡喃基)氣-4-(R)-3-苄氣基十四酰基A基-戊基)酰胺如上制备的化合物(250毫克；0.22毫庫尔)在含三乙基胺(O.4毫升)的1/1乙醇/6酸乙8ST混合物(16毫升)中的溶液，在10j;碳栽钯(10毫克)存在下，在室温及氣的大气压力下氣化二小时.过滤去除催化刑，滤液蒸发至干，然后残余物用叶轮泵抽干，回收呈三乙基铵盐形式的酸(250毫克).2.7.3,3-[(R卜3-十二跣JOL十四酰iUUU-4-IL代-5-IL杂-9-『(R)-3-苄&基十四曙l0-(2-四氣钛喻基)ltL-癸-l-酵往如上所制备的酸(约250毫克)在2/1二氣甲烷/无水THF混合物(3毫升)中的溶液，在0TC及氣气流下加入N-甲基吗啉(72橄升；0.66毫摩尔；3当重)，然后加入氣甲酸异丁酴(86徵升；0,66毫摩尔；3当量).迅速观察形成的N-甲基'马啉盐酸盐沉淀，CCM监枧反应的进行(Rf0.90，在2/l二氣甲坑/丙酮中).在宜湿下扰拌30分钟后，反应混合物冷却至OTC，然后快速加入硼氣化钠(33毫克；0.88毫摩尔；4当量)在水(l毫升)中的溶液.一旦气体停止胃出(5分钟)，溶液用水(1毫升)及THF(l毫升)禅幹，然后在室温下挽拌5分钟.溶液经浓缩，使用二氯甲烷及水稀释，接着分离各相.有机相用破酸媒千燥，过滤及蒸发.用硅胶柱闪式色谦純化(2/l二氣甲坑/丙酮洗脱液)，能够回收醉(138毫克；61X二步碟)，呈白色結晶闺体状.(Rf-O.33,在3/1二氣甲鍵/丙拥中；裤钼酸化合物及紫外光显色剂).2.7.4.3-[(R)-3-十二酰基氣十四酰基A基-4-氣代-5-氣杂-9-[00-3-苄氣基十四酰泉氨基-10-(2-四氣吡喃基)氣-癸-l-酵二苄基磷酸酹往上述制备的醉(120毫克；0.12毫摩尔)及1H-四唑(25毫克；0.35毫摩尔；3当量)在无水THF(5毫升)中的溶液，在室溫及氣气流下，加入85X二卡基二乙基亚氨基磷酸iS(95橄升；0.27毫摩尔；2.3当重).可见在反应介质中快速形成白色晶体.扰拌30分钟后，反应混合物冷却至-20t！,然后加入迈CPBA(57-86*;75毫克；0.43毫摩尔；3.7当量)在二氣甲垸(3毫升)中的溶液.注意晶体消失.在室湿下攬拌45分钟后，加入饱和Na,S,0r溶液U毫升)，反应混合物扰拌10分钟.其次，溶液用醚稀释，有机相经分离后，用饱和碟代硖酸钠溶液(5x)及饱和碟酸氣钠溶液(2x)洗涤.有机相用破酸钱干燥，过逸及蒸发.用硅胶柱闪式色谱純化(先4/1，然后2/1二氣甲坑/丙酮洗脱液)，能够回收裤酸二苄酶(126毫克；84X)，呈无定形固体状(Rf-0.53，在3/l二氣甲坑/丙酬中；礴钼酸化合物及紫外光显色刑〉.2.7.5.3-[00-3-十二酰泉氣十四-4-氣代-5-氣杂-9-f(R)-3-苄氣泉十四ft泉A基]-l.10-二酵l-(承酸二苄翻)往1%盐酸在甲醇(25毫升)中的溶液，在OIC添加如上制备的化合物(700毫克，0.54毫摩尔)在二氣甲坑(2.5毫升)中的溶液.在01C挽拌45分钟后，反应介质用5X破酸氣钠溶液中和，用二氣甲烷稀幹，然后分离有机相.所得水相用二氣甲汰(3x)萃取，合并有机相.有机相用硫酸镁干燥，过滤及蒸发，获得粗制醇(640毫克；98X)(Rf-O.50,在3/l二氣甲烷/丙拥中；蜂钼酸化合物及紫外光显色刑).2.7.6.3-[(R)-3-+Jiftlft+g9gfe^AJU-4-J>U^5-l^-9-(R)-3-苄氣基十四酰泉AJU-癸-1.10-二酵l-(磷酸二苄酶)10-(6-苄氣基羰基A基己酸趣)往如上制备的化合物("O毫克，0.53毫摩尔)和6-(,氣基叛基氨基)已酸(423毫克，1.60毫摩尔)在无水二氣甲垸(25毫升)中的溶液，在Or及氣气流下相继地加入市售l-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(306毫克，1.60毫庫尔)及4-二甲基氨基吡梵(20毫克，160毫摩尔).然后反应混合物在0TC挽拌30分钟，随后在室温下扰拌一夜.然后反应介质用水，再用1N盐酸溶液洗涤，接着分离各相.有机相用硖酸镁干燥，过滤及蒸发.采用硅胶闪式色详纯化(先4/1，然后2/1二氣甲烷/丙酮洗脱液)，可回收偶合反应产物(537毫克；71X).13C-RMN(62.89MHz'CDCIj),S，ppm:173.18;171.16;170.38;169.60:156.30;138.23;136.50;135.38;135.28;128.42;128.26;128.17;127,79;127.74;127.44;76.48;71.15;70.84;69.47;69.39;69,31;66,25:65.62;64.43;64.37:49.78;47.76:41.41;41.34:40.57;38.97;34.22:34.16;33,96;33.57:32.95;31.70;29.43;29.15;28.95;28.32;25.87;25.46;25.02;24.80;24.18;22,49;13.94.2.7.7.3-(R)-3-十二酰l氣十四酰基氨ll-4-氣代-5-fc杂-9-[(R)-3-羟基十四酰基A基]-癸-1.10-二酵1-二氣磷酸酯10-(6-胺塞己酸翁)(》0M-197-MP-AC-R.R)(困13)如上制备的化合物(500毫克，0.35毫摩尔)在含乙酸(10毫升)的5/2二氯甲坑/乙醉混合物(70毫升)中的溶液，在10%硖我把存在下，在室温及氣大气压力下氣化12至24小时.过滤去除催化刑.滤液蒸发至干，然后残余物使用叶轮泵抽干，获得3-(R)-3-十二酰基氧十四耽基氨基]-4-氣代-5-氣杂-9-[a)-3-羟基十四酰基A基-癸-l，lO-二醉1-二氣裤酸敏10-(6-氨基己酸翻)(368毫克，定量产率).ES/MS:迈/zl047.9M+H厂；1069.8(闺14).实施例2.8.US,9R)-3-[(R)-3-十二耽基氣十四耽基A基-4-氣代-5-氣杂-9-[(R)-3-羟基十四酰基氨基〗-癸-l,10-二醉1-二氣裤酸敏10-(6-氨基己酸癍)(一OM-197-MP-AC-S,R)应用于N-[(R)-3-十二耽基氣十四耽基-L-天冬我酸，((4R)-5-择基-4-[(R)-3-雍基十四酰基A基-戌基)跌按p-节欲(1.2.4.节)，同样的反应順序可得到实施例2.8的产物.实施例2,9，3-(R)-3-十二酰基氣十四耽基氨基-4-氧代-5-氣杂-9-[(R)-3-羟基十四耽基氨基-癸-1,10-二醇1-二氣磷酸癍10-(6-羟己酸醋)(-OM-197-FV8)(困15)2.9.1.(2R)-5-(氨基)-2-[(R)-3-辛氣基十四Bfe基A基-戊-l-錄苄H基甲基酸往(2R)-5-(苄氣基羰基氨基)-2-[(R)-3-苄氧基十四酰基氨基一戊-l-醉(1.1.2.节)(2.05克；3.60毫摩尔)在无水二氣甲烷(40毫升)中的溶液，在宜温及在氣气流下相继地加入B0MC1(苄基氣甲基鍵)(工业级60t1.25毫升；5.41毫摩尔；1.5当量)及二异丙基乙基胺(942微升；5.41毫摩尔；1.5当量).然后，反应混合物在玄湿下攬拌一夜，随后蒸发至干.通过硅肢柱闪式色谱纯化(2/1石油醚/乙酸乙酶洗脱液)，回收0-爷氣甲基衍生物(2.28克；至白色结晶闺体状(Rf-0.70，在1/3石油醚/乙酸乙翁混合物中，磷钼酸及紫外光显色刑).PF豕97-100TC.此种产物(200克；2.90毫摩尔)在含三乙基胺"毫升)的HPLC级乙醇(220毫升)中的'吝液，在20X氣氣化钯/破(200毫克)存在下，在室溫及在氛的大气压力下氣化3小时时间.过滤去除催化刑.滤液蒸发至干，然后残余物用叶轮泵抽干，能够获得游离胺U.58克；9850,呈无定形固体状.a0(C-1.20;CHCI3);，H-RMN(250MHz,CDCI3),5,ppm:7.45.7.21(m,10H,Ar),6.52(d,1H,NH),4,804.45(m，6H，2xCWrph，O-CWrO),4.10(m,1H,H-3)3.83(m,1H,H-2》,3.62(dd,1H,H-1),3.47(dd,1H,H.",2.65(t,2H,2xH5),2.40(m，2H,2xH-2'),1.80-1,40(m,8H,2xH4,2xH-3,2xH"4'，NH2〉，1,40-1.20(m，18H,9xCH2),0.88(t,3H,CH3);"ORMN(62.B9MHz,CDCI3),8,ppm:170.78;138.24;137.63;128,38;128.32;127.66;127.62;94,82;76.70;71,26;69.63;69.44;48.48;41.82;4"7;33.83;31.84;29.88:29,58;29.56;29.51;29.27;29.04:25.";22.62;14.06.2.9.2.N-(R)-3-十二酰基氣十四酰基A基-L-天冬氨酸，a-N-{(4R)-5-(辛氣基甲氣基)-4-[(R)-3-苄H基十四fe基Ajy在IIDQ存在下，按照笫1,2.2.节中描迷的相同条件，如前迷制备的胺与N-(R)-3-十二酰基氣十四跌基氛基-L-天冬氨酸-P-苄》(由L-天冬氨酸-p-节酯制备，麥见笫1.2.1节)偶合.用砬胶純化其产物(先2:1然后l:l石油鍵/乙酸乙断)能够获得相应的酰胺，65X产率.ES/MS:边/z1169.7([M+Hr).2.9.3.(3S.9R)-3-[(R)-3-十二狭基氣十四酰JU8L基l-4-氣代-5-氣杂-9-[ai)-3-苄氣基十四酰泉A基]-癸-l,10-二酵1-二苄基磷酸蹄如上所得偶合反应产物(1.05克；0.90毫摩尔)在含三乙基胺(l.5毫升)的1/1乙醉/乙酸乙醋混合物("毫升)中的溶液，在10%碳我钯(50毫克)存在下，在室溫及在氣的大气压力下氣化l小时.过滤去除催化刑，滤液蒸发至千，然后用叶轮果抽干.残余物溶解在1:1异丙醇/二氣甲烷混合物(50毫升)中，在室温与A迈berliteIR-120(H+)树脂(3毫升)共同挽拌10分钟.树脂过滤除去，滤液蒸发至干，获得游离酸(956毫克；99W，至白色结晶闺体状.往如上所得的酸(855毫克；0.79毫摩尔)在无水THF(5毫升)中的溶液在OTC及氣气流下，加入N-甲基吗啉(87橄升；0.79毫摩尔；1当量)，然后加入氣甲酸异丁酹(103徵升；0.79毫摩尔；l当重).迅速观察到形成的N-甲基"马啉盐酸盐沉淀.在室温下挽拌30分钟后，反应混合物冷却至01C，然后快速加入硼氣化钠(60毫克；1.58毫摩尔；2当重)在水(2毫升)中的溶液.一旦停止放出气体(5分钟)，溶液用水U毫升)及THF(2毫升)稀释，然后在室温下拢拌5分钟.溶液经浓缩后，用二氣甲烷及水稀释.用1M盐酸溶液中和，接着分离各相.有机相用碟酸镁干燥，过滤及蒸发.通过硅胶柱闪式色if純化(4/l二氣甲坑/丙稱洗脱液)，可回收还原产物(387毫克；46!i),呈白色结晶闺体状.往此醉(313毫克；0，29毫摩尔)及lH-四唑(62毫克；0.88毫摩尔；3当量)在无水THF(12毫升〉中的溶液，在盆温及在氣气流下加入85X二节基二乙基亚氨基裤酸癍(267微升;0.67毫摩尔；2.3当量).迅速观察到在反应介质中生成白色晶体，挽拌30分钟后，反应混合物冷却至-20"，然后加入迈CPBA(57-85X;187毫克;1.08毫摩尔;3.7当量)在二氣甲垸(8毫升)中的溶液.观察到晶体消失.在宜温下攬拌45分钟后，加入饱和NalO，溶液(5毫升)，反应混合物扰拌IO分钟.溶液再用鍵稀幹，然后有机相经分离，用饱和Na,S，0，溶液(5x)、饱和碳酸氣钠溶液(2x)及lM盐酸溶液(lx)洗涤.有机相用硫酸镁干燥，过滤与蒸发.通过硅胶柱闪式色谱纯化(先8/1，然后5/1二氣甲烷/丙酮洗脱液)，可以回收裤酸三酯(361毫克；呈无定形闺体状.这种产物在THF-HC1含水介质中进行水解反应，分裂去除苄氣基甲基缩搭，这样得到(3S，9R)-3-[(R)-3-十二酰基氣十四耽基氨基-4-氣代-5-氰杂-9--5-(6-氧代己基)氛基)戊薛(-OM-144-FP9)(围17)2.10.1.三<1甲汰《酸庚-6-烯欲三象甲烷磺酸酐Tf,0((CF3.SO,),O，ll毫升；6.67毫摩尔)在-15TC滴加到庚-6-蜂-l-醇(515毫克；4.51毫摩尔)和三乙肤(627徵升；4,51毫摩尔)在二氣甲烷(IO毫升)中的溶液，混合物在-15X3攬拌30-45分钟至无任何醇剩余为止.回到室湿后，介质用二氣甲坑稀释，相继地用水、饱和破酸氣钠水溶液、饱和氣化钠水溶液洗涤.如此得到的有机相用碟酸锬干燥，真空浓維获得残余物，残余物溶解在(1/2)乙酸乙酯/石油醚混合物中，用硅胶过滤(去除反应期同形成的三乙胺盐).蒸发滤液后，得到三氣甲垸磺酸盐，产率87^(956毫克)，未经进一步纯化可用于下面步樣.Rf一O.8,在1/2乙酸乙癍/石油醚中.1H-RMN(CDCIa,250MHz):S,ppm:5.7:5.0;4.45;2.0;1'8;1.4."C-RMN(GDCI3.62.89MHz);S,ppm:138.21;"4.的；77.68;33.40;29.13;28.10;24.53.'2.10.2.(2R)-2-(R)-3-辛氣基十四耽基A基-5-(戾-6-烯塞)氨基-戊-l-酵将上述新制备的三象甲坑磺酸盐("6毫克；3.88毫摩尔)在二氣甲烷(IO毫升)中的溶液，滴加到(2R)-5-氨基-2-(R)-3-,氣基十四酰基氨基-戊-l-醇(1.1.2.节)(1.69克；3.88毫摩尔)在二氣甲坑(10毫升)中的溶液，混合物在室湿在氣气流下攬拌4小时.用二氣甲烷稀释后，反应介质相继地用饱和破酸氣钠水溶液及水洗条.如此所得到的有机相用硖酸鎂干燥，真空浓縮.用硅胶柱闪式色*纯化(15/1二氣甲坑/甲醉洗脱液)，能够回收期望的仲胺(862毫克；43X).Rf-0.3(8/1二氣甲烷/甲醉).ES/MS:m/Sr532.0M+H广，RMN，H(CDCI3,250MHz);S,ppm:7.2-7.4:7.1:5.8;5.0;4.6;3.95;3.5;2.9;2.5;2.1;1.9-1.5;1.5-1.2;0,9.RMN"C(CDCI3,62.89MHz):8,ppm:172.17;138.28;138.21;128.39;127.96;127.71;114.82:76.80;71.40;63.81;50.87;48.30;47.75;41.57;34.10:33.39:31.89;29.66:29,62:29.33;28.19;28.03;25.21;26.11;25.78;22.82;22邻；14.10.■1H(CDCI3,250MHz);S,ppm:7.2-7,4;6.75;5.8;5.0;4.5;3.9;3.5;2.5;2.0;2.1;1.7-1.2;0.9.RMN13C(CDCI3,62.89MHz》；S,ppm:171.77;138.68;138,14;128.23;127.72;127.56;114.22;76.64;71.37;64.58;51.45;49.79;49.37;41.53;33.90;33.53;31.77;29.65;29,20;28.64;28.57:25.00;26.68;25.93;22.53;13.98(分别为铵盐及游离械光谱).2.10.3.2-[(R)-3-十二酰塞氣十四酰基JUU-4-(二笨氣基磷耽氣泉)丁酸-(2-f(R)-3-辛氣泉十四酰基A基l-5-(庚-6-嫌基)-A往上迷得到的仲肤(163毫克；0.307毫摩尔；l当贵)和4-(二苯氣基磷酰氧基)-2-[(R)-3-十二耽基氣十四酰基A基]丁酸(1.1.1.节)(278毫克；0.368毫摩尔；1.2当量)在二氣甲坑U5毫升)中的熔液，加入N,N-二异丙基G基胺(DIEA)(54徵升；l当量).介质冷却至OTC，然后加入EDC1(71毫克；1.2当量)和l-羟基-7-氣杂苯并三唑(HOAt)(41毫克；1当量).反应混合物在OIC挽拌2小时，随后在室湿下挽拌90小时.然后，该溶液用水洗涤，有机相用碟酸镁干燥，随后在401C真空下蒸发.采用碰胶柱闪式色谱纯化(15/1二氣甲就/甲醇洗脱液)，能够回收0-酖化产物(126毫克；2.10.4.2-[(R)-3-十二酰基氣十四酰基氨基]H-(二笨氣基磷跌氣基)丁酸-{2-(10-3-苄氣基十四ife基AJU-5-(6,7-二lfel庚碁)-A基)-戊豳新制备的2.5X四氣化锇在吡啶(1.1毫升；1.9当量)中的溶液，在25TC滴加到如上制备的0-耽化反应产物(70毫克；0.055毫摩尔)在无水吡啶(5毫升)中的溶液.混合物在宜湿下挽拌24至48小时，然后加入Na2S,0，处理，最终用二氣甲烷稀释，相继地用水、1N盐酸水溶液和再次用水洗涤.所得有机相用碟酸镁千燥,过滤，蒸发，得到的残余物用硅胶柱闪式色嫌纯化(15/1至10/1二氣甲坑/甲醉洗脱液)，这样能够回收期望的二醇(27毫克；股LC(210nm):T,37，25分钟.ES/MS:迈/zl307.0M+Hr.2.10.5.2-(R)-3-十二跣基氣十四酰基A基]-4-(二羟基磷耽氣泉)丁酸-(2-(R)-3-鞋基十四-5-(6.7-二羟基庚基)-氨泉)-戊S8(-0M-144-FP8)a.去^基化反应往前面得到的二醉(50毫克；0.038毫摩尔)在HPLC級甲醉/6醇混合物(5/0.2毫升)中的溶液，加入催化刑(10好d/C)(10毫克)，反应混合物在氣气(大气压)中在玄湿下挽拌4小时.用徵孔过滤器过滤去除催化刑，滤液蒸发得到去苄基化产物(46毫克；99X),无需进一步純化.HPLC(210nm):T,-35.13及35.51分钟(观測到两种非对映异构体).ES/MS:m/zl217.0[M+Hr.b.去茉基化反应催化剂(Pt(h)(25毫克；3.8当量)在HPLC級6醉(0.5毫升)中的悬浮液，在氛气下进行10分钟预活化.前面得到的去苄基化产物(35毫克，0.029毫摩尔)在HPLC级乙醉(2毫升)中的溶液(在氣气下预脱气)添加到催化刑悉浮液.然后，反应混合物在氣气下在宜湿扰拌2小时.催化刑用橄孔过滤器过沐，滤液蒸发得到期望的磷酸趣(26毫克；87^，无需进一步纯化.HPLC(210nm):T，一29.3及30.9分钟(观察到两种非对映异构体).ES/MS:m/zlO".8[M+Hr，1086.8[M+Na]+，1108.8[M-H+2Nar(困18).2.10.6.2-[(R)-3-十二跌基氣十四酰基JL基]-4-(二鞋基璘鼓氣塞)-丁酸-{2-[(10-3-羟泉十四酰塞^基]-5-(6-&代己基)-^基)-戊酴HM-144-PP9)1.87毫升0.1M高碘酸钠(40.17毫克，20当重)添加到在异丙醇水混合物(l:l)中的10毫克(9.39毫摩尔，1当量)前面制备的去保护产物.溶液在室温下挽拌2小时.通过加入1至2滴乙二醉中止反应，T,-30.0及31.5分钟.(观察到两种非对映异构体).ES/MS:迈/zl032.8M十H],，1054.8[M+Na+.实施例2.11.(2R，8R)-2-[(R)-3-十二觥基氣十四酰基氨基]-3-氣代-4-氣杂-8-[(R)-3-羟基十四耽基氨基-壬-l,9二醉1-0-羧甲基鍵9-0-(6-氣代己酸酶)('OM-U2-FV7)(困19)D-丝氨酸被保护成N-(对-甲氣基节氣基羰基)衍生物形式[参见Chcn及Wang，Synthesis(1989):36-37],然后，祭基官能团在氣化钠(2当量)存在下，使用溴乙酸苄醋进行坑基化.在二氣甲烷中用三氣乙酸处理幹放出胺基官能团，然后在三乙基胺存在下，使用(R)-3-十二St基氣十四坑耽氣进行酰化.如此所得的丝氣酸衍生物在IIDQ存在下与(2R)-5-氨基-2-[(R)-3-苄氣基十四酰基氨基戊-l-醉胺(麥见4.1.1.节)偶合，获得OR,8R)-2-[(R)-3-十二耽基氣十四耽基氨基-3-氣代-4-氣杂-8-[(R)-3-苄氧基十四酰基A基-壬-l，9-二醉l-O-苄氣基羰基甲基醚.然后，该产物在BDC1存在下使用庚-6-沐酸进行酜化.附属睇的双鍵使用四氣化锇(催化量，在N-甲基吗啉N-氣化物存在下)进行羟基化，然后在乙醉溶液中，在钯/碳存在下通过氣解使二醇去保护.在异丙醇-水混合物中，通过离碘酸钠处理可得到0M-112-FV-7产物，C丄縣"MM:1010.45,实施例2.12.(2R,8R)-l-(欺甲基)-硫-2-(R)-3-十四酰氣十四酰基氨基]-3-氣代-4-氣杂-8-[(10-3-羟基-十四酰基氨基]-壬-9-醇9-0-(7-氨基庚酸酯)("0M-212-AH1)(困20)在THF-水介质中，在破酸钠存在下，使用溴乙酸对-甲氣基节癍使D-半胱膝酸进行S-坑基化.如此得到的S-节氣基羰基甲基半胱胺酸使用(R)-3-十四酰氣十四烷酰氣进行N-酰化，然后在IIDQ存在下，S-坑基化-N-酰化的D-半脒胺酸衍生物与(2R)-5-A基-2-(R〉-3-幾基十四酰基氨基-戊-l-醇胺{由氣解(2R)-5-氛基-2-[(R)-3-爷氣基十四酰基氨基戊-l-醇获得(参见4.1.1.))偶合.如此所得的产物选择性地在笫一位置，使用由丁醉与7-(对-甲氧基苄氣基羧基氨基)庚睃得到的^进行0-酰化.然后使用三氣乙酸水溶液处理该癍，可除去两个对-甲氣基节基基团.C"HmIM)"S.MM:1069.64.实施例2,13.(2R,8R)-2-f(R)-3-十二酰基氣十四耽基氨基-3-氣代-4-氮杂-8-[00-3-羟基十四酰基氨基-壬烷-l，9-二醇l-0-(2,2-二羧乙基)鍵9-0-(6-氧代己酸欲)(《0M-312-FV7)(田21).在氩化纳存在下，使用亚甲基丙二酸二苄ST使D-丝胺酸的N-(对-甲氣基苄氣基羰基)衍生物进行O-烷基化.在二氣甲烷中，通过三氣乙酸处理，释放胺官能，然后在三乙基换存在下，使用00-3-十二耽基氣十四坑ft氣进行跌化.如此所得的丝氨酸衍生物在IIDQ存在下与(2R)-5-氨基-2-[00-3-苄氣基十四酰基A基]戊-l-酵胺(麥见4.1.1.节)偶合，得到(2R,810-2--壬坑-l，9-二醇1-0-[2,2-双-(苄氣基羰基)乙基鍵.这种产物在BDC1存在下使用庚-6-雄酸进行0-耽化，然后庚蜂酰酯使用四氧化锇进行羟基化.在乙醉中，在钯/碳存在下通过氣解除去节基.在异丙醉-水混合物中，使用高碘酸钠处理去,基化产物获得OM-312-FV-7产物.C"H,"N，O".MM:1068.49.实施例2.14.3-[00-3-十二映基氣十四耽基JL基-4-氣代-5-氣杂-9-[00一3-^基十四酰基氨基-l，10-二醉-l-二氛磷酸麻10-(6-溴乙耽氨基己酸欲)(-0M-412-BA7)(闺22)3-[00-3-十二耽基氧十四酰基A基-4-氣代-5-氛杂-9-[(R)_3-羟基十四酰基氨基-l，l(H二醇-l-二氣磷酸癍10-(6-氨基己酸醋)(参见4.2.3.3.节)，在水-DMF介质，在三乙胺存在下，使用澳乙酸丁二酰亚胺基氣基酶进行溴乙酰化反应.最后产物采用HPLC纯化.C"H"'Br歸"P.MM:1168.4.实施例2.15.(3R,9R)-3-[(R)-羟基十四酰基氨基-4-氧代-5-氣杂-9-[(R)-3-十二酰基氣十四酰基氨基)-癸-l，10-二醇1-二氛彿酸癍l(M)-(6-氧代已酸欲)(OM-512-FV7)(困23)2-(R)-3-节氣基十四跌基氨基)-4-二苯氡基-罅耽氣基-丁酸制备方法如下使用(R)-3-节氧基十四耽氣使0-(二苯氣基裤耽基)-DL-高丝氨酸千W三象乙酸盐进行N-酰化反应，然后在乙醉中，在三乙胺及钯/破催化刑存在下，通过氣解分裂卡sn,在IIDQ存在下偶合(2R)-5-氨基-2-[(R)-3-十二酰基氣十四酰基氨基戊-l-醇[制备方法如下使用(R)-3-十二酰基氧十四酰氣使(2R)-5-(苄氧基羰基氨基)-2-氨基-戊-l-醉的三象乙酸盐进行N-酰化反应，然后在乙醇中，在三乙基胺及耙/碳催化刑存在下，通过氣解将Cs位的A基去保护].在EDC1存在下，使用6-庚烯酸，将如此生成的酰胺的游离态OH官能进行O-耽化，得到相应的癍.辅助豳的双鍵使用四氣化锇进行羟基化反应；然后使用钯/破催化刑，通过氣解去除苄基，通过在铂黑氣解释放裤酸8.二醇官能团进行高碘酸氣化反应，生成6-氧代己耽基衍生物OM-512-FV7.C"H,"JM)"P,MM:1046.42,实施例2.16.N-[00-3-十二酰基氣十四耽基-D-天冬氨酸，a{(4R)-5-(6-氨基己酰氧基)-4-[(R)-3-羟基十四酰基A基戊基)酰胺(-OM-197-MC-AC)(困24)2.16.1,N-KR)-3-十二耽基氣十四酰基]-D-天冬氨酸，a-N-{(4R)-5-(6-爷氣基羰基A基)己跣氣基]-4-[(R)-3-窄氣基十四酰基A泉lA泉)酰胺B-苄醋往N-[(R)-3-十二耽基氣十四耽基]-D-天冬A酸，a-N-{(4R)-5-羟基-4-[(R)-3-苄氣基十四耽基氨基]戊基)酰胺&-苄癍(400毫克，0.38毫摩尔)及6(苄氣基羰基A基)6酸(22Q毫克，0.83毫庫尔)在无水二氣甲烷(15毫升)中的溶液，在01C,在氣气流下相继地加入市售l-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(162毫克，0.85毫摩尔)及4-二甲基氨基吡焚(12毫克，98微摩尔).然后，反应混合物在ox:下挽拌30分钟，随后在室溫下挽拌一夜.反应介质用水及1N盐酸溶液洗涂，然后相分离.有机相用硖酸镁干燥，过滤及蒸发.通过硅胶柱闪式色语純化(先9/1，然后4/l二氣甲烷/丙酮洗脱液)，能够回收偶合反应产物(395毫克；至白色闺体状.13C-RMN(6么89MHz,CDCI3),5,ppm173.46;173.29;171.83;171.14;170.12;156.38;138.19;136.60;133.30;128.51;128.42;128.31;127.99;127.70;127.58;119.97;76.49;71,23;71.06;66.73;66.47;49.21;47.83;41.42;40.73;39.14;35.46;34.38;33.86:33.70;31.84:29.57;29.46:29.28;29,10:26.01;25.54;25.17;25.08;24.94;24.31;22.61;14.05.2.16.2.N-(R)-3-十二耽泉氣十四Bfe泉l-D-天冬泉酸，ot-N-((4R)-5-(6-氨基己酰氣基)-4-(R)-3-羟基十四酰基泉基]戊基}跣旌上述制备的化合物(340毫克，0.26毫摩尔)在含乙酸(2毫升)的5/l二氣甲坑/乙醉混合物(24毫升)中的溶液，在10%碟栽钯(40毫克)存在下，在室溫与在氣的大气压力下氣化12至24小时.过滤去除催化刑.滤液蒸发至干，然后残余物用叶轮泵抽干，获得N-[(R)-3-十二耽基氣十四耽基-D-天冬氨酸，oc-N-((4R)-S-(6-A基已耽氣基)-4-[(R)-3-^基十四跌基氨基戊基)酰胺(238毫克，定量产率).C"HwlM)":边/z/981.9([M+HD;(困25)实施例2.17.K-[(R)-3-十二酰基氣十四耽基]-D-天冬氨酸，ot-N-{(4R)5-(6-丁二耽氨基已耽氧基)-4-[(R)-3-羟基十四酰基氨基)戊基酰胺(-OM-197-MC-AC-Succ)(困24)往实施例2.16.的产物(2.16,2.节)(50毫充；0.051毫摩尔)在吡啶(3毫升)中的溶液，相继地加入丁二肝(ll毫克，0.l毫庫尔)及4-N,N-二甲基胺基吡啶(7毫克；0.57毫摩尔).在501C在氨气下扰拌6小时后，加入甲醉(2毫升)，反应介廣再在宜温下拢拌15分钟.蒸去溶剂，产物采用硅胶柱闪式色谦純化(先7:1,然后5:1二氯甲烷/甲醉洗脱液)；如此获得的产物呈白色闺体状(42毫克；74X)C"H,。，IM)"ES/MS:m/zl082([M+Hr)，Rf-O.1(4:1二氣甲就/甲醇)实施例2.18.N-[(R)-3-十二ftt基氣十四酰基-D-天冬我酸，ot{(4R)-5-(甘氨酸氣基)-4-[(R)-3-羟基十四耽基A基戊基)酰胜("0M-197-MC-Gly)(困24)2.18.1.N-(R)-3-十二酰基氣十四酰基l-D-天冬JL酸，cx-N-{(4R)-5-*mJUJ6gfelUU-4-[(R)m+曰BUUUU戊基)酰按fl-苄醋往N-[01)-3-十二酰基氣十四酰基-D-天冬A酸，a{(4R)-5-羟基-4-[(R)-3-苄氣基十四酰基A基戊基)耽胜P-苄酶(300毫克，0.29毫摩尔)及市售N-节氣基羰基甘氛酸(101毫充，0.49毫摩尔)在干燥二氣甲坑(IO毫升)中的溶液，在OTC及氣气流下相继地加入市售1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基破化二亚胺盐酸盐(93毫克，0.48毫摩尔)及4-二甲基A基吡啶(6毫克，49徵摩尔).然后反应混合物在OX:下挽拌30分钟，随后在室溫下挽拌一夜.反应介质再用水及1N盐酸溶液洗涤，接着相分离.有机相用硖酸镁干燥.过滤及蒸发.通过硅胶柱闪式色谦纯化(先8/1,然后6/l二氣甲坑/丙酮洗脱液)，能够回收偶合反应产物(313毫克；呈白色闳体状.13C-RMN(62.89MHz,CDCI3〉，5,ppm173.71;173.49;171.80;171.68:171.21:170.21;170.06;169.94;169.84;156.41;138,18:136.16;135.26:128.46;128.40;128.33;128.26;128.04;127,93;127.65;127,55;76,49;71.14;71.07;70.93;66.90:66.67;66:38;66.26;49.21;49.03;47.72;47.66;42.58;41,83:41.68;41.32;39.02;35.58;35.39;34.34;33,84;31.80;2S,S2;29,24;2Q.0S:28.31;28.13:25,34:25,12:25.03:24.89:22.57:14.01.2.18.2.N-[(R)-3-十二耽基氣十四酰塞]-D-天本JL酸.a-N-{(4R)-5-(甘胺酸氣)-4-(R)-3-羟泉十四酰基氨基1戊泉}狭胺(-OM-197-MC-Gly)(图24)上述制备的化合物(268毫克，0.22毫摩尔)在含乙酸(2毫升)的5/1二氣甲烷/乙酵混合物(12毫升)中的溶液,在10%破栽钯(30毫克)存在下，在室温及在氣的大气压力下氣化12至24小时.过滤去除催化刑.滤液蒸发至干，然后残余物用叶轮泵抽干，获得N-[(R)-3-十二Sb基氣十四耽基]-D-天冬A酸，a-N-{(4R)-5-(甘氨酸氣基)-4-[a)-3-祭基十四耽基氨基成基)耽胺(200毫克，定量产率).C"H"化On:ES/MS;迈/z925.7([M+HD,947.8[M+Nar;(闺26)实施例2.19.N-[(R)-3-十二耽碁氣十四跌基-D-天冬我酸，a-N-{(4R)-5-(丁二酰氣基)-4-(10-3-羟基十四酰基氨基戊基)酰胺H)M-197-MC-Succ〉(困27)2.19.1.N-[(R)-3-十二酰基氣十四酰基l-D-天冬A酸，a-N-((4R)-5-(丁二酰氣泉)-4-[(R)-3~苄氣基十四耽lA泉]戊基)酰胺往丁二酐(25毫克，0.25毫摩尔)在无水二氣甲烷(2毫升〉中的溶液，在三乙碁胺(40微升，0.29毫摩尔)存在下，在01C加入N-IOO-3-十二耽基氣十四酰基)-D-天冬氨酸，a{(4R)-5-轻基-4-[(R)-3-苄氣基十四耽基氨基戊基)酰胺？-苄酶(1.2.2.节)(HO毫克，0.14毫摩尔)在二氣甲烷(5毫升)中的溶液.反应混合物在()TC攬拌10分钟，随后在室湿下挽拌.然后反应介质用二氣甲坑稀释，用1N盐酸熔液洗涤，接着分离相.有机相用碟酸镁干燥，过滤及蒸发.用硅胶柱闪式色谱纯化(9/l二氣甲烷/丙拥洗脱液，含24乙酸)，能够回收酸产物(148毫克；呈白色闺体状."C-,(62.89MHz,CDCI3〉,S,ppm175.03:173.55;173.35;171.92;171.72;171.36;170,97;170.60;170一8;170.41:138.05;135.24;128.85;128.76;128.41;128.27;128.20;128.03;127.59;76.48;71.31;70.77;66.67:65.08;49.20;48.";41,48;41.31;3Q.02;3S.80;34.26;34.13;33.84;31.77;2Q.S0;29,21;29,03;25.05;24,99;24.83;22.54:13.98.2.19.2.N-[(R)-3-十二酰基氣十四酰基-D-天冬A酸，a-N-{(4R)-5-(6-丁二酰H基)-4-00-3-羟基十四Jfe基AJU及泉)H)M-197-MC-Succ)(田27)上述制备的化合物(124毫克，0.11毫摩尔)的溶液溶解于含乙酸(1毫升)的热(HPLC級)乙醇(12毫升)中，然后在10%破栽钯(15毫克)存在下，在玄温及在氣的大气压力下氣化10小时.过滤去除催化刑.滤液蒸发至千，然后残余物使用叶轮泵抽干，得到二酸产物(102毫克，9750.C"H，晶0":BS/MS;迈/z968.6([M+HD，990.7([M+NaD;(困28).实施例2.20.N-[(R)-3-十二耽基氣十四耽基]-D-天冬氨酸，a((4R)-5-羟基-4-[(R)-3-鞋基十四酰基氨基]戊基)酰胺0(3-氨基丙基)酰胺H)M-197-AP)(困29)2.20.1.N-[(R)-3-十二酰基氣十四酰基-D-天冬A酸，a-N-{(4R)-5-羟基-4-(R)-3苄氣基十四ft泉A基虎塞l酰胺N-[(R)-3-十二酰基氣十四耽基氨基-D-天冬氨酸-P-苄癍，a-N-U4R)-5-羟基-4-[(R)-3-苄氣基十四酰基A基]戊基)酰胺(l.2.2.节)(2.53克；2.4毫摩尔)在含三乙基胺(4毫升)的1/16醉/乙酸乙酯混合物(150毫升)中的溶液，在10X破栽钯(120毫克)存在下，在宜温及在氣的大气压力下氛化2小时.过滤去除催化刑，滤液蒸发至千，然后用叶轮泵抽干.然后残余物溶解在1/1异丙醇/二氣甲烷混合物(IOO毫升)中,在室温与AmbcrliteIR-120(1T)树脂(5毫升)共同挽拌10分钟.过滤去除树脂，滤液蒸发至千，获得游离酸U.25克；，呈白色结晶固体状.(Rf0.45,在含lX乙酸的9/l二氣甲坑/甲醇中，裤钼酸化合物及紫外光显色刑).PF-115-117TC.2.20.2.N-[(R)-3-十二BUUtL十四酰基I-D-天冬泉酸，a-N-{(4R)-5-羟基-4-(R)-3-辛氣基十四酰基氨基A泉l酰胺6-N-(3-将1IDQ(2-异丁氣基-l-异丁氣基浆基-l，2-二氣喹啉)(98克；0.32毫摩尔)在无水二氣甲烷(3毫升)中的溶液，在0X3及在氣气流下添加到前面制备的化合物(250毫克，0.26毫摩尔)在无水二氣甲秌(15毫升)中的溶液.反应混合物在OlC扰拌15分钟，加入市售3-千氣基羰基氨基-丙基胺盐酸盐(70毫克，0.29毫摩尔)在舍三乙基接(40微升，0.29毫摩尔)的无水二氣甲坑(7毫升)中的溶液.挽拌18小时后，溶液蒸发至干，采用硅肢柱闪式色谱纯化(20/1二氣甲烷/甲醇洗脱液)，可回收偶合反应产物(217毫克；78W，呈白色闳体状.2.20.3.N-(lQ-3-十二酰基氣十四酰基-D-天冬JL酸，a-N-{(4R)-5-羟基-4-(R)-3-羟泉十四就基氨基1龙基}酰胺B-N-(3-JL基丙基)酰胺("OM-197-AP)上述制备的化合物(50毫克，44毫摩尔)在含乙酸(l毫升)的1/1一氣甲坑/异丙醇混合物(8毫升)中的溶液，在10%破栽钯(10毫克)存在下，在室湿及在氣的大气压力下氣化6至8小时.过滤去除催化刑.滤液蒸发至干，残余物用叶轮泵抽干，获得N-(R)-3-十二跌基氣十四酰基-D-天冬氨酸，a-N-{(4R)-5-羟基-4-1(R)-3-羟基十四酰基氨基戊基)酰胺P-N-(3-氨基丙基)酰胺(32毫克，80X).C"Hm歸,:ES/MS;边/z924.8(M+H]+);1848.8([2M+H]+);(困30).实施例2.21.N-[(R)-3-十二耽基氣十四酰基]-D-天冬氨酸，a-N-{(4R)-5-羟基-4-[(R)-3-羟基十四酰基氨基戊基}酰胺P[(1S)-1-羧基-5-氨基戊基]酰脉H)M-197-Lys)(困31)2.21.1.N-(R)-3-十二耽泉氣十四酕基-D-天冬氨酸，a-N-((4R)-5-羟基-4-(R)-3-苄氣基十四跌基A基戊基)跌胺&-N-〖(1S)-1-苄氣基羰泉-5-苄11基狻基氨基戊基耽接在室温及在氣气流下，IIDQ(2-异丁氧-l-异丁氣羰基-l，2-二氣喹啉)(114毫克；0.38毫摩尔)在无水二氣甲烷(5毫升)中的溶液，加到N-[(R)-3-十二酰基氣十四酰基)-D-天冬氨酸，a{(4R)-5-羟基-4-[(R)-3-节氣基十四酰基氨基戊基)酰胺(2.20.1节)(330毫克，0.31毫摩尔)在无水二氣甲坑(20毫升)中的溶液.反应混合物在宜温下搅拌15分钟，然后加入市售s-N-节氣基羰基-L-赖A酸节醋盐酸盐(140毫克，0.31毫摩尔)在含三C基肤(48徵升，0.34毫摩尔〉的无水二氯甲坑(5毫升)中的溶液.拢拌18小时后，溶液蒸发至干.通过硅胶柱闪式色详純化(先30/1，然后20/l二氣甲烷/甲醉洗脱液)，可以回收偶合反应产物(317毫克；77X)，呈白色固体状."C-RMN(62,89CDCI3),S.ppm:173.68;172.35;171.92:170.74;170,62;170.54:156.75;156.52;138.31;.136.54;135.12:128.54;128.40;128.28;128.21;127.96;127.577;127.59;76.67;71.40;71.18;67.20;67.09;66.48;64,67;52.30;51.19;41.64;40.34:39.24;37,58;34.40;34.10;31.83;29.58;29.27;29.09;25.16;25.11;24.93;22.60;14.04.2.21.2.N-[(R)-3-十二跌塞氣十四耽基]-D-天冬A酸，ct-N-((4R)-5-羟基-4-〖(R)-3-羟基十四ft基A基戊基)酰胺fl(1S)-1-羧基-5-氨基戊基酰胺(OM-197-Lys)上述制备的化合物(93毫克；71微摩尔)在含水醋酸(0.5毫升)的1/l二氯甲烷/乙醇混合物(20毫升)中的溶液，在10%碟栽钯(17毫克)存在下，在室温及在氣的大气压力下氣化12至24小时.过滤去除催化刑.滤液蒸发至千，残余物用叶轮泵抽千，获得N-[(R)-3-十二狭基氣十四酰基]-D-天冬氨酸，ct-N-{(4R)-5-羟基-4-[(R)-3-羟基十四酰基氨基]戊基l酰胺p-N-[(lS)-l-歡基-5-氨基戊基]耽胺(71毫克，定量产率)，C"H.。息。:ES/MS:m/z996.9(M+H+);1018.9([M+NaD;(困32).实施例2.22.N-[(R)-3-十二汰基氣十四酰基]-D-天冬氨酸，a-N-{(4R)-5-(6-氨基己耽氧基)-4-(R)-3-羟基十四醜基氨基]戊基)酰胺P-N-[(IS)-l-聚基-5-氨基戊基耽胺(sOM-197-Lys-AC)(困31)2.22,1.W-(R)-3-十二酕l氣十四酰基l-D-天冬氨酸，a-N-{(4R)-5-(6-苄氣基羰lA基己耽氣基)H-[(R)-3-苄氣基十四耽基氨泉]戊基)-酰胺B4-(18卜1-芊氣基羰基-5-牟氣基羰基袭基戊基酰胺往N-[(R)-3-十二酕基氣十四耽基-D-天冬氛酸，oc{(4R)醫5-羟基-"[(R)-3_苄氣基十四酰基A基戊基)耽胺P-N-[(1S)-l-苄氧基浆基-5-苄氣基羰基氛基戊基l耽胺(2.21.1.节)(317毫克，0.24毫摩尔)及6-(苄氧基羰基氨基)已酸(U8毫克，0.48毫摩尔)在无水二氯甲烷(15毫升)中的溶液，在OC及在氣气流下相继地加入市售的l-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(93毫克，0.48毫摩尔)和4-二甲基氨基吡啶(12毫克，0.98毫摩尔).反应混合物在OTC攬拌30分钟，随后在室溫下攬拌一夜.然后反应介质先用水，然后用盐酸溶液洗涤，接着分离相.有机相用疏酸镁干燥，过滤及蒸发.用硅胶柱闪式色详处理(2/l二氣甲坑/丙稱洗脱液)，可回收偶合反应产物(266毫克；71)0呈白色固体状.2.22.2.N-(R)-3-十二ife泉&十四8yU-D-天冬AJt，a{(4R)-5-(6-A基己-4-(R)-3-羟基十四戊基)-跌胺-W-[(1S)-1-欺基-5-氨基戊基酰胺(画OM-197-Lys-AC)如上制备的化合物(236毫克；151徵摩尔)在含乙酸(1毫升)的1/1二氣甲垸/异丙醇混合物(20毫升)中的溶液，在10%破栽钯(100毫克)存在下，在室温及在氣的大气压力下氣化12至24小时.过滤去除催化刑.滤液蒸发至干，然后残余物用叶轮泵抽干，获得N-[(R)-3-十二跌基氣十四耽基-D-天冬A酸，a-N-{(4R)-5-(6-氨基已酰氧基)-4-[(R)-3-羟基十四耽基氨基戊基)酰胺-N-(1S)-1-欺基-5-氨基戊基跌胺(140毫克，m)C《iH"息':BS/MS:坦/z555.5(M+H]");1110.0([M+HD;(困33).实施例2.23.N-[(R)-3-十二酰基氣十四耽基]-D-天冬泉酸，a{(4R)-5-羟基-4-[00-3-羟基十四酰基氛基]戊基)-耽胺P-N-(IS)-1,2-二羧基乙基]酰胺(一0M-197-Asp)(困34)2.23.1.N-(R)-3-十二酰基氣十四酰基-D-天冬A酸，oc-N-((4R)-5-羟基-4-(R)-3-苄氣基十四酰基氨基戊基)-酰胺P-N-『(IS)-1.2-二(辛氣基後基)C基1IDQ(2-异丁氣-l-异丁氣羰基-12-二氣喹啉)(96克；0.32毫摩尔)在无水二氣甲烷(5毫升)中的溶液，在宜温及在氣气流下添加到N-[(R)-3-十四酰基氧十四酰基]-D-天冬A酸，a-N-{(4R)-5-羟基-4-[(R)-3-苄氣基十四酰基氛基戊基)-酰胺(2.20.1节)(252毫克，0.26毫摩尔)在无水二氣甲坑UO毫升)中的溶液.反应混合物在玄温下挽拌15分钟，然后加入市售的L-天冬氛酸二节DI的对甲苯磺酸盐(141毫克，0.29毫摩尔)在含三乙基胺(40徵升，0.29毫摩尔)的无水二氣甲坑(5毫升)中的溶液.扰拌18小时后，溶液蒸发至干.用砝胶柱闪式色详纯化(20/1二氣甲坑/甲醇洗脱液)，可回收偶合反应产物(260毫克；78X)."C-國(62,89MHz,CDCI3),8,ppm:173.68;171,92;171.17;170.60;170.46;170.37;17q.18;170.06;138.31;138.19;135.20:135.12;134.87;128,48;128.26;128.18;127,75;127,63;127.56;76.66;71.40;71,19;70,98;68.79;67.59;66.85;65.14;64,73;51.25;50.17;48.78:48.67;41.70;39.37;39,21;37.50:35.94:34.48;34.38:34.10;31.81:29.54;29.25;29.08;27.93;25.56;25,14;25.09;24.91;22.58;14.02.2,23.2.N-[(R)-3-十二酰基氣十四乾基-D-天冬A酸，a-N-{(4R)-5-羟基-4-[(R)-3-羟基十四酰基氨基戊基)-ft胺6-K-(lS)-l,2-二狻基乙基]耽胺(-OM-197-Asp)上述制备的化合物(260毫克；207徵摩尔)在1/1二氣甲烷/异丙醉混合物(20毫升)中的溶液，在10%破栽钯(50毫克)存在下，在室温及在氣的大气压力下氣化4小时.过滤去除催化刑.滤液蒸发至干，残余物用叶轮泵抽干，获得二酸(108毫克，88X〉.C"H"N*0":ES/MS:m/z983.7([M+HD;1005.8([M+NaD;(困35).实施例2.24.N-[(R)-3-十二酰基氣十四酰基]-D-天冬氨酸，a-N-{(4R)-5-(6-氨基巳耽氧基)-4-[(R)-3-羟基十四酰基氨基戊基)耽胺P-N-(1S)-l，2-二羧基乙基酰胺(画OM-197-Asp-AC)(困34)2.24.1.N-(R)-3-十二酰基氣十四酰基l-D-天冬A酸，oc-N-{(4R)-5-(6-苄氣基羰基A基己酰&A)-4-00-3-苄氣基十四ft基A基]及基)耽胺B-N-[(IS)-1.2-二(苄H基數基)乙基胜N-[(R)-3-十二酰基氣十四酰基-D-天冬A酸，a{(4R)-5-羟基-4-[(R)-3-千氣基十四耽基氨基戊基)耽胺P-N-[(1S)-1，2-二(苄氣基羰基)乙基酰胺(2.23,1.节)(158毫克，0.13毫摩尔)以及6-(苄氣基羰基氨基)己酸(84毫克，0.32毫摩尔)在干燥二氣甲就(6毫升)中的溶液，在ox:及氣气流下相继加入市售l-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基破化二亚胺盐酸盐(61毫克，0.32毫摩尔)和4-二甲基氨基吡啶(4毫克；33微摩尔).然后，反应混合物在0TC扰拌30分钟，随后在室温下挽拌一夜.然后，反应介质用水及1N盐酸溶液洗涤，接着分离相.有机相用碟酸镁干燥，过滤及蒸发.用硅胶柱闪式色谦純化(6/1二氣甲烷/丙拥洗脱液)，能够回收偶合反应产物(83毫克，"C掘N(62,89MHz,CDCI3),S,ppm:173.69,173.53,173.26,171.21,171.11,170.61,170.38,170.31，170.22,156.36,138.26,136.58,135.20,134.87,128.48,128.38,128.31,128,27,128.19,127.95，127.55'76.50,71.24，71.10,67.58,67.48,66.79，66.42,65,69,49.99,48.77,47.86,41.70,41.49,40.70,39.15,37.50,35.94,34,44,34.37，33.97,33.67,31.80,29.54，29.24,29.07,28.37,25.98,25.55,25.13,25.08,24.91,24.28'22.58，14.02.2.24.2.N-f(R)-3-十二酰基氣十四酰某l-D-天冬氨酸，ct-N-{(4R)-5-(6-A泉己酰氣基)H-(R)-3-羟基十四酰基A基]戊基)跌胺&-N-[(IS)-1.2-二羧基乙基lBb胺(-0M備197-Aso-AC)上述制备的化合物(80毫克；0.053毫摩尔)在含己酸(l毫升)的1/4二氣甲烷/乙醉混合物(10毫升)溶液，在10*破我钯(50毫克)存在下，在室溫及在氣的大气压力下氣化12至24小时.过滤去除催化刑.滤液蒸发至干，然后残余物用叶轮泵抽千，获得二酸(61毫克，定量产率).质谱(SM):C"H，"N，O"之计算值1095.8;实测值m/z1097.0([M+HD(闺36),实施例2.25.N-6酰基-D-天冬氨酸，cx-N-{(4R)-5-(6-氛基己酰氣基)-4-[(R)-3-幾基十四酰基氛基戊基)9t胺(-0M-197-N，C2-AC)(闺37)2.25.1.N-乙酰基-D-天冬4L酸，B-苄鐮往乙酸酑(85橄升，0.90毫摩尔)在乙猜(1毫升)中的溶液，加入市售H-D-Asp(OBn)-OH(Senn化学公司，CH-Dielsdorf)(200毫克，0.90毫摩尔)在CH3CN/H,0/Bt,N(3.5/1.0/0.4毫升)混合物中的溶液.反应混合物在室温下挽拌18小时.蒸发去除有机溶刑，剩余水相冷却至0C，用IOX柠樣酸水溶液酸化至pH-3,再用乙酸乙酯(2x)萃取.有机相合并，用碟酸镁干燥，过滤及蒸发.获得H-乙酰基-D-天冬泉酸千酯，呈白色结晶闺体状(192毫克，未经进一步纯化即可用在下面步稞(Rf"O.30,在含2X乙酸的20/l二氣甲坑/甲醉中，裤钼酸化合物及紫外光显色刑).2.25.2.N-乙跌基-D-天冬A酸，cx-N-{(4R)-5-羟基-4-[(R)-3-苄氣基十四耽塞A塞1戊基}酰胺0-苄欲1IDQ(2-异丁氣-l-异丁氣羰基-l，2-二氣喹啉)(254毫克；0.84毫摩尔；1.2当量)在无水二氣甲坑(5毫升)中的溶液，在室温及在氣气流下，添加到上述制备的N-乙酰基-D-天冬A酸-p-苄SS(185毫克，0.70毫摩尔)在无水二氣甲坑(15毫升)中的溶液.反应混合物挽拌15分钟，随后加入(2R)-5-氛基-2-[(R)-3-苄氣基十四酰基氨基-戊-l-醇(1.1.2.节)(334毫克，0.77毫摩尔，1.1当量)在无水二氣甲烷(IO毫升)中的溶液.挽拌3小时后，溶液蒸发至干.残余产物用硅胶柱闪式色谱純化(5/3二氣甲坑/丙酮，然后纯丙拥洗脱液)，回收偶合反应产物(369毫克；78%)(Rf-O.22,在5/2二氣甲烷/丙酮中，磷钼酸化合物及紫外光显色剂).13ORMN(62,89MHz,CD3OD〉,5,ppm:171,92;171,23;171,07;170,61;170,35;138,11;135,24;128,40;128,24;128,02;127,69;127,59;71,25;67,57;64,56;51,03;49,41;41,51;39,21;35,90;33,88;31,73;29,46;29,17;28,32;28,02:25,35;25,24;24,97;22,83;22,51;13,97;SM:CMHS9N307的计算值681,4;实测值:m/z682,5(M+H+),704,5([M+Na+).2.25.3.N-乙酰基-D-天冬A酸，a-N-{(4R)-5-(6-苄氣基羰基Al)己耽氣l]-4-[(R)-3-芊氣左十四酰m]及塞l酰胺6-苄翻往N-乙酰基-D-天冬氨酸，a{(4R)-5-羟基-4-[(R)-3-苄氣基十四酰基氨基戊基)酰胺e-苄8(200毫克；0."毫摩尔)及6-(苄氣基羰基iUIO己酸(156毫克；0.59毫摩尔)在无水二氣甲秌(8毫升)中的溶液，在OTC及氣气流下相继加入市售l-(3-二甲基A基丙基)-3-乙基破化二亚胺盐酸盐(112毫克，0.59毫摩尔)和4-二甲基氛基吡啶(7毫克，59毫摩尔).然后反应混合物在0TC扰拌30分钟，随后在室温下挽拌一夜.然后反应介质相继用水及1N盐酸溶液洗涤，接着分离相.有机相用碟酸钱干燥，过滤及蒸发.用硅胶柱闪式色谱纯化(6/1二氣甲烷/丙酮洗脱液)，回收偶合反应产物UOO毫克；73X呈白色闳体状.13C-RMN(62.89MHz,CDCb),S,ppm173.65,171.71,171.26,170.30,156.41,138.化，136.60,135.33'128.57,128.46，128.38，128.20'128.04,127.76,127.62,71.21，66.80，66.53,65,72'65.63,49,36,47,80,41.36,40.76,39.22,39.13,35.79，33.75,31.88，29,61，29.31,28,58,28.52,26.04,25.48,25.11,24.36,23.13,22.64,14.09.2.25.4N-乙跣基-D-天本A酸，a-N-{(4R)-5-(6-A基己酰氣基)-4-[(R)-3-羟塞十四酰塞氨泉1酰胺(-OM-197-N，C2-AC)上述制备的化合物(200毫克；0.22毫摩尔)在含乙酸(2毫升)的1/1二氣甲坑/乙醉混合物(16毫升)中的溶液，在10S破栽钯(40毫克)存在下，在室温及在氨的大气压力下氣化l2至24小时.过滤去除催化剂，滤液蒸发至千，然后用叶轮泵抽干，获得N-乙酰基-D-天冬氨酸，a-N-{(4R)-5-(6-氨基己酰氣基)-4-[(R)-3-羟基十四酰基氨基戊基)耽胺(132毫克，定量产率).SM:C"H"1M),的计算值614.43;实測值m/z615.5([M十Hr);629.5([M+NH小)；637.5([M+NaD(田38).实施例2.26，N-(2-癸酰氣基辛酰基)-D-天冬氨酸，a-N-{"R)-5-(6-氨基己酰氧基)-4-[(R)-3-羟基十四酰基氨基-戊基)酰胺(《■0M-197-N，(C10-20C8)-AC)(闺39)2.26.1.2-*m^往市售外消旋2-羟基辛酸(1.00克，6.2毫摩尔)在HPLC级乙酸乙癍(30毫升〉中的溶液，相继加入苄基溴(2.22毫升；18.7毫摩尔)，三乙胺(2.6毫升，18.7毫摩尔)及四丁基硖化铵(1.15克；3.12毫摩尔).溶液在室溫下挽拌18小时，随后蒸去溶刑.残留物溶于鍵中，然后有机相以饱和碳酸钠溶液及水(2x)洗涤.有机相用破酸镁干燥，过滤及蒸发，获得粗制2-羟基辛酸千翻(Rf-0.57,在3/l石油酸/乙酸乙酹混合物中；确钼酸化合物及紫外光显色剂)，2.26.22-癸酰氣基辛酸^敏上述制备的糖(780毫克；3.12毫摩尔)在无水二氣甲烷(15毫升)的溶液，在0TC中相继滴加吡啶(0.9毫升)及癸耽氣(654毫克；3.43毫摩尔).混合物在室温下挽拌20小时，然后反应介质倒入舍(5X)碳酸氣钠的水冷水中.有机相经分离，相继用1N盐酸溶液与水(2x)洗涤.有机相用硖酸镁干燥，过滤及蒸发.用硅胶柱闪式色谦純化(30/1石油醚/乙酸乙敏洗脱液)，能够回收纯2-癸酰氧基辛酸苄豳.2.26.32-癸酰氣基辛酸如上制备的2-脊酰氣辛酸爷》(515毫克；1.27毫摩尔)在HPLC级乙醉(40毫升)中的溶液，在IOX壤栽钯(IOO毫克)存在下，在室温及在氣的大气压力下氣化2小时.在徵孔腹上过逸去除催化剂.滤液蒸发至干，然后残余物用叶轮泵抽干，获得2-癸酰氣基辛酸(定重产率).2.26.4.N-(2-癸酰氣基辛酰泉)-D-天本A酸，B-苄敏往2-脊酰氧基辛酸(317毫克；1.01毫摩尔)在无水THF(2毫升)中的溶液，在-15iC及氣气气流下，相继加入N-甲基"马啉(lll橄升；1.01毫摩尔；1当量)以及氣甲酸异丁醋(ni樣升；1.01毫摩尔；1当量).迅速观察到生成的N-甲基吗啉盐酸盐沉淀.在-151C挽拌30分钟后，加入市售H-D-Asp(OBn)-OH(CH-Dielsdorf，Senn化学公司)(225毫克；l.Ol毫摩尔；1当量)在含三乙胺(O.4毫升)的3.5/1乙腈/水混合物(9毫升)中的溶液.然后，反应混合物在室湿下攬拌一夜.有机相蒸发，水相冷却至OTC，用1(^柠樣酸水溶液酸化至pH-3，用乙睃乙W(2x)萃取.有机相用碟酸镁干燥，过滤及蒸发.用硅肢柱闪式色谱纯化(含24乙酸的2/1石油醚/6酸乙洗脱液)，接着与甲笨共蒸发，能够回收N-(2-癸耽氣基辛耽基)-D-天冬氛酸，p-苄欲(140毫克；27X).2.26.5.N-(2-姿酰氣基辛酰基)-D-天冬Jl酸，a-N-{(4R)-5-羟基-4-(10-3-辛&基十曰耽基氨基1-/&基}P-苄敏在室温及氩气气流下，1IDQ(98毫克；0.32毫庫尔；1.2当量)添加到N-(2-發酰氣基辛酰基)-D-天冬氛酸0-爷敏(14O克；0.27毫摩尔)在无水二氣甲坑(15毫升)中的溶液.反应混合物挽拌15分钟后，加入(2R)-5-氨基-2-(R)-3-苄氣基十四酰基A基]戊-l-醇(1.1.2.节)(129毫克；0.30毫摩尔；1.1当量)在无水二氣甲坑(5毫升)中的溶液.挽拌18小时后，溶液蒸发至干.用硅胶柱闪式色详純化(先5/1二氣甲烷/丙酮，后1/l;氣甲烷/丙酮洗脱液)，能够回收偶合反应产物(197毫克；7M)(Rf一O.30，在5/1二氣甲烷/丙酮混合物中，磷钼酸化合物以及紫外光显色剂).2.26.6.N-(2-癸晚氣基辛耽基)-D-天本A酸，a-N-{(4R)-5-[6-(辛氣基羰基A基)己跣氣基]-4-(R)-3-苄fL塞十四酰基氨基-戊基}酰胺B-苄豳往N-(2-癸耽氧基辛酰基)-D-天冬氨酸p-千欲，a-N-{(4R)-5_羟基-4-[(R)-3-苄氣基十四酰基A基-戊基)酰胺(197毫克；0.21毫摩尔)以及6-(千氣基羰基氨基)己酸(112毫克；0.42毫摩尔)在无水二氣甲烷(8毫升)中的溶液，在ot:及氣气气流下，相继加入l-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基破化二亚胺盐酸盐(81毫克，0,42毫摩尔)以及4-二甲基氨基吡啶(6毫克，42毫摩尔).然后，反应混合物在01C挽拌30分钟，随后在室温下扰拌一夜.然后，反应介质相继用水及1N盐酸溶液洗涂；接着分离各相.有机相用硖酸镁千燥，过滤及蒸发.用硅胶柱闪式色if纯化(6/l二氣甲坑/丙酮洗脱液)，能够回收偶合反应产物(170毫克；68J4).2.26.7N-(2-癸醃氣基辛酰基)-D-天冬iL酸a-N-{(4R)-5-(6-泉基己跌氣泉)-4-(R)-3-羟基十四酰基氨基]-戊基)耽胺上述制备的化合物(150毫克；0.13毫摩尔)在含6酸(2毫升)的1/1二氣甲烷/6醉混合物(16毫升)中的溶液，在10i破栽钯(40毫克)存在下，在室温及在氣的大气压力下氣化12至24小时.过滤去除催化刑.滤液蒸发至干，残余物用叶轮泵抽干，获得N-(2-癸耽氣基辛酰基)-D-天冬A酸，a-N-{(4R)-5-(6-氨基己耽氣基)-4-(R)-3-幾基十四耽基氨基)-戊基}酰胺UIO毫克，定量产卒)；SM(质语)C"H"NA，的计算值868.65;实测值迈/z比870.0([M+H)*，884.0(M+NIhr)，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage74</formula>(困40).实施例2.27.本发明化合物的纯化及分析合成产物与带有附属官能化支链的酰基化二肽溶于水-异丙醇混合物(l:l体积/体积)中.然后添加必需量的2M碳酸氣铵，以达到50mM浓度.2.27.1.纯化在下迷奈件下，采用反相制备HPLC进行纯化柱BondapackC18PrcpPak,40x200毫米，15-20徵米，300埃，Waters公司移动相A:异丙醇-水(9:l体积/体积)，50迈M碳酸氣铵B:异丙醇-水(2:8体积/体积)，50边M碳酸氣铵流速40毫升/分钟洗脱在柱上恒溶刑組成吸附4054B(60XA)，IO分钟梯度A:B:在10分钟内40-8054B恒溶剂组成洗脱80仰，30分钟洗涤步稞IOO仰，10分钟检测紫外光，210毫徵米若观察有任何芳族产物(不完全脱保护步稞)，則须进行更精密的純化步猓.这种补充纯化处理是根据下述条件进行的柱Kro迈asilC18，21x250毫米，5徵米，100埃，Macherey-Nagel公司.移动相A:异丙醉-水(9:l体积/体积)，50mM破酸氣铵B:异丙醉-水(2:8体积/体积)，50mM硖酸氣铵流速5毫升/分钟洗脱柱上恒溶剂组成吸附B(604A)，10分钟恒溶刑组成洗脱B，30分钟洗涤步錄B,10分钟检测紫外光，210毫徵米系统Waters2000含有呈铵盐形式的相关化合物的洗脱部分合并，并通过在C18Bondapack相，15-20微米，300埃，waters公司吸附浓缩.然后反离子使用10克/升械金属盐(例如氣化钠或氣化钾)在水-异丙醉混合物(9:1体积/体积)中的水溶液洗涤交换.在柱通过5个水-异丙醇混合物(9:1体积/体积)体积去除过量盐后，化合物用純异丙醇洗脱.2.27.2.纯化过程监視在各个步棘后，洗脱部分可根据下述条件来用反相HPLC分析色详进行分析柱SupelcosilC18.3稞米，4.6x150毫米，100埃，Supelco公司移动相A:水-乙精(l:l体积/体积)，5mMTBAPB:水-异丙醉(1:9体积/体积)，5idMTBAPTBAP:四丁基裤酸铵流速1毫升/分钟洗脱步錄A:B梯度(75:25至0:100范围)，37.5分钟检測紫外光，210纳米和254纳米色详对于这些分析，使用不同的HPLC色语(HP1050Ti系列,HP1090系列M,LabChro迈shimadzu).根据使用的系统可以改变保窗时间，对于一定化合物可能有约1分钟.2.27.3.i后A物的湘定及纯度分析在上述色谦条件下，采用HPLC/UV对所得产物进行測定和純庋的控制.根据这些分析结果，所得到产物的纯度是"至100、.为了证明含有在紫外光为无活性的杂质，进行LC/ES-MS分析(电喷洒型电离作用，正棋式).为了满足电离的条件，使用下列色if分析柱移动相流速洗脱溫度2.27'4.舰VydacC4.5徵米，4.6xl50毫米,300埃A:水-乙請(l:l,体积/体积)，0.05XTFAB:水-异丙醇(1:9，体积/体积)，0.05XTFA1毫升/分钟A:B梯度(80:20-0:100)，20分钟光详分析采用不同型号的质详仪(FinniganLCQ，离子阱；MicromassQuattroII，三阶段四极；MicromassZ-Bio-Q三阶段四极)測量ES/MS光谱(正与负棋式).还进行了MS/MS型的补充分析.使用250.13及62.89MHzBrukerDPX型装置測量了'H-RMN及"C-RMN光详.笫3系列实施例壤合物(conjugu")的制备实施例3.1与FGFG肽的壤合物如困5、8、15、17、19、21及23中列出的合成流程困所表明的，在带有烯烃型辅助支链的酰化假二肽化合物进行相邻二羟基化反应，导致生成穗定二醇官能团.然后进行定期氣化反应，在辅助支链上形成fi^官能团.然后，通过还原性胺化反应，这种官能罔能够例如偶合小尺寸肽，如FGGF(苯基丙A酸-甘氨酸-苯基丙我酸-甘氨酸，Sig迈a公司).为了除去溶液中存在的盐，醛的純化步錄是必不可少的.这种搭化合物纯化可根据下迷程序用C18Bondapack相(waters公司)15-20及徵米，300埃进行:-稀释在异丙醇-水混合物(l:3)后吸收-使用异丙醉-水混合物(1:9)洗脱盐-使用最小体积的异丙醇洗脱醛.通过还原性胺化的偶合反应可在水溶液中进行，同时醛官能(酰化假二肽的辅助支链)与待偶合肽或蛋白质上可用胺官能团之间满足相等的化学计算重.在GFGF肽实例中，2毫克纯化的0M-197-FV7(1.86微摩尔，l当量)添加到0.8毫克FGFG(1."毫摩尔，l含量)溶于1毫升(l:l)水-乙腈中的溶液.该溶液在玄湿下挽拌30分钟形成亚胺.随后，通过加入92微升1MNaBH3CN(5.77毫克，50当量)进行还原步碌，形成高度穗定的壤-氣鍵(闺41).緩合物首先用VydacC4柱进行纯化，去除未反应肽，随后用BaondapackC18相(Waters公司)，获得钠盐(麥见本发明化合物纯化与分析一节).然后，緩胺(TEoA)的无菌水中，以满足生物活性试验的需求.纯化后记录的ES/MS质谦显示在田43中，证明了在1457.4m/z的[M+Hr分子离子,表明其期望的偶合作用.通过MS/MS分析鉴定出迈/z400与900间的可见离子为来自緩合肽分子峰的片段.未检測出对应于起始FGFC肽的离子(迈/z427.1〖M+H，，m/z853.0[2M+Hr，田42),实施例3.2.与(NANPhP!P"肽的綴合物在困5中列出的合成流程围所得到的0M-197-FV7化合物例如可与葯学感兴趣的舦偶合，例如(NANP),P,P"[Valmori等人；1992,《J.Immunol.》149:717-721，它具有下迷的序列(NANP)6QY薩SKFIGITEFNNFTVSFWLRVPKVSASHLE(NANP),PA。肽具有四个可能的緩合位点(末端胺+三个賴A酸).5毫克純化的OM-197-FV7(4.64稞摩尔，4当量)添加到7."毫克(NANP),P,P"(1.16橄摩尔，1当量)溶于1毫升(1:1)水-异丙醇混合物中的溶液.该溶液在室湿下搅拌30分钟，随后通过加入230稞升1MNaBH,CN(14.43毫克，50当量)进行还原步碌.溶液在宜温下攬拌2小时.然后，反应混合物对水渗析24小时(3.5Kd渗析盒，Slide-A-Lyzer，Pierce公司).反应混合物进行LC/ES-MS分析证明存在有三种类型的分子，如田44的色谦田所表明的对应于游离的肽(峰A)、单壤合的肽(峰B)以及双緩合肽(峰C)的峰清楚可见，每个峰所记录的离子云示于田45、46及47，证明羊緩合物和双壤合物分别是与一个或二个OM-197-FV分子共价緩合.困45:肽(NANP)AP"(游离肽).PM:6451.在迈/z1076.2(A6),1291.2(A5)，1613.7(A4)的离子困46:羊緩合物OM-197-FV7-(NANP)(PiP，。PM:7481.在m/z1247.8(B6)，1497.4(B5),1871.2(B4)的离子困47:双壤合物(OM-197-PV),-(NANP),P,P，。.PM:8S11.在m/z/1496.6(C6),1703.3(C5),2129.1(C4)离子采用SDS-PAGE分析OM-197-PV7-(NANP)AP，，緩合物能够谇明有不同的独立带，它们分別对应于未反应的肽、羊蜒合物及双緩合物.在使用的电泳条件下(10-20S聚丙烯酰胺梯度，tris-tricin緩冲液,Bio-Rad公司，#161-1108)，现在的标准能评价相关带间的差为1000uma，证明了0M-197-FV的一个或二个分子偶合在肽上.实施例3.3.与PJ，，肽的級合物其它肽也可通过还原性胺化反应与带有tf型辅助支链的化合物偶合.例如OM-197-FV与P,0"肽偶合.后者对应于破伤风类毒素的T抗原决定簇部分，且具如下序列KQYIKANSKFI(3ITE師RVSFWLRVPKVSASHLEP川"肽具有5个可能的級合位点(末端胺+4个賴A酸)，质量"00uma.因此使用5当量0M-197-FV7.应用上述的反应条件.在对水渗析(3.d渗析盒Slide-A-lyZer，Pierce公司)后，所得綴合物的质谗采用LC/ES-MS技术测量，且对游离肽P,O"记录光语比较，后者是多电荷离子，迈/z840.9(A5)1050.9(A4)及1401.0(A3),它构成了分子童4200uma舦的离子云(困48).OM-197-FV-P2P3。单緩合物的ES/MS谱是多电荷离子的，m/z872.8U6)，1047.1(A5)，1308.6(A4)及1744.4(A3)(困49)，它构成了分子重5230uma緩合物的离子云，其对应于通过还原性胺化反应OM-197-FV分子接技在P,P"肽分子上.同理，所得到的(OM-197-FV)广P，P"双緩合物质谱证明每个肽羊位有二个OM-197-FV分子.由离子m/z1044.5(A6)，1253.1(A5),1566.3(A4)及2088.4(A3)(闺50)构成的离子云，通过转换分析后证明双缀合物的预期分子量(6261咖a).实施例3.4,与(NANP)aCS,T3肽的綴合物对具有下述序列的(NANP),CS.T3肽(TNO，PM;3527uma)进行类似偶合NANPNANPNANPDIE/CK1AKMEK^SSVFNWNS在对水渗析后，从ES/MS谦所观察的离子表明分子量4557及5587uma，它们对应于羊綴合物及双级合物的预期值.实施例3.5,MR99B肽缀合物采用闺8的合成流程困所得OM-197-MC-FV6化合物，例如与药物有利的肽如PyCS245-253偶合.对应于尤氏痗原虫(Plasmodiumyoclli)的T抗原决定簇"p"ope)部分的肽[Franke，E.D.等人，1997，J.Immunol.159，3432-3433具下迷序列SYVPSAEQI(PyCS245-253)为了不在偶合期间修饰T抗原决定簇部分，添加SER氨基酸，形成称做为MR99B具如下序列的肽SERSYVPSAEQI(MR99B)因该序列不含賴氨酸，故MR99B肽具独特的还原性胺化缀合位点(在末端胺).國此，2毫克纯化的OM-197-MC-FV6(2.04徵摩尔，1.4当量)添加到2毫克MR99B(1.47樣摩尔，1当量)溶于1毫升1:1水-异丙醇混合物中的溶液.溶液在室溫下挽拌30分钟，然后通过加入29.4微升1MNaBHsCN(29.4微摩尔，20当量)进行还原步棵.溶液在室溫下挽拌2小时.反应混合物进行LC/ES-MS分析，证明形成了具有预期分子量(2330.4u咖，围51)的0M-197-MC-FV-MR99B,如同证明图52(离子云)及53(转化光谱〉具有的讲.0M-197-MC-FV-MR99B緩合物纯化是根据下迷条件采用C4相的半制备性液相色谗进行的柱VydacC4250xi0毫米，5微米，300埃(Vydac)移动相A:(9:1体积/体积)水-乙腈，0.TFAB:(9:1体积/体积)异丙醉-水，0.05XTFA流速2.5毫升/分钟洗脱恒溶刑组成洗脱B，20分钟洗涤B,10分钟检测紫外光，210纳米系统HPLC1050为了验证肽抗原簇未被緩合改变，进行了OM-197-MC-FV-MR"B的胰蛋白睐消化.0.5毫克緩合物与83徵克胰蛋白醉(Roche,#109819)(基质-醉比(6:l)在1毫升50迈MTris-HCl援冲液，2mM氣化钙，pH8中在25XJ培养24小时.在图54列出反应后LC/ES-MS分析结果，能够证明在闺55及56示出的ES-MS光谱的二片段.第一片段具有在迈/z比993.5([M+H+)及1015.6([M+NaD的离子，对应于CSPy245-253肽(困55).笫二片段具有在迈/z比678.1([M+HD及1355.0([M+HD的离子，表明有0M-197-MC-FV-SER型结构存在(闺56).也可观察到笫三个峰.该峰对应于SYVPS及AEQI两个片段(在这些色谦条件下共洗脱液).当MR99B单独消化时也观察到这种反应.这些结果证明綴合未改变MR99B肽的T抗原决定銕部分，如困51流程田所示.实施例3.6，与MR99A肽的壤合物为了提高肽的OM-197-MR-PV的緩合程度，以及提高佐刑/批原比，还不改变T-抗原决定簇部分，KGG型序列可接枝在欲緩合的肚上.罔此，KGMGGK序列例如可接枝在MR99B肽上而获得下述MR99A肽KGGKGGKSERSYVPSAEQMR99A这时，该肽有四个可能的緩合位点用于还原性胺化反应(三个賴A酸与末端胺).因此，U毫克经純化的0M-197-MC-FV6(12.2微摩尔，12当重)添加到2毫克MR99A(1.01徵摩尔，1当量)溶解于l毫升l:l水-异丙醇中的溶液.该溶液在室温下挽拌30分钟，然后加入242微升lMNaBBhCN(244微摩尔，242当量)进行还原步錄.溶液在室湿下搅拌2小时.反应混合物的LC/ES-MS分析结果证明不同峰，它们对应于0M-197-MC-FV分子与MR99A肽壤合的不同程度.对应于(0M-197-MC-FV)广MR99A三緩合物(4870a肌)的质详示于闺57(离子云)及58(转化光错)，而困59(离子云)及60(转化光谦)的谦证明形成了四緩合物(0M-197-MC-FV)广MR99A(5834u迈a).同等观察到对应于五緩合物形式的离子.这个结果证明在某些反应条件下(过量OM-197-MC-FV),赖氨酸并非是唯一能通过还原性胺化反应进行反应的氨基酸.三-及四-缀合物(0M-197-MC-FV)w-MR99A的纯化可根据下迷条件采用C4相半制备性液相色详术进行柱VydacC4，250xlO毫米，5徵米，300埃(Vydac)移动相A:(9:1,体积/体积)水-MeCN,0.05XTFAB:(9:1，体积/体积)异丙醉-水，0.05XTFA流速2.5毫升/分钟洗脱恒溶刑组成洗脱85XB，20分钟洗涤B,10分钟检测紫外光，210纳米系统HPLC1050如同0M-197-MC-FV-MR99B单缀合物的情况，(OM-197-MC-FV)n-MR99A多ftl合物进行狭蛋白消化，以决定抗原簇(CSPy245-253)是否受缀合影响.1毫克多綴合物与166橄克胰蛋白酶(Roche,109819号)(基质-醉比(6:l))在l毫升50mMTrisHCl緩冲液，2mM氣化钙，pH8中在25TC共同培育24小时.反应后进行的LC/ES-MS分析能够证明许多片段，它们相应于MR99A肽各个位点分裂产物.此这些产物中，揭示了具有在m/z993.5([M+H，)及1015.6([M+HD的离子，并相应于CSPy245-253肽的片段.该肽的存在证明了即使在多重级合反应后，肽的T抗原决定襄部分的完整性.通过迈/z1621.4(M+H,〉及1942.8(M+H，)的三倍电荷离于所现察的二个片段是特别令人感兴趣的.实际上，达种片段分别对应于片段(0M-197-MC-FV)广KGGWGKSBR及(OM-197-MC-FV)s-KGGKGGKSER.观察这些片段表明，不同的OM-197-MC-FV分子有效地接枝在添加到CSPy245-253的序列上，即使在还原性胜化反应步脒时，除賴氨酸以外的氨基酸也进行反应.还应该强调指出，在肽上存在若干立体重要性的0M-197-MC-FV分子不影响蛋白睐的活性，如胰蛋白醉.例如在可分裂鍵选摔性分裂后能幹放出活性成分的prodrogue缀合的情况下，这些结果此时显得特別重要.实施例3.7.与Ag85c肽的綴合物带有辅助甲酰基戊耽基型支链的結构可以与多种药学上有益的肽缀合.例如，我们提出例如OM-197-MC-FV分子通过还原性胺化反应接枝在合成肽末端胺上，其肽序列衍生自结核杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)的抗原蛋白的序列.最初使用肽如下MR100YLQVPSASWIGR測.4麵MR101MVQIPRLVANNTRIWVYC21了6，6umaLR72PYMSLSGFLNPSEG蘭PTUGLAM2676.1画在与OM-197-MC-FV反应后，通过LC/ES-MS分析观察到下列級合物例如OM-197-PV-MR100,其分子量2171.0u迈a(困61及62)另外也获得OM-197-MC-FV-MR101(3140.0u咖)及OM-197-MC-FV-LR72(3643.0u迈a〉.实施例3.8.具有OM-197型结构的二聚物还原性胺化反应也可以应用于合成0M-197型结构的二聚物.例如,使用两种带有官能化辅助支链的化合物，例如0M-197-MC-FV及0M-197-MC-AC可以生成二聚物.罔此，1毫克经纯化后的OM-197-MC-FV6(0.98财尔,1当量)添加到1毫克OM-197-MC-AC(0.98微摩尔，1当景)溶于l毫升(l:9)水-异丙醉中的溶液中.溶液在室湿下扰拌1小时，然后通过加入19.6徵升1MNaBIhCH(19.6橄摩尔，20当量)进行还原步壤.随后，溶液在玄湿下攬拌12小时，反应介质进行LC/ES-MS分析能够证明形成具有预期分子重(1945.5u咖)的OM-197-MC-FV-OM-197-MC-AC二聚物，如闺63所示的详证明，因此，这种分子在带酰基链的主链末端有两个鼓酸官能.在田63所示的结构中，例如，在用OM-197-MP-FV或0M-197-MP-AC型化合物进行前迷合成时，可用辨耽基置换其中一个羧基.通过与前述带有官能辅助支链的两种化合物(0M-197-MP-PV及OM-197-MC-AC)间的还原性胺化反应进行类似反应，可获得0M-197-MP-FV-0M-197-MC-AC二聚物.闺64的ES/MS详证明这种化合物的预期分子质量(2011.9uma)实施例3.9.带有氨基型附厲支链化合物的緩合带有氨基型附属支链化合物也可通过还原性胺化反应接合至肽抗原.事实上有可能利用待接合肽序列中存在的末端丝氨酸.在笫一个步稞，肽进行高碘酸氣化反应，结果形成高度反应性的乙醛酰基(-CO-CHO).然后，这种基团通过还原性胺化反应与0M-197型化合物官能化辅助支链上的伯胺反应.例如，合成的肽MR99B可接合(緩合)到0M-197-MC-AC化合物，如困65的合成流程困所示.为此目的，147稞升0.1M高碘酸纳(14.6微摩尔，20当量)添加到1毫克MR99B肽(0.73徵摩尔，1当量〉溶于1毫升水的溶液中.溶液在室湿下挽拌2小时.因此，如此得到的醛用C18相纯化，回收在l毫升(l:l)异丙醇-水混合物中.然后，加入0.72毫克OM-197-MC-AC化合物(0.73徵摩尔，l当量)，以及1毫升0.2M硼酸盐緩冲液，pH9.2.在室温下拢拌30分钟后，加入14.6徵升1MNaBH;CN(14.6微庫尔，20当量)进行还原步稞.溶液在室湿下搅拌24小时.反应混合物的LC/ES-MS分析证明了形成具有预期分子量(2299.1uma,闺65)的OM-197-MC-AC-MR99B綴合物，如田66(离子云)以及67(转化光谗)所示语证明.带有氨基型辅助支链的其它化合物也可以类似方式接合.例如可列举0M-197-MC-AP、OM-197-MF-AC、0M-212-AH1、0M-197-MC-Gly、0M-197-MC"Lys、0M-197-Lys-AC或OM-197-Asp-AC.实施例3.10.与卯白蛋白的緩合物蛋白质，例如像印白蛋白，特别适合于采用还原性肢化反应进行偶合.对于带有官能化辅助支链与醛官能的假二肽，其序列中有大量的賴氨酸(印白蛋白有20个賴氨酸)是同样的可能緩合位点.通过改变还原性胺化反应的化学计算量(酰基化假二肽/蛋白质的比)，可达到不同的接合程度.1毫克经純化后的0M-197-FV7(0.928徵摩尔，10当重)添加到4毫克印白蛋白(O.09樣庫尔，1当量)溶于5毫升水中的溶液.该溶液在玄湿下挽拌30分钟，随后，通过加入46徵升1MNaB仏CN(2.89毫克，50当量)进行还原步緣.溶液在室温下扰拌2小时.反应混合物随后对水渗析24小时(3.5W渗析盒，Slide-A-Lyzer,Pierce公司).根据卵白蛋白的大小以及特有的非同源特性，印白蛋白构成大量分析问趙.因此，通过盾语法表征0M-197-FV-印白蛋白緩合物极为困难.为了证明发生接合(級合)反应，对不同批次的OM-197-FV-印白蛋白綴合物进行SDS-PAGB分析.如困68(B)(4-20S聚丙烯酰肤梯度)表明其凝胶，观察到，OM-197-FV-印白蛋白級合物(线3、4及5)的质量超过初始卯白蛋白质量达约3000u边a(线2),这种质量差提示了每个印白蛋白分子有许多OM-197-FV分子.采用C,相进行的LC/UV分析证实这种结果.实际上，在这些奈件下，初始卵白蛋白清楚地出现在Rt-11.3分奸，而在接合反应后，对应于初始的印白蛋白峰完全消失，这个事实证明了印白蛋白的定量反应.相反地，OM-197-FV-印白蛋白缀合物未被洗脱出.这种色谱性能还表明在卵白蛋白上还存在多个OM-197-FV分子，因此妨碍了蜒合物在这种条件下洗脱.实施例3.11.H1N1血液凝臬素緩合物H1N1血液凝臬素蛋白也提供说明OM-197型分子与蛋白质抗原间偶合的选择范例.1毫克经純化的OM-197-FV7(0.928徵摩尔，15当重)添加到5毫克H1N1(血液凝集素A/Beijig262/95,SolvayDuphar公司，Weosp,NU(0.06微摩尔，1当量)溶于8毫升水中的溶液，溶液在室湿下拢拌30分钟，然后通过加入46徵升1MNaBH，CN(2.89毫克，50当量)进行还原反应步壤.溶液在宜溫下挽拌2小时，然后，反应混合物对水渗析24小时(3.5Kd渗析盒).在0M-197-FV-卵白蛋白壤合物(4-2OX壤丙辟酰胺梯度)使用的相同条件下，采用SDS-PAGE分析了0M-197-FV-H1N1緩合物.困68(C)上有起始蛋白质(线6)和电泳前后的綴合物(分别为线8及7)所得的电泳困.H1N1蛋白质出现三个带，其中二个带对应于在麥考文献中描述的HA1及HA2亚羊位(Swiss-Prot,瑞士生物电脑科学会，日内瓦)，在OM-197-FV-HIM緩合物的情况下，观察到各带的质量差，证明0M-197-FV分子与HlNl蛋白质的偶合.实施例3.12.与AZT的緩合物(困69)往AZT(200毫克；0.749毫摩尔)在吡突(4毫升)中的溶液相继加入丁二酸肝(150毫克；0.5毫摩尔)及4-二甲基氨基吡啶(50毫克；0.41毫摩尔).任其在501C放里12小时后，加入甲醉(2毫升)，反应介质又在室湿下搅拌15分钟.然后，反应介质经浓缩，产物用硅胶柱闪式色谱用如下洗脱液纯化5/1二氣甲汰/甲醉.这时得到产物呈白色固体状(266毫克；m).C"H"IMMM-367克/摩尔);Rf-O.25(4/1二氣甲烷/甲醉).在OIC及氣气气流下，往如此得到的丁二酰基-AZT衍生物(60毫克；0，1"毫摩尔)在THF(3毫升)中的溶液,相继加入三乙胺(24徵升；0,172毫摩尔)及氣甲酸乙醋U4徵升；0.172毫摩尔).迅速观察到形成三乙胺盐酸盐沉淀.扰拌40分钟后，加入氨基己酰基衍生物(实施例2.16.)(160毫克；0.163毫摩尔)在含三乙胺(24橄升；0.172毫摩尔)的9/lDMF:水混合物(IO毫升)中的溶液.然后，反应混合物在0C扰拌拌15分钟，随后在室温下扰拌一夜，然后在减压下蒸发.粗产物溶于二氣甲烷(15毫升)及水(5毫升)中.有机相分离.水相用10X柠樣酸水溶液酸化，然后用二氣甲萃取(两次).这时，有机相合并，用碟酸镁干燥，过滤及浓缩.用硅胶柱闪式色谱，用洗脱液(先9/1，后7/l二氣甲坑/甲醇)纯化.回收AZT-缀合物(123毫克；57JJ)，呈白色固体状.Rf-0.2(4/1二氣甲坑/甲醉)；C"H"，N,0"(M1329克/摩尔)；实測值迈/z1330.9([M+HD,分析HPLC:保留时间Tr-24.437分钟，C18Supelcosil柱(15厘米x4.6毫米，3徵米，100埃)；溶刑A"50XMoCN5mMTBAP:溶剂B-90X2-丙醉，5mMTBAP,梯度25-100仰，37.5分钟，在210毫徵米紫外光检測.制备HPLC:C18Kromasil柱(25厘米x21毫米，5徵米，100埃)，溶刑A一-50XMeCN，5mMTBAP;溶刑B-90X2-丙醉，5mMTBAP.产物使用80XB洗脱.终相通过SPE以W盐通过，C18Bondapack相15徵米，用90X2-丙醉洗脱.与d4T的綴合物(困69)往d4T(200毫克；0.89毫摩尔)在吡啶(4毫升)中的溶液，相继加入丁二酸酐(179毫克；0.786毫摩尔)及4-二甲基氨基吡啶(109毫克、0.89毫摩尔).在宜溫下扰拌12小时后，加入甲醇(2毫升)，反应介质又在室溫下挽拌15分钟，然后蒸发.然后，粗产物用硅胶柱闪式色谦.如下洗脱液(5/l二氣甲坑/曱醇)纯化.获得产物呈白色闺体状(280毫克；C"H"N,0，(M一324克/摩尔)；Rf-O.25(4/1二氣甲坑/甲醇).往如此得到的d4T的丁二耽基衍生物(60毫克；0.185毫摩尔)在THF(3毫升)中的溶液，在OTC及氣气气流中，相继加入三乙胺(27徵升；0.194毫摩尔)及氣甲酸乙鐮(16橄升；0.194毫摩尔).迅速观察到形成的三乙胺盐酸盐沉淀.挽拌40分钟后，在OTC加入氨基己耽基衍生物(实施例2,16.)(181毫克；0.185毫摩尔)在含三乙胺(27徵升；0:194毫摩尔)的9/1MDF/水混合物(10毫升)中的溶液.然后反应混合物在0X:扰拌15分钟，随后在室湿下扰拌一夜，然后在减压下蒸发.这时，粗产物溶于二氣甲汰(15毫升)及水(5毫升)中.有机相分离.水相用IOX柠檬酸水溶液酸化，然后用二氣甲垸(2x)萃取.有机相合并，用硫酸镁干燥，过滤及浓缩.用硅胶柱闪式色详，用洗脱液(9/1然后7/1二氣甲垅/甲醉)进行纯化，田升d4T-緩合化合物(107毫克；45X)至白色固体状.Rf0.2(4/1二氣甲烷/甲醉)；C"H",N.O"(M-1329克/摩尔);实測值m/z1288.9(MH+);1310(Na).分析HPLC:保留时间Tr24.455分钟，C18Supclcosil柱(15厘米x46毫米，3槺米，IOO埃)；溶剂A50XMoCN，5MmTBAP:溶刑B-90X2-丙醇，5mMTBAP.梯度25-100^B,37.5分钟，在210毫橄米傲紫外光监测.制备HPLC:C18Kro咖sil柱(25厘米x21毫米，5微米,100埃),熔刑A-50XMoCN,5迈NTBAP;溶剂B-90X2-丙醇，5fflMTBAP,产物使用B洗脱.终相用SPENa，盐通过，C18Bondapack相15徵米，用2-丙醇洗脱.第4系列实施例本发明化合物的药理研究(试管试验)实施例4.1.内毒性测定分析采用动力学产色石蕊阿米巴细胞溶解产物试验(CharlesRiverBndosafe，产品R1708，批号E2251B)测定内毒性.这个LAL试验用于本发明化合物的低内毒性.本试验的生物学原理是基于通过细菌内毒素引发石蕊阿米巴细胞溶解产物(LAL)中存在的酶原，该酶活化丝A酸-蛋白酶的串联(cascade).在无色基质(与对硝基苯胺偶合的S-2834肽)存在下，产色基团分裂导致释放出对硝基笨胺(PNA)，出现黄色，可在405纳米使用分光光度计监視.内毒素1.醉原--------》酶2.基质---------^肽+对-硝基苯胺这种动力学产色试验是基于内毒性的量与达到光密度(D.0,)0.2所需要的时间成反比.浓皮是以0.005-50BU/毫升范围的标准曲线相比測定的，使用0.1毫克/毫升产物溶液的稀释溶液(5-,10-,50-，100-，500-或lOOO-倍)进行产物试验.LAL结果对应于不再抑制LPS过栽回收的最低稀释度.结果是相对于闺际标准试样溶液(BC-6)以BU(内毒性羊位)表示的.对于本系列測定，1EU表示0.08纳克(ng)大肠杆菌(E.coli.)055:B5LPS.带有符合通式I官能化辅助支链的不同耽基化假二肽所得LAL结<table>tableseeoriginaldocumentpage88</column></row><table>全部受測试的假二肽都具有低内毒性.对于多种产物，这种内毒性甚至低于试验检測限.内毒性的定量測定由于需要稀幹恢复过栽的试样而受限制.即使在这个LAL试验中最活性化合物的内毒性活性也比LPS低5000倍.本发明的假二肽闳其低的内毒性和生物学活性而备受关注.表<table>tableseeoriginaldocumentpage89</column></row><table>相倌与卵白蛋白偶合的OM-197-FV可导致检測的LAL活性升高.这种升高可归罔在有0M-197-FV分子的方式中的变化.其它印白蛋白系列产物皆具有相等的LAL活性.LAL结果变化很大，各组间差3倍至4倍是不说明问趙的.袭大的LAL活性是对于偶合产物每次注射2.4纳克当量LPS(25徵克/注射)，至于其它组，最大LAL活性是每次注射0.012纳克当量LPS.表<table>tableseeoriginaldocumentpage89</column></row><table>H1NI系列产物都具有相同的LAL活性.LAL结杲变化很大，各组间差3倍至4倍是不说明问題的.偶合对LAL活性无影响.袭大的LAL活性是每次注射0.008纳克当量LPS(5橄克/注射).表使用与(NANP)AP，。肽缀合产物进行免疫实胗的__不同产物的LAL结果__<table>tableseeoriginaldocumentpage90</column></row><table>'本试验不适合乳液样品，故未測定LAL(NANP)AP,。系列产物皆具有相同的LAL活性.LAL结果变化很大，各组间差3倍至4倍是不说明问趙的.偶合对LAL活性无影响.最大LAL活性是每次注射0.03纳克当重LPS(20槺克/注射).实施例4.2.使用本发明化合物剌激的小鼠骨鍵千细胞增殖的測定4.2.1.増瘅实聆6-周龄雄性C57/BL6小鼠通过吸入二氣化破而死亡.去除*、股、胫及后腿骨.通过切开的端部注入杜別可氏(Dulbecco，s)改性Eaglo(伊格尔)培养基(DH培养基)，从骨室中抽取出骨tt.干细胞经洗涤，再次悬浮于补充20X胎牛血清(SVF)的DH培养基中.细胞浓度调整至500000细胞/毫升.产物在补充20%SVF、氨基酸及抗生素的DH培养基中的溶液直接按系列稀幹在徵量培养板中.产物重复三次測试，各徵量培养板含有由只是培养基组成的负对照物.每个孔的最后容积为ioo橄升.将IOO徵升细胞悬浮液添加到产物稀幹溶液，细胞在37TC培貫器内，在M二氣化碳及饱和湿度环境下培貫7天.通过测量在活细胞线粒体中产色基质XTT(2,3-二2-甲氣基-4-硝基-5-磺基苯基]-2H-四唑镇-5-羧苯胺(caboxanilide))氣化作用测定细胞的增殖.培养结束时，50徵升XTT基质溶液(l毫克/毫升XTT+0.008毫克/毫升芬纳井(pheii"ine)甲基疏睃盐)添加到各孔.在饱和湿度培育器内，在37TC与8X二氧化破下培养8小时后，使用分光光度计，与麥比试样在690纳米相比，在490纳米读取樣量培养板.结果以平均值土标准差表示，得到刑量-反应曲线.由DH介质组成的负对照值(平均±标准差)也以田形表示.由刑量反应曲线，计算出曲线的3个特定点Max:表大曲线幅度及其对应的浓度EC50:对应于50X最大幅度的浓度Miii:最低浓度谦导显著的増殖，它对应于空白土3x标准差值.对应于EC50及Min的浓度值是用连接曲线不同点的直线线段决定的.如果曲线没有最大值，但曲线在最高试验浓度还继续上升，則在Max及EC50值的前标出[>记号.如果曲线还未降低低于空白土3x标准差的限度，刑最低浓度给出[<〗最低试验浓度.4.2.2.结杲的4L示由脊右骨能化弒助iL链的ft化假二肽诱生的脊tt千细胞的增殖困70显示不同酰化假二肽的活性，表明官能化辅助支链对在小鼠体内骨拔干细胞增殖的影响.某些耽化假二肽可诱发的増殖高于由大肠杆菌LPS组成的正对照组.可诱发显著增殖的最低产物浓度高于正对照组施用的浓度.这种最低产物浓度大大受辅助支链官能庋的影响.困71显示与一种药物偶合的酰化假二肽偶合的活性.这种活性证明了，尽管偶合，这些化合物仍保持其一部份活性.还无法区别闺有的活性与通过胞内麻醉由偶合豳鍵所得到的活性.这些产物的抗病毒活性倾向于表明翁鍵至少进行郜分分裂.无论机理如何，保持生物活性证明这种抗病毒活性与产物活性組合的十分重要的意义.表通过带有满足通式I的官能化辅助支链的酰化假二肽所诱发的骨徵干细胞増殖结果产物最大械度/EC50幅度/最小幅度/浓度/光密度/浓度/先密度/浓度/光密度/擻光/毫升稞克/毫升DH培养基(负对照)0.67±0.04,大肠杆菌LFS(正对赋)1.72/161.19/1.20.80/0,03OM-197-MC1.75/641.21/19.40.80/1.25OM-197-MC-MP>1.60/>160>1.13/>6.50.80/0.77OM-197.FV61.52/501.10/5.70.80M.60OM-197-FV81,07/250.87/1.80.80/1.24OM-197'MC-FV51.75/501.21/32.00.80/8.20OM'197-MC-FV7>1.83/>100>1.25/>33,10.80/8.58OM-197-MP-AC(R/S,R)2.12/251.39/3,10.80/0.71OM-197-MP-AC(S,R)'1.22/8.250.94/2.620.80/117OM-197-MC-AC1.62/501.15/31.00.80/0.92OM-197-N'C2-MC-AC0,75/1,560.71/nd0.80/ndOM-197-N'(C10-2OC8)-MC>AC0.75/6.250.71/nd0.80/ndOM-197-MC"Succ2.16/501.41/24.70.80/2.95OM-197-Lys1.58/251.11/3.3<0.86/<0.39OM-197-AP1.49/251.08/2.20.80/0.41OM-197-Asp1,22/250.94/5.00.80/1.89OM-197-Asp-AC1.33/500.10/2.80.80/1,27OM-197勿s-AC>2,02/>50>1.34/>14.60.8070.90OM-197-MC-AC-SucoAZT1,08/12.50.87/3.30.80/2.11OM-197-MC-AC-SucO"d4T1.40/501.03/25.20.80/2.81OM.197-MC-AC-Succ>1,65/>100>1.16/33.70.80/2,04nd"未測定除带有短链的化合物外，本发明所有酰化假二肽都可诱发显著的骨tt干细胞增殖.实施例4.3.通过使用本发明产物剌激鼠巨噬细胞产生氣化氣的测定4.3.1.6周龄C57/BL6雄性小鼠通过吸入二氣化壤而死亡.去除胥、股、胫及后附属骨.由切开的端部通过注入杜別可氏改性伊格尔培养基(DH培养基)，从骨室中萃取出骨tt.干细胞洗涂后，并再次悬浮于补充20X马血清(SH)及L929细胞上清液的DH埃养基(细胞浓度约4000细胞/毫升)中.L929为鼠纤维母细胞系，其上清液富含巨噬细胞生长因子(H-CSF).细胞培养液分配在培养亚里，它饱和湿度的培貫器中，在37D与8X二氣化破下培育8天.8天后，干细胞分化成为成熟巨噬细lfc.通过冷却刮下巨噬细胞，经洗涂，再悬浮于补光5X胎牛血4(FCS)、我基酸及抗生素的DH培养基中.细胞浓度调整为700000细胞/毫升.在补充5XSVF、A基酸及抗生素的DH培养基的产物溶液系列地直接稀释在稞重培养板中.产物重复三次试验，每个橄量培养板含有由只是培养基组成的负对照物.每个孔的最后体积为IOO徵升.IOO微升细胞悬浮液添加到产物稀释溶液，细胞在他和湿度的培育器中，在37TC与在8X二氣化破下培育22小时.在有产物的培育结束后，抽取出IOO徵升升上清液，通过格利斯(Griess)反应測定亚硝酸盐浓度.在2.5X裤酸水溶液中IOO橄升格利斯试刑(5毫克/毫升对氛基苯橫酰胺+O.5毫克/毫升N-(l-萘基亚乙基二胺盐酸盐)添加到每个孔.使用分光光度计，相对在690纳米的参考试样，在562纳米读取微量培养板.亚硝酸盐浓度与产生的氧化氛浓度成比例.亚硝酸盐浓度是与标准曲线比较測定的.结果以平均值±标准差表示，得到刑量-反应曲线，由刑量反应曲线，计算出曲线的3个特定点Max:最大曲线幅度及其对应的浓度EC50:对应于50X最大幅度的浓度Min:最低浓度诱导显著的増殖，它对应于空白士3x标准差值.对应于EC50及Min的浓度值是用连接曲线不同点的直线线段决定的，如果曲线没有表大值，但曲线在袭高试狳浓度还继续上升，則在Max及EC"值的前标出[>记号.如果曲线还未降低低于空白±3><标准差限，刑敢低浓度给出[<最低试验浓度.4.3.2.結杲表示通过带右官能化辅助支链的耽化假二肽诱发鼠巨噬细胞产生氣化闺72显示不同的耽化假二肽的活性，证明官能化辅助支链对诱发鼠骨tl干细胞增殖的能力的影响.OM-197-MP-AC(R/S，R)能够诱发増殖高于由大JW杆菌LPS组成的正对照物所诱发的增殖.能够诱发显著增殖的最低产物浓度远低于正对照物的浓度.使用酰化假二肽剌激的鼠巨噬细胞产生的氣化氛大大受辅助支链的影响.困73显示与葯物偶合的酰化假二肽的活性.这种活性证明了，尽管偶合，这些化合物仍保持其一部份活性.无法区別固有活性与通过胞内薛醉偶合欲鍵所得到的活性.这些产物的抗病毒活性倾向于表明醋鍵至少进行部分分裂.无论机理如何，保持生物活性证明这种抗病毒活性与产物活性组合的十分重要的意义.表<table>tableseeoriginaldocumentpage95</column></row><table>nd-未測定除了含短链化合物(OM-197-N，(C10-20C8)-MC-AC小量产生)外全部本发明的耽基假二肽都可译发鼠巨噬細胞大量产生氧化氣.实施例4.4.树状细胞分化试验评估本发明产物诱发前树状细胞成熟成为树状细胞的能力.測量下列麥数葡聚糖(Dextran)-FITC的加入以及CD83,CD86表面分子的表达.4.4.1.实聆程序周闺血液单核细胞是由健康捐赠者的"血块黄层(buffycoats)"分离出来的.通过粘着纯化的羊核细胞在含IOX胎牛血清(SVF)、GM-CSF及IL-4(10纳克/毫升)的RPMI-1640培养基中制成悬浮液，其浓度为lxlO'细胞/毫升.细胞分配在培养皿(每个培养皿10x10'细胞)，培养6天，3天后更换培养基.这样所得的细胞称作前树状细胞(DC-6).使用稀释产物溶液或LPS(正对照)再培育3天(参见产物一节)，可将前树状细胞培养成熟为成熟的树状细胞.笫9天(DC-9),收获细胞，分析树状细胞成熟的不同表示性麥教评估CM3、CD86表面分子的表达及掺入葡聚糖-FITC的能力.所有这些参数都采用FACBEPICS-XL-MCL(库特(Coulter)免疫公司，芬兰海雷)分析.表面分子的表达是以用LPS活化细胞(正对照)的平均愛光百分数表示；葡聚糖-FITC掺入率是以保持在培养基中的细胞掺入率计算的，且以百分比表示.产物:在添加0.1X三乙胺的0.9X氣化钠/水中，制备0.5毫克/毫升OM-197-MC，OM-197-FV6及OM-197-MP-AC(R/S，R)的备用溶液.溶液在37t;培养20分钟，进行激烈挽拌3分钟，然后在RPMI-1640培养基中稀,至100橄克/毫升，且以10橄克/毫升至0.03擻克/毫升的浓度范围稀释使用.春比产物:大肠杆菌脂多睹(LPS，DIFCO，美BI密苏垔州底特律〉，5毫克/毫升在PBS中备用溶液，100锹克/毫升中间物溶液是用RPMIl"0培养基制备的.试狳浓度是1橄克/毫升至0.03徵克/毫升的稀溶液.另一系列实验中，全部酰化假二肽都经过冷冻干燥，再直接溶于非致热原的水中.不同产物及LPS对照在10徵克/毫升浓度进行了试验.对于葡聚糖细胞呑噬作用或CD86表面标记表达，逸些结果以树状细胞百分数和平均安光值表示.逸些錄果是迖些产物的2至6次实验的平均值.4.4.2.结果分析通过GM-CSF与IL-4級合作用由单核细胞分化所得的未成熟树状细胞(DC-6)是能够掺合葡聚糖-FITC的.在成熟过程中，细胞丧失其掺合葡聚糖-FITC的能力.到达DC-9分化阶段时进行这些分析.这些结果(田74)是在仅用培养基培养的未刺激的细胞中以所观察的葡聚糖-FITC掺合百分数表示.这些使用LPS或OM-197-MP-AC(R/S,R)处理的细胞分别仅保持15X及22X吞噬能力.应该注意至少需要1徵克/毫升0M-197-MP-AC(R/S,R),才诱发最大降低掺合葡聚糖，而0.1橄克/毫升LPS則可诱发同样的降低，需要10橄克/毫升OM-197-MC，可诱发降低22X细胞吞噬.此外，浓度低于3擻克/毫升，0M-197-MC对呑噬没有任何作用.OM-197-FV6对树状细胞的成熟显然没有什么影响.共刺激表面分子的表达是DC成熟的另一个标准.曹试验CD83和CD86(分别为图75ft76)表达增加.这些结果是以LPS-译发这些标记表达为基的以平均荧光的百分数表示.这些结果全然符合由细胞呑噬研究所得到的结果.OM-197-MP-AC(R/S,R)从0.1橄克/毫升开始表面分子的表达增加，而OM-197-MC应该至少需要l徵克/毫升才能诱使增加CD83及CD86的表达.OM-197-FV6对树状细胞特征性表面分子表达没有什么影响.这些结果表明，酰化假二肽随其附属支链而其性能有显著的差异.0M-197-MP-AC(R/S，R)表明，从0.1锹克/毫升起就具有谦发DC-6细胞分化成为DC-9细胞的绝佳能力，而OM-197-MC的浓度高于1擻克毫升才开始诗发这种分化，0M-197-FV6全然没有这种活性.通过符合通式I的带會能化械助支链的酰化傲二肽刺激酋柑状细胞(CD6)后，荧光素标记葡聚棘细胞呑噬作用和CD86的袅达前树状细胞分化成成熟树状细胞<table>tableseeoriginaldocumentpage98</column></row><table>在10微克/毫升浓度，许多酰化假二肽可诱发前树状細胞分化成为树状细胞.附属支链所带的官能可调节这种活化前树状细胞的能力.与葯物偶合的酰化假二肽0M-l"-MC-AC-Succ-AZT具有显箸诱发分化成为树状细胞的能力.酰化假二肽配方作用对其诱发前树状细胞分化成为树状细胞的能力是特別重要的.茱些产物的活性依振它们在有或无0.1%TE0A存在下溶解情况而有板大的差别.实施例4.5.在树状细胞中诱发M"蛋白质的分析曾评价本发明的产物通过前树状细胞诱发产生抗病毒蛋白质MxA的能力.由这些细胞产生的MxA在电泳分离SDS-PAGB后采用蛋白印迹法(westernblotting)4.5丄实聆程序如上述制备得到的DC-6阶段树状细胞，使用或没有使用a-IPN(500单位/毫升)，LPS(l徵克/毫升),TRANCE(100纳克/毫升)，CD40"1徵克/毫升)，0M-197-MC-AC(1徵克/毫升)或OM-197-FY6(1徵克/毫升)活化48小时.蛋白质的提取及分析进行如下收集细胞，然后使用PBS(裤酸盐緩冲盐水)洗涤3次，再使用100mMTris-HCl緩冲液，150mM氣化钠，5mMEDTA,IX崔頓(Triton)-100,其中含有lmMPMSF(苯基甲基磺耽象)及l槺克/毫升抑胃肽(popstatin)作为蛋白睐抑制刑进行分解.按照每100槺升(5x)壤冲液10'细胞进行分解，緩冲液含有60mMTris-HCl(pH6.8),1054甘油,2%SDS，14.4mM2-巯基乙醇及0.li澳盼.试样在密封伊本朵夫(Ependorf)试管内加热至95TC达5分钟.使用与相同细胞数等效的试样重，在10屋米x10厘米12X丙烯fifc胺迷你凝胶(迈inigel)上进行电泳.使用下述緩冲液进行迁移25迈MTris,192边M甘A酸，0.IXSDS，pH8.3.转移到膜上蛋白质由SDS-PAGE凝胶转移到硝基纤堆素腹(转移緩冲液25mMTris，192mM甘氨酸，20X甲醉，pH8.3)与抗体培养使用庞索红(PonceauRed)染色证明膜转移.用在TBS(IO边MTris-HCl，150mMNaCl,pH7.4)中的脱脂乳保护腹上无特定的位点，在室温放置l小时.膜在稀释于TBS-乳(1:100，体积/体积)中的抗-MxA羊克隆抗体(克隆143)溶液中进行培养.使用TBS-O.IX吐温(Twcen)20洗3次.腹与稀释千倍(体积/体积)的与过氣化醉偶合的笫二种抗小鼠抗体(HRP，Sig肌公司)共同培育.膜用TBS-吐湿洗3次.胰与化学发光刑(BCL，阿莫杉法玛西亚公司(A边ersha迈Pharmacia))共同培养后，使含MxA的条带显色.在本系统中，HRP催化基于卢迷诺(luminol)的化学发光反应，可在胶片上检测这种反应.4.5.2.结果按照如下活化DC-6细胞达0、2小时、4小时、24小时(困77)或48小时(田78):<table>tableseeoriginaldocumentpage100</column></row><table>困77及78中的蛋白印迹法说明随时间推移产生MxA:在24小时后(困77)以及48小时后(困78),通过产物OM-197-AC5及OM-197-FV6分別诱发MxA蛋白质显著升高.这种M"的产重与通过LLPS正对照或oc-TNF诱发的产量是相当的；这种产量高于分別通过负对照、通过TRANCE(cx-TNF组细胞分裂素，它也诱发树状细胞成熟)或通过CD40L(另一种可促进树状细胞成熟的化学刑)许发的产量.本发明化合物OM-197-MP-AC及OM-197-FV6证明了因其诱发MxA蛋白质的能力而具有抗病毒的性质.实施例4.6，測定本发明化合物通过人类周围血液单核细胞活化产生ct-TNF的能力".1.程序周闺血液单核细胞系由健康捐赠者的"血块黄层"分离的."血块黄层"细胞再悉浮，在菲可巴克(FicoU-Paque)梯度(阿其杉法玛西亚公司)离心分离羊核细胞.纯化后的单核细胞再悉浮于补充10XSFV、抗生素、统基乙醉及L-谷我酸的RPMI-1640培养基中.细胞浓度调整至2x10'活细胞/毫升.100橄升各个带有官能化辅助支链的酰化假二肽在RPMI1640培养基中的溶液，该溶液稀释到IOO、10或1槺克/毫升，它们分配在徵量培养板.试样重复3次试验，各个徵量培养板舍有仅由培养基組成的负对照组.大肠杆苗LPS的稀释液(l至0.00001徵克/毫升的范闺)用作为正对照.100徵升细胞悬浮液添加到含产物稀溶液或对照的各孔中.这些细胞与产物在37"C、5X二氣化碳及饱和湿度的培育器(恒溫箱)中培养18小时.培养结束后，徵量培养板经离心，收集上清液，以等分试样在-80x:冷冻，直到BLISA测定.由单核细胞产生的a-TNF浓度采用化学发光BLISA(广提果(QuantiGlo)#QTAOOR&D套件组)測定.稀释4倍的上清液分配到至擻量培养板各孔，其中连接人的抗a-TNF抗体，橄量培养板在宜溫培养4小时.洗涂后加入与过氣化珠緩合的人的抗-otTNF抗体.培养2小时并彻底洗涂后，加入化学发光基质，20分钟后读取发光.上清液中含有的a-TNF浓度是与7000至0.7徵徵克(pg)/毫升标准曲线相比测定的.结果以产生的a-TNF橄橄克/毫升表示.列出的这些结果是从耽化假二肽活性的代表性实验得到的.4.6.2.Mi由通式I带一个官能化辅助支链的酰化假二肽在周围血液单核细胞诱发a-TNF的产量.产物100徵克/*升10徵克/*升OM-197-MC1200OM-197-MC-MP7200OM-197'FV6881040OM-197-FV825210012OM-197-MG-FV51161040OM-197-MC-FV776800OM-197-MP-AC(R/S,R)160156244OM-197-MP-AC(R,R》84880OM番MP-AC(S,R〉80124488OM-197-MC-AC14414012OM-197-N'C2-MC-AC000OM-197-N'(C10*2OC8)-MC-AC000OM-197-MC-Succ176960OM-197-Lys20164284OM-197-AP64116428OM-197-Asp80280OM-197-Asp，AC13217220OM-197丄ys-AC256化4232OM-197-MC-AC-SucoAZT64224108OM-197-MC-AC-Sucod4T5240OM-197-MC'AC-Succ40320I负对照是由诱发基本的ct-TNF产童在检測限0.7微徵克/毫升以下的RPMI培养基组成的.通过大场杆菌LPS在周闺血液单核细胞诱发a-TNP的产童.大肠杆苗LPS,徵克/毫升产物10.10.010.0010.00010.00001TNF-cc(徵稞克/毫升)4044363562761320由大JI&杆菌LPS组成的正对照，即使在最低的试验浓度也译发出a-TNF的离产重.最大部份酰化假二肽谦发很高的a-TNF产量，即使这个产量低于由正对照谦发的这个产量.为了译发大量产生a-TNF,这些浓度也应该比LPS的浓度高.某些化合物，0M-197-MC和OM-197-MC-MP唯有在100徵克/毫升浓度才诱发很高的产量.胺官能度对诱发产生a-TNF特别受到关注，一方面提髙诱发大童反应所必需的幅度，以及降低诱发大量反应所必需的最低产物浓度.短链酰化假二肽0M-197-N，C2-MC-AC及0M-197-N，(C10-2OC8)-MC-AC即使在100徵克/毫升浓度也未诱发出产生任何的ot-TNF.实施例4.7.測定本发明化合物抑制由大炀杆苗脂多錄(LPS)谦发的由人类周围血液羊核细胞产生的a-TNF的能力4.7.1.程序周围血液单核细胞是从健康捐赠者的"血块黄层"分离出来的."血块黄层"细胞制悬浮液，采用菲可巴克(Ficoll-Paque)梯度(阿其杉法玛西亚公司)离心分离单核细胞.纯化的羊核细胞再悬浮在补充SFV、抗生素、巯基6醉及L-谷氨睃的RPMI-1640培养基中.细胞浓度调整至2x10(活细胞/毫升.通过产物与单核细胞预先培养，l小时后加入系列诱发产生a-TNF的LPS稀溶液，测定这些产物所起的抑制作用.不同的带官能化辅助支链的耽化假二肽的抑制浓度是10微克/毫升.大肠杆菌的LPS系列稀释(10倍稀释)1至0.00001徵克/毫升.50微升用RPMI1640培养基稀幹到10锹克/毫升的产物溶液分配在徵量培养板中.每个奈件(10槺克/毫升产物+稀释的大肠杆苗LPS)试验重复三次，每个稞量培养板包括由只是培养基组成的负对照样.添加用RPMI培养基稀释大肠杆菌LPS的稀幹液时，可测定由只是LPS(无抑制作用)诱发产生的ex-TNF.100橄升细胞悬浮液添加到装有产物稀释液或对照物的每个孔中.细胞与产物在37TC,在5X二氣化破及湿度饱和的恒湿箱中培养1小时.前培养期结束时，加入50橄升系列大肠杆苗LPS稀释液.单核细胞与产物及LPS接者培养18小时.细胞活化期结束时，离心稞量培养板，收集上清液，以等分试样在-80TC冷冻，直到来用ELISA測定.羊核细胞分泌的a-TNF浓度可采用化学发光的ELISA(广炎果并QTAOO1UD套件组)測定.稀释4倍上清液放到稞量培养板的每个孔中，该孔内结合人的抗a-T卵抗体.徵贵培养板在重湿培养4小时.洗涤后加入与过氣化蘇緩合的人的抗oc-TNF抗体.2小时培养及彻底洗涤后，加入化学发光基质，20分钟后读取发光.上清液含有的a-TNF浓度可相对于7000至0.7徵徵克/毫升的标准曲线进行測定.与仅用RPMI培育的对照物相比，使用大肠杆苗LPS与这些产物共同培养诱发产生50Jia-TNF的LPS浓度来表征抑制作用.这种浓度増加得越高，产物抑制活性越高.使用ot-TNF产童抑制值-100-(该产物和LPS诱发的a-TNF产量)/(只是LPS诱发的a-TNF产量)>U00可计算出这个浓度.用这些抑制数据，将在50X抑制效果附近的两个LPS稀释液的线段可外推出这个浓度.产物诱发抑制LPS产生a-TNF的能力也可用最大抑制作用表征.对应于这个最大抑制作用(抑制>95的LPS也表示了产物的抑制能力.这些结果可用有全部产物的代表性实验计算得到.4.7.2.纽通过符合通式I的带官能化辅助支链的酰化假二肽抑制在人类羊核细胞上由LPS谦发产生的a-TNF<table>tableseeoriginaldocumentpage105</column></row><table>由RPMI培养基组成的负对照物可诱发产生基本的a-TNF低于0.7毫克/毫升检測限.所有酰化假二肽都能诱发抑制大肠杆菌LPS谦发的a-TNF.达到这种抑制效果需要的产物浓度是随辅助支链官能度以及脂肪酸链长度而改变的.甚至通过癍鍵与药物偶合的酰化假二肚也能谦发这种抑制作用.实施例4.8.本发明化合物对抗K562细胞系靶细胞的NK细胞毒性活化能力的测定4.8.1.纽PBMC是根据前面实施例4.6所述程序从"血块黄层"分离出来的.简言之，在菲可(Ficoll)离心及3次洗涂后，PBMC按照在3毫升含10XFCS的RPMI培养基中3xl0'细胞/毫升分配在6孔板中，或只是用培养基培养，或使用Y-IFN(1000单位(U)/毫升)，LPS(l稞克/毫升)，0M-197-AC5(1徵克/毫升)或0M-197-FV6(l橄克/毫升)刺激培,.细胞在这种条件下培养24小时.K562细胞(人类白血病细胞系，ATCC#CCL243,20110-2209玛奈萨(维吉尼亚州)美国)使用含10XFCS的RPMI培养基保持培养，且每周进行两次传代培养.为了测量细胞毒性，PBMC及K562细胞用HBSS洗涂两次，并再悬浮于含5SFCS的不含盼红的RPMI培养基.PBMC分配在圃底96孔平板中，达到在50微升容积中PBMC/把比为20/1、10/1及5/1.每个孔添加在50徵升不含酚红的RPMI中5000个K562细胞(靶细胞).最后容积为IOO微升.平板经过离心促进接触，然后在371C培育4小时.根据供应商的方案，使用基于测量细胞溶解期间释放LPH的非放射性塞托拓(CytoTox)96工具套盒(盒号fG1780，批号#124100,波米加(Promega)公司，威斯康辛州马理森)測定细胞毒性.细胞毒性的百分数系根据下式计算DOK562+PBMCDOPBMC-DOK562羊独S细胞毒性-^-"00DOK562总溶解'DOK562单独4.8.2.结果化合物OM-197-AC5及OM-197-FV6谦发NK活性，与由在相同浓度(1徵克/毫升)下试验LPS诱发的活性相近或略橄低差.<table>tableseeoriginaldocumentpage107</column></row><table>实施例4.9.测定本发明化合物诱发小鼠淋巴细胞增殖的能力4.9.1.实胗梯廷汇集得自一組4只純CBA小鼠的脾细胞，在没有或有OM-197-MP-AC佐剂(O.l至10槺克/毫升)下培养四次.培养1或2天后，通过测量氚标记胸腺核苷(}H-TdR)掺合评价这些细胞的増殖反应.表中报告值表示4次培养的算术平均值±标准差.皿OM-197-MP-AC母液是用0.9毫克/毫升在加0.1X三乙醇胜的注射用水制备的.结果OM-197-MP-AC产物刺激体外试睑的脾细胞増殖.这种作用在培养1天后最大，这种作用在1橄克/毫升浓度时胸腺核脊棒合提高5倍，而在10徵克/毫升浓度时胸腺核苷掺合提高12倍.培养l天后，l徵克/毫升的0M-197-MP-AC产物具有很强的有丝分裂效果，与5微克/毫升伴刀豆球蛋白A相当(麥见表l).&^麟OM-197-MP-AC^剂的Jt狄i^咖t佐刑<table>tableseeoriginaldocumentpage108</column></row><table>上表列出的值表示4次培育掺合測童的平均值土标准偏差.使用(5微克/毫升)伴刀豆球蛋白A作为正对照，在培育1天后获得胸腺核苷掺合为37.5±6.2xIO'CPM的值.实施例4.10.本发明化合物与AZT及d4T緩合物作为前葯的抗病毒活性的測定.4.10.1.用HTLV(—种引起白血病形态的病毒)感染不死的(永生化)TMT-4淋巴细胞，可用来试验分别与AZT-及d4T-埂合的本发明化合物抗病毒活性(抗VIH(HIV，英文)).这种细胞具有受到VIH感染后无法存活的性质.试验基于保护该产物(如AZT)不会受到这种病毒性毁灭效果.这些产物是在96孔平板用一系列稀释溶液进行的.微重培养板的上半部中，试猃了各种浓度的产物与细胞及病毒(重复3次)，这样能够测定保护细胞免受病毒毁灭性作用的产物浓度.我们观察到活细胞数减少50X时的浓度是产物的IC50.存活细胞计数是使用MTT进行的，MTT是一种黄色四唑镥化合物，它可以睐还原(在存活细胞的粒线体中)成为紫色甲)i脊化合物.含活细胞的孔为紫色，细胞死亡則持续为黄色.测量光密度(0.D.)可定量这种作用.在平板的下半部以同样方式评价产物的细胞毒性，在平板下半部用产物与无病毒细胞共同培养的稀释液进行了试验，这样能够测定产物对细胞的毒性作用.其毒性以CC50表示，CC50表示50X细胞闳产物毒性死亡的浓度.产物的选择性(选择性指标，SI)定义为CC50/IC50.这个麥数是重要的，好的产物具有很高的选择性指标.4.10.2.与AZT(0M-197-LC-Succ-AZT)或d4T綴合的本发明产物具有抗HIVIIIIB及HIV2ROD的抗病毒活性.对MT-4细胞进行两次实验(重复三次)结果列举如下<table>tableseeoriginaldocumentpage109</column></row><table>与AZT或d4T-綴合的本发明化合物表明在这种MT"细胞棋式中抗病毒活性.这些前药的其中一个优点在于級合物的脂质性质，这种性质一方面使得该化合物对感染细胞的靶向作用，同时释放抗病毒物质至病毒储存位点，另一方面，能够调节靶细胞的免疫活性.实施例4.11.本发明化合物将前树状细胞活化成熟成为树状细應能力的测定4.11.1.程序树状细胞的获得从(C57BI/6,6至8周龄)小鼠的股骨及胜骨抽骨拔.骨拔悬浮液经70徵米细胞筛过摊而获得羊一细胞悉浮液.骨胜细胞再悬浮于补光IOX热失活胎牛血清(SVFU和抗生素的伊斯科(Iscove)改性杜别可(Dulbecco)培养基(IMDM)中,细胞在37TC、二氣化碳下及他和湿度6孔稞量培养板中培养.笫二天(第0天)收集及洗涤未粘着的细胞.采用崔邦蓝(bluedetrypan)染料排除法补充存活细胞.细胞浓度在含有20纳克/毫升鼠重组GM-CSF(r边GM-CDF)和20纳克/毫升鼠重組IL-4(rmlL-4)的IMDM中调整到2xl()S细胞/毫升，进一步培养.在笫3天添加浓度10纳克/毫升的新r迈GM-CSF及rmIL-4.在笫6天收集未附着的细胞，经洗涤，并采用崔邦蓝(bleudetrypan)染料排除法补充.细胞浓度在含10納克/毫升rmGM-CSF及r迈IL-4的IMDM中调整到2x105细胞/毫升，再进行培养.第8天收集由成熟及未成熟树状细胞(CD-DM)组成的非粘着细胞，且用于与产物共同培养实验.与本发明产物一起培养:浓度5xl()5细胞/毫升的CD-DM在24孔微量培养板中在如下活化刑存在下进行培养100纳克/毫升大肠杆菌0111:B4的LPS正对照，IMDM负对照；以及2种本发明化合物OM-197-MC-FV5及OM-197-MP-AC浓度分別为0.1、1及10微克/毫升.经48小时培养后，收集细胞，储存供流量细胞计分析之用.使用流量细胞计分析:CD-DM使用含SVFi和0.OIX叠氣化钠(FACS援冲液)的PBS洗涤.然后细胞在水上与袭佳浓度的抗CD86、抗CD40、与FITC緩合的抗MHCII以及与过氧化醉緩合的抗CD80—起培养30分钟.然后细胞洗涂3次，细胞在冰上与过氣化醉壤合的鼠的免疫球蛋白共同培养30分钟，标记抗CD86和抗CD40.培养后，细胞洗涂，再悬浮于FACS援冲液中.采用FACScanTM流量细胞计测量安光.每个试样分析15000脉冲.贊经只是与緩合物培养的细胞用作为负对照.4.11.2.结杲细胞表达<table>tableseeoriginaldocumentpage111</column></row><table>MFI:平均萦光强度本发明产物能许发前树状细胞成熟成为树状细胞.这些体外得到的结杲与小鼠活体试检所得的结果是一致的，在活体试狳中，每只小鼠静脉及皮下用药20徵克和5微克OM-197-MP-AC，谦发树状细胞成熟且迁移入脾脏内，由边缘区段(位于红跋与白號间)迁移至T细胞出现的白拔.使用本发明产物处理的动物脾脏組织切片的免疫染色，揭示了成熟树状细胞与T細胞同局限于白徵，如用LPS处理一样；而未处理动物刑未观察到迁移及成熟.第5系列实施例本发明化合物的药理研究(活体试验)实施例5.1.在鼠的免疫棋式中，与(NANP)P,P"混合或偶合的带官能化辅助支链的假二肽性质的评价.5.1丄实验程序抗原:(NANP)iP,P,。肽包含悉性痴原虫(Plasmodiumfalciparum)的重复序列(NANP)和两个破伤风毒素序列(P::830-843及P":947-967).该舦己知是T辅助细應的抗原决定簇，显示其在常见的佐刑存在下诱发高而长期的免疫反应.根据麥考文献OTal加ri等人，1992年，《免疫学杂志》，149:717-721)中描述的方法通过合成可以获得这种肽.0.4毫克/毫升抗原母液是用pH8.0的0.95i氣化钠水溶液制备的.佐剂:1毫克/毫升耽化的假二肽(OM-197-MP，OM-197-FV6及OM-197-MC)母液是用添加0.1X三乙醉胺的0.9Jt氣化钠水溶液制备的.正对照由不完全弗隆氏(Freund)佐刑(IFA得自迪弗可(Difco)公司，美国密苏里州底特律)组成，负对照为0.9X氣化钠/水溶液.整个实验过程中，抗原及佐刑配制成如前述的混合物或級合物形式.试验了二种类型的級合物(OM-197-FV),-(NANP)AP,。.相应于不同缀合程度的蜒合物，每个肽分子有1、2或3个OM-197-FV分子(分别为单-、二-及三級合物混合物，n-l、2及3),亦即每一个肽分子有一分子OM-197-FV(单緩合物，n'l).免疫作用使6周龄BALB/c雌性小鼠(每组6只小鼠)免疫两次，含0.1毫升皮下注射在尾底部.用药量是笫一次注射时为20槺克抗原和50徵克佐刑，笫二次注射为10橄克抗原和50橄克佐刑.在緩合物的情况下，计算注射刑量时，抗原部分是决定性的.实验组表组別佐剂抗原小氣只数1NaCI62一(NANP)sP2P3063IFA+(NANP〉。P2p3064OM'197-FV6+(NANP)sP2P幼65OM-197-MG+,P)aP2P加66(OM.197-FV)，,2,3《NANP)eP2P30668OM,197'MP+OM-197-FV-(NANP)aP2Pso6光乘与取样方隶:<table>tableseeoriginaldocumentpage113</column></row><table>血清制备于第0及第5周采血样.让血液于37TC放直60分钟然后于4TC维持一夜.随后于-801C冷冻血清，直到測量抗体.5.1.2.抗OUNP)AP"IgG抗休的測定对(1UNP)AP"抗原特异性的IgG抗体的測定是采用EUSA进行的.固定抗原是在96孔橄量培养板(MaxisorpF96,Nunc公司，丹麦)进行的，在潮湿的室内于4TC培养一夜，每个孔有O.l毫升PBS(确酸盐緩冲盐水)，其中含有0.001毫克/毫升(NANP),P,P"抗原.锹量培养板使用含1X牛血清白蛋白(BSA,福陆卡公司，瑞士)的PBS饱和.这些平板使用含0.05、吐溫20的PBS(希格玛公司，美國蒙大拿州圣路易)洗涤.在5周时抽取的血清用稀脊緩冲液(含2.59i脱脂乳粉和0,05X吐湿20的PBS)进行一系列稀释，然后移至槺量培养板,让其于室溫(TA)下放置1小时.然后平板用PBS洗涤.含有与械性磷酸蘇緩合的小鼠抗免疫球蛋白G多克隆抗体的稀释溶液(希格玛公司，美国蒙大拿州圣路易)分配到平板上，且在室温(TA)下培,1小时.然后，平板用PBS洗涤，通过与械性磷酸睥基质，对硝基苯基磷酸豳(希格玛公司，美国蒙大拿州圣珞易)的比色反应，证明特异性的抗体.使用徵量培养板读取器(Dynat。ch25000BLISA读取器，亚煦弗得(Ashford)公司，英国米多赛斯)，读取在405毫橄米的吸光率.每个条件重复测量两次.列出的这些结果是每组小鼠所得到于405纳米測量的吸光率平均值.5.1.3.结果^异性反应用困形表示了接受两次免疫的小鼠，采用BLISA測定的特异性产生的抗-(NANPhP,P，。IgG抗体(田79).两次注射抗原+佐刑混合物(0M-197-FV6或OM-197-MC),诱发生血清反应，比单独注射抗原时所观察的高得多.使用0M-197-FV-(NANP)单共耗物(缀合物)免疫诱发IgG反应略高于抗原+OM-197-FV6混合物所得反应.(0M-197-Fy),，:,，-(NANP),P,P，，较高共轭庋(壤合度)并未改善对这种抗原的血清反应.0M-197-MP佐刑和OM-197-FV-(NANP)单緩合物的混合物显著增加了对这种抗原的血清反应，超过了由(NANPhP,P"+IFA混合物组成的正对照物所达到的反应.当使用(NANP)AP"NA肽作为抗原，采用ELISA捕获抗体时，可得到类似的结果(困80).实例5.2.卵白蛋白免疫組在皮下用药一次和二次后，測定在小鼠上产生的特异性抗体5.2.1,实验的描述本研究的目的是比较注射佐刑+抗原混合物(OM-197-MP+卵白蛋白)谦发的血清反应与使用有这种相同抗原的缀合物(0M-197-FV-印白蛋白)引出的血清反应.为此，30只BALB/c小鼠(雌性，开始处理时为8周龄)分为下述三组<table>tableseeoriginaldocumentpage114</column></row><table>溶液A组制备仅有抗原的母液(卯白蛋白，FlukaAG，瑞士巴克)，该溶液浓度为在水+O.OIX破柳汞中125橄克/毫升.B组抗原+佐剂混合物母液(印白蛋白+OM-197-MP)含有在水+0.Ol碟柳汞中125橄克/毫升卵白蛋白和250徵克/毫升OM-197-MP.C组OM-197-FV-印白蛋白緩合物的母液浓度是在水+0.01%碟柳汞中125徵克/毫升蛋白质.注射液的准备每个母液于371C培育15分钟，然后在每种情况下，往每种溶液添加适量的氣化钠(14X),以获得等渗溶液(0.9i氣化钠).整体混合物涡旋3分钟.免疫作用子第0天及笫14天注射.这些溶液采用皮下用药(两个不同部位各100徵升，每只动物共接受200徵升).于第14天和笫28天采血样(后眼睢穿刺).抗卵白蛋白免疫球蛋白激j定采用ELISA重复两次测定下迷印白蛋白的血清免疫球蛋白*IgGI、IgG2a及IgM.简言之，橄量培养板(NUNC免疫平板，罗斯克菜(Roskilde)公司，丹麦)使用IOO槺升印白蛋白(0.5微克)在碾酸氣盐緩冲液(pH9.6)中于4TC培育(涂布一夜).使用0.5X吐温-20(默克侯朗(MerckHohenbrunn)公司，丹走)洗涂后,血清稀幹50、200及800倍[稀释液裤酸盐緩冲盐水(PBS)+li牛血清白蛋白(BSA，希格玛公司，美国蒙大拿州圣路易)+0.02X吐湿-20].每个IOO微升稀血清试样添加到各孔中.于37"C培养45分钟.在第二次洗涤后，印白蛋白特效的IgGl、IgG2a及IgM与IOO擻升与过氣化酶綴合抗-IgGl抗体(抗小鼠的大鼠抗体)(希洛泰克(Serotoc)公司，英国牛津)、与过氣化蘇埂合IgG2a的抗体(法明哲(Phar迈ingen)公司，美頃加州圣地牙哥)及与生物素緩合IgM的抗体(法明哲公司，美国加州圣地牙哥)，它们预先稀释在PBS/BSA/吐湿提冲液(分别稀释250、1000、500倍)，于37TC培养30分钟，对于IgM，补充洗涤后，需要用1:100与过氣化酶结合的链丝菌抗生素(达寇(Dako)公司，丹走万罗雀普)溶液进行笫三次培养(37X:，30分钟).洗涤后，添加100徵升1，2-亚苯基二胺溶液(OPD，默克公司，丹史达特，D)，检測与抗IgGl二次抗体蛣合的过氣化醉，而对于IgG2a及IgM，使用的试刑是3，，3，，5，，5，-四甲基联苯胺(TMB,希格玛公司，美国蒙大拿州圣路易)，在宜温培育20分钟后，通过加入100微升2N碟酸中止反应.使用BioRad3550棋式平板读取器于490纳米读取吸光值.5.2.2.MA每次在490纳米读取的结果是以每毫升的任意单位(u.a.)表示的.这就有可能将每个样品与使用来自A組(单独注射印白蛋白动物)第28天所采集血样的不同稀释液制备的麥比样品进行比较.根据定义，稀释50倍的样品浓度为1000u.a,/毫升.然后，各个结果根振相应的稀释因数(50、200或800倍)进行校正，这些结果示于困81、82及83,空心圃是对应于14天的平均值，,困是对应于28天的平均值；Ova表示卵白蛋白的缩写.这些结果表明，0M-197-FV-卵白蛋白緩合物在研究棋式中是特別的免疫原，因为在笫二次注射后可显著提高小鼠产生的对印白蛋白的特异性抗体，而与接受分析的克疫球蛋白类別(IgGl、IgG2a及IgM)无关.特別地，应该揭示抗印白蛋白IgG2a俅人的増高(田84),提示一种优选地朝向TH1的免疫性.卵白蛋白+OM-197-MP非共价混合物产生比缀合物更低的IgG2a反应.实例5.3.H1N1血液凝集素免疫组小鼠在皮下用葯l次和2次后产生的特异性抗体的測定5.3.1.实验描述这个研究的目的是佐刑+抗原混合物(0M-197+H1N1)所诱发的血清反应，与使用具有相同抗原蜒合物(0M-197-FV-H1N1)所产生的血清反应加以比较.为此，30只BALB/C小鼠(雌性，处理开始时为8周龄)分为下述三组组别佐刑-抗原H1N12.5徵克/动物/注射佐刑(未结合)50稞克/动物/注射注射体积稞升AH1N1一100BH1N1OM-197-MP(50徵克)100C0M-197-FV-H1N11005.3.2.注射液的准各A组H1N1母液(A/北京262/95血液凝集素，苏维杜佛(SolvayDuphar)，威斯普，NL)制成在水中浓度25徵克/毫升，B組H11U+0M-197-MP母液含有在水中25徵克/毫升H1N1和500微克/毫升OM-197-MP.C组0M-197-PV-H1N1(H1N1共价结合OM-197-FV)母液为25微克/毫升在水中的.浓度.每种母液于37C培养15分钟.然后往每种溶液各2毫升添加135微升(14X)氣化钠.整体混合物涡旋3分钟.5.3.3.抗H1N1免疫球昼白的注射与湘定在第0天及笫14天安排注射.溶液经皮下用药(50橄升用于两个不同部位，每只动物共100徵升).在笫14天采血样(后眼眶穿刺).采用ELISA重复测定对H1N1特异性的IgM.简言之，微量培养板(NUNC免疫平板，丹麦罗斯克菜公司)与10'0橄升H1N1(0.5稞克)在破酸氣盐緩冲液(pH9.6)中在4TC培养(涂布一夜).使用0.5X吐温-20(默克侯朗公司，丹麦)洗涂后，血清稀释50、200及800倍稀幹液礴酸盐緩冲盐水(PBS)+1X牛血清白蛋白(BSA,希格玛公司，美蒙大拿州圣路易)+0.02*吐溫-21.各100徵升秭释血清样品加到各个孔中.于371C培养45分钟.经笫二次洗涤后，对H1N1特异性的IgM在371C与预先秭释在吐温緩冲液(稀释500倍)中的100橄升抗IgGl抗体(抗大鼠的小鼠抗体)-生物素緩合物(法明哲公司，美国加州圣地牙哥)共同培养.在补充洗涤后，与1:100过氣化醉綴合的链丝茵抗生物素(达寇公司，丹走葛罗雀普)稀幹溶液进行笫三次培养(于371C，30分钟).经洗涂后，IOO橄升3，，3，，5，，9-四甲基联苯胺溶液(TMB,希格玛公司，美国蒙大拿州圣珞易)添加到与抗IgM二次抗体緩合的过氣化酶.在室温培养20分钟后，通过加入100擻升2N破酸中止反应.使用BioRad3550棋式平板读取器读取于490毫橄米的吸光率.5.3.4.MA每次测量的在490毫橄米的结果是以每毫升任意单位OI.A.)表示的.这就有可能将每个样品与使用由A组(单独注射H1N1动物)于28天收集血清样品的各种稀幹液制备的对比样品加以比较.根据定义，稀释50倍的样品浓度为1000U.A./毫升.然后，各个结果可根据对应的稀幹因数(50、200或800倍)进行校正，且示于困84:实心圃对应28天的平均值.使用0M-197-FV-H1N1緩合物的免疫小鼠显示出，抗-HlNlIgM抗体效价高于由只是H1N1抗原构成的对照样品的效价，以及高于OM-197-MP+H1N1混合物組成的对照样品的效价.实例5.4.在皮下使用利什更原虫(Lcish迈ania)LmCPb抗原的小鼠免疫模式中，0M-197-MP-AC佐剂性质的评价5.4.1.实验描述CBA小鼠经尾部羊次皮下注射(100擻升)利什更原虫寄生虫LmCPb抗原(每小鼠3徵克)±佐刑.形成两组，每組6只小鼠，接受下迷的处理仅抗原(对照组)和抗原+50稞克OM-197-MP-AC,注射后ll天，鼠腹股沟及主动脉周围淋巴节细胞(2组，每组各3只小鼠)在纯化的UCPb抗原或寄生虫(无鞭毛体)全部提取物存在下重复3次培养,在笫4天取出上清液样品，储存于-201C,以便測定IL-4及Y-IFN.最后，将氣化胸腺核CH-TdR)添加到培养物，以測量其增殖.采用夹层-ELISA测定细胞分裂素(y-IFN及IL-4的OptEU盒，BD，法明哲公司，瑞士贝梭)，通过測量胸腺核苷的掺合CH-TdR)评价增殖反应.用算术平均值±标准差以CPM表示的，H-TdR掺合測量结果(8个組各3只小鼠)，以及以徵徵克/毫升表示的IL-4浓庋，对于每組各3只小鼠各自以两次測重值的算术平均值给出的(測定细胞分裂素).抗原制备在PBS中浓度150橄克/毫升的LmCPb母液佐剂制备在水中浓度0.9毫克/毫升的OM-294-MP-母液，用于附加注射0.IS三乙醇胺.抗廉-佐剂混合物在就要注射前,在无菌FBS中预先调节到适当最后浓度的佐刑制刑(4个体积)与抗原母液(l个体积)混合.5.4.2.赵使用利什更原虫L迈CPb抗原免疫的CBA小鼠，单次刑量50徵克OM-197-MP-AC,足以裔发提高淋巴节细胞増殖(2至6倍)，这种增殖是根据对纯化抗原(0.6至15徵克/毫升)的反应或对寄生虫无鞭毛体阶段的全部提取物(2至50xl(TV毫升范闺)离体測量的，这些结果列于表l.此外，用0M-197-MC-AC处理表明使用寄生虫抗原刺激的淋巴节细胞培养上清液内出现相当重的IL-4(麥考表2),而未搶測到产生Y-IFN(《100徵橄克/毫升).灰1用LmCPb免疫的CBA小氣离体试验的淋巴节淋巴细胞坩殖反应仅0M-197-MC-AC佐剂或与CdG-DNA結合使用—效果体外试验刺激刑氣化胸腺核普溶解(CPM)<table>tableseeoriginaldocumentpage119</column></row><table>(伴)刀豆球蛋白A(徵克/毫升)5124.3±48.9208.5±56.0该1表列出的值是用两組淋巴节(每组3只小鼠；每組重复培养三次)进行掺合測量的算术平均±标准差.袅2休外使用由L迈CPb免疫的CBA小鼠淋&细胞产生的IL-4:仅OM-197-MP-AC佐剂或与CDG-DNA结合使用的彩响_<table>tableseeoriginaldocumentpage119</column></row><table>该表列出的值是对三次重复培养的两组淋巴节细胞上清液(a和b;每組3只小鼠)中两次细胞分裂素测童的算术平均.结论在使用LmCPb(在利什更原虫寄生虫的无鞭毛体阶段有丰富的蛋白睐)免疫的CBA小鼠内，0M-294-MP-AC产物可増强，通过測量淋巴细胞增殖离体评价的特异性T反应.此外，这种佐刑可促进分泌相当量ILH的抗LmCPb淋巴细胞的发育.实例5.5.与尤氏疟原虫环境子孢子(circu边sporozoite)蛋白质的合成肽(PyCs-252-260)偶合或混合的，带官能化辅助支链狭化假二肽性质在鼠免疫棋式中的评价该实验目的是评价与尤氏疟原虫环境子孢子蛋白质的合成肽(PyCs-252-260)接枝或混合的，带辅助支链的耽化假二肽诱发特异性细胞和体液免疫反应的能力.5.5.1.实聆禪序抗原与佐剂的配制对应于尤氏疾原虫环境子孢子蛋白质T.细胞抗原决定簇的合成肽PyCS-252-260具有SYVPSAEQI序列(表1)肽2MR99B(SBRSYVPSAEQI)是往H端増加SER氨基酸得到的，肽1MR99AaGGGGSERSYVPSAEQI)是通过添加与MR99B肽的N端连接的賴氨酸-甘氨酸-甘A酸氨基酸得到的.这些肽是使用购自巴肯芬卡兰(Bache边Feinchc迈ikal1ien)公司(瑞士巴登朵夫)、诺瓦拜肯(Novabiochem)公司(瑞士洛芙芬津〉以及福陆卡公司(瑞士巴克)的试刑及溶剂，根据Merrifield及Athorton合成方法(Atherton等人，BioorgChem，8:350-351，1979)，通过固相合成(F-moc)得到的.这些肽通过反相HPLC进行純化.如实施例3.6([OM-197-MC-FVn-肽l)和实施例3.5(OM-197-MC-FV-肽2)中所描述的，可得到肽与带辅助支链的耽化假二肽(OM-197-MC-PV)*的单和多緩合物.最终緩合肽无苗溶液进行冷冻干燥.小鼠免疫作用抗原剂量相当于每只小鼠每次注射20徵克肽2(表2).注射前，冷冻千燥制剂溶解于O.W氣化钠，挽拌3分钟，在50X3下超音波处理10分钟.一个体积的抗原(在PBS中14.5徵克肽PyCS252-260加5O徵克P30(通用T细胞抗原决定簇))与一个体积的佐刑混合制备得到有IFA的配方.4周龄BALB/c小鼠(哈兰(Harlan)，吉斯特，NL)于尾部末端皮下注射.仗用23号针注射最后体积50徵升.动物于笫5用开始接受第二次抗原剂量注射，笫9周接受第三次注射.表1,抗原<table>tableseeoriginaldocumentpage121</column></row><table>表2.实验組，免疫及泉样袅_采用肽先疫_组別佐刑批原小鼠只数1IFA-7PyCS252-2692IFAy7+P303OM-197肽l74OM-197肽275OM-197-肽l76OM-197-肽l77OM-197OM-197-肽l78OM-1977々511T用评价抗体反应(ELISA)CTL反应(ELISPO丁〉淋巴器官及血液泉样血清采样于7及11周后全部小鼠都采血样.血液放置在37TC达6分钟，然后于41C维持一夜.随后，血清于-80"冷冻直到测定抗体.鼠腹股沟淋巴节及脾脏的回收每组两只动物分别于7周及11周后杀死.采用外科手术取出鼠腹股沟淋巴节及脾脏，细胞经培养而采用ELISPOT评价CTL活性(Y-干扰素反应).抗肽l抗体效价的測定采用ELISA测定特別对肽l(KGGKGGKSERSYVPSAEQI)的特异性抗体.抗原固定方式是在96孔锹量培养板(麦希索普F96,弄克，丹麦)于潮湿室内在410培育一夜，每个孔有0.05毫升含0.001毫克肽1的PBS(磷酸盐緩冲盐水).平板用PBS-O.05X吐温20(希格玛公司，美国蒙大拿州圣路易)(PBS-T)洗涤，在室湿下使用5X脱脂乳于PBS-T中他和平板l小时.在笫9周及笫ll周抽取小鼠的羊个血清样品(A,B，C,D,E,F,G)用稀释緩冲液(含2.5X脱脂乳粉及0.055t吐湿20的PBS)进行一系列稀释，然后移转至徵量培养板，任其在室温下放置l小时.平板再用PBS洗涤，含有与械性裤酸酶緩合的山羊杭小鼠免疫球蛋白多克隆抗体(希格玛公司，美国蒙大拿州圣路易)的稀释溶液添加到平板且，在室温下培育1小时.平板用PBS洗涤，通过与械性辨酸醉基质、对硝基苯基磷酸88(希格玛公司，美国蒙大拿州圣路易)比色反应证明这些特异性抗体.使用徵量培养板读取器(Dynatech25000ELISA读取器，亚煦弗得公司，英国米多赛斯)，读取于405毫稞米的吸光率，两次重复测量血清样品.列出的这些结果是所得到的每组小鼠測量值的平均值.抗体效价是用最后诱导高的正反应的稀释液决定的，即光密度高于附加背景噪音值±3标准偏差，Y-干扰奮-BLISPOT湘定在潮湿玄内，于ELISPOT擻量培养板中，其孔底袭益硝基纤維素(密里波尔(Millipore),法国摩尔森)，50徵克/毫升抗体溶液在4"培养一夜，闺定鼠的抗-Y-干扰素的特异性抗体(01E703B2).添加含IOX胎牛血清(FCS,法科拉(Fakola),瑞士)的DMEM(生命技术公司，美国纽约州大烏)于371C放罝2小时实施饱和步槺.由淋巴器官(鼠腹股沟淋巴节及脾脏)得到的细胞以200000或400000细胞/孔在槺重培养板培养，然后在37"与100000抗原呈现细胞[事先使用FyCS252-260肽于37C处理l小时，照射(10Krad)以及洗涤3次)共同培养24小时或于(伴)刀豆球蛋白A存在下培养作为对照.培育后，取出细胞，洗涤后，在2小时内加入笫二种生物素化的小鼠抗-y-ifn抗体(ani,2徵克/毫升，在PBS中，含1XBSA).加入稀幹1000倍的与械性磷酸酶结合的链丝苗抗生物素(百灵佳更汉公司，德国更汉)，于371C培养1小时，随后使用含0.05X吐溫20的PBS洗涤三次，接着使用PBS洗涤三次.抗-y-IFN克疫复合物的存在可通过加入BCIP/NBT基质(希格玛公司，美国蒙大聿州圣路易)加以证明.可用流水洗涤停止该反应.这时可用BiosysGmbH自动读取器(德闺卡本)计数y-IFN的正斑点.特异性斑点数相应于在有肽的脉冲式细胞存在下计算的点数与无肽存在下计算点数的差.这些结果以每组小鼠得到值的平均值表示.以每百万培养细胞的点数表示.纽在困85(笫2次注射后2周)与田86(笫3次注射后2周)示出体液反应.两次免疫后，笫5组(动物使用通过具有4单位耽化假二肽的辅助支链结合的肽1已进行免疫)7只中有5只观察得阳性反应.本组中，由于小鼠B及D显示有意义但低的抗体效价，故在注射笫3针后有反应的小鼠百分比提高了.使用与相同佐刑混合的相同肽免疫的第三組没有显示任何有意义的抗体效价.(使用游离态0M-197佐刑补充肽2单缀合的)笫7组在3次免疫后现察到出现反应.其它各組接受短肽或没有接受任何肽，没有显示出任何抗体反应.结果，0M-197-肽2四綴合物在全部接受免疫的小鼠中皆诱发低效价至中效价的抗体反应.通过CTL的頻率，它分泌对PyCS252-260抗原决定簇特效的y千扰素，可测定细胞活性.这些结果记录于表3中.正对照用笫2组表示，负对照单用佐剂表示(笫l及8组).用伴刀豆球蛋白A刺激细胞的对照组对全部小鼠皆呈阳性.笫5组(四壤合物)以及笫7组(单綴合物+佐刑)显示阳性CTL反应.结杲，与4个酰化假二肽分子接合的肽(0M-197-肽l)是有效的，而单壤合物(0M-197-肽2)未诱发CTL反应.相反地，用游离OM-197补充的单級合物谦发CTL反应，而未谦发产生任何抗体，该項事实的原因可能在于肽2尺寸小(12个氨基酸).表3:对PyCS252-260肽的CTL反应<table>tableseeoriginaldocumentpage125</column></row><table>实例5，6.在兔棋式中酰化假二肽热原性的评价这个实验的貝的是确定不会诱发静脉注射兔体发烧的带接枝辅助支链的耽化假二肽最高浓度.程序15只新西兰白兔分成下列各组第l组1.0毫克/千克笫2组0.1毫克/千克笫3組0.01毫克/千克第4組0.001毫克/千克笫5组注射水试验当天，兔子称重，并在为此目的的备用箱中进行免疫.溫度探头插入直肠.探头插入后1小时记录体湿(注射前)达90分钟，求出平均温度.然后，每个兔通过边緣(外側)耳静脉静脉注射产品或对照物(无菌水，O.M氣化钠).每30分钟測量一次温度，測量3小时.计算出出注射前平均体湿与最离体温的差，且报告.每组取3只兔，若3次反应的和不超过1.15t！,則认为试验产品不是致热原的，若其和超过2.65t:,則认为该产品是致热原的.若所得结果介于两者之间，刑另外使用3只兔重复试验,Mil0M-197-MC-MP及OM-197-MC-Asp化合物的致热性试验结果列于后0M-197-MC-MP刑量反应，TC平均(个别值)结果1毫克/千克3.40(1.50，0.60,1.30)致热原0.1毫克/千克2.00(1.45,0.05,0.50)非致热原(1个高值)0.01毫克/千克0.65(0,00，0.45,0.20)非致热原0.001毫克/千克0.35(0.10，0.05,0.20)非致热原对照0.20(0.20，0.00，0.00)非致热原0M-197-MC-Asp剂量反应，1C平均(个别值)结果1毫克/千克3.25(1.25,1.45,0.55)致热原0.1毫克/千克2,85(1.10,1.20,0.55)致热原0.01毫克/千克0.35(0.20,0.15,0.00)非致热原0.001毫克/千克0,25(0.00,0,10，0.15)非致热原对照0.40(0.25,0.05,0.10)非致热原本发明化合物与低于0.1毫克/千克剂重时非热原性.权利要求1、作为新产物的通式IV化合物式中R1及R2各自代表衍生自含2至24个碳原子的饱和或不饱和的直链或支链羧酸的酰基，该酰基为未取代的或带一个或多个选自羟基、烷基、烷氧基、酰氧基、氨基、酰氨基、酰硫代基及(C1-C24)烷硫代基的取代基，下标m、p及q为1至10的值，下标n为0至10的值，X及Z各自代表酸基或官能化间隔支链；-通式XVI化合物式中取代基R1、R2以及下标m、n、p及q定义如前，以及R是氢解不稳定的基团，-通式XVII化合物式中A为氧原子，取代基W、R1、R2及下标m、n、p、q、r及s定义如前，这些化合物可呈纯对映异构体或立体异构体混合物形式。2、根据权利要求1所述的化合物，它们接枝在抗原上以调节免疫反应，以及含有这样一些缀合物的药物组合物。3、根椐权利要求1所述的化合物，它们接枝在药效团化合物上，以改善治疗效果和/或其靶向作用，以及含有这样一些化合物的药物组合物。全文摘要本发明特别涉及假二肽，它是由官能化氨基酸得到的，它由固定在酰胺形式的假二肽的胺官能团上的脂肪酸链组成，所述假二肽的一端带有官能化的辅助支链，另一端是中性或带电荷的酸基团。本发明的化合物作为佐剂使用时具有免疫调节的性质。本发明的化合物也可以接枝在抗原上，以调节免疫反应，或接枝在药效基团上，以改善其治疗作用，或其靶向作用。最后，本发明化合物因此可以用于人药和兽药，作为免疫剂和作为诊断工具。文档编号C07K5/04GK101164543SQ20071016701公开日2008年4月23日申请日期2000年12月21日优先权日1999年12月22日发明者J·保尔,O·R·马丁,S·罗德里格兹申请人:欧姆药品公司