专利名称：：2，6-二(氨基苯亚甲基)环烷酮类化合物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及有机化合物及其合成，具体涉及2,6-二(氨基苯亚甲基)环垸酮类化合物及其制备方法，以及在制备抗肿瘤作用药物中的应用。
背景技术：
：目前国际上临床常见的抗肿瘤药物约80余种，一般根据其来源和作用机理分类，可分为抗代谢药物、放射增敏剂、激素类药物、免疫调节剂、纺锤体有丝分裂抑制剂(mitoticspindleinhibitor)以及作用于DNA的药物。作用于DNA的药物一般又分为垸化剂、DNA沟区结合剂和嵌入剂(CurrMed.Chem.2001，8(5):476-505)。DNA嵌入剂的主要作用机制是引起基因移码突变，因为它们的结构与一个嘌呤-嘧啶对十分相似，故能嵌入两个相邻DNA碱基对之间造成双螺旋的部分解开(两个碱基对原来相距0.34nm，当嵌入一个其他分子后，即变成0.68nm，从而在DNA复制过程中，使链上增添或缺失一个碱基，使该部位后面的全部遗传密码发生转录和翻译错误。DNA嵌入剂通过插入DNA碱基对，抑制RNA的转录和DNA的复制，从而表现出抗肿瘤的活性。蒽环类药物为典型的DNA嵌入剂。蒽环类药物包括阿霉素、柔红霉素、阿克拉霉素、洋红霉素等，对70%实体瘤有效，如乳腺癌、恶性淋巴瘤、肺癌、急性白血病等，主要药理作用机制是插入DNA双螺旋结构，拟制依赖DNA的RNA合成过程，使得转录和翻译错误。另外，蒽的氮杂衍生物-一吖啶(Acridine)类药物，相当于蒽的10位碳原子被氮原子所取代，因此该类化合物也属于DNA嵌入剂。在吖啶类9-氨基吖啶的衍生物中，如安吖啶(N-[4-(9-吖啶氨基)甲基苯基]甲磺酰胺)、4-(9-吖啶胺基)甲基苯胺、9-苯胺-2，3-亚甲基二氧吖啶等均显示出较好的抗肿瘤活性，部分化合物已应用于临床。最近有研究报道二氨基吖啶的衍生物1'，1〃-(吖啶-3，6-二烃基)-3'，3〃-二烷基双脲，具有细胞毒素活性，其主要作用机制也是通过结合DNA后芳环插入DNA碱基对，导致转录和翻译错误(Bioorg.Med.Chem.2008.Jan.19)。与二氨基吖啶具有相似构型的2，6-二(氨基苯亚甲基)环烷酮类化合物，目前主要用于合成光敏聚合物，应用于高性能纤维、微电子装置和特殊的电子材料(Polym.Int.48:421士425(1999))，其生物和药理活性还未有相关报道。据文献报道，有关2,6-二(4-氨基苯亚甲基)环垸酮类化合物(Ia)的制备方法如下硝基苯甲醛和环戊酮环合成(IVa)化合物后，分两条路线还原制得化合物(Ia)。路线一以乙醇为溶剂，Pd/C-水合肼为还原剂，反应完全后趁热过滤，滤液旋转蒸发得到的固体用四氢呋喃/乙醚(1:2)的混合溶液重结晶得到化合物(la)(Eur.Polym,J.Vol.28.No.4.卯439-448,1992)。路线二以乙醇作为溶剂，铁粉、氯化铵和对苯二酚作还原剂，需氮气保护回流反应，反应完全后将反应液在0-5"C下放置5个小时，过滤后将滤液倒入2000ml蒸馏水中，再次过滤得到的固体用氯仿重结晶，即得化合物(Ia)(Polym.Int.48:421士425(1999))。这些路线不足之处在于选择性低，生产难以控制，副产物多，收率低，最高不超过90%。
发明内容本发明的目的为提供一类新型的2，6-二(氨基苯亚甲基)环烷酮类化合物，制备方法及其制备抗肿瘤药物中的应用。本发明提供的2，6-二(氨基苯亚甲基)环垸酮类化合物具有下述结构CI)其中Ri为氢原子，n-0或l;或R,为甲基或烷基，n二l;R2为氯原子或其它卤素原子。该2,6-二(氨基苯亚甲基)环烷酮类化合物的结构特点是(1)具有五个环;(2)具有aa不饱和酮键；(3)氨基在苯亚甲基环上。本发明提供的2,6-二(氨基苯亚甲基)环烷酮化合物可按以下步骤制备(1)以硝基苯甲醛n和环烷酮III为起始原料，在离子液体[bmim][BF4]中以三氯化铟为催化剂縮合得到2,6-二(硝基苯亚甲基)环烷酮IV，其反应温度为50~70°C，反应时间为612h:其结构和反应式如下IVI本发明合成的2，6-二(氨基苯亚甲基)环烷酮操作方便，条件温和，收率较高，可超过90%，且化合物I具有较强的生理和药理活性，可用于抗肿瘤的药物。具体实施方式通过下述实施例将进一步理解本发明，但不限制本发明的内容。实施例h本例说明化合物IV的制备(1)2，6-二(4-硝基苯亚甲基)环己酮(IVa)的合成；在一圆底烧瓶中加入InCU-4H20(0.30g，2画1)，对硝基苯甲醛(1.511g，lOmmol)和离子液体8ml，在温度为100。C的条件下搅拌30min后冷却到50-70。C时加入环己酮(0.51ml，5mmol)和TMSC1(0.75ml，5,1)，然后在50-7(TC条件下反应6-12h(TLC示反应无明显进展)，将反应液过滤，过滤物用冰乙醇洗涤，用DMF重结晶，固体置于真空干燥箱干燥，得到晶型很好的黄色针状固体1.6692g，收率为92%。测得该产物得熔点为206-208°C。(2)其他2，6-二(硝基苯亚甲基)环垸酮化合物的制备方法同上。实施例2:本例说明化合物I的制备(1)2，6-二(4-氨基苯亚甲基)环己酮(Ia)的合成在圆底烧瓶中加入Fe粉(0.1344g，2.4画1)，NH4C1(0.006g，0.12匪ol)，25ml的95%乙醇和2ml蒸馏水，加热回流30min后，加入2,6-二(4-硝基苯亚甲基)环己酮(0.1092g，0.3mmo1)。反应2h(TLC示反应完全)后趁热过滤，冷却得到黄色固体，过滤，干燥，得黄色固体0.083g，收率为90.5%，测得该产物的熔点为140-142°C。(2)其他2，6-二(氨基苯亚甲基)环烷酮化合物的制备方法同上。本发明采用实施例二中的Fe/NH4C1方法得到了九个2，6_二(氨基苯亚甲基)环烷酮类化合物，分别为2，6-二(4-氨基苯亚甲基)环己酮(Ia)，2,6-二(3-氨基苯亚甲基)环己酮(Ib)，2，6-二(2-氯-5-氨基苯亚甲基)环己酮(Ic)，2，6-二(4-氨基苯亚甲基)环戊酮(Id)，2，6-二(3-氨基苯亚甲基)环戊酮(Ie)，2，6-二(2-氯-5-氨基苯亚甲基)环己酮(If)，2，6-二(4-氨基苯亚甲基)对甲基环己酮(Ig)，2，6-二(3-氨基苯亚甲基)对甲基环己酮(Ih)，2，6-二(2-氯-5-氨基苯亚甲基)对甲基环己酮(Ii)。化合物Ia-Ii的收率、熔点、LC/MS数据见表l:2，6-二(氨基苯亚甲基)环烷酮化合物的收率、熔点等结果表1结果显示，本发明提供的2,6-二(氨基苯亚甲基)环烷酮类化合物制备方法操作方便，条件温和，产物收率较高，且避免了氮气保护等苛刻条件。实施例3:抗肿瘤活性测试方法(1)实验材料RPMI-1640(美国Hyclone);胰蛋白酶(美国Hyclone);小牛血清(杭州四季青公司)；MTT(四甲基偶氮唑盐)(北方同正生物制品公司)；二甲亚砜(重庆川东化工有限公司)肿瘤细胞株及培养基人白血病细胞株k562、人肺癌细胞株A549由重庆医科大学组胚实验室提供；人肝癌细胞株QGY—7701由重庆医科大学第二临床学院肝病研究所提供。用含10X小牛血清的RPMI-1640培养液，置37。C、5%C02饱和湿度孵育箱内培养。实验仪器YJ-1450型超净工作台(苏州净化设备厂)；SHEL.LAB2300型二氧化碳培养箱(美国)；Nikon倒置相差显微镜(日本)；低速离心机(北京医用离心机厂)(2)试验方法取对数生长期细胞培养于96孔培养板内，每孔200ul(含104个肿瘤细胞)，同时给药组加入含有不同浓度的受试化合物，每种药设5个剂量组(40、20、10、5、2.5ug/ml)，每组设5个平行孔，对照组加入与给药组等体积的溶剂，置37。C、5XC02温箱中培养72h，每孔加20ul的0.5mg/mlMTT溶液。37。C孵育4h，弃去上清液，每孔加200ulDMSO溶解甲膳颗粒，混匀后用酶标仪在参考波长450nm、检测波长570nm条件下测定吸光度值(A)，以溶剂对照处理的肿瘤细胞为对照组，计算药物对肿瘤细胞的抑制率=(对照组平均A值-给药组平均A值)/(对照组平均A值)X100%，并计算ICs。值。(3)试验结果采用MTT法，测定了8个目标化合物在五个浓度(40、20、10、5、2.5ug/ml)下在体外对人白血病细胞(k562)、人肺癌细胞(A549)、人肝癌细胞(QGY)细胞株的抑制率，并计算半数抑制浓度IG。，结果如表2所示表2:目标化合物对不同肿瘤细胞株的IG。值<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表2结果显示，目标化合物Ia-Ii均有不同程度的抗肿瘤活性，其中化合物Ig的作用较强，对k562、A549和QGY-7701细胞的ICs。值分别为2.76、6.34、5.78ug/mlc(1)对人白血病细胞K562的作用而言，除了化合物Ic的作用较弱外，其他的化合物均显示出较强的抑制作用，IG。均在10ug/ml以下，其中Ig的抑制作用最强。(2)对人肺癌细胞A549的作用而言，化合物Ie、Ig、Ih对A549的抑制作用较强，三者的ICs。在10ug/ml以下，其余的几个化合物的抑制作用较弱，>10ug/ml。(3)对人肝癌细胞QGY-7701的作用而言，化合物Ia和Ic对QGY-7701的抑制作用比较弱，其余化合物的抑制作用比较强，且ICs。在5.787.69ug/ml之间。权利要求1.2，6-二(氨基苯亚甲基)环烷酮类化合物，其结构通式为id="icf0001"file="S2008100696313C00011.gif"wi="89"he="58"top="56"left="62"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>其中R1为氢原子，n＝0或1；或R1为甲基或烷基，n＝1；R2为氯原子或其它卤素原子。2、一种制备如权利要求1所述的2,6-二(氨基苯亚甲基)环烷酮类化合物的方法，其特征在于按如下步骤进行合成(1)以硝基苯甲醛n和环垸酮III为起始原料，在离子液体[bmim][BF4]中以三氯化铟为催化剂縮合得到2,6-二(硝基苯亚甲基)环垸酮IV，其反应温度为50~70°C,反应时间为612h:其结构和反应式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>(in)(iv)(2)化合物IV通过还原反应得到2，6-二(氨基苯亚甲基)环垸酮I，加热回流，反应时间为l6h，其结构和反应式如下IVI3、根据权利要求2所述的制备2,6-二(氨基苯亚甲基)环垸酮类化合物的方法，其特征在于步骤(2)中的还原剂为铁粉和氯化铵，其中化合物IV与铁粉、氯化铵的物质的量的比为13:1030:1，还原反应的溶液为醇溶液。4、根据权利要求3所述的2，6-二(氨基苯亚甲基)环烷酮类化合物的制备，其特征在于醇溶液为乙醇的水溶液、甲醇的水溶液或异丙醇的水溶液，所述醇溶液的浓度为80~98%。5、权利要求1所述的2，6-二(氨基苯亚甲基)环垸酮类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。全文摘要本发明涉及2，6-二(氨基苯亚甲基)环烷酮类化合物，该类化合物的结构通式为I，本发明还涉及所述化合物的制备通过芳醛和环烷酮缩合而成2，6-二(硝基苯亚甲基)环烷酮，后者还原制得一系列的2，6-二(氨基苯亚甲基)环烷酮类化合物。本发明的2，6-二(氨基苯亚甲基)环烷酮类化合物经初步的药理活性试验表明这些化合物具有抗肿瘤活性，并有一定的选择性。本发明的优点为制备方法操作方便，条件温和，产物收率较高。文档编号C07C225/00GK101270060SQ20081006963公开日2008年9月24日申请日期2008年5月7日优先权日2008年5月7日发明者瑜余,伟李,强李,菲杨,杨晓兰,胡雪原申请人:重庆医科大学;余瑜