具有良好细胞穿透和强核酸亲和性的肽核酸衍生物的制作方法

专利名称：具有良好细胞穿透和强核酸亲和性的肽核酸衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及经化学修饰以显示出良好细胞穿透和强核酸亲和性的肽核酸衍生 物。附图简述

图1提供了由反相HPLC纯化Oligo 17之前和之后的HPLC层析谱。图2提供了 Oligo 17纯化批次的MALDI-TOF质谱。图3提供了 Oligo 17针对互补或错配DNA的随温度变化的光吸收图。图4 (a)和4 (b)提供了分别用Oligo 1和Oligo 2以5 μ M对HeLa细胞处理之后 1、2、3和24小时的共聚焦显微镜图像(63 X物镜)。图5 (a)禾Π 5(b)提供了分别用OKgo 6和OKgo 7以2.5 μ M对MCF-7细胞处理之 后0.5和1小时的共聚焦显微镜图像(63Χ物镜)。图6 (a)和6 (b)提供了分别用Oligo 1和Oligo 6以1 μ M对HeLa细胞处理之后
6或者24小时的共聚焦显微镜图像(40Χ物镜)。图7 (a)和7 (b)提供了分别用Oligo 21和Oligo 28以2 μ M对JAR细胞处理之后
24小时的共聚焦显微镜图像(40Χ物镜)。图7 (C)和7 (d)提供了分别用Oligo 21和Oligo 28以,2 μ M对Α549细胞处理之 后24小时的共聚焦显微镜图像(40Χ物镜)。图7 (e)和7 (f)提供了分别用Oligo 21和Oligo 28以2 μ M对HeLa细胞处理之
后12小时的共聚焦显微镜图像(40Χ物镜)。图7 (g)提供了用Oligo 21以2 μ M对HeLa细胞处理之后24小时的共聚焦显微 镜图像(40Χ物镜)。图8 (a)、8 (b)和 8 (C)提供 了在用 2 μ M 的 Oligo 22 分别对 HeLa、A549 和 JAR 细胞处理之后24小时的共聚焦显微镜图像(40X物镜)。图9提供了 JAR细胞的蛋白印迹结果，所沭细胞用5 μ M或者10 μ MOligo 9处 理、5 μ M或者10 μ M OligQ 10处理、用5μ M或者10μ M的每个寡聚物共处理，以及空
白(无寡聚物处理)。图10是本发明PNA寡聚物的代表性结构。
背景技术：
寡核苷酸已经用于许多不同生物学目的，包括基因表达的反义抑制、PCR(聚合 酶链反应)、通过基因芯片进行的诊断分析等等。由于寡核苷酸以序列特异性的方式与 核酸如DNA和RNA相互作用，因此其在可预测地调节细胞内涉及DNA或者RNA的生 物过程时是非常有用处的。然而与小分子药物不同，寡核苷酸不易于穿透哺乳动物细胞 膜，因此除非对其进行适当修饰或者配制以易于穿透浆膜，否则几乎不能影响细胞内生 物过程。作为药物靶标的蛋白质:蛋白质介导许多不同的细胞功能。并不令人吃惊的是 可发现目前市场上大多数药物通过调节蛋白质功能而显示治疗活性。例如，非留体类抗炎药物阿司匹林抑制称作环加氧酶的酶而发挥其抗炎活性。氯沙坦结合并拮抗称作血管 紧张素II受体的跨膜受体的功能而发挥其抗高血压活性。罗格列酮(Rosiglitazone)选择 性激活称作过氧化物增殖物激活受体Y (PPARy)的细胞内受体而引发其抗糖尿病活性。 依那西普(Etanercept)是一种融合蛋白，其结合称作肿瘤坏死因子_ α (TNF- α )的细胞因 子并且中和TNF-α的生物活性从而发挥其抗风湿活性。赫赛汀(Herceptin)是通过选择 性结合在某些类型乳腺癌细胞中过表达的erbB2治疗乳腺癌的单克隆抗体。蛋白质合成的反义抑制蛋白质由DNA(2-脱氧核糖核酸)编码。在对细胞刺 激的应答中，DNA在细胞核中被转录产生前-mRNA(前信使核糖核酸)。前_mRNA的 内含子部分被酶剪接掉而产生mRNA(信使核糖核酸)，然后其被易位至胞质区室。在 细胞质中，称作核糖体的翻译机制的复合物结合mRNA并随着其扫描沿mRNA编码的遗 传信息而进行蛋白质合成(Biochemistry vol 41, 4503-4510，2002 ； Cancer Res.vol 48， 2659-2668, 1988)。以序列特异性方式结合至mRNA或者前-mRNA的寡核苷酸被称作反义寡核苷酸 (AO)。AO在细胞质中可以紧密结合mRNA并且抑制由沿着mRNA的核糖体进行的蛋白 质合成。AO需要存在于细胞内以抑制其靶蛋白质的合成。AO可以紧密结合细胞核中 前-mRNA并且影响前-mRNA的剪接，产生改变了序列的mRNA及因此而改变了的蛋白质。
0IoB
0 ι
1
ONA
B:核铖基非天然寡核苷酸DNA或者RNA的寡核苷酸易于被内源核酸酶降解,限制了 其治疗用途。迄今为止，已经开发并深入研究了许多类型的非天然寡核苷酸(Clin.Exp. Pharmacol.Physiol.vol 33, 533-540，2006)。其中一些显示出与 DNA 和 RNA 相比更强的 代谢稳定性。上面提供的是一些具代表性的非天然寡核苷酸的化学结构。这些寡核苷酸 可预测地如DNA或者RNA —样地结合互补核酸。硫代磷酸寡核苷酸(PTO)是一种DNA类似物，其每个单体的主链磷酸氧原子之 一由硫原子所取代。这种小的结构改变使得PTO对于核酸酶降解具有相当抗性(Arai.Rev. Biochem.vol 54，367-402，1985)。回顾PTO与DNA的结构相似性，它们都不易穿透大多数类型哺乳动物细胞中 的细胞膜。然而，对于一些大量表达DNA转运蛋白的细胞，DNA和PTO显示出良 好的细胞穿透。全身性施用的PTO已知易于分布至肝和肾(NucleicAcids Res.vol 25，3290-3296, 1997)。为了促进在体外PTO的细胞穿透，脂转染法已被广泛实施。然而，脂转染物理 性地改变了细胞膜，引起细胞毒性，因此对于长期治疗性用途并不理想。在过去的二十年，对反义PTO及PTO变体进行了临床评估以治疗癌症、免疫疾 病、代谢疾病等(Biochemistry vol 41，4503-4510，2002 ； Clin.Exp.Pharmacol.Physiol.vol 33，533-540，2006)。许多这种反义药物候选物并未成功，部分由于PTO的不良细胞穿 透所致。为了克服不良的细胞穿透，需要高剂量施用PTO以达到治疗活性。然而，已 知PTO与剂量依赖性毒性相关，如延长的凝血时间、补体激活、肾小管肾病、Kupffer细 胞激活以及免疫刺激包括脾肿大、淋巴增生、单核细胞侵润(Clin.Exp.Pharmacol.Physiol. vol 33，533-540, 2006)。已经发现许多反义PTO对于具有显著的来自肝或肾的影响的疾病显示出适当的 临床活性。ISIS-301012(mipomersen)是PTO类似物，其抑制涉及LDL胆固醇转运的 蛋白质apoB-100的合成。Mipomersen很可能由于其在肝脏中的优先分布而在某些动脉 硬化患者群中显示出适当的临床活性(www.medscape.com/viewarticle/556073 于2009 年2月19日访问)。ISIS-113715是反义PTO类似物，其抑制合成蛋白酪氨酸磷酸酶 IB(PTPlB)，且发现其在II型糖尿病患者中显示出治疗活性(Curr.Opin.Mol.Ther.vol 6， 331-336， 2004)。在亚磷酰胺吗啉代寡核苷酸(PMO)中，DNA的主链磷酸和2_脱氧核糖分别被 亚磷酰胺和吗啉取代(Appl.Microbiol.Biotechnol.vol 71，575-586，2006)。虽然 DNA 主 链是带负电荷的，但是PMO主链不带电荷。因此PMO与mRNA之间的结合在主链之 间没有静电排斥，而趋向于比DNA与mRNA之间的结合更强。由于PMO在结构上与 DNA非常不同，因此PMO不会被识别DNA的肝转运蛋白所识别。然而，PMO不易于 穿透细胞膜。肽核酸(PNA)是具有N-(2-氨基乙基)甘氨酸作为单位主链的多肽，由Nielsen 及其同事发现(Science vol 254，1497-1500，1991)。与 DNA 和 RNA—样，PNA 也选择 性结合互补核酸[Nature(London)vol 365，566-568，1992]。与 PMO—样，PNA 的主链 不带电荷。因此PNA与RNA之间的结合趋相于比DNA与RNA之间的结合更强。由于 PNA在结构上与DNA显著不同，因此PNA不会被识别DNA的肝转运蛋白所识别，并会 显示出与DNA或者PTO极为不同的组织分布谱。然而，PNA也不易穿透哺乳动物细胞 膜(Adv.Drug Delivery Rev.vol 55，267-280，2003)。在锁定核酸(LNA)中，RNA的主链核糖环在结构上受到约束以提高对于RNA 或者DNA的结合亲和性。因此，LNA可被认为是高亲和性DNA或者RNA衍生物 (Biochemistry vol 45，7347-7355，2006)。反义机制反义机制取决于AO类型而有差异。RNAse H识别mRNA与DNA、 RNA或者PTO的双链体，并降解mRNA的双链体部分。因此，PTO的反义活性显著地 被RNAse H所增强。与此同时，RNAse H不识别mRNA与PMO、PNA或者LNA的双 链体。换句话说，PMO、PNA和LNA的反义活性必须纯粹依赖于mRNA的空间阻断 (steric blocking) (Biochemistry vol 41, 4501-4510, 2002)。对于具有相同mRNA结合亲和性的寡核苷酸而言，PTO因此应显示出比PMO、PNA和LNA更强的反义活性。对于空间阻断AO如PMO、PNA和LNA，反义活性需要 强mRNA亲和性。PNA的反义活件PNA对mRNA的结合亲和性会随着PNA的长度增加至某一点 而增加。然而，PNA的反义活性似乎不总是随着PNA的长度而增加。有这样的情况， 即PNA的反义活性在12至13-聚体达到最大活性并随后降低(Nucleic acids Res.vol 32， 4893-4902，2004)。另一方面，对于某一mRNA的最佳反义活性由15至18-聚体PNA达 到，反映出mRNA的靶结合位点的结构可及性将是重要的(Biochemistry vol 40，53-64， 2001)。在许多情况中，据报道PNA在良好的细胞穿透条件下以微摩尔水平抑制由 核糖体进行的蛋白质合成(Science vol 258，1481-85，1992 ； Biochemistry vol 40， 7853-7859，2001 ； Nucleic acids Res.vol 32, 4893-4902，2004)。然而，靴向于 mRNA 高可及性位置的PNA在良好的转染条件下在低于微摩尔水平(Neuropeptides vol 38, 316-324，2004 ； Biochemistry vol 40，53-64，2001)或者甚至在低于纳摩尔水平(Nucleic Acids Res.vol 36，4424-4432，2008)也被发现显示出反义活性。在靶向于mRNA中高可及性位点之外，PNA对mRNA的强结合亲和性对于良好 的反义活性也是非常必要的。与DNA、PTO和LNA不同，PNA的主链不带电荷。随 着大小增加，PNA趋于聚集并且变得不适于结合mRNA。希望改善PNA对mRNA的结 合亲和性而不增加PNA的长度。具有点电荷的PNA单体的掺入有益于防止PNA聚集。PNA的细胞穿透策略PNA不易于穿透细胞膜且趋于显示不佳的反义活性， 除非其被适当地转染。在早些年，PNA的反义活性通过显微注射(Science vol 258， 1481-85，1992)或者电穿孔(Biochemistry vol 40，7853-7859，2001)评估。显微注射和 电穿孔是侵入性的且不适用于治疗目的。为了改善细胞穿透，已经开发了多种策略(Adv. Drag Delivery Rev.vol 55, 267-280，2003 ； Curr.Top.Med.Chem.vol 7, 727-737，2007)。通过如下方法已经将PNA有效地输送至细胞内细胞穿透性肽的共价掺 入(Neuropeptides vol 38，316-324，2004)、在与互补DNA形成双链体后的脂转染 (Biochemistry vol 40, 53-64，2001)、用共价附着的9-氨基吖啶对PNA的脂转染 (Nucleic Acids Res.vol 32, 2695-2706，2004)、用共价附着的磷酸盐阴离子对PNA的脂 转染(NucleicAcids Res.vol 36，4424-4432，2008)等等。细胞穿透也通过在PNA上附着 亲脂部分如金刚烷(Bioconjugate Chem.vol 10，965-972，1999)或者两亲性基团如四苯基 磷(NucleicAcids Res.vol 29，1852-1863，2001)而进行改善。然而，尽管在细胞穿透方 面有明显改善，但是这种共价修饰不太可能增加对于mRNA的结合亲和性。具有共价附着的CPP的PNA 细胞穿透肽(CPP)是显示良好细胞穿透以及具有 来自精氨酸或者赖氨酸残基的多个正电荷的多肽。迄今为止已经发现了许多CPP，如转 运肽(transportan)、穿膜肽(penetratin)、NLS (核定位信号)和Tat。已知CPP有效地运 载共价附着的搭载物(cargo)进入细胞。具有共价附着的CPP的PNA也显示出良好的细 胞穿透性。尽管一些具有共价附着的CPP的PNA示出大约IOOnM的反义IC5tl (Neuropeptides vol 38, 316-324，2004)，但是微摩尔反义IC5tl对于这种PNA更普遍。具有共价连接的CPP的PNA由两部分组成，即疏水性PNA结构域和带正电的CPP结构域。这种PNA趋于聚集以及被捕获到细胞内的内体中，而不可用于蛋白质 合成的反义抑制(Curr.Top.Med.Chem.vol 7，727-737，2007 ； Nucleic Acids Res.vol 33, 6837-6849，2005)。此外，这种共价附着的CPP几乎不增加PNA对于mRNA的结合亲和性。 具有手件主链的PNA 曾经尝试在2-氨基乙基-甘氧酸(Aeg)的PNA主链上 引入手性取代。例如，通过掺入具有2-氨基乙基-赖氨酸主链代替Aeg的PNA单体， 显著改善 PNA 的水溶性(Angew.Chem.Int.Ed.Engl.vol 35，1939-1941，1996)。通过引入L-(2-氨基-2-甲基)乙基-甘氨酸的主链代替Aeg，PNA对于DNA 和RNA的结合亲和性得到显著改善。具有L-(2_氨基-2-甲基)乙基-甘氨酸所有主链 代替2-氨基乙基-甘氨酸的10-聚体PNA显示出对于互补DNA和RNA的Tm分别增加 19°C和10°C。但是，这种增加与L-(2_氨基-2-甲基)乙基-甘氨酸取代数目似乎不成 比例(J.Am.Chem.Soc.vol 128，10258-10267，2006)。GPNA 据报道通过用2-氨基乙基-精氨酸主链代替Aeg来掺入PNA单体可显 著改善 PNA 的细胞穿透(J.Am.Chem.Soc.vol 125，6878-6879，2003)。由于这种 PNA 在 主链上具有胍盐部分而被称作“GPNA”。据报道具有2-氨基乙基-D-精氨酸主链的GPNA与具有2-氨基乙基精氨 酸主链的GPNA相比具有更强的DNA和RNA亲和性(Chem.Commun.244-246，2005)。 对于具有5个具有2-氨基乙基-Π-精氨酸主链的GPNA单体的10-聚体GPNA而言，与 相应未修饰的PNA相比其对于互补DNA的Tm (解链温度)增加7°C (Bioorg.Med.Chem. Lett.vol 16，4931-4935，2006)。据报道针对人EGFR-TK的16-聚体反义GPNA在经ip (腹膜内)施用于无胸 腺裸鼠时显示出抗肿瘤活性，尽管现有技术中并未证实反义GPNA的体外反义活性(WO 2008/061091)。具有修饰的核碱基的PNA 与DNA的情况一样，已进行核碱基修饰以改善PNA 对核酸的亲和性。对用2，6- 二氨基嘌呤置换了腺嘌呤的PNA对于互补DNA或者RNA的亲和性 进行评估。发现2，6-二氨基嘌呤的取代引致每个置换Tm升高2.5 6°C (NucleicAcids Res.vol 25，4639-4643, 1997)。胞嘧啶和修饰的胞嘧啶对用9- (2-氨基乙氧基)吩噁嗪置换了胞嘧啶的PNA对于互补DNA或者RNA 的亲和性进行评估。用9-(2_氨基乙氧基)吩噁嗪的单取代引致Tm升高10.7 23.7°C， 但是这种升高显著依赖于核苷酸序列。核碱基9- (2-氨基丙氧基)吩噁嗪也诱导Tm的大幅度升高。由于Tm巨大的升高，因此将具有9-(2-氨基乙氧基)_吩噁嗪或者9-(2-氨基 乙氧基)吩噁嗪作为胞嘧啶置换的PNA单体称作“G-夹”(Org丄ett.vol 4，4395-4398， 2002)。然而，未报道具有G-夹PNA的细胞穿透数据。对用6-{2-(2_氨基乙氧基)苯基}_吡咯并胞嘧啶或者6_{2，6_ 二(2_氨基乙氧 基)苯基丨吡咯并胞嘧啶置换了胞嘧啶的PNA对于互补DNA或者RNA的亲和性进行评 估。用6-{2-(2_氨基乙氧基)苯基}吡咯并胞嘧啶或者6-{2，6-二(2-氨基乙氧基)-苯 基}吡咯并胞嘧啶的单取代使Tm提高3 11.5°C (J.Am.Chem.Soc.vol 130，12574-12575， 2008)。然而，未对这种PNA的细胞穿透进行评估。PNA的其它用涂通过与微小RNA紧密结合，PNA可抑制微小RNA的调节 功能，导致由该微小RNA直接调节的蛋白质的表达水平增加(RNAvol 14，336-346， 2008)。通过与核糖核蛋白如端粒酶的紧密结合，PNA可以调节所述核糖核蛋白的细胞 功能(8丨00屯16(1.0^1111^&019，1273-78，1999)。通过与细胞核中基因的某部分紧密 结合，PNA可以调节该基因的转录水平(Biochemistryvol 46，7581-89，2007)。由于PNA紧密结合DNA和RNA，且选择性区分单碱基对错配，因此PNA将适 用于单核苷酸多态性(SNP)的高保真度检测。因为PNA以高序列特异性紧密结合DNA 和RNA，因此可发现PNA的多种其它涉及DNA或RNA的治疗和诊断用途(FASEB vol 14， 1041-1060， 2000)。发明概述本发明提供了由式I所代表的新类型的PNA寡聚物或者其药物可接受的盐
权利要求
1.式I所示肽核酸衍生物或者其药物可接受的盐
2.权利要求1的肽核酸衍生物或者其药物可接受的盐 其中，η是等于或者大于5但是小于或者等于30的整数；Si？ S2 ......？ Sn-!？ Sn T1J T2？ ......？ TV1 和Tn是氢基；X和Y独立地选自氢基、取代或者未取代的烷基、取代或者未取代的酰基、取代或 者未取代的磺酰基、和取代或者未取代的芳基；Z表示氢基、羟基、取代或者未取代的烷氧基、取代或者未取代的氨基、取代或者未 取代的烷基、或者取代或者未取代的芳基；B1, B2,……，Blri和Bn独立地选自天然核碱基，包括腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌 呤、胞嘧啶和尿嘧啶，以及非天然核碱基；并且，B1, B2,……，Blri和Bn中至少一个独立地选自由式II、III或者IV所示的非天然 核碱基
3.权利要求2的肽核酸衍生物或者其药物可接受的盐， 其中，N是等于或者大于8但是小于或者等于25的整数；Si？ S2 ......？ Sn-!？ Sn T1J T2？ ......？ TV1 和Tn是氢基；X和Y独立地选自氢基、取代或者未取代的烷基、和取代或者未取代的酰基； Z表示羟基、或者取代或者未取代的氨基；B1, B2,……，Blri和Bn独立地选自天然核碱基，包括腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌 呤、胞嘧啶和尿嘧啶，以及非天然核碱基；B1, B2,……，Blri和Bn中至少两个独立地选自由式II、III或者IV表示的非天然 核碱基；R1, R2, R3, R4, R5和R6独立地选自取代或者未取代的烷基、以及氢基； Q1和Qm是取代或者未取代的亚甲基，并且Qm与碱性氨基直接连接； Q2, Q3,……和Qnri独立地选自取代或者未取代的亚甲基、氧和氨基；以及， m是等于或者大于2但是小于或者等于12的整数。
4.权利要求2的肽核酸衍生物或者其药物可接受的盐， 其中，N是等于或者大于10但是小于或者等于25的整数；Si？ S2 ......？ Sn-!？ Sn T1J T2？ ......？ TV1 和Tn是氢基；X和Y独立地选自氢基、以及取代或者未取代的酰基； Z表示羟基、烷氧基、或者取代或者未取代的氨基；B1, B2,……，Blri和Bn独立地选自天然核碱基，包括腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌 呤、胞嘧啶和尿嘧啶，以及非天然核碱基；B1, B2,……，Blri和Bn中至少三个独立地选自由式II、III或者IV所示的非天然 核碱基；R1, R2, R3, R4, R5和R6独立地选自取代或者未取代的烷基、以及氢基； Q1和Qm是亚甲基，并且Qm与碱性氨基直接连接； Q2, Q3,……和Qnri独立地选自亚甲基、氧和氨基；以及， m是等于或者大于2但是小于或者等于10的整数。
5.权利要求2的肽核酸衍生物或者其药物可接受的盐，其中，η是等于或者大于10但是小于或者等于20的整数；Si？ S2 ......？ Sn-!？ Sn T1J T2？ ......？ TV1 和Tn是氢基；X和Y独立地选自氢基、以及取代或者未取代的酰基； Z表示羟基、或者取代或者未取代的氨基；B1, B2,……，Blri和Bn独立地选自天然核碱基，包括腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌 呤、胞嘧啶和尿嘧啶，以及非天然核碱基；B1, B2,……，Blri和Bn中至少三个独立地选自由式II、III或者IV所示的非天然 核碱基；R1, R3和R5是氢基，R2, R4和R6独立地表示氢基、或者取代或者未取代的脒基； Q1和Qm是亚甲基，并且Qm与碱性氨基直接连接； Q2, Q3,……和Qnri独立地选自亚甲基、氧和氨基； m是等于或者大于2但是小于或者等于10的整数。
6.权利要求2的肽核酸衍生物或者其药物可接受的盐， 其中，N是等于或者大于10但是小于或者等于20的整数；Si？ S2 ......？ Sn-!？ Sn T1J T2？ ......？ TV1 和Tn是氢基；X和Y独立地选自氢基、以及取代或者未取代的酰基； Z表示羟基，或者取代或者未取代的氨基；B1, B2,……，Blri和Bn独立地选自腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌呤、胞嘧啶，以及非 天然核碱基；B1, B2,……，Blri和Bn中至少三个独立地选自由式II、III或者IV所示的非天然核碱基；R1, R3和R5是氢基，并且R2, R4和R6独立地表示氢基或者脒基； Q1和Qm是亚甲基，并且Qm与碱性氨基直接连接； Q2, Q3,……和Qnri独立地选自亚甲基、和氧；以及， m是等于或者大于2但是小于或者等于8的整数。
7.权利要求2的肽核酸衍生物或者其药物可接受的盐， 其中，η是等于或者大于8但是小于或者等于20的整数；Si？ S2 ......？ Sn-!？ Sn T1J T2？ ......？ TV1 和Tn是氢基；X是氢基；Y表示氢基、或者取代或者未取代的酰基； Z表示羟基、或者取代或者未取代的氨基；B1, B2,……，Blri和Bn独立地选自腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌呤、胞嘧啶，以及非 天然核碱基；B1, B2,……，Blri和Bn中至少三个独立地选自有式II、III或者IV所示的非天然核碱基；R1, R3和R5是氢基，R2, R4和R6独立地表示氢基或者脒基；L1 表示-(CH2)2-O-(CH2) 2_、-CH2-O-(CH2) 2_、或者-CH2-O-(CH2) 3_，其右端与碱 性氨基直接连接；以及，L2 和 L3 独立地选自-(CH2)2-O-(CH2) 2_、-(CH2) 3-0-(CH2) 2_、-(CH2)2-O-(CH2)3-、_ (CH2) 2_、-(CH2) 3"> "(CH2) 4-> -(CH2) 5-> -(CH2) 6-、_ (CH2) 7_、和-(CH2)8-,其右 端与碱性氨基直接连接。
8.用于治疗目的的药物组合物，其含有治疗有效量的权利要求1-7任一项的肽核酸衍 生物或者其药物可接受的盐。
9.使用权利要求1-7任一项的肽核酸衍生物或者其盐用于诊断目的的方法。
10.使用权利要求1-7任一项的肽核酸衍生物或者其盐用于细胞蛋白质表达体外调节 的方法。
11.式VI所示化合物其中，
12.由式VII所示化合物其中，R8是氢基、N-琥珀酰基、或者取代或者未取代的烷基；P1选自氢基、叔丁氧羰基、(9H-芴-9-基)甲氧基_羰基、取代或者未取代的苄氧 羰基、以及取代或者未取代的芳基磺酰基；P2选自氢基、叔丁氧羰基、(9H-芴-9-基)甲氧基_羰基、取代或者未取代的苄氧 羰基、取代的烷氧羰基、取代或者未取代的烷基、脒基、1，3-双(叔丁氧基-羰基)脒 基、1，3-双-(苄基-氧羰基)脒基；P3选自氢基、叔丁氧羰基、(9H-芴-9-基)甲氧基_羰基、取代或者未取代的苄氧 羰基和取代的苄氧羰基；P4选自氢基、以及叔丁氧羰基；以及， L2是由式V所示的接头
13.由式VIII所示化合物
14.由式IX所示化合物
全文摘要
本发明提供了一类新的肽核酸衍生物，其示出良好的细胞穿透以及对核酸的强结合亲和性。
文档编号C07C237/10GK102015628SQ200980109059
公开日2011年4月13日 申请日期2009年3月13日 优先权日2008年3月14日
发明者朴贤真, 李钟旭, 郑信, 金希娟, 金美兰 申请人:Cti生物公司