专利名称：一种高车前苷的制备方法
技术领域：
本发明属于天然产物分离领域，尤其是涉及一种高车前苷的制备方法。
背景技术：
荔枝草，别名雪见草、癞蛤蟆草，为唇形科植物荔枝草(svlvia plebeia r. br.)的 地上部分。性凉，味苦、辛。功能主治是清热，解毒，凉血，利尿。主要用于咽喉肿痛、支气管 炎、肾炎水肿、痈肿；外治用于乳腺炎、痔疮肿痛、出血等。其中高车前苷是荔枝草的主要功 能性成分。
高车前苷，属于黄酮类化合物，易溶于甲醇、乙醇，微溶于丙酮，难溶于水。分子式 C22H22O11,其半水合物为黄色结晶物。本品有抑菌作用，体外对慢性气管炎常见的病原菌白 色葡萄球菌、肺炎双球菌等有中等强度的抑制作用，对金黄色葡萄球菌在动物体内感染有 一定的对抗作用，可降低死亡率20%。有一定的镇咳、祛痰效果，祛痰能力大于氯化铵，可用 于治疗慢性气管炎，且毒性较小。以上药用价值报道显示，高车前苷具有广阔的研究前景。
现有高车前苷的提取工艺主要是醇提、超声提取，乙酸乙酯萃取，硅胶柱、聚酰胺 柱色谱、凝胶柱等手段分离纯化。如向兰等发表的“荔枝草中黄酮类成分的研究”，该文献公 开的提取方法是醇提，乙酸乙酯萃取，重复聚酰胺柱分离，该方法制备高车前苷周期长，只 适于实验室少量制备。此外还有吴斐华等发表的“毛平车前的化学成分和保肝活性”，该文 献通过醇提，正丁醇萃取，多次硅胶柱层析、凝胶柱、C-18柱和重结晶的方法制得高车前苷， 该方法步骤繁多、操作复杂，不适合大量制备。而现有文献中对从荔枝草中提取高车前苷的 研究较少，因此提供一种从荔枝草中提取高车前苷的方法是必要的。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种高车前苷的制备方法。该方法操作简单，产品含量尚。
本发明之所以采用高速逆流色谱分离纯化高车前苷，是因为该分离方法操作简 便，同时也避免了样品的损失，与传统分离手段相比，克服了其操作繁琐，分离周期长的缺 点，并具有制备量大，产品纯度高的优点。
本发明是采用以下技术方案实现的
一种高车前苷的制备方法，其特征在于包含以下步骤
1)提取将荔枝草原料粉碎，加入8 12倍量60-80%乙醇液加热回流提取2 3次，合并提取液，减压回收乙醇，得浓缩液；
2)柱分离将上述浓缩液适量水稀释滤过，上大孔树脂柱，用乙醇水溶液梯度洗 脱，薄层监测，收集高车前苷流分，浓缩洗脱液；
3)除杂将上述浓缩液调节至酸性，滤出沉淀物，用丙酮洗涤，真空干燥得淡黄色 粉末；
4)高速逆流色谱分离纯化以乙酸乙酯-乙醇-水作为两相溶剂系统，取上相为3固定相，下相为流动相，将上述粉末用下相溶解，流出物减压蒸干即得高车前苷产品。
所述步骤2)中的大孔树脂的型号可选AB-8、D1300、HZ-816和LSA-8中的一种，乙 醇水溶液梯度为 3-5BV20-40%— 4-6BV50-70%。
所述步骤幻中调节酸性的可以是盐酸或硫酸的一种，调节pH2 4。
所述步骤4)中的两相溶剂乙酸乙酯乙醇水的配比4-3 1 5。色谱仪转速 700 1000r/min，流动相流速 1. 0 3. Oml/min。
综上所述，本发明存在以下优点
(1)大孔树脂的处理量大，再生简单，可重复使用；
(2)高速逆流色谱无需使用载体，减少了操作过程中样品的损失，分离效果好，制备量大。
下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。
具体实施例方式
下述实施实例中高车前苷的监测采用薄层色谱法(参照彭苗苗等“荔枝草中高车 前苷的提取分离和光谱色谱特征图谱的建立”文献)，具体方法如下
薄层色谱条件
薄层板娃胶G薄层板。
展开剂氯仿-甲醇G 1)
显色剂的A1C13乙醇液。
展开后(展距IOcm)，取出，晾干，喷以AlCl3乙醇液，供试品在与对照品色谱 相应的位置上(Rf = 0. 48)，有一相同颜色的单一斑点。
实施例1
取荔枝草粉碎物lKg，加入IOL的60%乙醇溶液提取2个小时，过滤，滤渣按上 述条件再提取一次，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩液加水分散，滤过，加入至装有600g的 AB-8型大孔树脂柱中吸附，先用IL水洗脱(弃去)，再依次用5BV20%乙醇一4BV50%乙醇 溶液洗脱，薄层监测，收集高车前苷流分，浓缩至0. 5L，加入5 %的硫酸溶液调节至pH3，过 滤，沉淀物用丙酮洗涤，真空干燥得黄色粉末15. lg，再将乙酸乙酯、乙醇、水按4 1 5的 体积比量取，超声混合后加入分液漏斗中，静置使上、下相分层，取上相作为固定相，下相作 为流动相，将上述黄色粉末用下相溶解，再用上相泵满色谱柱，然后以
2. 5ml/min的流速泵 入流动相，平衡后设定色谱仪转速为850r/min，进样分离，收集高车前苷流分，减压蒸干即 得高车前苷2. 4g，含量99.3%。
实施例2
取荔枝草粉碎物lKg，加入8L的75%乙醇溶液提取2个小时，过滤，滤渣按上述条 件再提取两次，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩液加水分散，滤过，加入至装有600g的D1300 型大孔树脂柱中吸附，先用IL水洗脱(弃去)，再依次用4BV30%乙醇一4BV70%乙醇溶液 洗脱，薄层监测，收集高车前苷流分，浓缩至0. 4L，加入3%的盐酸溶液调节至pH4，过滤，沉 淀物用丙酮洗涤，真空干燥得黄色粉末16. 8g，再将乙酸乙酯、乙醇、水按3 1 5的体积 比量取，超声混合后加入分液漏斗中，静置使上、下相分层，取上相作为固定相，下相作为流动相，将上述黄色粉末用下相溶解，再用上相泵满色谱柱，然后以2ml/min的流速泵入流动 相，平衡后设定色谱仪转速为700r/min，进样分离，收集高车前苷流分，减压蒸干即得高车 前苷2. 2g，含量98. 6%。
实施例3
取荔枝草粉碎物lKg，加入12L的80%乙醇溶液提取2个小时，过滤，滤渣按上 述条件再提取两次，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩液加水分散，滤过，加入至装有600g的 HZ-816型大孔树脂柱中吸附，先用2L水洗脱(弃去)，再依次用;3BV40%乙醇一5BV60%乙 醇溶液洗脱，薄层监测，收集高车前苷流分，浓缩至0. 7L，加入3 %的硫酸溶液调节至pH2， 过滤，沉淀物用丙酮洗涤，真空干燥得黄色粉末18. 5g，再将乙酸乙酯、乙醇、水按4 :1:5 的体积比量取，超声混合后加入分液漏斗中，静置使上、下相分层，取上相作为固定相，下相 作为流动相，将上述黄色粉末用下相溶解，再用上相泵满色谱柱，然后以lml/min的流速泵 入流动相，平衡后设定色谱仪转速为700r/min，进样分离，收集高车前苷流分，减压蒸干即 得高车前苷2. 5g，含量98.4%。
实施例4
取荔枝草粉碎物lKg，加入8L的75%乙醇溶液提取2个小时，过滤，滤渣按上述条 件再提取一次，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩液加水分散，滤过，加入至装有600g的LSA-8 型大孔树脂柱中吸附，先用3L水洗脱(弃去)，再依次用5BV30%乙醇一4BV60%乙醇溶液 洗脱，薄层监测，收集高车前苷流分，浓缩至0. 6L，加入5%的硫酸溶液调节至pH4，过滤，沉 淀物用丙酮洗涤，真空干燥得黄色粉末16. lg，再将乙酸乙酯、乙醇、水按3 1 5的体积 比量取，超声混合后加入分液漏斗中，静置使上、下相分层，取上相作为固定相，下相作为流 动相，将上述黄色粉末用下相溶解，再用上相泵满色谱柱，然后以3ml/min的流速泵入流动 相，平衡后设定色谱仪转速为lOOOr/min，进样分离，收集高车前苷流分，减压蒸干即得高车 前苷2. 5g，含量98. 1%ο
权利要求
1.一种高车前苷的制备方法，其特征在于包含以下步骤1)提取将荔枝草原料粉碎，加入8 12倍量60-80%乙醇液加热回流提取2 3次， 合并提取液，减压回收乙醇，得浓缩液；2)柱分离将上述浓缩液加适量水稀释，滤过，上大孔树脂柱，用乙醇水溶液梯度洗 脱，薄层监测，收集高车前苷流分，浓缩洗脱液；3)除杂将上述浓缩液调节至酸性，滤出沉淀物，用丙酮洗涤，真空干燥得淡黄色粉末；4)高速逆流色谱分离纯化以乙酸乙酯-乙醇-水作为两相溶剂系统，取上相为固定 相，下相为流动相，将上述粉末用下相溶解，流出物减压蒸干即得高车前苷产品。
2.如权利要求1所述的高车前苷的制备方法，其特征在于所述步骤2)中的大孔树 脂的型号可选AB-8、D1300、HZ-816和LSA-8中的一种，乙醇水溶液梯度为3_5BV20_40% —4-6BV50-70%。
3.如权利要求1所述的高车前苷的制备方法，其特征在于所述步骤幻中调节酸性的可 以是盐酸或硫酸的一种，调节PH2 4。
4.如权利要求1所述的高车前苷的制备方法，其特征在于所述步骤4)中的两相溶剂乙 酸乙酯乙醇水的配比4-3 1 5。色谱仪转速700 lOOOr/min，流动相流速1.0 3. Oml/min。
全文摘要
本发明提供一种高车前苷的制备方法。方法是将荔枝草原料粉碎，加入60～80％的乙醇水加热回流提取2～3次，合并提取液，浓缩加水分散，滤过上大孔树脂柱，用乙醇水溶液梯度洗脱，收集高车前苷流分，浓缩洗脱液，调节至pH2～4，滤出沉淀物用丙酮洗涤，干燥得淡黄色粉末，再采用高速逆流色谱法进行分离纯化，即得产品。本方法适合制备高含量高车前苷。
文档编号C07H1/08GK102030790SQ201010520188
公开日2011年4月27日 申请日期2010年10月26日 优先权日2010年10月26日
发明者苏刘花 申请人:南京泽朗农业发展有限公司