专利名称：从吐根中提取分离盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的一种制备方法
技术领域：
本发明涉及一种从吐根中提取精制盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的方法。
背景技术：
吐根是多年生常绿矮小灌木，为茜草科，头九节属。根呈扭曲圆柱形，暗棕色，茎青绿，枝质软，花白色。吐根主要产于巴西潮湿森林地带，商品名为巴西吐根。吐根在印度东部的Bengal、緬甸、马来亚联邦、新加坡、印度尼西亚等地种植成功，我国广东、云南、台湾也有引种栽培。
吐根中主要含有醚溶性总生物碱，其中又以盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱为主。吐根为南美印第安人的药品，于1672年传入欧洲，被认为是痢疾的治疗药物，对阿米巴痢疾治疗效果较好。现在吐根的应用更为广泛，作为催吐药疗效确切，即使中等剂量也能刺激呕吐直至胃内容物被清除；小剂量使用是强祛痰剂，常用于许多止咳药中，用于支气管炎、百日咳的治疗。吐根具有一定的毒性，其毒性成分和治疗成分都是以盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱为主的总生物碱，该发明对今后制剂中盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的精确控制从而提高药品安全性具有显著意义。由于吐根属于进口药品，国内对其相关研究甚少，也缺乏相应的提取精制方法的文献。有报道称采用乙醇对吐根进行超声提取，可以有效提取醚溶性生物总碱许立颖、宋伟峰，吐根醚溶性生物碱提取工艺研究，制剂与技术，2011年4月8卷第11期但是醚溶性生物碱包括了许多的成分，且并未涉及到盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的提取精制方法。
发明内容
本发明提供一种从吐根中提取精制盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的方法，该方法包括如下步骤a、超声提取取吐根药材，粉碎，加入酸性乙醇，超声提取，得提取液A ；b、浓缩提取液A离心，取上清液，挥尽溶剂，调节PH值至碱性，得浓缩液B ;C、萃取浓缩液B以乙醚萃取，收集乙醚层，挥干溶剂，得残渣C ;d、分离纯化将残渣C溶解，注入制备液相，采用制备色谱进行分离纯化，采用ODS柱分离，流动相为乙腈三乙胺；根据检测图谱盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱对应的谱带，分别馏分收集溶液D和溶液E ；e、冷冻干燥将得到的溶液D和溶液E分别浓缩至有机溶剂除去后，调节PH值至酸性，进行冷冻干燥，得到盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱。该方法中所指的酸性乙醇，是指将所需浓度的乙醇，加入适量盐酸，配置成所需酸度的乙醇。本发明从吐根中提取精制盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的方法优选包括如下步骤
a、超声提取取吐根药材，粉碎，加入10-40倍量I %-3%的酸性乙醇，乙醇浓度为50-90%，超声提取0. 5-2小时，得提取液A ;b、浓缩提取液A离心，取上清液，40_60°C减压挥尽乙醇，调节PH值到10_12，得浓缩液B ；
C、萃取浓缩液B以同体积乙醚萃取1-4次，收集乙醚层，挥干溶剂，得残渣C ;d、分离纯化将残渣C用乙腈溶解，定容至相当于生药量Ig每ml，采用制备色谱进行分离纯化，色谱条件色谱柱=ODS色谱柱；流动相为乙腈0. 05%三乙胺，室温体积比为40-45 60-55 ;流速为I. Oml/min-5. Oml/min ;根据检测图谱盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱对应的谱带，分别馏分收集溶液D和溶液E ；e、冷冻干燥将得到的溶液D和溶液E分别减压浓缩至有机溶剂除去后，调整pH值到3-5，进行冷冻干燥，得到盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱。本发明从吐根中提取精制盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的方法更优选包括如下步骤a、超声提取取吐根药材，粉碎，加入20倍量I %的酸性乙醇，乙醇浓度为70%，超声提取I小时，得提取液A ；b、浓缩提取液A离心，取上清液，40°C减压挥尽乙醇，调节PH值到10，得浓缩液B ；C、萃取浓缩液B以同样体积的乙醚萃取4次，收集乙醚层，挥干溶剂，得残渣C ；d、分离纯化将残渣C用乙腈溶解，定容至相当于生药量Ig每ml，采用制备色谱进行分离纯化，色谱条件色谱柱=C18色谱柱；检测波长283nm ;流动相为乙腈0. 05%三乙胺，室温体积比为45 55;流速为5. Oml/min;根据检测图谱盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱对应的谱带，分别馏分收集溶液D和溶液E ；e、冷冻干燥将得到的溶液D和溶液E分别减压浓缩至有机溶剂除去后，调整pH值到4，进行冷冻干燥，得到盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱。本发明从吐根中提取精制盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的方法更优选还包括如下步骤a、超声提取取吐根药材，粉碎，加入30倍量3%的酸性乙醇，乙醇浓度为90%，超声提取2小时，得提取液A ；b、浓缩提取液A离心，取上清液，60°C减压挥尽乙醇，调节PH值到12，得浓缩液B ；C、萃取浓缩液B以同样体积的乙醚萃取I次，收集乙醚层，挥干溶剂，得残渣C ;d、分离纯化将残渣C用乙腈溶解，定容至相当于生药量Ig每ml，采用制备色谱进行分离纯化，色谱条件色谱柱=C18色谱柱；检测波长283nm ;流动相为乙腈0. 05%三乙胺，室温体积比为40 60;流速为I. Oml/min;根据检测图谱盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱对应的谱带，分别馏分收集溶液D和溶液E ；e、冷冻干燥将得到的溶液D和溶液E分别减压浓缩至有机溶剂除去后，加入少量稀盐酸，调整PH值到5，进行冷冻干燥，得到盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱。本发明从吐根中提取精制盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的方法更优选还包括如下步骤
a、超声提取取吐根药材，粉碎，加入10倍量2%的酸性乙醇，乙醇浓度为60%，超声提取O. 5小时，得提取液A ;b、浓缩提取液A离心，取上清液，50°C减压挥尽乙醇，调节PH值到11，得浓缩液B ；C、萃取浓缩液B以同样体积的乙醚萃取3次，收集乙醚层，挥干溶剂，得残渣C ；d、分离纯化将残渣C用乙腈溶解，定容至相当于生药量Ig每ml，采用制备色谱 进行分离纯化，色谱条件色谱柱=C18色谱柱；检测波长283nm ;流动相为乙腈0. 05 %三乙胺，室温体积比为45 55;流速为3. Oml/min;根据检测图谱盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱对应的谱带，分别馏分收集溶液D和溶液E ；e、冷冻干燥将得到的溶液D和溶液E分别减压浓缩至有机溶剂除去后，加入少量稀盐酸，调整pH值到3，进行冷冻干燥，得到盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱。本发明从吐根中提取精制盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的方法更优选还包括如下步骤a、超声提取取吐根药材，粉碎，加入40倍量3%的酸性乙醇，乙醇浓度为50%，超声提取I. 5小时，得提取液A ;b、浓缩提取液A离心，取上清液，60°C减压挥尽乙醇，调节PH值到10，得浓缩液B ；C、萃取浓缩液B以同体积乙醚萃取2次，收集乙醚层，挥干溶剂，得残渣C ；d、分离纯化将残渣C用乙腈溶解，定容至相当于生药量Ig每ml，采用制备色谱进行分离纯化，色谱条件色谱柱=C18色谱柱；检测波长283nm ;流动相为乙腈0. 05 %三乙胺，室温体积比为45 55;流速为4. Oml/min;根据检测图谱盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱对应的谱带，分别馏分收集溶液D和溶液E ；e、冷冻干燥将得到的溶液D和溶液E分别减压浓缩至有机溶剂除去后，调整pH值到5，进行冷冻干燥，得到盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱。本发明从吐根中提取精制盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的方法中，调节酸性乙醇使用盐酸，调节溶液碱性使用氨试液。本发明还保护依据上述任一所述的从吐根中提取精制盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的方法得到的精制盐酸吐根碱在制备治疗阿米巴病药物中的应用。本发明从吐根中提取精制盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的方法中的原料药材吐根由菌草科植物 Cephaelis acuminate Karsten 或 C. ipecacuanha (Brotero)A. Richard 的根茎和根组成。采用本发明从吐根中提取精制盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的方法连续生产五批盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱，纯度均超过98%，详细结果见表I表I连续五批生产盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的纯度
IEl盐酸吐根碱含量％~盐酸吐根酚碱含量％~
2012020199. 7898.0权利要求
1.一种从吐根中提取精制盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的方法，该方法包括如下步骤 a、超声提取取吐根药材，粉碎，加入酸性乙醇，超声提取，得提取液A; b、浓缩提取液A离心，取上清液，挥尽溶剂，调节PH值至碱性，得浓缩液B; C、萃取浓缩液B以乙醚萃取，收集乙醚层，挥干溶剂，得残渣C ; d、分离纯化将残渣C溶解，注入制备液相，采用制备色谱进行分离纯化，采用ODS柱分离，流动相为乙腈三乙胺；根据检测图谱盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱对应的谱带，分别馏分收集溶液D和溶液E ； e、冷冻干燥将得到的溶液D和溶液E分别浓缩至有机溶剂除去后，调节PH值至酸性，进行冷冻干燥，得到盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱。
2.根据权利要求I所述的从吐根中提取精制盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的方法，该方法包括如下步骤 a、超声提取取吐根药材，粉碎，加入10-40倍量1%-3%的酸性乙醇，乙醇浓度为50-90 %，超声提取0. 5-2小时，得提取液A ； b、浓缩提取液A离心，取上清液，40-60°C减压挥尽乙醇，调节PH值到10-12，得浓缩液B ； C、萃取浓缩液B以同体积乙醚萃取1-4次，收集乙醚层，挥干溶剂，得残渣C ; d、分离纯化将残渣C用乙腈溶解，定容至相当于生药量Ig每ml，采用制备色谱进行分离纯化，色谱条件色谱柱=ODS色谱柱；流动相为乙腈0. 05%三乙胺，室温体积比为40-45 : 60-55 ;流速为I. Oml/min-5. Oml/min ;根据检测图谱盐酸吐根碱和盐酸吐根酹碱对应的谱带，分别馏分收集溶液D和溶液E ； e、冷冻干燥将得到的溶液D和溶液E分别减压浓缩至有机溶剂除去后，调整pH值到3-5，进行冷冻干燥，得到盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱。
3.根据权利要求I所述的从吐根中提取精制盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的方法，该方法包括如下步骤 a、超声提取取吐根药材，粉碎，加入20倍量I%的酸性乙醇，乙醇浓度为70%，超声提取I小时，得提取液A ; b、浓缩提取液A离心，取上清液，40°C减压挥尽乙醇，调节PH值到10，得浓缩液B; C、萃取浓缩液B以同样体积的乙醚萃取4次，收集乙醚层，挥干溶剂，得残渣C ; d、分离纯化将残渣C用乙腈溶解，定容至相当于生药量Ig每ml，采用制备色谱进行分离纯化，色谱条件色谱柱=C18色谱柱；流动相为乙腈0. 05%三乙胺，室温体积比为45 55;流速为5. Oml/min;根据检测图谱盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱对应的谱带，分别馏分收集溶液D和溶液E ； e、冷冻干燥将得到的溶液D和溶液E分别减压浓缩至有机溶剂除去后，调整pH值到4，进行冷冻干燥，得到盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱。
4.根据权利要求I所述的从吐根中提取精制盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤 a、超声提取取吐根药材，粉碎，加入30倍量3%的酸性乙醇，乙醇浓度为90%，超声提取2小时，得提取液A ; b、浓缩提取液A离心，取上清液，60°C减压挥尽乙醇，调节PH值到12，得浓缩液B;C、萃取浓缩液B以同样体积的乙醚萃取I次，收集乙醚层，挥干溶剂，得残渣C ; d、分离纯化将残渣C用乙腈溶解，定容至相当于生药量Ig每ml，采用制备色谱进行分离纯化，色谱条件色谱柱=C18色谱柱；流动相为乙腈0. 05%三乙胺，室温体积比为.40 60 ;流速为I. Oml/min;根据检测图谱盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱对应的谱带，分别馏分收集溶液D和溶液E ； e、冷冻干燥将得到的溶液D和溶液E分别减压浓缩至有机溶剂除去后，加入少量稀盐酸，调整PH值到5，进行冷冻干燥，得到盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱。
5.根据权利要求I所述的从吐根中提取精制盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤 a、超声提取取吐根药材，粉碎，加入10倍量2%的酸性乙醇，乙醇浓度为60%，超声提取0.5小时，得提取液A ; b、浓缩提取液A离心，取上清液，50°C减压挥尽乙醇，调节PH值到11，得浓缩液B； C、萃取浓缩液B以同样体积的乙醚萃取3次，收集乙醚层，挥干溶剂，得残渣C ; d、分离纯化将残渣C用乙腈溶解，定容至相当于生药量Ig每ml，采用制备色谱进行分离纯化，色谱条件色谱柱=C18色谱柱；流动相为乙腈0. 05%三乙胺，室温体积比为.40 60 ;流速为3. Oml/min;根据检测图谱盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱对应的谱带，分别馏分收集溶液D和溶液E ； e、冷冻干燥将得到的溶液D和溶液E分别减压浓缩至有机溶剂除去后，加入少量稀盐酸，调整PH值到3，进行冷冻干燥，得到盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱。
6.根据权利要求I所述的从吐根中提取精制盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤 a、超声提取取吐根药材，粉碎，加入40倍量3%的酸性乙醇，乙醇浓度为50%，超声提取I. 5小时，得提取液A ; b、浓缩提取液A离心，取上清液，60°C减压挥尽乙醇，调节PH值到10，得浓缩液B; C、萃取浓缩液B以同体积乙醚萃取2次，收集乙醚层，挥干溶剂，得残渣C ; d、分离纯化将残渣C用乙腈溶解，定容至相当于生药量Ig每ml，采用制备色谱进行分离纯化，色谱条件色谱柱=C18色谱柱；流动相为乙腈0. 05%三乙胺，室温体积比为45 55;流速为4. Oml/min;根据检测图谱盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱对应的谱带，分别馏分收集溶液D和溶液E ； e、冷冻干燥将得到的溶液D和溶液E分别减压浓缩至有机溶剂除去后，调整pH值到.5，进行冷冻干燥，得到盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱。
7.根据权利要求1-6任一所述的从吐根中提取精制盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的方 法，其特征在于，调节酸性使用盐酸，调节碱性使用氨试液。
8.根据权利要求1-6任一所述的从吐根中提取精制盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的方法，其特征在于，步骤d中，色谱条件中检测波长为283nm。
全文摘要
本发明公开了一种从吐根中分离制备盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的方法。茜草科植物吐根具有催吐、镇咳祛痰剂的作用，目前已知其含有盐酸吐根碱、盐酸吐根酚碱等6种生物碱。本发明提供一种制备方法，通过提取、纯化、冷冻干燥等步骤，可以从吐根中得到含量为98％以上的盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱。
文档编号C07D455/00GK102633793SQ20121011315
公开日2012年8月15日 申请日期2012年4月18日 优先权日2012年4月18日
发明者宋剑, 王宗权, 裴彩云, 贾永鑫, 韩桂茹 申请人:宋剑