专利名称：蝙蝠葛酚性碱在制备抗心肌缺血药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及治疗心血管疾病的药物，特别是抗心肌缺血的药物，同时涉及从植物中提取的有效部位的新的应用，特别是蝙蝠葛酚性生物碱的新的应用。
心肌缺血是冠心病的重要致病原因。冠心病全称为冠状动脉粥样硬化性心脏病，心绞痛是其常见症状，由心肌急剧的暂时缺血和缺氧所引起。发作时病人胸骨后或左前胸区出现阵发性绞痛或闷痛，一般历时1-5分钟，给病人带来很大痛苦并危及生命。因此，对心肌缺血的控制和治疗是当今医药学界的重要课题。
蝙蝠葛酚性碱(phenolic alkaloids of menispermum dauricum，PAMD)系从防己科植物蝙蝠葛(menispermum dauricum DC)的根茎中提取的双苄基异喹啉类生物碱。本发明应用的蝙蝠葛酚性碱是用以下方法从防己科植物蝙蝠葛根茎中提取的酚性生物碱(1)从蝙蝠葛根茎粗粉中提取总生物碱；(2)含有生物总碱的提取液经NaOH碱化析出粗总碱沉淀；(3)利用酚性碱有效部位的脂溶性特征，以有机溶媒从粗总碱中提取酚性碱得棕色膏状物；(4)将以有机溶媒提取的棕色膏状物经NaOH溶解，过滤除去难溶性的非酚性脂溶性杂质，酚性碱水溶液再加酸调节pH值，滤集析出物，干燥，得纯度高的浅黄色蝙蝠葛酚性碱。
在上述步骤中，从蝙蝠葛根茎粗粉中提取生物总碱的方法是酸水提取法，具体是以0.2％硫酸稀溶液以渗漉法滤取渗漉液；将含有生物总碱的提取液经NaOH碱化析出粗总碱沉淀的方法是使用10％NaOH碱化至pH8-8.5获得沉淀物粗总碱；从粗总碱中提取酚性碱所使用的有机溶媒是乙醇，具体是将粗总碱碾成60目左右细粉，以85-95％乙醇在水浴上回流提取，过滤，减压浓缩得棕色膏状物；从用有机溶媒提取的纯度较低的棕色膏状酚性碱中获得纯度高的浅黄色蝙蝠葛酚性碱产物的具体工艺步骤是将有机溶媒提取物加1％NaOH溶解，过滤，在搅拌下向过滤液加入10％H2SO4调PH8-8.5滤集沉淀物，水洗，50-55℃通风干燥后得高纯度淡黄色蝙蝠葛酚性碱。
蝙蝠葛酚性碱(PAMD)抗心肌缺血主要药效学实验结论1.异丙肾上腺素(Iso)增加心肌耗氧量所致大鼠心肌损伤的实验表明，PAMD能明显降低血清CK和LDH水平，提高血清中SOD活性及降低血清MDA水平，可减轻心肌组织病理损伤，其作用与地尔硫卓、地奥心血康作用相似。结果表明，PAMD对Iso所致大鼠心肌损伤具有保护作用，与其抗氧化及改善心肌代谢有关。
2.手术结扎阻断犬冠状动脉所致急性心肌缺血实验中，采用心电图ST段、酶学及定量组织学指标观察PAMD对犬急性心肌缺血的影响，并与DAXXK的抗心肌缺血作用相比较。结果表明，PAMD能对抗ST段上移及降低LDH和CK活性，并能降低心肌梗死范围。PAMD 7mg.kg-130min时，在对抗ST段上移及降低LDH活性上优于DAXXK 40mg.kg-1(P＜0.01)，降低CK活性的作用与DAXXK相当(P＞0.05)；高低剂量PAMD组降低梗死范围与DAXXK 40mg.kg-1组作用无显著差异(P＞0.05)。
3.在离体实验中PAMD对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。PAMD能促进LVSP、LVEDP和±dp/dtmax的恢复，增加冠脉流量、增强心肌SOD活性及降低MDA含量。PAMD对LVSP、LVEDP及±dp/dtmax影响及对心肌SOD、MDA含量变化与DAXXK比较无显著差异(P＞0.05)，PAMD组能增加冠脉流量，100mg·L-1组在3min时作用较DAXXK强(P＜0.05)。提示PAMD对离体大鼠缺血再灌注损伤具有保护作用。
4.通过观察PAMD对大鼠H/R损伤心肌细胞的影响，从分子细胞水平探讨了PAMD对心肌细胞的保护作用。结果表明，PAMD可减轻H/R造成的细胞超为结构的损伤，提高细胞存活率，减少损伤过程中能量消耗，降低细胞内钙含量。另外，PAMD可降低缺氧复氧引起的LDH漏出和细胞内氧化产物MDA的产生，减少心肌细胞NO的生成，使SOD的含量恢复至正常值。而PAMD对缺氧性损伤心肌细胞的保护作用随着给药浓度的提高而增强，具有浓度依赖性特征。
5.蝙蝠葛酚性碱对犬血流动力学及冠脉循环的影响。结果表明，①对血流动力学的影响PAMD能使犬LVSP、心率、总外周阻力均明显降低，而动脉血压、LVEDP、心输出量、+dp/dtmax、-dp/dtmax、左心作功、心脏指数变化则无显著性。②对冠脉循环的作用PAMD能使犬冠脉血流量增加，冠脉阻力降低。③对心肌氧代谢的影响PAMD能使犬心肌氧含量明显增加，氧利用率明显降低，然而动脉血氧含量和冠状窦血氧含量无明显变化。
从以上整体和离体心肌缺血实验中，用定量组织学、生理及生化观测指标的结果显示PAMD可保护缺血心肌，减少梗塞范围及损伤程度；调节冠脉循环、心脏功能及全身血流动力学状况；改善心肌氧及能量代谢，从而增加心肌供氧及减少耗氧量。PAMD同时具有抗氧化和防止钙超载的作用。总之，PAMD具有抗心肌缺血作用。
有关的具体实验及数据1.蝙蝠葛酚性碱对大鼠异丙肾上腺素心肌损伤的保护作用本实验旨在观察PAMD对异丙肾上腺素(Isoprenaline，ISO)诱发缺血心肌模型的保护作用及其与减轻脂质过氧化的关系，并与地尔硫卓、地奥心血康的抗心肌缺血作用进行比较。1.1材料和方法1.1.1材料、药品和主要试剂日本岛津8000型全自动生化分析仪，上海分析仪器厂721分光光度计。
PAMD粉剂，按本申请所述制备方法提取，临用前用0.1mol·L-1HCl溶解，再用0.1mol·L-1NaOH调pH至6.5-6.8。地尔硫卓原料药由天津田边制药有限公司提供，批号000315，地奥心血康原料药由成都地奥公司提供，批号98206，ISO原料药由上海大众药业有限公司提供，批号2000306。
乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase，LDH)、肌酸激酶(Creatine Kinase，CK)由北京中生生物工程部技术公司生产，超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒及丙二醛(Malondialdehyde，MDA)检测试剂盒均由南京聚力生物医学工程研究所生产。1.1.2实验分组及动物模型健康SD大鼠70只，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供，雌雄各半，体重266±12g，随机分为7组，每组10只。①ISO组参照文献方法建立心肌损伤模型[2]，皮下注射(sc)ISO 85mg·kg-1，并于30min前用与PAMD等容积的生理盐水(NS)灌胃(ig)。②③④PAMD保护组在注射ISO前30min给予PAMD灌胃，剂量分别为7.5mg·kg-1、15mg·kg-1、30mg·kg-1。⑤地尔硫卓保护组作为阳性西药对照组，注射ISO前30min给予地尔硫卓10mg·kg-1ig。⑥地奥心血康保护组作为阳性中药对照组，注射ISO前30min给予地奥心血康150mg·kg-1ig。⑦NS组为阴性对照组，分别ig和sc与PAMD和ISO等容积的NS。1.1.3血清酶学测定于皮下注射ISO后24小时从大鼠眼静脉取血，离心(2400×g)制得血清，应用日本岛津8000型全自动生化分析仪测定LDH和CK活性。1.1.4血清SOD活性及MDA含量测定按上述方法制备血清，采用亚硝酸盐形成法[Elster EF.Heupel A.Inhibition of nitric formationfrom hydroxylammoniumchloridea simple assay for superoxide dismutase[J].Anal Biochem，1976；70616]测定SOD活性；采用硫代巴比妥酸比色法(TBA)[向荣、王鼎年。过氧化脂质硫代巴比妥酸分光光度法的改进[J].生物化学与生物物理进展，1990；17241-242]定MDA含量。1.1.5心肌病理损伤分级处死后切取心脏，经4％甲醛固定及常规石蜡包埋后左室前壁取材作组织切片，HE染色，Olympus镜下观察，参照文献[朱接全，曾繁典，胡崇家。蝙蝠葛碱对猫冠脉结扎和复灌性心律失常的影响及电生理作用。中国药理学通报，1991；7(1)23.][王波、陈修。抗心肌缺血药实验方法述评[J]。药学通报，1987；22(10)583-585]将病理损伤程度分级0级为无病变正常心肌，1级为心内膜下局灶性心肌病变，I1级为大范围局灶性心肌病变，III级为大范围广泛融合性心肌病变。1.1.6统计学处理实验数据计量资料用x±s表示，进行组间t检验；等级资料用秩和检验进行组间比较。1.2 结果1.2.1 PAMD对血清LDH、CK的影响(表1-1)ISO组与NS组相比，血清LDH、CK活性明显升高(P＜0.01)，表明心肌受损后CK和LDH释放入血增加。地尔硫卓、DAXXK均能显著降低LDH、CK活性(P＜0.01)；PAMD能剂量依赖性地降低LDH、CK活性(P＜0.05和P＜0.01)，显著减轻ISO引起的血清酶学的升高。PAMD 15mg·kg-1和30mg·kg-1作用与地尔硫卓10mg·kg-1无显著性差异(P＞0.05)，PAMD30mg·kg-1作用优于DAXXK 150mg·kg-1(P＜0.05)表1-1 PAMD对ISO心肌损伤太鼠血清LDH、CK活性的影响(x±s，n＝10)组别LDH(U·L-1) CK(U·L-1)NS 967±253▲▲284±71▲▲ISO+NS 2127±538500±127ISO+PAMD 7.5mg·kg-11930±561△*465±123△*ISO+PAMD 15mg·kg-11637±458▲398±101▲ISO+PAMD 30mg·Kg-11335±384▲▲*337±83▲▲*ISO+Diltiazem10mg·kg-11429±384▲▲330±86▲▲ISO+DAXXK150mg·kg-11427±375▲▲354±91▲▲与ISO组比▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；与Diltiazem组比△P＜0.05；与DAXXK组比*P＜0.051.2.2 PAMD对血清SOD活性、MDA含量的影响(表1-2)ISO组与NS组相比，血清SOD活性明显降低，MDA含量明显升高(P＜0.01)。地尔硫卓、DAXXK均能显著提高SOD，降低MDA(P＜0.01)；PAMD 15mg·kg-1和30mg·kg-1均能显著提高SOD，降低MDA(P＜0.05和P＜0.01)。PAMD 15mg·kg-1、30mg·kg-1与地尔硫卓10mg·kg-1、DAXXK 150mg·kg-1对SOD的作用无统计学差异(P＞0.05)，PAMD 30mg·kg-1对MDA的作用优于DAXXK 150mg·kg-1(P＜0.05)。
表1-2 PAMD对ISO心肌损伤大鼠血清SOD活性、MDA含量影响(x±s，n＝10)组别SOD(NU·ml-1) MDA(Nm·ml-1)NS 122.5±31.3▲▲14.12±3.71▲▲ISO+NS 77.7±22.9 30.37±7.66ISO+PAMD 7.5mg·kg-187.0±23.4△*25.29±6.84△ISO+PAMD 15mg·kg-1101.7±25.6▲23.82±5.64▲ISO+PAMD 30mg·kg-1116.1±30.3▲▲21.48±6.51▲▲*ISO+Diltiazem 10mg·kg-1114.1±28.7▲▲19.42±4.86▲▲ISO+DAXXK 150mg·kg-1111.0±28.6▲▲22.97±5.83▲▲与ISO组比▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，▲▲▲P＜0.001；与Diltiazem组比△P＜0.05；与DAXXK组比*P＜0.051.2.3对心肌病理学分级的影响(表1-3)病理检查结果表明ISO组心肌损伤分级较NS组明显增加(P＜0.01)，而应用PAMD保护组心肌病变程度显著减轻，病理学分级较ISO组明显降低(P＜0.05与P＜0.01＝，PAMD与地尔硫卓、DAXXK相比作用无显著性差异(P＞0.05)。
表1-3 PAMD对ISO心肌损伤大鼠病理损伤程度的影响(n＝10)病理损伤分级组别P值*0级 I级 II级III级NS 91 00＜0.01ISO 00 37ISO+PAMD 7.5mg·kg-102 35ISO+PAMD 15mg·kg-104 33＜0.05ISO+PAMD 30mg·kg-104 42＜0.01ISO+Diltiazem 10mg·kg-102 44ISO±DAXXK 150mg·kg-10253＜0.01多组秩和检验*与ISO组相比1.3结论PAMD能明显降低血清CK和LDH水平，提高血清中SOD活性及降低血清MDA水平，可减轻心肌组织病理损伤，其作用与地尔硫卓、地奥心血康作用相似。结果表明，PAMD对Iso所致大鼠心肌损伤具有保护作用。2.蝙蝠葛酚性碱对犬冠状动脉结扎形成心肌梗死的保护作用2.1材料与方法2.1.1 材料、药品和主要试剂ECG-6511型心电图机，上海医用电子仪器厂生产；SC-3型人工呼吸机，上海医疗器械厂生产；日本岛津8000型全自动生化分析仪。
PAMD粉剂，按本申请所述方法提取，临用前用0.1mol·L-1HCl溶解，再用0.1mol·L-1NaOH调pH至6.5-6.8。地奥心血康原料药由成都地奥公司提供，批号98206。
乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase，LDH)、肌酸激酶(Creatine Kinase，CK)由北京中生生物工程部技术公司生产。硝基四氮唑蓝(NBT)由上海前进化学试剂厂生产。2.1.2实验动物分组及动物模型健康成年家犬30只，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供，雌雄不拘，体重15±2kg，随机分为5组，每组6只。戊巴比妥钠30mg·kg-1静脉麻醉后右侧卧位固定，气管插管，连接人工呼吸机。胸部去毛，沿左侧第四肋间隙开胸，暴露心脏，纵行切开心包，将心包缘缝于胸壁，做成摇篮状心包床，以固定心脏。分离冠状动脉左前降支第三分支根部并结扎。
实验动物分组①伪手术组(F)在左冠状动脉前降支下穿线但并不结扎，并术前90min给予与受试组等容积的生理盐水灌胃(ig)，其它各组均结扎。②③PAMD保护组在结扎前90min分别给予PAMD 3.5mg·kg-1、7mg·kg-1ig。④DAXXK保护组作为阳性中药对照组，结扎前90min给予DAXXK 40mg·kg-1ig。⑤模型对照组(NS)结扎前90min给予与受试组等容积的生理盐水。2.1.3 心电图的测定记录结扎前、结扎后15、30、60、120、180min II导心电图，分析ST段改变。2.1.4血清酶学测定在结扎前和完全结扎后15、30、60、120、180min从左侧颈外静脉插管采集冠脉窦附近血液制备血清，测血中LDH、CK活性。2.1.5测量心肌梗死范围实验结束取出心脏，除去血管及脂肪组织，称取全心重量，再沿冠状动脉沟除去心房，将心室称重后，横切成5片，然后将心肌片置于0.25％NBT染液中，振摇染色15分钟后取出，精确剪去被染色的非梗死心肌，将未染色的梗死心肌称重，计算梗死心肌占心室肌百分率，据此说明梗死范围大小。2.1.6 统计学处理实验数据用x±s表示，进行t检验。以结扎后不同时间实测值与结扎前进行比较，以药后不同时间变化百分率(药前为100％)进行组间比较。2.2 结果2.2.1 心电图ST段变化(表2-1)NS组与F组相比，犬冠状动脉结扎后15min始ST段上移，PAMD高低剂量组30min后均可显著对抗ST段上移(与NS组相比P＜0.01)，DAXXK 40mg·kg-1组120min后可明显对抗ST段上移(P＜0.01)，说明PAMD发挥作用较DAXXK早，但PAMD与DAXXK相比作用无统计学意义(P＞0.05)。
表2-1 PAMD对麻醉犬冠脉结扎前后心电图ST段移位的影响(x±s，n＝6) Unitmv结扎后组别 结扎前15min 30min 60min 120min180minNS 0 0007±0.07※0.10±0.06※※0.12±0.09※※0.13±0.09※※0.10±0.06※※F 0 0.01±0.02 0 0-0.01±0.01 -0.01±0.01PAMD 3.5mg·kg-10 0.04±0.14 -0.01±0.03■■-0.02±0.04■■-0.02±0.03■■0.002±0.01■■PAMD 7mg·kg-10 0.03±0.02 0.003±0.05■■-0.01±0.06■■-0.03 ±0.06■■-0.02±0.08■■DAXXK 40mg·kg-10 0.02±0.08 0.04±0.070.04±0.08 0.01±0.06■■-0.02±0.04■■与NS组比■P＜0.05，■■P＜0.01；与F组比※P＜0.05，※※P＜0.012.2.2 PAMD对血清酶学的影响冠脉结扎后NS组与F组相比，冠脉窦血清LDH活性明显升高，最大升高幅度为145±14％(P＜0.01)；PAMD组15min后即能剂量依赖地降低LDH活性(与NS组相比P＜0.05或P＜0.01)；DAXXK 40mg·kg-1组30min后始降低LDH活性(P＜0.05或P＜0.01)。PAMD7mg.kg-1在30min时作用优于DAXXK 40mg.kg-1(P＜0.05)，见表2-2。表2-2 PAMD对麻醉犬冠脉结扎前后血清LDH(U·L-1)的影响(x±s，n＝6)结扎后组别 结扎前15min 30min 60min 120min 180minNS 242±107297±140327±137322±136319±128347±146
％100 121±15 136±22 135±14 135±11145±14F 253±84 255±87 270±84 280±100298±94306±112％100 101±6■■108±10■■110±11■■118±6■■120±14■■PAMD 3.5mg·kg-1250±83 272±104294±105 293±81 302±92314±93％100 108±8■※117±6■※119±13■122±8■127±11■PAMD 7mg·kg-1282±87 286±104302±113 311±106339±116 358±131％100 101±9■■106±10■■*109±8■■119±9■125±8■■DAXXK 40mg·kg-1294±79 320±77 338±74 339±94 351±87363±80％100 110±9※117±10■116±8■■120±2■■125±10■■与NS组比■P＜0.05，■■P＜0.01；与F组比※P＜0.05；与DAXXK组比*P＜0.05NS组结扎犬冠脉后与F组相比，CK活性明显升高(P＜0.01)，180min时与结扎前相比有显著差异(P＞0.05)；PAMD组15min始降低CK活性(与NS组相比P＜0.05或P＜0.01)；DAXXK 40mg·kg-1组60min后始降低CK活性(P＜0.05或P＜0.01)。PAMD 7mg·kg-1作用与DAXXK 40mg·kg-1相当(P＞0.05)，见表2-3。
表2-3 PAMD对麻醉犬冠脉结扎前后血清CK(U·L-1)的影响(x±s，n＝6)结扎后组别 结扎前15min 30min60min120min 180minNS520±105 651±149 648±149 649±15 703±128□820±139□□％ 100125±12 124±6.9 125±9 136±11 159±11F 474±181 502±178 514±190 498±148 526±193 622±208％ 100107±8■■109±11■■108±9■■112±10■■133±14■■PAMD 3.5mg·kg-1497±128 527±138 564±139 567±149 613±161 753±190□％ 100114±4■※114±7■114±8■■123±6■※153±18※*PAMD7mg·kg-1493±127 535±111 553±138 571±166 589±154 666±160□％ 100110±7■■113±6■■115±6■119±5■■136±8■■DAXXK40mg·kg-1525±131 615±159 622±170 607±146 626±151 685±141□％ 100117±8※118±6※116±5■※119±5■■132±13■■与结扎前比□P＜0.05，□□P＜0.01；与NS组比■P＜005，■■P＜0.01；与F组比※P＜0.05；与DAXXK组比*P＜0.052.2.3 对心肌梗死范围的影响(表2-4)犬冠脉结扎引起心肌梗死后，心肌梗死区占心室及全心重量分别为12.07±2.96％和10.75±2.65％，与F组相比均显著提高(P＜0.01)。PAMD能降低梗死范围(P＜0.05或P＜0.01)，与DAXXK相比作用无统计学显著差异(P＞0.05)。
表2-4 PAMD对麻醉犬心肌梗死范围的影响(x±s，n＝6)组别 梗死区/心室(％) 梗死区/全心(％)NS12.07±2.96※※10.75±2.65※※F0 0PAMD 3.5mg·kg-18.22±2.12■7.38±1.96■PAMD 6.38±1.90■■5.81±1.79■■7mg·kg-1DAXXK 40mg·kg-16.72±1.90■■6.01±1.61■■与NS组比■P＜0.05，■■P＜0.01；与F组比※※P＜0.0012.3结论PAMD 7mg·kg-130min时，在对抗ST段上移及降低LDH活性上优于DAXXK 40mg·kg-1(P＜0.01)，降低CK活性的作用与DAXXK相当(P＞0.05)；高低剂量PAMD组降低梗死范围与DAXXK 40mg·kg-1组作用无显著差异(P＞0.05)。PAMD预防性给药对实验性心肌缺血有明显的保护作用。3. 酚性碱对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用3.1材料和方法3.1.1材料和药品PAMD粉剂，本室按本申请所述制备方法提取，临用前用0.1mol·L-1HCl溶解，再用0.1mol·L-1NaOH调pH至6.5-6.8。地奥心血康原料药由成都地奥公司提供，批号98206。超氧化歧化酶(SOD)检测试剂盒及丙二醛(Malondialdehyde，MDA)检测试剂盒均由南京聚力生物医学工程研究所生产。3.1.2 实验动物分组、操作步骤及测定指标体重300±10g♂Wistar大鼠60只，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。在戊巴比妥钠麻醉(45mg·kg-1i.p.)和肝素化(500 U·kg-1i.p.)后，迅速取出心脏置4℃KH液中并悬挂于Langendorff灌流装置上，以95％O2+5％CO2平衡的改良KH液恒温(37±0.5℃)恒压[7.84 Kpa(80cmH2O)]灌流，稳定灌注15分钟(预灌)后，随机分成6组，每组10只。①缺血再灌注模型(IR)组KH液灌流，缺血30分钟后再灌注40分钟。②正常对照(C)组KH液灌注70分钟。③④⑤PAMD保护组KH液内分别加PAMD 1、10、100mg·L-1，余同①组。⑥DAXXK保护组KH液内分别加DAXXK 100mg·L-1，余同①组。改良KH液成分(mmol·L-1)NaCl 118，KCl 4.7，MgSO41.2，CaCl21，KH2PO41.2，NaHCO325，Glucose 11.1，Na2EDTA 0.5，pH 7.35-7.45。3.1.3左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)及左室压最大变化速率(±dp/dtmax)将与SJ-42型多道生理记录仪相连的导管经左心耳切口插入至左心室，记录预灌末及再灌注30min时的LVSP、LVEDP及±dp/atmax。3.1.4 冠脉流量量筒收集在缺血前5min及再灌注1、3、5、10、15、20min时冠脉流出液以测定冠脉流量(CF)。3.1.5 心肌组织SOD活性及MDA含量心脏灌注末，称取湿重，剪取心尖组织约0.2g，制成10％匀浆，采用亚硝酸盐形成法[4]，按照南京聚力生物医学工程研究所试剂盒说明书测定SOD活性；采用硫代巴比妥酸比色法(TBA)[5]，按照南京聚力生物医学工程研究所试剂盒说明书测定MDA含量。3.1.6 统计学处理所有数据均以均数±标准差(x±s)表示，进行t检验。3.2结果3.2.1 LVSP、LVEDP及±dp/dtmax变化(表3-1)PAMD组能促进LVSP、LVEDP及±dp/dtmax恢复。PAMD100mg·L-1组在缺血再灌注末LVSP、+dp/dtmax和-dp/dtmax分别降为预灌末值的68±8％、73±5％和58±5％，LVEDP升至预灌末值的49±8％，与IR组相比有显著差异(P＜0.05)，与DAXXK组作用无统计学意义(P＜0.05)。3.2.2 冠脉流量变化(表3-2)PAMD组能增加冠脉流量，100mg·L-1组在3min时作用较DAXXK强(P＜0.05)
表3-1 PAMD对离体大鼠心肌缺血再灌注时LVSP、LVEDP及±dp/dtmax的影响(x±s，n＝10)组别 LVSP(kPa) LVEDP(kPa)+dp/dtmax(kPa/s) -dp/dtmax(kPa/s)(mg·L-1) 缺血前再灌注30min 缺血前 再灌注30min 缺血前 再灌注30min缺血前再灌注30minC 11.99±1.30 11.94±1.31▲▲0.11±0.04 0.11±0.03▲▲316.7±74.2316.3±74.1▲▲206.1±47.2206.4±46.3▲▲IR12.36±1.24 4.44±0.50 0.13±0.07 0.55±0.26 338.5±79.0134.8±25.2 258.8±66.6105.0±20.1PAMD1 12.57±0.73 4.73±0.43**0.16±0.06 0.69±0.33**349.9±73.0147.7±31.2**263.5±72.3115.8±27.0**PAMD 10 13.09±1.17 6.30±1.18▲▲**0.17±0.05 0.67±0.22**385.3±100.1 204.4±72.2▲▲295.3±63.3151.9±53.6▲▲PAMD 100 12.72±1.31 8.68±0.97▲▲0.17±0.05 0.37±0.12▲370.7±94.7270.6±71.8▲▲278.9±72.2197.9±48.9▲▲DAXXK 100 12.28±0.86 8.33±0.80▲▲0.14±0.07 0.35±0.19▲▲321.0±92.6223.2±68.5▲▲244.7±67.7174.6±51.8▲▲与IR组相比▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，与DAXXK组相比**P＜0.01
表3-2 PAMD对离体大鼠心肌缺血再灌注时冠脉流量的影响(x±s，n＝10)组别 再灌注缺血前(mg·L-1) 1min3min 5min10min15min 20min 30minC 6.50±1.70 6.44±1.72▲▲6.47±1.71▲▲6.42±1.72▲▲6.38±1.75▲▲6.35±1.76▲▲6.30±1.78▲▲6.30±1.74▲▲IR6.12±1.59 1.33±0.341.39±0.30 1.37±0.34 1.38±0.33 1.38±0.25 1.36±0.33 1.34±0.34PAMD 16.05±1.51 1.51±0.271.68±0.27▲**1.68±0.29▲**1.58±0.27**1.62±0.27▲**1.57±0.25**1.56±0.29**PAMD 10 5.71±1.47 1.65±0.50*2.66±0.57▲▲2.42±0.57▲▲**2.19±0.51▲▲**2.12±0.49▲▲*1.94±0.50▲▲**1.81±0.49▲*PAMD 100 6.03±1.49 1.61±0.553.39±0.96▲▲*3.14±0.92▲▲2.75±0.65▲▲2.51±0.66▲▲2.37±0.65▲▲2.06±0.52▲▲DAXXK 100 6.38±1.70 1.29±0.352.62±0.79▲▲3.36±0.77▲▲3.11±0.75▲▲2.74±0.67▲▲2.68±0.66▲▲2.48±0.68▲▲与IR组相比▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，与DAXXK组相比*P＜0.05，**P＜0.01
3.2.3 心肌SOD、MDA含量变化(表3-3)IR组心肌SOD活性较C组明显降低(P＜0.01)，MDA含量明显增高(P＜0.001)，给予PAMD可增强心肌SOD活性，降低MDA含量。100mg·L-1组与IR组比较有显著性差异(P＜0.01或P＜0.001)，与DAXXK100mg·L-1无显著差异(P＞0.05)。表3-3 PAMD对离体大鼠心肌缺血再灌注时心肌SOD活性及MDA含量的影响(x±s，n＝10)组别(mg·L-1) SOD活性(×10Nu/g干重) MDA含量(×10nmol/g干重)C 375±46▲▲3.11±0.85▲▲▲IR283±97 5.98±1.12PAMD1 312±67 4.96±0.66▲PAMD10360±64▲3.70±1.07▲▲▲PAMD100 394±67▲▲3.59±1.00▲▲▲DAXXK 100 358±43▲3.71±1.03▲▲▲与IR组相比▲P＜0.05，▲▲P＜0.013.3 结论PAMD能促进LVSP、LVEDP和±dp/dtmax的恢复，增加冠脉流量、增强心肌SOD活性及降低MDA含量。显示PAMD对离体大鼠缺血再灌注损伤具有保护作用。
按顺序关机。箱体内充盈氮气，密闭皮塞，然后开启前箱体大门，逐盒取出，迅速充氮气、密塞，加铝盖锁口、包装。辅料在药剂中的作用为氨基乙酸 氨基乙酸有增溶和稳定pH作用。
甘露醇为冻干品骨架支撑剂。
权利要求
1.蝙蝠葛酚性碱在制备抗心肌缺血药物中的应用。
2.按以下方法制备的蝙蝠葛酚性碱在制备抗心肌缺血药物中的应用(1)从蝙蝠葛根茎粗粉中提取总生物碱；(2)含有生物总碱的提取液经NaOH碱化析出粗总碱沉淀；(3)利用酚性碱有效部位的脂溶性特征，以有机溶媒从粗总碱中提取酚性碱得棕色膏状物；(4)将上述以有机溶媒提取的棕色膏状物经NaOH溶解，过滤除去难溶性的非酚性脂溶性杂质，酚性碱水溶液再加酸调节pH值，滤集析出物，干燥，得纯度高的浅黄色蝙蝠葛酚性碱。
3.根据权利要求2所述的蝙蝠葛酚性碱在制备抗心肌缺血药物中的应用，其特征在于所说的从蝙蝠葛根茎粗粉中提取生物总碱的方法是酸水提取法。
4.根据权利要求2或3所述的蝙蝠葛酚性碱在制备抗心肌缺血药物中的应用，其特征在于所说的将含有生物总碱的提取液经NaOH碱化析出粗总碱沉淀的方法是使用10％NaOH碱化至pH8-8.5，获得沉淀物粗总碱。
5.根据权利要求2或3所述的蝙蝠葛酚性碱在制备抗心肌缺血药物中的应用，其特征在于从粗总碱中提取酚性碱所使用的有机溶媒是乙醇。
6.根据权利要求4所述的蝙蝠葛酚性碱在制备抗心肌缺血药物中的应用，其特征在于从粗总碱中提取酚性碱所使用的有机溶媒是乙醇。
7.根据权利要求2或3或6所述的蝙蝠葛酚性碱在制备抗心肌缺血药物中的应用，其特征在于从用有机溶媒提取的纯度较低的棕色膏状酚性碱中获得纯度高的浅黄色蝙蝠葛酚性碱产物的具体工艺步骤是将有机溶媒提取物加1％NaOH溶解，过滤，在搅拌下向过滤溶液入10％H2SO4调PH8-8.5滤集沉淀物，水洗，50-55℃通风干燥，得高纯度淡黄色蝙蝠葛酚性碱。
8.根据权利要求4所述的蝙蝠葛酚性碱在制备抗心肌缺血药物中的应用，其特征在于从用有机溶媒提取的纯度较低的棕色膏状酚性碱中获得纯度高的浅黄色蝙蝠葛酚性碱产物的具体工艺步骤是将有机溶媒提取物加1％NaOH溶解，过滤，在搅拌下向过滤溶液入10％H2SO4调PH8-8.5滤集沉淀物，水洗，50-55℃通风干燥，得高纯度淡黄色蝙蝠葛酚性碱。
9.根据权利要求5所述的蝙蝠葛酚性碱在制备抗心肌缺血药物中的应用，其特征在于从以有机溶媒提取的纯度较低的棕色膏状酚性碱中获得纯度高的浅黄色蝙蝠葛酚性碱产物的具体工艺步骤是将有机溶媒提取物加1％NaOH溶解，过滤，在搅拌下向过滤溶液入10％H2SO4调PH8-8.5滤集沉淀物，水洗，50-55℃通风干燥，得高纯度淡黄色蝙蝠葛酚性碱。
10.以蝙蝠葛酚性碱为活性成分的药物制剂在制备抗心肌缺血药物中的应用。
全文摘要
本发明的任务是提供蝙蝠葛酚性碱新的医疗用途，即在制备用于治疗心肌缺血药物中的应用。本发明应用的蝙蝠葛酚性碱是从防己科植物蝙蝠葛的根茎中提取的酚性生物碱。整体和离体心肌缺血实验显示，蝙蝠葛酚性碱可保护缺血心肌，减少梗塞范围及损伤程度，调节冠脉循环、心脏功能及全身血流动力学状况，改善心肌氧及能量代谢，从而增加心肌供氧及减少耗氧量，同时具有抗氧化和防止钙超载的作用，揭示蝙蝠葛酚性碱具有抗心肌缺血作用。
文档编号C07D217/00GK1458149SQ02115870
公开日2003年11月26日 申请日期2002年5月18日 优先权日2002年5月18日
发明者胡崇家, 曾繁典, 龚培力, 杜佐华, 潘锡平 申请人:伊春药业有限公司