专利名称：抗-磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种抗-磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体，一种含有该抗体作为活性成分的细胞生长抑制剂和抗癌药物。相关技术描述磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)是存在于细胞表面上的硫酸乙酰肝素蛋白多糖的磷脂酰肌醇蛋白聚糖家族中的一种。一些人认为GPC3可能与发育中的细胞分裂或癌细胞生长有关，然而，其功能目前仍没有得以较好的阐明。人们已发现某种类型的结合于GPC3的抗体通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)活性以及补体-依赖的细胞毒性(CDC)活性具有细胞生长-抑制活性(国际专利申请TO 2003/000883)。此外，已表明GPC3在体内裂解并以GPC3的分泌形式分泌到血液中，且利用能够检测分泌形式GPC3的抗体可以进行肿瘤诊断(国际专利申请W02004/022739，WO 03/100429 和 WO 2004/018667)。当开发基于抗体的细胞毒性活性的抗癌药物时，优选使用具有高ADCC活性或CDC活性的抗体。因此，具有高细胞毒性活性的GPC3抗体已被期待作为识别GPC3的抗体。本发明的目的是提供一种与传统抗体相比具有较高ADCC活性和CDC活性的抗-GPC3抗体。发明概述本发明人成功获得了与常规的抗-磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体相比具有较高细胞毒性活性的抗体。此外,他们分析了这种抗体的表位并成功确定了由具有高细胞毒性活性的抗体识别的GPC 3上的区域。一方面，本发明提供了含有具有下述(1)-(12)任一项的⑶Rs 1，2和3的重链可变区的抗体(I)含有SEQ ID NO :123所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :124所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :125所示氨基酸序列的⑶R3 ；(2)含有SEQ ID NO :109所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :110所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :111所示氨基酸序列的⑶R3 ；(3)含有SEQ ID NO :106所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :107所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :108所示氨基酸序列的⑶R3 ；(4)含有SEQ ID NO :132所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :133所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :134所示氨基酸序列的⑶R3 ；(5)含有SEQ ID NO :106所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :135所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :136所示氨基酸序列的⑶R3 ；
(6)含有SEQ ID NO :126所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :127所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :128所示氨基酸序列的⑶R3 ；(7)含有SEQ ID NO :129所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :130所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :131所示氨基酸序列的⑶R3 ；(8)含有SEQ ID NO :103所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :104所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :105所示氨基酸序列的⑶R3 ；(9)含有SEQ ID NO :118所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :121所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :122所示氨基酸序列的⑶R3 ；(10)含有SEQ ID NO : 115所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :116所示 氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :117所示氨基酸序列的⑶R3 ；(11)含有SEQ ID NO : 112所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :113所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :114所示氨基酸序列的⑶R3 ;或(12)含有SEQ ID NO : 118所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :119所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :120所示氨基酸序列的⑶R3 ；在另一个方面，本发明提供了含有具有如下(1)-(13)任一项的⑶Rs 1，2和3的轻链可变区的抗体(I)含有SEQ ID NO :143所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的⑶R3 ；(2)含有SEQ ID NO :143所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :145所示氨基酸序列的⑶R3 ；(3)含有SEQ ID NO :140所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :141所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :142所示氨基酸序列的⑶R3 ；(4)含有SEQ ID NO :167所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :168所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :169所示氨基酸序列的⑶R3 ；(5)含有SEQ ID NO :170所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :171所示氨基酸序列的⑶R3 ；(6)含有SEQ ID NO :159所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :160所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO 161所示氨基酸序列的⑶R3 ；(7)含有SEQ ID NO :162所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :147所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :163所示氨基酸序列的⑶R3 ；(8)含有SEQ ID NO :164所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :165所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :166所示氨基酸序列的⑶R3 ；(9)含有SEQ ID NO :137所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :138所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :139所示氨基酸序列的⑶R3 ；(10)含有SEQ ID NO : 155所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :156所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :157所示氨基酸序列的⑶R3 ；(11)含有SEQ ID NO : 149所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :150所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :151所示氨基酸序列的⑶R3 ；(12)含有SEQ ID NO : 146所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :147所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :148所示氨基酸序列的⑶R3 ;或(13)含有SEQ ID NO : 152所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :153所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :154所示氨基酸序列的⑶R3 ；优选地，本发明的抗体选自如下(1)-(13)的任一项(I)包括具有分别含有SEQ ID NO :123，124和125所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO: 143，144和158所示氨基酸序列的⑶Rs 1,2和3的轻链可变区的抗体；(2)包括具有分别含有SEQ ID NO 109, 110和111所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO: 143，144和145所示氨基酸序列的⑶Rs 1,2和3的轻链可变区的抗体；
(3)包括具有分别含有SEQ ID NO 106, 107和108所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO: 140，141和142所示氨基酸序列的⑶Rs 1,2和3的轻链可变区的抗体；(4)包括具有分别含有SEQ ID NO :132，133和134所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO : 167，168和169所示氨基酸序列的⑶Rs 1,2和3的轻链可变区的抗体；(5)包括具有分别含有SEQ ID NO :106，135和136所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO :170，144和171所示氨基酸序列的⑶Rs 1,2和3的轻链可变区的抗体；(6)包括具有分别含有SEQ ID NO :126，127和128所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO :159，160和161所示氨基酸序列的⑶Rs 1,2和3的轻链可变区的抗体；(7)包括具有分别含有SEQ ID NO :129，130和131所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO: 162，147和163所示氨基酸序列的⑶Rs 1,2和3的轻链可变区的抗体；(8)包括具有分别含有SEQ ID NO :129，130和131所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO : 164，165和166所示氨基酸序列的⑶Rs 1,2和3的轻链可变区的抗体；(9)包括具有分别含有SEQ ID NO 103, 104和105所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO :137，138和139所示氨基酸序列的⑶Rs 1,2和3的轻链可变区的抗体；(10)包括具有分别含有SEQ ID NO :118，121和122所示氨基酸序列的CDRs I, 2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO 155,156和157所示氨基酸序列的⑶Rs1，2和3的轻链可变区的抗体；(11)包括具有分别含有SEQ ID NO :115，116和117所示氨基酸序列的CDRs I, 2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO 149,150和151所示氨基酸序列的⑶Rs1，2和3的轻链可变区的抗体；(12)包括具有分别含有SEQ ID NO :112，113和114所示氨基酸序列的CDRs I, 2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO 146,147和148所示氨基酸序列的⑶Rs1，2和3的轻链可变区的抗体；(13)包括具有分别含有SEQ ID NO :118，119和120所示氨基酸序列的CDRs I, 2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO 152,153和154所示氨基酸序列的⑶Rs1，2和3的轻链可变区的抗体；在另一个方面，本发明提供了含有具有如下(1)-(7)任一项的重链可变区的抗体(I)包括SEQ ID NO 84所示氨基酸序列的重链可变区；(2)包括SEQ ID NO 85所示氨基酸序列的重链可变区；(3)包括SEQ ID NO 86所示氨基酸序列的重链可变区；(4)包括SEQ ID NO 87所示氨基酸序列的重链可变区；(5)包括SEQ ID NO 88所示氨基酸序列的重链可变区；(6)包括SEQ ID NO 89所示氨基酸序列的重链可变区；或(7)包括SEQ ID NO 90所示氨基酸序列的重链可变区。在另一个方面，本发明提供了具有包含SEQ ID NO :92所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体。优选地，本发明的抗体选自如下(1)-(7)任一项的抗体 (I)包括含有SEQ ID NO 84所示氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO 92所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体；(2)包括含有SEQ ID NO 85所示氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO 92所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体；(3)包括含有SEQ ID NO :86所示氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:92所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体；(4)包括含有SEQ ID NO :87所示氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:92所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体；(5)包括含有SEQ ID NO :88所示氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:92所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体；(6)包括含有SEQ ID NO :89所示氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:92所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体；以及(7)包括含有SEQ ID NO :90所示氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:92所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体。在另一个方面，本发明提供了含有具有如下(1)-(15)任一项的⑶Rs 1，2和3的轻链可变区的抗体(I)含有SEQ ID NO :174所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的⑶R3 ；(I)含有SEQ ID NO :175所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的⑶R3 ；(3)含有SEQ ID NO :176所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的⑶R3 ；(4)含有SEQ ID NO :177所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的⑶R3 ；(5)含有SEQ ID NO :178所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的⑶R3 ；(6)含有SEQ ID NO :179所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的⑶R3 ；(7)含有SEQ ID NO :180所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的⑶R3 ；(8)含有SEQ ID NO :181所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的⑶R3 ；(9)含有SEQ ID NO :182所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的⑶R3 ； (10)含有SEQ ID NO : 183所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的⑶R3 ；(11)含有SEQ ID NO :184所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的⑶R3 ；(12)含有SEQ ID NO :185所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的⑶R3 ；(13)含有SEQ ID NO : 186所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的⑶R3 ；(14)含有SEQ ID NO : 187所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的⑶R3 ;或(15)含有SEQ ID NO : 188所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的⑶R3。在另一个方面，本发明提供了选自抗体如下(1)-(15)的抗体(I)包括具有分别含有SEQ ID NO :123，124和125所示氨基酸序列的⑶Rs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO: 174，144和158所示氨基酸序列的⑶Rs 1,2和3的轻链可变区的抗体；(2)包括具有分别含有SEQ ID NO :123，124和125所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO: 175，144和158所示氨基酸序列的⑶Rs 1,2和3的轻链可变区的抗体；(3)包括具有分别含有SEQ ID NO :123，124和125所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO: 176，144和158所示氨基酸序列的⑶Rs 1,2和3的轻链可变区的抗体；(4)包括具有分别含有SEQ ID NO :123，124和125所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO: 177，144和158所示氨基酸序列的⑶Rs 1,2和3的轻链可变区的抗体；(5)包括具有分别含有SEQ ID NO :123，124和125所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO: 178，144和158所示氨基酸序列的⑶Rs 1,2和3的轻链可变区的抗体；
(6)包括具有分别含有SEQ ID NO :123，124和125所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO: 179，144和158所示氨基酸序列的⑶Rs 1,2和3的轻链可变区的抗体；(7)包括具有分别含有SEQ ID NO :123，124和125所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO: 180，144和158所示氨基酸序列的⑶Rs 1,2和3的轻链可变区的抗体；(8)包括具有分别含有SEQ ID NO :123，124和125所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO: 181，144和158所示氨基酸序列的⑶Rs 1,2和3的轻链可变区的抗体； (9)包括具有分别含有SEQ ID NO :123，124和125所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO: 182，144和159所示氨基酸序列的⑶Rs 1,2和3的轻链可变区的抗体；(10)包括具有分别含有SEQ ID NO :123，124和125所示氨基酸序列的CDRs I, 2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO 183,144和158所示氨基酸序列的⑶Rs1，2和3的轻链可变区的抗体；(11)包括具有分别含有SEQ ID NO :123，124和125所示氨基酸序列的CDRs I, 2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO 184,144和158所示氨基酸序列的⑶Rs1，2和3的轻链可变区的抗体；(12)包括具有分别含有SEQ ID NO :123，124和125所示氨基酸序列的CDRs I, 2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO 185,144和158所示氨基酸序列的⑶Rs1，2和3的轻链可变区的抗体；(13)包括具有分别含有SEQ ID NO :123，124和125所示氨基酸序列的CDRs I, 2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO 186,144和158所示氨基酸序列的⑶Rs1，2和3的轻链可变区的抗体；(14)包括具有分别含有SEQ ID NO :123，124和125所示氨基酸序列的CDRs I, 2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO 187,144和158所示氨基酸序列的⑶Rs1，2和3的轻链可变区的抗体；和(15)包括具有分别含有SEQ ID NO :123，124和125所示氨基酸序列的CDRs I, 2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO 188,144和158所示氨基酸序列的⑶Rs1，2和3的轻链可变区的抗体。在另一方面，本发明提供了具有选自如下(1)-(15)的轻链可变区的抗体(I)含有SEQ ID NO :191所示氨基酸序列的轻链可变区；(2)含有SEQ ID NO :192所示氨基酸序列的轻链可变区；(3)含有SEQ ID NO :193所示氨基酸序列的轻链可变区；(4)含有SEQ ID NO :194所示氨基酸序列的轻链可变区；(5)含有SEQ ID NO :195所示氨基酸序列的轻链可变区；(6)含有SEQ ID NO :196所示氨基酸序列的轻链可变区；(7)含有SEQ ID NO :197所示氨基酸序列的轻链可变区；(8)含有SEQ ID NO :198所示氨基酸序列的轻链可变区；
(9)含有SEQ ID NO :199所示氨基酸序列的轻链可变区；(10)含有SEQ ID NO :200所示氨基酸序列的轻链可变区；(11)含有SEQ ID NO :201所示氨基酸序列的轻链可变区；(12)含有SEQ ID NO :202所示氨基酸序列的轻链可变区；(13)含有SEQ ID NO :203所示氨基酸序列的轻链可变区；(14)含有SEQ ID NO :204所示氨基酸序列的轻链可变 区；和(15)含有SEQ ID NO :205所示氨基酸序列的轻链可变区。在另一个方面，本发明提供了具有选自如下(1)-(15)的轻链可变区以及选自如下(1)-(7)的重链可变区的抗体其中所述轻链可变区选自(I)含有SEQ ID NO :191所示氨基酸序列的轻链可变区；(2)含有SEQ ID NO :192所示氨基酸序列的轻链可变区；(3)含有SEQ ID NO :193所示氨基酸序列的轻链可变区；(4)含有SEQ ID NO :194所示氨基酸序列的轻链可变区；(5)含有SEQ ID NO :195所示氨基酸序列的轻链可变区；(6)含有SEQ ID NO :196所示氨基酸序列的轻链可变区；(7)含有SEQ ID NO :197所示氨基酸序列的轻链可变区；(8)含有SEQ ID NO :198所示氨基酸序列的轻链可变区；(9)含有SEQ ID NO :199所示氨基酸序列的轻链可变区；(10)含有SEQ ID NO :200所示氨基酸序列的轻链可变区；(11)含有SEQ ID NO :201所示氨基酸序列的轻链可变区；(12)含有SEQ ID NO :202所示氨基酸序列的轻链可变区；(13)含有SEQ ID NO :203所示氨基酸序列的轻链可变区；(14)含有SEQ ID NO :204所示氨基酸序列的轻链可变区；和(15)含有SEQ ID NO :205所示氨基酸序列的轻链可变区；其中所述重链可变区选自(I)包括SEQ ID NO 84所示氨基酸序列的重链可变区；(2)包括SEQ ID NO 85所示氨基酸序列的重链可变区；(3)包括SEQ ID NO 86所示氨基酸序列的重链可变区；(4)包括SEQ ID NO 87所示氨基酸序列的重链可变区；(5)包括SEQ ID NO 88所示氨基酸序列的重链可变区；(6)包括SEQ ID NO 89所示氨基酸序列的重链可变区；和(7)包括SEQ ID NO 90所示氨基酸序列的重链可变区。⑶Rsl，2和3的重链可变区，轻链可变区和氨基酸序列，以及SEQ ID NOs概括在下表中。
权利要求
1.包括具有如下(1)-(12)任一项的⑶Rs1，2和3的重链可变区的抗体 (1)含有SEQID NO :123所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :124所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :125所示氨基酸序列的CDR3 ； (2)含有SEQID NO :109所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :110所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :111所示氨基酸序列的⑶R3 ； (3)含有SEQID NO :106所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :107所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :108所示氨基酸序列的CDR3 ； (4)含有SEQID NO :132所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :133所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :134所示氨基酸序列的CDR3 ； (5)含有SEQID NO :106所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :135所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :136所示氨基酸序列的CDR3 ； (6)含有SEQID NO :126所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :127所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :128所示氨基酸序列的CDR3 ； (7)含有SEQID NO :129所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :130所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :131所示氨基酸序列的CDR3 ； (8)含有SEQID NO :103所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :104所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :105所示氨基酸序列的CDR3 ； (9)含有SEQID NO :118所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :121所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :122所示氨基酸序列的CDR3 ； (10)含有SEQID NO :115所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO:116所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :117所示氨基酸序列的CDR3 ； (11)含有SEQID NO :112所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :113所示氨基酸序列的⑶R2，以及含有SEQ ID NO :114所示氨基酸序列的⑶R3 ;或 (12)含有SEQID NO :118所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO:119所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :120所示氨基酸序列的CDR3。
2.包括具有如下(1)-(13)任一项的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体 (1)含有SEQID NO :143所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的CDR3 ； (2)含有SEQID NO :143所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :145所示氨基酸序列的CDR3 ； (3)含有SEQID NO :140所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :141所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :142所示氨基酸序列的CDR3 ； (4)含有SEQID NO :167所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :168所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :169所示氨基酸序列的CDR3 ； (5)含有SEQID NO :170所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :171所示氨基酸序列的CDR3 ； (6)含有SEQID NO :159所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :160所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :161所示氨基酸序列的CDR3 ；(7)含有SEQID NO :162所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :147所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :163所示氨基酸序列的CDR3 ； (8)含有SEQID NO :164所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :165所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :166所示氨基酸序列的CDR3 ； (9)含有SEQID NO :137所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :138所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :139所示氨基酸序列的CDR3 ； (10)含有SEQID NO :155所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :156所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :157所示氨基酸序列的CDR3 ； (11)含有SEQID NO :149所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :150所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :151所示氨基酸序列的CDR3 ； (12)含有SEQID NO :146所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :147所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :148所示氨基酸序列的CDR3 ;或 (13)含有SEQID NO :152所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :153所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :154所示氨基酸序列的CDR3。
3.选自如下(1)-(13)任一项的抗体 (1)包括具有分别含有SEQID NO: 123，124和125所示氨基酸序列的⑶Rs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO: 143，144和158所示氨基酸序列的⑶Rs 1，2和3的轻链可变区的抗体； (2)包括具有分别含有SEQID NO : 109，110和111所示氨基酸序列的⑶Rs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO 143,144和145所示氨基酸序列的⑶Rs I, 2和3的轻链可变区的抗体； (3)包括具有分别含有SEQID NO 106, 107和108所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO 140,141和142所示氨基酸序列的⑶Rs I, 2和3的轻链可变区的抗体； (4)包括具有分别含有SEQID NO: 132，133和134所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO: 167，168和169所示氨基酸序列的⑶Rs 1，2和3的轻链可变区的抗体； (5)包括具有分别含有SEQID NO 106, 135和136所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO 170,144和171所示氨基酸序列的⑶Rs I, 2和3的轻链可变区的抗体； (6)包括具有分别含有SEQID NO 126, 127和128所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO 159,160和161所示氨基酸序列的⑶Rs I, 2和3的轻链可变区的抗体； (7)包括具有分别含有SEQID NO: 129，130和131所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO: 162，147和163所示氨基酸序列的⑶Rs 1，2和3的轻链可变区的抗体； (8)包括具有分别含有SEQID NO : 129，130和131所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO 164,165和166所示氨基酸序列的⑶Rs I, 2和3的轻链可变区的抗体； (9)包括具有分别含有SEQID NO 103, 104和105所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO :137，138和139所示氨基酸序列的⑶Rs 1，2和3的轻链可变区的抗体； (10)包括具有分别含有SEQID NO 118, 121和122所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及 具有分别含有SEQ ID NO :155，156和157所示氨基酸序列的⑶Rs 1,2和3的轻链可变区的抗体； (11)包括具有分别含有SEQID NO 115, 116和117所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO :149，150和151所示氨基酸序列的⑶Rs 1,2和3的轻链可变区的抗体； (12)包括具有分别含有SEQID NO 112, 113和114所示氨基酸序列的CDR s 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO: 146，147和148所示氨基酸序列的⑶Rs 1,2和3的轻链可变区的抗体； (13)包括具有分别含有SEQID NO 118, 119和120所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO :152，153和154所示氨基酸序列的⑶Rs 1,2和3的轻链可变区的抗体。
4.具有如下(1)-(7)任一项的重链可变区的抗体 (1)包括SEQID NO :84所示氨基酸序列的重链可变区； (2)包括SEQID NO :85所示氨基酸序列的重链可变区； (3)包括SEQID NO :86所示氨基酸序列的重链可变区； (4)包括SEQID NO :87所示氨基酸序列的重链可变区； (5)包括SEQID NO :88所示氨基酸序列的重链可变区； (6)包括SEQID NO :89所示氨基酸序列的重链可变区；或 (7)包括SEQID NO :90所示氨基酸序列的重链可变区。
5.具有含有SEQID NO :92所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体。
6.选自如下(1)-(7)任一项的抗体 (1)包括含有SEQID NO :84所示氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO :92所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体； (2)包括含有SEQID NO :85所示氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:92所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体； (3)包括含有SEQID NO :86所示氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:92所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体； (4)包括含有SEQID NO :87所示氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:92所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体； (5)包括含有SEQID NO :88所示氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:92所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体； (6)包括含有SEQID NO :89所示氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:92所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体；和 (7)包括含有SEQID NO :90所示氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQ ID NO:92所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体。
7.具有相当于权利要求1-6任一项的抗体的活性的抗体,其中权利要求1-6任一项所示氨基酸序列中的一或多个氨基酸残基被取代、缺失或添加和/或插入。
8.权利要求1-7任一项的抗体，其是人源化抗体。
9.能够结合于磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的人源化抗体。
10.能够结合于含有磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的氨基酸残基524-563序列的肽的抗体。
11.能够结合于含有磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的氨基酸残基537-563序列的肽的抗体。
12.权利要求10或11所述的抗体，其不结合于含有磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的氨基酸残基550-563序列的肽。
13.能够结合于含有磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的氨基酸残基544-553序列的肽的抗体。
14.能够结合于含有磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的氨基酸残基546-551序列的肽的抗体。
15.权利要求9-14任一项的抗体，其是人源化抗体。
16.能够结合于与第二抗体能够结合的表位的抗体，其中所述第二抗体包括具有分别含有SEQ ID NO 123, 124和125所示氨基酸序列的⑶Rs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO 143,144和158所示氨基酸序列的⑶Rs 1，2和3的轻链可变区。
17.能够结合于磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的抗体，其具有抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3表达细胞的高⑶C活性。
18.能够结合于磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的抗体，其具有抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3表达细胞的高ADCC活性。
19.编码权利要求1-18任一项所述抗体的重链可变区或轻链可变区的多核苷酸。
20.权利要求18所述的多核苷酸，具有SEQID NOs :11-21, 33-43，55-59，65-70和77-83所示的序列。
21.含有权利要求1-18任一项所述抗体作为活性成分的细胞-生长抑制剂。
22.含有权利要求1-18任一项所述抗体作为活性成分的抗癌药物。
23.权利要求22所述的抗癌药物，用于治疗肝细胞瘤。
24.含有磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的氨基酸残基524-563的氨基酸序列的肽。
25.含有磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的氨基酸残基537-563的氨基酸序列的肽。
26.含有磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的氨基酸残基544-553的氨基酸序列的肽。
27.含有磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的氨基酸残基546-551的氨基酸序列的肽。
28.包括具有如下(1)-(15)任一项的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体 (1)含有SEQID NO :174所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的CDR3 ； (2)含有SEQID NO :175所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的CDR3 ； (3)含有SEQID NO :176所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的CDR3 ； (4)含有SEQID NO :177所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的CDR3 ； (5)含有SEQID NO :178所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的CDR3 ； (6)含有SEQID NO :179所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的CDR3 ； (7)含有SEQID NO :180所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的CDR3 ； (8)含有SEQID NO :181所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的CDR3 ； (9)含有SEQID NO :182所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的CDR3 ； (10)含有SEQID NO :183所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的CDR3 ； (11)含有SEQID NO :184所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的CDR3 ； (12)含有SEQID NO :185所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的CDR3 ； (13)含有SEQID NO :186所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的CDR3 ； (14)含有SEQID NO :187所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的CDR3 ； (15)含有SEQID NO :188所示氨基酸序列的CDRl，含有SEQ ID NO :144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO :158所示氨基酸序列的CDR3。
29.选自如下(1)-(15)的抗体 (1)包括具有分别含有SEQID NO: 123，124和125所示氨基酸序列的⑶Rs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO 174,144和158所示氨基酸序列的⑶Rs I, 2和3的轻链可变区的抗体； (2)包括具有分别含有SEQID NO: 123，124和125所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO: 175，144和158所示氨基酸序列的⑶Rs 1，2和3的轻链可变区的抗体； (3)包括具有分别含有SEQID NO 123, 124和125所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO 176,144和158所示氨基酸序列的⑶Rs I, 2和3的轻链可变区的抗体； (4)包括具有分别含有SEQID NO 123, 124和125所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO 177,144和158所示氨基酸序列的⑶Rs I, 2和3的轻链可变区的抗体； (5)包括具有分别含有SEQID NO: 123，124和125所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO: 178，144和158所示氨基酸序列的⑶Rs 1，2和3的轻链可变区的抗体； (6)包括具有分别含有SEQID NO 123, 124和125所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO 179,144和158所示氨基酸序列的⑶Rs I, 2和3的轻链可变区的抗体； (7)包括具有分别含有SEQID NO 123, 124和125所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO : 180，144和158所示氨基酸序列的⑶Rs 1，2和3的轻链可变区的抗体； (8)包括具有分别含有SEQID NO: 123，124和125所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO :181，144和158所示氨基酸序列的⑶Rs 1，2和3的轻链可变区的抗体； (9)包括具有分别含有SEQID NO: 123，124和125所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO: 182，144和159所示氨基酸序列的⑶Rs 1，2和3的轻链可变区的抗体； (10)包括具有分别含有SEQID NO 123, 124和125所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO: 183，144和158所示氨基酸序列的⑶Rs 1,2和3的轻链可变区的抗体； (11)包括具有分别含有SEQID NO 123, 124和125所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO: 184，144和158所示氨基酸序列的⑶Rs 1,2和3的轻链可变区的抗体； (12)包括具有分别含有SEQID NO 123, 124和125所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO: 185，144和158所示氨基酸序列的⑶Rs 1,2和3的轻链可变区的抗体； (13)包括具有分别含有SEQID NO 123, 124和125所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO: 186，144和158所示氨基酸序列的⑶Rs 1,2和3的轻链可变区的抗体； (14)包括具有分别含有SEQID NO 123, 124和125所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO: 187，144和158所示氨基酸序列的⑶Rs 1,2和3的轻链可变区的抗体；和 (15)包括具有分别含有SEQID NO 123, 124和125所示氨基酸序列的CDRs 1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQ ID NO: 188，144和158所示氨基酸序列的⑶Rs 1,2和3的轻链可变区的抗体。
30.具有选自如下(1)-(15)的轻链可变区的抗体 (1)含有SEQID NO :191所示氨基酸序列的轻链可变区； (2)含有SEQID NO :192所示氨基酸序列的轻链可变区； (3)含有SEQID NO :193所示氨基酸序列的轻链可变区； (4)含有SEQID NO :194所示氨基酸序列的轻链可变区； (5)含有SEQID NO :195所示氨基酸序列的轻链可变区； (6)含有SEQID NO :196所示氨基酸序列的轻链可变区； (7)含有SEQID NO :197所示氨基酸序列的轻链可变区； (8)含有SEQID NO :198所示氨基酸序列的轻链可变区； (9)含有SEQID NO :199所示氨基酸序列的轻链可变区；(10)含有SEQID NO :200所示氨基酸序列的轻链可变区； (11)含有SEQID NO :201所示氨基酸序列的轻链可变区； (12)含有SEQID NO :202所示氨基酸序列的轻链可变区；(13)含有SEQID NO 203所示氨基酸序列的轻链可变区；(14)含有SEQID NO :204所示氨基酸序列的轻链可变区；和(15)含有SEQID NO :205所示氨基酸序列的轻链可变区。
31.具有选自如下(1)-(15)的轻链可变区和选自如下(1)-(7)的重链可变区的抗体其中所述轻链可变区选自(1)含有SEQID NO :191所示氨基酸序列的轻链可变区；(2)含有SEQID NO :192所示氨基酸序列的轻链可变区；(3)含有SEQID NO :193所示氨基酸序列的轻链可变区；(4)含有SEQID NO :194所示氨基酸序列的轻链可变区；(5)含有SEQID NO :195所示氨基酸序列的轻链可变区；(6)含有SEQID NO :196所示氨基酸序列的轻链可变区；(7)含有SEQID NO :197所示氨基酸序列的轻链可变区；(8)含有SEQID NO :198所示氨基酸序列的轻链可变区；(9)含有SEQID NO :199所示氨基酸序列的轻链可变区；(10)含有SEQID NO :200所示氨基酸序列的轻链可变区；(11)含有SEQID NO :201所示氨基酸序列的轻链可变区；(12)含有SEQID NO :202所示氨基酸序列的轻链可变区；(13)含有SEQID NO :203所示氨基酸序列的轻链可变区；(14)含有SEQID NO :204所示氨基酸序列的轻链可变区；和(15)含有SEQID NO :205所示氨基酸序列的轻链可变区；其中所述重链可变区选自(1)包括SEQID NO :84所示氨基酸序列的重链可变区；(2)包括SEQID NO :85所示氨基酸序列的重链可变区；(3)包括SEQID NO :86所示氨基酸序列的重链可变区；(4)包括SEQID NO :87所示氨基酸序列的重链可变区；(5)包括SEQID NO :88所示氨基酸序列的重链可变区；(6)包括SEQID NO :89所示氨基酸序列的重链可变区；和(7)包括SEQID NO :90所示氨基酸序列的重链可变区。
32.权利要求28-31任一项所述的抗体，其是人抗体。
全文摘要
本发明涉及抗-磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体，公开了能够结合于磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的特定区域的抗体，以及基于那些抗体产生的人源化抗体。本发明的抗-GPC3抗体与传统抗体相比具有较高的ADCC活性和CDC活性。本发明的抗体可作为细胞生长抑制剂，抗癌药物以及肿瘤诊断药物。
文档编号C07K14/47GK102702353SQ201210152819
公开日2012年10月3日 申请日期2005年7月8日 优先权日2004年7月9日
发明者中野清孝, 井川智之, 吉野武, 周乡泉, 小西博子, 川合重人, 木下恭子, 根津淳一, 田中美谷米, 石黑敬弘, 角田浩行 申请人:中外制药株式会社